期刊文献+
共找到381篇文章
< 1 2 20 >
每页显示 20 50 100
来源于湖北省梨轮纹病菌中真菌病毒多样性检测及其分析
1
作者 罗慧 胡旺成 +1 位作者 王国平 王利平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期113-123,共11页
一些真菌病毒严重影响寄主生长、产孢量、致病力。本研究对来源于湖北梨轮纹病菌携带真菌病毒情况进行分析,旨在挖掘具有生防潜能的真菌病毒资源。随机采集湖北省梨树发病枝干,分离、鉴定获得13个梨轮纹病菌株,其生长速率、致病性存在... 一些真菌病毒严重影响寄主生长、产孢量、致病力。本研究对来源于湖北梨轮纹病菌携带真菌病毒情况进行分析,旨在挖掘具有生防潜能的真菌病毒资源。随机采集湖北省梨树发病枝干,分离、鉴定获得13个梨轮纹病菌株,其生长速率、致病性存在差异。提取dsRNA检测,发现12个菌株均携带不同大小的dsRNA片段。观察其dsRNA带型,HBWH-14 dsRNA含有1~7 kb 9条带,其他菌株携带的dsRNA条带位置均位于HBWH-14所含dsRNA带型中的某1条或多条对应的条带位置。RT-PCR检测发现部分菌株携带产黄青霉病毒BdCV1、双分体病毒BdPV1、单分体病毒BdTV1以及未分类的BdRV1。本研究未发现梨轮纹菌株所含病毒种类与致病力存在直接的相关性。HBWH-14原生质体脱毒获得后代100%携带的dsRNAs稳定遗传。 展开更多
关键词 梨轮纹病 葡萄座腔菌 真菌病毒 双链RNA 葡萄座腔菌产黄青霉病毒1 葡萄座腔菌双分体病毒1
新型轮状病毒反向遗传学系统的开发及应用 预览
2
作者 葛雨 冉旭华 闻晓波 《现代畜牧兽医》 2018年第10期57-61,共5页
轮状病毒(RV)是导致全球婴幼儿严重腹泻的重要病原体。由于缺乏完全基于质粒的反向遗传学系统,阻碍了对RV复制和发病机制的深入研究。经过多年来对轮状病毒反向遗传系统的开发,2018年终于成功研发了完全基于11个RV质粒的反向遗传系统... 轮状病毒(RV)是导致全球婴幼儿严重腹泻的重要病原体。由于缺乏完全基于质粒的反向遗传学系统,阻碍了对RV复制和发病机制的深入研究。经过多年来对轮状病毒反向遗传系统的开发,2018年终于成功研发了完全基于11个RV质粒的反向遗传系统,该技术不需要辅助病毒和辅助质粒的参与,不需要复杂的筛选过程,且重组病毒的拯救效率高。这项技术的成功研发,将加速RV基础生物学的研究,可应用于RV新型疫苗的设计、筛选RV抗病毒制剂,促进其他病毒反向遗传系统的研发。本文就轮状病毒反向遗传学系统的研究进展及应用作以简要综述。 展开更多
关键词 轮状病毒 反向遗传系统 病毒拯救 双链RNA
在线阅读 下载PDF
轮状病毒反向遗传系统构建策略研究进展 预览 被引量:1
3
作者 闻晓波 《现代畜牧兽医》 2017年第3期52-57,共6页
反向遗传学技术在病毒的蛋白功能、基因表达调控、致病机制以及疫苗开发等诸多研究工作中具有无可比拟的优势,并且已成为常规手段。目前对于人类或者动物病毒,尤其是RNA病毒,反向遗传学技术早已经用于开展基础研究和疫苗开发。但是,对... 反向遗传学技术在病毒的蛋白功能、基因表达调控、致病机制以及疫苗开发等诸多研究工作中具有无可比拟的优势,并且已成为常规手段。目前对于人类或者动物病毒,尤其是RNA病毒,反向遗传学技术早已经用于开展基础研究和疫苗开发。但是,对于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员,反向遗传操作系统的构建进展缓慢。目前,轮状病毒的反向遗传操作多借助于辅助病毒和筛选系统来实现单一片段的修饰和替换,尚无真正意义上的反向遗传系统报道。本文就轮状病毒反向遗传操作系统的构建策略及应用的研究进展作一简要综述。 展开更多
关键词 轮状病毒 呼肠孤病毒 反向遗传 病毒拯救 双链RNA
在线阅读 下载PDF
Transgenic cotton expressing C YP392A4 double-stranded RNA decreases the reproductive ability of Tetranychus cinnabarinus
4
作者 Guang-Mao Shen Chang-Gui Song +4 位作者 Yi-Qian-Yun Ao Yue-Hua Xiao Yong-Jun Zhang Yu Pan Lin He 《昆虫科学:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第4期559-568,共10页
作为一个杂食的害虫, Tetranychus cinnabarinus 有能力克服各种各样的主人的防卫,并且引起严重损失到各种各样的经济地重要的庄稼。因为在害虫和主人植物之间的相互作用是珍贵线索为害虫管理调查潜在的方法,我们打算识别 T 的关键... 作为一个杂食的害虫, Tetranychus cinnabarinus 有能力克服各种各样的主人的防卫,并且引起严重损失到各种各样的经济地重要的庄稼。因为在害虫和主人植物之间的相互作用是珍贵线索为害虫管理调查潜在的方法,我们打算识别 T 的关键基因。为它棉花上的改编的 cinnabarinus 然后,与 RNA 干扰(RNAi ) 和转基因的技术,构造一个转基因的棉花种类防碍这个过程,并且在螨的管理上评估这个方法的效果。T 的基因表示的差别。当它被转移到一台新主机时, cinnabarinus 被分析(从豇豆到棉花) 通过高产量的定序,和很多差别,在开发期间涉及 detoxification,消化和特定的进程的表示基因被分类。从他们,有棉花上的高丰富和突出的在表示上的 P450 基因 CYP392A4 作为一个候选人被选择。与转基因的技术,表示 CYP392A4 的双 stranded RNA 的棉花工厂被构造。喂实验证明它能减少目标基因,在螨的繁殖能力的减小的结果,和 T 的人口的表示。cinnabarinus 证明明显的健康在转基因的棉花上花费了。这些结果提供一条新途径在主人上限制螨人口的发展。它也是到通过 RNAi 和转基因的技术穿透吸的害虫的控制的一次有用尝试。 展开更多
关键词 转基因抗虫棉 双链RNA 生殖能力 转基因棉花 RNAI技术 多食性害虫 朱砂叶螨 转基因技术
以TMV为模式建立基于宏基因组学的植物病毒检测方法
5
作者 刘悦 孔宝华 +4 位作者 王连春 王崇德 吴德喜 谢琼 甘晓帆 《云南农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第2期197-203,共7页
用感染烟草花叶病毒(TMV)的烟株做阳性对照,提取dsRNA,采用随机引物扩增、高通量测序方法进行了序列分析。PCR产物宏基因组测序结果显示:TMV的检出频率为99.84%;属水平分类和丰度统计结果显示:,Ib.bamovirus占99.913%,成... 用感染烟草花叶病毒(TMV)的烟株做阳性对照,提取dsRNA,采用随机引物扩增、高通量测序方法进行了序列分析。PCR产物宏基因组测序结果显示:TMV的检出频率为99.84%;属水平分类和丰度统计结果显示:,Ib.bamovirus占99.913%,成功建立了以植物病毒dsRNA提取与高通量测序相结合的植物病毒探测方法。按照病毒类似颗粒提取的方法对感染TMV的烟株提取病毒类似颗粒,获得TMV病毒粒子,从中提取RNA,应用TMV特异引物,进行RT—PCR,结果显示:扩增产物序列与TMA序列同源性为99%。结果表明:用该病毒类似颗粒抽提方法能成功提取TMV病毒粒子及RNA,满足宏基因组分析要求。应用本研究构建的dsRNA及病毒类似颗粒的方法,提取20个表现植物病毒病症状的植物样本dsRNA与病毒类似颗粒的DNA,核酸检测质量较好,成功检测到10多种植物病毒。所构建的方法为宏基因组技术探测农业栽培区及非耕作区植物病毒种群与生态适应奠定了基础。 展开更多
关键词 宏基因组学 植物病毒 TMV 双链RNA 病毒类似颗粒 检测 方法
在线阅读 免费下载
外源双链RNA与抗病毒效应的研究进展 预览
6
作者 徐文凯 欧阳霞辉 +2 位作者 常秋燕 张德荣 马晓霞 《甘肃畜牧兽医》 2017年第5期24-29,共6页
对于大多数病毒来说,只要其侵染宿主细胞往往会在复制自身子代基因序列的过程中产生一种中间产物,双链RNA。起初,研究人员认为双链RNA是一种毒素,但是随着研究的深入进行,发现双链RNA是一种高效的干扰素诱导剂,可以作为免疫调节因子或... 对于大多数病毒来说,只要其侵染宿主细胞往往会在复制自身子代基因序列的过程中产生一种中间产物,双链RNA。起初,研究人员认为双链RNA是一种毒素,但是随着研究的深入进行,发现双链RNA是一种高效的干扰素诱导剂,可以作为免疫调节因子或者相应病毒的模拟分子来抵抗病毒的侵染。这就使得双链RNA具有病原体相关分子模式的特点,而且可以作为机体产生主动免疫来抗击病毒侵染的"信号灯"。双链RNA是在病毒侵染细胞后产生的,随着受感染细胞的崩解而释放到细胞外环境,从而刺激周围正常细胞产生相应的抗病毒效应。 展开更多
关键词 病毒 双链RNA 干扰素 抗病毒
在线阅读 下载PDF
Expression of mitogen-activated protein kinase double-stranded RNA in cucumber has no apparent effect on the diversity of rhizosphere archaea 预览
7
作者 CHEN Guo-hua TIAN Xue-liang +4 位作者 WANG Dian-dong LING Jian MAO Zhen-chuan YANG Yu-hong XIE Bing-yan 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第10期2239-2245,共7页
The expression of mitogen-activated protein kinase(mapk) double-stranded RNA in cucumber is effective in controlling infestations of the root-knot nematode Meloidogyne incognita. However,little is known about the ecol... The expression of mitogen-activated protein kinase(mapk) double-stranded RNA in cucumber is effective in controlling infestations of the root-knot nematode Meloidogyne incognita. However,little is known about the ecological effects of transgenic plants. Here,we analyzed the diversity of 16 S r DNA genes derived from the rhizosphere archaea of transgenic cucumber plants as an indicator of ecological change. A total of 17 and 18 operational taxonomic units were detected in the rhizospheres of non-transgenic cucumber and mapk ds RNA-expressing plants,respectively. No significant difference was observed between the two groups according to Shannon and Simpson indices. In soil samples of the two rhizospheres,the dominant group was Crenarchaeota at the phylum level,with Staphylothermus,Methanococcus,Pyrodictium and Sulfolobus the abundant taxa at the genus level. These results suggest that expressing mapk double-stranded(ds) RNA in cucumber has no apparent effect on the diversity of rhizosphere archaea,and provide powerful evidence for the ecological safety of transgenic cucumber expressing mapk ds RNA. 展开更多
关键词 有丝分裂原活化蛋白激酶 双链RNA 细菌多样性 植物根际 黄瓜 丝裂原活化蛋白激酶 转基因植物 dsRNA
在线阅读 下载PDF
体外建立dsRNA结合甲基化转移酶抑制剂转染猪肾细胞的模型 预览
8
作者 王晓铄 俞英 +2 位作者 敖红 郑云胜 王楚端 《中国畜牧杂志》 北大核心 2017年第8期94-99,共6页
病毒性疾病对现代养猪业造成了巨大的经济损失。猪RNA病毒基因组在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的复制型中间体,并诱导Ⅰ型干扰素的产生,从而对病毒的增殖起抑制作用,这是宿主抗RNA病毒感染的重要天然防线。猪许多病毒的dsRNA对... 病毒性疾病对现代养猪业造成了巨大的经济损失。猪RNA病毒基因组在复制过程中形成双链RNA(dsRNA)的复制型中间体,并诱导Ⅰ型干扰素的产生,从而对病毒的增殖起抑制作用,这是宿主抗RNA病毒感染的重要天然防线。猪许多病毒的dsRNA对上皮细胞有明显的趋化作用,而DNA甲基化转移酶抑制剂Aza—CdR可诱导感染细胞凋亡并发挥抗病毒作用。本实验结合荧光定量PCR,计算干扰素相关基因(TLR3、IRF、IFNA)的相对表达量。同时,通过设计剂量和时间依赖实验,利用CCK8实验方法,计算细胞生存比率,最终确定dsRNA模拟物Poly I:C体外转染PKl5细胞后,Aza—CdR处理的理想细胞转染模型。此模型能有效地在体外模拟活病毒感染细胞的效果,更便于在常规实验室使用,是研究猪宿主与病毒感染关系的理想细胞模型。 展开更多
关键词 双链RNA DNA甲基化转移酶抑制剂 转染模型
在线阅读 下载PDF
来源于产黄青霉病毒科成员的分离物对梨轮纹病菌生长及其致病力的影响
9
作者 冯慧静 文才艺 +2 位作者 尹新明 洪坤奇 臧睿 《果树学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1330-1339,共10页
【目的】明确产黄青霉病毒科成员(Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1,BdCV1)对寄主梨轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)菌株生物学性状的影响,证实单独感染BdCV1梨轮纹病菌分离株是弱毒菌株;以期确定BdCV1是否为引起梨轮纹病... 【目的】明确产黄青霉病毒科成员(Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1,BdCV1)对寄主梨轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)菌株生物学性状的影响,证实单独感染BdCV1梨轮纹病菌分离株是弱毒菌株;以期确定BdCV1是否为引起梨轮纹病菌弱致病力的单一因子。【方法】从前期弱致病力复合感染双分体病毒科成员Bd PV1和BdCV1的梨轮纹病菌LW-1中经多代菌丝分离获得的疑似仅单独感染BdCV1分离株(命名为LW-C)为材料;采用dsRNA检测、RTPCR,鉴定LW-C菌株中仅携带BdCV1。采用菌丝块接种于PDA培养基以及3针针刺法接种梨果实,观察其菌落形态以及发病情况,测定菌落生长速度和致病性,明确LW-C生物学特性。将LW-C对无毒菌株Mock进行水平转染,检测其传染后衍生菌株的dsRNA并测定其生物学特性。【结果】证实了LW-C仅感染BdCV1,具有弱毒特性;水平转染结果明确了BdCV1因子对梨轮纹病菌的菌落形态、生长速度有抑制作用,对寄主有弱致病力。【结论】确认了BdCV1是引起梨轮纹病菌致病力衰退的主要因子,为真菌病毒防治果树轮纹病害提供了新颖的生防材料。 展开更多
关键词 梨轮纹病害 葡萄座腔菌 产黄青霉病毒科 双分体病毒科 真菌病毒 双链RNA 致病力 生物防治
RNA Quality Control as a Key to Suppressing R Silencing of Endogenous Genes in Plants
10
作者 Lin Liu Xuemei Chen 《分子植物:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期826-836,共11页
内长的 RNA 的 RNA 质量控制是真核细胞的基因表示的不可分的部分并且经常依靠 exonucleolytic 降级消除不正常的抄本。在平行,外长、选择的内长的 RNA 通过 RNA silencing 被降级,它是许多优核质使用的染色体防卫机制。在植物, RNA ... 内长的 RNA 的 RNA 质量控制是真核细胞的基因表示的不可分的部分并且经常依靠 exonucleolytic 降级消除不正常的抄本。在平行,外长、选择的内长的 RNA 通过 RNA silencing 被降级,它是许多优核质使用的染色体防卫机制。在植物, RNA silencing 被 RNA 依赖的 RNA 聚合酶(RDR ) 被双 stranded RNA (dsRNAs ) 的生产触发并且通过小介入继续(si )指导 RNA, ARGONAUTE (以前) 相应抄本的调停的劈开。许多研究表明植物由把 RNA 监视机制用作一项保护措施保护他们的 transcriptome 侧面避免内长的编码基因的不恰当的 posttranscriptional 基因 silencing。在监视和 RNA silencing 保证在这些降级小径之中的内长的 RNA 底层的适当划分的 RNA 之间的战争的拖船。这里,我们在内长的基因在 RNA silencing 的抑制在 RNA 质量控制和它的角色上考察最近的进展并且讨论在这些小径之中位于串音下面的机制。 展开更多
关键词 转录后基因沉默 RNAS 质量控制 植物 RNA沉默 RNA降解 双链RNA 基因表达谱
微小RNA-1236和外源性小分子双链RNA激活膀胱癌细胞p21表达作用的比较
11
作者 盖强强 汪成合 +3 位作者 陈忠 张庆松 杨为民 叶章群 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2662-2665,共4页
目的人工合成与微小RNA(miRNA,TniR)-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA(dsRNA):dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245(dsP21-243序列配对程度最高),分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌... 目的人工合成与微小RNA(miRNA,TniR)-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA(dsRNA):dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245(dsP21-243序列配对程度最高),分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中抑癌基因p21表达能力的差异。方法参照小激活RNA(saRNA)的设计原则设计合成4对dsRNA。分别转染阴性对照组(dsContr01)、阳性对照组(miR-1236)和实验组(dsRNA)至T24和EJ细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测p21mRNA和蛋白表达的水平。结果FQ-PCR检测结果显示实验组中仅dsP21-245能明显促进两种细胞中p21mRNA水平的升高;且与阴性对照组比较,dsP21-245分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA的表达至2.32倍(P〈0.01)和2.84倍(P〈0.01);与阳性对照组比较,两种细胞株中p21mRNA的表达差异均没有统计学意义(P〉0.05)。RT-PCR检测结果证实了p21mRNA表达变化的趋势。Westernblot结果显示在两种细胞株中p21蛋白表达水平的升高与p21mRNA水平的上调一致。其余3对dsRNA均未能显著上调两种细胞株中p21基因的表达(P〉0.05)。结论人工合成的dsP21-245能显著促进膀胱癌细胞中p21的高表达,且与miR-1236激活p21表达的能力差异无统计学意义。 展开更多
关键词 微小RNA 双链RNA RNA激活 P21 膀胱癌
南方根结线虫Mi-eft2基因RNAi沉默效应研究 预览
12
作者 黎娟华 孙海彦 +1 位作者 赵平娟 彭明 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1182-1187,共6页
以南方根结线虫延长因子2基因(Mi-eft2)T克隆质粒为模板,克隆该基因的3个部分片段(各200 bp),作为体外合成ds RNA的模版,利用该ds RNA(F1ds,F2ds,F3ds)干扰南方根结线虫2龄幼虫(J2)的Mi-eft2表达。结果显示,利用real-time PCR... 以南方根结线虫延长因子2基因(Mi-eft2)T克隆质粒为模板,克隆该基因的3个部分片段(各200 bp),作为体外合成ds RNA的模版,利用该ds RNA(F1ds,F2ds,F3ds)干扰南方根结线虫2龄幼虫(J2)的Mi-eft2表达。结果显示,利用real-time PCR作为检测方法,干扰处理后的J2线虫Mi-eft2的表达量(F1、F2、F3),与对照处理的J2线虫Mi-eft2的表达量(F0)相比,分别降低了21%、69%、0.02%。将经过干扰处理的J2线虫和作为对照处理的J2线虫(500头/株)分别接种5株番茄,培养45 d后观察表型。发现干扰处理后J2线虫与对照处理的J2线虫接种番茄后产生的根结数相比较,分别减少了57.09%、68.94%、7.01%。说明Mi-eft2表达的沉默效应会使南方根结线虫对番茄造成的危害程度相应降低,也说明了利用RNAi干扰该基因表达的方法有利于对南方根结线虫病害防治方法的探索。 展开更多
关键词 南方根结线虫 Mi-eft2 RNA干扰 双链RNA
在线阅读 下载PDF
利用RNA干扰技术沉默稻纵卷叶螟几丁质合成酶A基因 预览 被引量:2
13
作者 李娇 杜娟 李尚伟 《山地农业生物学报》 2016年第3期10-17,62共9页
稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)是一种主要的水稻害虫,几丁质合成酶是昆虫体内几丁质合成通路中的一个关键酶,在昆虫生长发育中具有重要作用,是控制害虫的理想靶标。本文采用 RNA 干扰(RNAi)技术,以稻纵卷叶螟几丁质合成酶 A... 稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)是一种主要的水稻害虫,几丁质合成酶是昆虫体内几丁质合成通路中的一个关键酶,在昆虫生长发育中具有重要作用,是控制害虫的理想靶标。本文采用 RNA 干扰(RNAi)技术,以稻纵卷叶螟几丁质合成酶 A 基因(CmCHSA)为靶标,设计两个靶位点 CmCHSA-I 和 CmCHSA-II,在体外分别合成其双链 RNA(dsRNA),用显微注射法导入3龄幼虫体内,然后通过表型观察和荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测干扰效应。结果表明,注射两种 dsRNA 后纵卷叶螟对水稻的取食明显下降,生长发育阻滞,虫体变小变黑和畸形,有的出现死亡。 RT-qPCR 表明,注射 CmCHSA-I 和 CmCHSA-II 两种 dsRNA 在96 h 后,CmCHSA 的表达量相比对照分别下降了59%和64%。注射 CmCHSA-I 和 CmCHSA-II 两种 dsRNA 7 d 后,稻纵卷叶螟的死亡率分别为80%和83.33%,与对照组相比,分别增加了66.67%和70%。本研究用注射法 RNAi 技术成功实现了对稻纵卷叶螟几丁质合成酶 A 基因的沉默,为利用该技术研究昆虫基因的功能,以及通过转基因 RNAi 技术防治稻纵卷叶螟奠定了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 稻纵卷叶螟 几丁质合成酶A基因 双链RNA
在线阅读 下载PDF
进境大豆种子上菜豆荚斑驳病毒和大豆花叶病毒的多重RT-PCR检测 预览 被引量:7
14
作者 沈建国 高芳銮 +3 位作者 蔡伟 金晶 廖富荣 吴祖建 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期667-676,共10页
【目的】针对进境大豆种子上症状相似的菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)和大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV),建立同时快速检测2种病毒的多重RT-PCR技术。【方法】根据GenBank公布的BPMV、SMV外壳蛋白基因序列,设... 【目的】针对进境大豆种子上症状相似的菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)和大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV),建立同时快速检测2种病毒的多重RT-PCR技术。【方法】根据GenBank公布的BPMV、SMV外壳蛋白基因序列,设计2对特异性引物,以复合感染BPMV、SMV的大豆种子为材料,提取dsRNA作为模板进行多重RT-PCR的引物浓度、退火温度和循环数的优化。利用优化建立的多重RT-PCR方法分别对健康大豆种子、BPMV、SMV及2种病毒复合感染的大豆种子进行检测,测定该方法的特异性。利用健康大豆种子提取的dsRNA,将从复合侵染BPMV、SMV大豆种子中提取的dsRNA按10倍梯度稀释,依次稀释为原液的10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4).10~(-5)和10~(-6)倍作为模板,分别进行多重RT-PCR和单一RT-PCR扩增,测定灵敏度。多重RT-PCR扩增产物回收纯化后,连接于pMD18-T载体,进行克隆测序和序列比对,进一步验证该方法的可靠性。应用建立的多重RT-PCR方法对来自于美国、阿根廷、中国和巴西的疑似带病大豆种子进行检测,同时以单一RT-PCR检测进行验证。以BPMV、SMV抗体等体积混合液包被PCR管后再加入样品提取液或直接以样品提取液包被PCR管,将免疫捕获、试管捕捉和多重RT-PCR相结合,建立同时检测BPMV、SMV的多重一步IC-RT-PCR、多重一步TC-RT-PCR方法。【结果】多重RT-PCR的优化结果显示,最佳引物浓度为BPMV 0.4μmol·L~(-1)、SMV 0.4μmol·L~(-1),最佳退火温度为52℃,最佳循环数为35。特异性测定结果表明,多重RT-PCR能够从复合感染BPMV、SMV的大豆种子上同时扩增到大小约542、221 by特异性目的条带,从单一感染BPMV的大豆种子上扩增到大小约542 by特异性目的条带,从单一感染SMV的大豆种子上扩增到大小约221 by特异性目的条带,而从健康大豆种子材料上未扩增出任何特异性条带。灵敏度测定结果� 展开更多
关键词 菜豆荚斑驳病毒 大豆花叶病毒 多重RT-PCR 双链RNA
在线阅读 下载PDF
外源性dsRNA对蛋鸡卵泡CART基因表达及雌激素和孕酮分泌的影响 被引量:3
15
作者 李鹏飞 孟金柱 +6 位作者 于雪静 庞钰莹 杜海燕 李晓明 姚晓磊 赵妙妙 吕丽华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期515-520,共6页
旨在研究双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)对海兰褐蛋鸡卵泡可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)基因表达及雌激素(Estrodiol,E2)和孕酮(Progestin,P)分泌的影响。选择60只20周龄... 旨在研究双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)对海兰褐蛋鸡卵泡可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)基因表达及雌激素(Estrodiol,E2)和孕酮(Progestin,P)分泌的影响。选择60只20周龄海兰褐蛋鸡,全价日粮预饲30d后,随机平均分为3个处理组:对照组(A组)、dsRNA每5d注射1次(B组)、dsRNA仅第1天注射1次(C组);30d后每组各选择10只健康蛋鸡宰杀,分别采集3~5、6~8、9~12mm卵泡,提取总RNA进行qRT-PCR检测;并对E2和P浓度进行测定。结果显示:注射dsRNA后,处理组B和C组CART表达量与对照组相比均降低,且在6~8 mm卵泡CART表达量显著低于对照组(P〈0.05);B组注射dsRNA后,可显著提高6~8、9~12mm卵泡E2的分泌(P〈0.05);但各处理组对各卵泡P浓度无显著影响。表明体外静脉注射dsRNA可抑制蛋鸡卵泡CART的表达,并进一步通过促进卵泡细胞E2的分泌来影响卵泡的发育。 展开更多
关键词 蛋鸡 卵泡 CART 双链RNA 雌激素 孕酮
在线阅读 免费下载
浅谈玉米粗缩病发生规律及防治方法 预览
16
作者 王宁 《新农村(黑龙江)》 2016年第24期48-49,共2页
玉米作为国内主要的粮食兼饲料作物,在国内大面积种植,但在玉米生长过程中,各种病害的发生不同程度上造成了减产及质量下降的现象,玉米粗缩病是我国北方玉米生产区流行的重要病害。玉米粗缩病是由玉米粗缩病毒(MRDV)引起的一种玉... 玉米作为国内主要的粮食兼饲料作物,在国内大面积种植,但在玉米生长过程中,各种病害的发生不同程度上造成了减产及质量下降的现象,玉米粗缩病是我国北方玉米生产区流行的重要病害。玉米粗缩病是由玉米粗缩病毒(MRDV)引起的一种玉米病毒病。MRDV属于植物呼肠弧病毒组,是一种具双层衣壳的双链RNA球形病毒,由灰飞虱以持久性方式传播。下面笔者就玉米粗缩病发生规律及防治方法进行详细解读。 展开更多
关键词 玉米粗缩病毒 防治方法 发生规律 大面积种植 玉米病毒病 呼肠弧病毒 双链RNA 饲料作物
在线阅读 下载PDF
RNAi在昆虫控制领域的研究进展 被引量:2
17
作者 赵洁 刘小宁 《中国植保导刊》 北大核心 2015年第1期17-23,共7页
RNAi技术在研究昆虫功能基因组学方面已经越来越成熟,基本涉及了昆虫的所有目,并为害虫的控制和益虫种群保护筛选出许多合适的基因,越来越多的研究结果证明了这一方法的可行性。为了在这一领域更好地运用RNAi技术就必须了解干扰片段的... RNAi技术在研究昆虫功能基因组学方面已经越来越成熟,基本涉及了昆虫的所有目,并为害虫的控制和益虫种群保护筛选出许多合适的基因,越来越多的研究结果证明了这一方法的可行性。为了在这一领域更好地运用RNAi技术就必须了解干扰片段的不同递呈方式及其在昆虫体内的吸收机制。因此,就目前在昆虫中常用的干扰片段递呈方法和吸收途径进行了简要介绍,对近年RNAi在害虫控制和昆虫种群保护等方面的研究进展进行了综述与展望。 展开更多
关键词 昆虫 RNA干扰 种群控制 双链RNA
RNA interference-mediated silencing of a Halloween gene spookier affects nymph performance in the small brown planthopper Laodelphax striatellus
18
作者 Shuang Jia Pin-Jun Wan Li-Tao Zhou Li-Li Mu Guo-Qing Li 《中国昆虫科学:英文版》 CAS CSCD 2015年第2期191-202,共12页
昆虫的 embryonic 以后开发高度依赖于 ecdysteroid 荷尔蒙 20-hydroxyecdysone。万圣节前夕基因更鬼(spok, cyp307a2 ) 被记录了在果蝇 melanogaster 和 Bombyx mori 涉及 ecdysteroidogenesis。我们这里描述克隆和万圣节前夕基因的... 昆虫的 embryonic 以后开发高度依赖于 ecdysteroid 荷尔蒙 20-hydroxyecdysone。万圣节前夕基因更鬼(spok, cyp307a2 ) 被记录了在果蝇 melanogaster 和 Bombyx mori 涉及 ecdysteroidogenesis。我们这里描述克隆和万圣节前夕基因的描述更鬼(Lsspok, Lscyp307a2 ) 在小棕色的 planthopper Laodelphax striatellus, hemipteran 昆虫种。LsSPOK 有三个保存昆虫的 P450 主题,也就是说 Helix-K, PERF 主题和 heme 有约束力的领域。Lsspok 的时间、空间的表示模式被量的聚合酶链反应评估。通过 fouth 中间形态和早第五中间形态的阶段, Lsspok 显示出二表情在秒天和第五天的第四中间形态的美女的山峰,和二马槽在第一天第四和第五中间形态。在白天 5 第四中间形态的美女上, Lsspok 清楚地在 prothoracic 腺被定位的胸有高抄本水平。在美女阶段的 Lsspok 的双 stranded RNA 的饮食的介绍成功地将目标基因击倒,蜕皮激素的减少的表达式水平受体(LsEcR ) 基因,引起的 nymph 的致命性和推迟的开发。在 Lsspok-dsRNA-exposed 美女的 20-hydroxyecdysone 的摄取没增加 Lsspok 表示水平,但是几乎完全救 LsEcR mRNA 水平并且在幸存和发展上减轻否定效果。因此,我们的数据建议 ecdysteroidogenic 小径在昆虫被保存, LsSPOK 为在在 L 的 ecdysteroidogenesis 的特定的步负责。striatellus。 展开更多
关键词 灰飞虱 靶基因 RNA干扰 若虫 半翅目昆虫 细胞色素P450 双链RNA 性能
Toll样受体3抗乙型肝炎病毒慢性持续感染的进展 被引量:1
19
作者 朱丽 《国际流行病学传染病学杂志》 2015年第3期202-204,共3页
目前,HBV慢性持续感染的致病机制仍不明确,多倾向于机体对病毒产生免疫耐受,固有免疫及适应性免疫应答不佳所致。免疫调节治疗有望成为治疗HBV慢性持续性感染的重要手段。Toll样受体3(TLR3)作为病毒双链RNA(dsRNA)识别受体在机... 目前,HBV慢性持续感染的致病机制仍不明确,多倾向于机体对病毒产生免疫耐受,固有免疫及适应性免疫应答不佳所致。免疫调节治疗有望成为治疗HBV慢性持续性感染的重要手段。Toll样受体3(TLR3)作为病毒双链RNA(dsRNA)识别受体在机体抗病毒免疫中发挥十分重要的作用。此文将对TLR3在HBV慢性持续感染中的作用研究进展作一综述。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 慢性持续感染 TOLL样受体3 双链RNA
dsRNA激活肝癌细胞中TLR3-TRIF信号介导的凋亡作用 预览
20
作者 周虹 陈莉 《南通大学学报:医学版》 2015年第3期178-181,共4页
目的:利用RNAi技术下调Toll样受体(Toll-like receptor 3, TLR3)信号通路中β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β, TRIF)的表达,探讨双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)激活肝细... 目的:利用RNAi技术下调Toll样受体(Toll-like receptor 3, TLR3)信号通路中β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β, TRIF)的表达,探讨双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)激活肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞株(SMMC-7721)中TLR3-TRIF信号通路介导的凋亡作用。方法:分别构建靶向TRIF 的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)(siTRIF),激活TLR3的dsRNA(BM-06)。用BM-06和BM-06联合siTRIF(BM-06+siTRIF)分别转染SMMC-7721细胞作为实验组,同时用Poly(I:C)作为阳性对照组、未处理细胞作为阴性对照组。Western Blot检测各组靶基因TRIF的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测凋亡相关基因Caspase3、8、9的表达,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测和Hoechst染色检测细胞凋亡率。结果:与未处理细胞相比,BM-06组和Poly(I:C)组中靶基因TRIF蛋白表达均显著增高(P〈0.05),凋亡相关基因Caspase3、8 mRNA水平和细胞凋亡率显著增加(均P〈0.05);Caspase9 mRNA水平略有增加,但差异无统计学意义(P〉0.05);上述各结果在BM-06组和Poly(I:C)组间差异无统计学意义(P〉0.05),在BM-06+siTRIF组和未处理细胞间比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:dsRNA激活HCC细胞中TLR3信号通路介导的细胞凋亡作用依赖于TRIF。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 双链RNA TOLL样受体3 β干扰素TIR结构域衔接蛋白 凋亡
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 20 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈