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ADAM28反义寡核苷酸对人牙龈成纤维细胞内ADAM28的基因表达的影响
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作者 赵征 李杰 +2 位作者 丁秀娜 周磊 孙德刚 《现代口腔医学杂志》 CAS 2019年第1期1-4,共4页
目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义寡核苷酸对人牙龈成纤维细胞(HGFs)内ADAM28表达的抑制作用。方法设计合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HGFs后,通过RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异... 目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义寡核苷酸对人牙龈成纤维细胞(HGFs)内ADAM28表达的抑制作用。方法设计合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HGFs后,通过RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果 ADAM28 AS-ODN转染HGFs后,在转录、翻译和蛋白水平HGFs内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.05)。结论 ADAM28 AS-ODN可有效阻断HGFs内ADAM28的基因表达。 展开更多
关键词 金属蛋白酶解离素28 反义寡核苷酸 人牙龈成纤维细胞 表达差异
草地贪夜蛾Sf9细胞中snoRNA Bm-15反义寡核苷酸的定位及其对Bm-15的干涉效率 预览
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作者 李新梅 邱妩洁 +5 位作者 崔斌 杨宗霖 申雅文 路一平 阚云超 李丹丹 《昆虫学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期795-800,共6页
【目的】利用反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)干涉昆虫核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)Bm-15的表达,并探索ASO进入细胞后的代谢途径。【方法】利用脂质体携带Cy5标记的、2′-O核糖甲基化修饰和硫代磷酸骨架修饰的Bm... 【目的】利用反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)干涉昆虫核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)Bm-15的表达,并探索ASO进入细胞后的代谢途径。【方法】利用脂质体携带Cy5标记的、2′-O核糖甲基化修饰和硫代磷酸骨架修饰的Bm-15 ASO转染草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞,然后通过Cy5标记与溶酶体及线粒体免疫荧光探针共定位研究Bm-15 ASO在细胞内的转运机制。利用实时荧光定量PCR检测转染Bm-15 ASO的Sf9细胞中Bm-15的表达量,分析ASO对snoRNA Bm-15的干涉效果。【结果】Bm-15 ASO转染草地贪夜蛾Sf9细胞48 h后,ASO荧光信号充斥整个细胞和位于细胞边缘的比例分别为34%和66%,说明ASO进入细胞后可能分布在不同的亚细胞器中;进一步对Bm-15 ASO和溶酶体及线粒体进行共定位发现,位于细胞边缘的ASO大多被运输至溶酶体而不会存在于线粒体等细胞器中。实时荧光定量PCR检测结果表明,转染Bm-15 ASO的Sf9细胞中Bm-15表达量下降了47%。【结论】即使经过多种化学修饰,ASO仍然逃避不了细胞内源降解机器的识别,这有效解释了某些情况下利用ASO干涉基因表达时靶标基因干涉效率较低的现象。 展开更多
关键词 昆虫 草地贪夜蛾 反义寡核苷酸 SNORNA Bm-15 溶酶体
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核酸功能化纳米探针在细胞荧光成像中的应用 预览
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作者 郑爱仙 张晓龙 刘小龙 《中国光学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期363-376,共14页
核酸是携带遗传信息的物质,既存在于自然界中也能够通过成熟技术人工合成。通过体外筛选技术还可以筛选出具有特殊功能的核酸序列,例如核酸适体和脱氧核酶。核酸通过沃森-克里克碱基互补配对原则进行杂交,具有很强的专一性。无论是通过... 核酸是携带遗传信息的物质,既存在于自然界中也能够通过成熟技术人工合成。通过体外筛选技术还可以筛选出具有特殊功能的核酸序列,例如核酸适体和脱氧核酶。核酸通过沃森-克里克碱基互补配对原则进行杂交,具有很强的专一性。无论是通过序列设计还是体外筛选,核酸探针在生物标志物的分析与成像应用方面都发挥着重要作用。纳米材料辅助构建核酸功能化纳米探针,可以保护负载的核酸探针不被核酸酶降解,并且无需转染试剂就能进入细胞,在细胞荧光成像应用上具有很大优势。为解决细胞内有些生物标志物含量低、难于检测的问题,目前已构建多种适用于细胞水平的成像信号放大方法来实现对低丰度生物标志物的高灵敏成像。本文主要综述了核酸功能化纳米探针在细胞荧光成像中的应用进展,包括反义寡核苷酸功能化纳米探针、核酸适体功能化纳米探针、脱氧核酶功能化纳米探针等,同时介绍了他们在成像信号放大中的应用。 展开更多
关键词 纳米探针 反义寡核苷酸 适体 脱氧核酶 荧光成像
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乙酰辅酶A羧化酶反义寡核苷酸对非酒精性脂肪肝细胞模型的作用
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作者 夏晓华 何傲林 +2 位作者 李莎莎 王炳芳 方燕斐 《中国临床药理学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期279-281,共3页
目的观察乙酰辅酶A羧化酶(ACC)反义寡核苷酸(ASODN)对HL-7702肝细胞脂肪变性的影响。方法用计算机软件设计并合成特异性靶向ACC的硫代修饰ASODN。用静脉脂肪乳剂体外培养正常HL-7702肝细胞48 h,制备体外脂肪肝细胞模型。以脂质体法... 目的观察乙酰辅酶A羧化酶(ACC)反义寡核苷酸(ASODN)对HL-7702肝细胞脂肪变性的影响。方法用计算机软件设计并合成特异性靶向ACC的硫代修饰ASODN。用静脉脂肪乳剂体外培养正常HL-7702肝细胞48 h,制备体外脂肪肝细胞模型。以脂质体法将ACC-ASODN转染至脂肪肝细胞模型,设置空白组(HL-7702肝细胞组)、模型组(脂肪肝细胞模型组)、低高2个浓度实验组(5,10μmol·L~(-1)ACC-ASODN转染组)。以ACC-ASODN转染入脂肪肝细胞模型24 h后,放射性同位素技术测定ACC酶活性,HPLC法测定丙二酰辅酶A含量,放射性同位素技术测定肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT I)活性,用全自动生化分析仪测定4组肝细胞内三酰甘油(TG)含量。结果 ACC-ASODN转染入脂肪肝细胞模型24 h后,空白组、模型组及低、高2个浓度实验组的肝细胞ACC活性(U)分别是0.74,0.33,0.20,0.18;这4组的细胞内丙二酰辅酶A含量(nmol·L~(-1))分别是14.3,12.4,7.5,6.8;这4组的细胞CPTⅠ活性(U)分别是1.33,1.47,3.85,3.95;这4组的TG含量分别是0.20,0.52,0.37,0.28 mmol·L~(-1)。模型组与空白组的以上几项指标比较,差异均有统计学意义(均P〈0.05);实验组与模型组的以上几项指标比较,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。结论 ACC-ASODN作用于肝细胞,通过抑制肝细胞ACC活性,使TG含量下降,从而减轻肝细胞脂肪变性。 展开更多
关键词 乙酰辅酶A羧化酶 反义寡核苷酸 非酒精性脂肪肝 丙二酰辅酶A 肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ
miR-155反义寡核苷酸对内毒素诱导急性肺损伤小鼠的保护作用 被引量:1
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作者 唐瑾 谢旺 +4 位作者 程婷婷 王凯玲 顾霞 张倩 郭忠良 《中华危重病急救医学》 CSCD 北大核心 2018年第8期743-747,共5页
目的 通过建立微小RNA(miRNA)反义寡核苷酸(ASO)慢病毒表达载体,探讨miR-155 ASO对急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用.方法 设计并合成miR-155 ASO,使用BamHⅠ和NheⅠ双酶切后连接产生慢病毒表达载体,聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克... 目的 通过建立微小RNA(miRNA)反义寡核苷酸(ASO)慢病毒表达载体,探讨miR-155 ASO对急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用.方法 设计并合成miR-155 ASO,使用BamHⅠ和NheⅠ双酶切后连接产生慢病毒表达载体,聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克隆,测序并测定病毒滴度.按随机数字表法将54只4~6周龄的雄性BALB/c小鼠平均分为3组,均经腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg制备ALI动物模型.3组分别于制模前24 h经尾静脉注射含1×108/mL pmiR-155-ASO病毒的磷酸盐缓冲液(PBS)200μL(pmiR-155-ASO组),或含1×108/mL pSMPUW-miR-GFP空载体病毒的PBS 200μL(pmiR-cont组),或等量PBS(PBS组).每组中10只小鼠用于观察7 d存活率;剩余8只小鼠于制模后取血标本及肺组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清炎性因子水平;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织miR-155表达;镜下观察肺组织病理学改变及巨噬细胞分布.结果 pmiR-cont组与PBS组各指标比较差异均无统计学意义.pmiR-155-ASO组肺组织中miR-155成熟体的表达水平较pmiR-cont组明显降低(2-ΔΔCt:4.92±0.72比15.38±0.60,P〈0.05).与pmiR-cont组比较:给予miR-155ASO预处理后ALI小鼠损伤程度明显改善,7 d存活率显著提高(72.1%比61.9%,P〈0.05);肺大体观察显示肺组织充血明显减轻,肺湿/干重(W/D)比值明显下降(4.50±0.13比5.64±0.61,P〈0.05);苏木素-伊红(HE)染色显示肺组织炎性细胞浸润减少,免疫荧光法检测显示肺组织巨噬细胞浸润数量明显减少;血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平明显降低〔TNF-α(ng/L):379.8±48.9比495.9±33.3,IL-6(ng/L):262.3±61.8比355.4±22.6,均P〈0.05〕,而IL-10水平无明显改变(ng/L:143.6±32.5比140.4±22.3,P〉0.05).结论 miR-155 ASO具有抑制LPS诱导ALI小鼠炎症反应、改善预后的作用. 展开更多
关键词 急性肺损伤 炎症反应 微小RNA-155 反义寡核苷酸
磁性载药微球联合反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠模型的疗效观察 预览
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作者 赵会庚 权广前 +1 位作者 潘耀振 尹家俊 《实用癌症杂志》 2017年第2期181-184,共4页
目的 探讨辐射促细胞转染的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因mdr1反义寡核苷酸(ASON)联合5-氟尿嘧啶磁性载药微球(PEG-5-FU-MAMS)治疗裸鼠人胰腺癌的效果.方法 通过构建裸鼠人胰腺癌耐药肿瘤模型基础上,肿瘤局部以2 Gy60 C... 目的 探讨辐射促细胞转染的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因mdr1反义寡核苷酸(ASON)联合5-氟尿嘧啶磁性载药微球(PEG-5-FU-MAMS)治疗裸鼠人胰腺癌的效果.方法 通过构建裸鼠人胰腺癌耐药肿瘤模型基础上,肿瘤局部以2 Gy60 Coγ辐射,瘤内注射阳性脂质体介导的mdr1反义寡核苷酸(ASON),经磁导下利用磁性载药微球(PEG-5-MAMS)联合化疗.结果 联合辐射组与未联合辐射组及对照组肿瘤生长曲线肿瘤生长曲线差异有显著性(P〈0.01).联合组能显著抑制肿瘤的生长,联合组肿瘤重量抑制率为85.00%,肿瘤体积抑制率为87.74%.结论 辐射促转染的mdr1ASON联合磁性载药微球对肿瘤细胞具有较好的耐药逆转作用. 展开更多
关键词 电离辐射 反义寡核苷酸 转染 多药耐药 PEG-5-FU-MAMS
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反义寡核苷酸应用于脑部疾病治疗的研究进展
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作者 李云凤 孟艳秋 徐亮 《国际药学研究杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期743-752,共10页
随着生物技术的快速发展,反义核酸药物倍受关注。反义寡核苷酸(ASON)通过作用于疾病相关靶m RNA,干扰基因表达发挥治疗作用,具有特异性高、毒副作用低等特点。基于脑靶向载体技术和化学修饰,ASON在脑部疾病的治疗领域显示了广阔前景... 随着生物技术的快速发展,反义核酸药物倍受关注。反义寡核苷酸(ASON)通过作用于疾病相关靶m RNA,干扰基因表达发挥治疗作用,具有特异性高、毒副作用低等特点。基于脑靶向载体技术和化学修饰,ASON在脑部疾病的治疗领域显示了广阔前景。本文综述了ASON药物的研发现状,及其应用于阿尔茨海默病、帕金森病及脑肿瘤等常见脑部疾病治疗的研究进展。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 阿尔茨海默病 帕金森病 脑肿瘤
MPC30-DEA70载AMO-miR-146a对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响
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作者 李志 陆远 +5 位作者 冯辉 张敏 张卓琦 王志荣 杨煜 徐晤 《海南医学》 CAS 2017年第11期1724-1727,共4页
目的阳离子磷酸胆碱聚合物(MPC30-DEA70)负载反义miR-146a寡核苷酸(AMO-miR-146a)转染大鼠颈总动脉球囊损伤处血管平滑肌细胞(VSMC),观察其对血管内膜增生的影响。方法 60只SD大鼠完全随机化分为未损伤组、单纯损伤组、多聚赖氨酸... 目的阳离子磷酸胆碱聚合物(MPC30-DEA70)负载反义miR-146a寡核苷酸(AMO-miR-146a)转染大鼠颈总动脉球囊损伤处血管平滑肌细胞(VSMC),观察其对血管内膜增生的影响。方法 60只SD大鼠完全随机化分为未损伤组、单纯损伤组、多聚赖氨酸(PLL)组、AMO-miR-146a组、PLL载MPC30-DEA70/AMO-miR-146a复合物(P/M=3:1组和P/M=5:1组),每组10只。通过光学显微镜观察4周后大鼠颈总动脉组织形态学变化,q-PCR法检测miR-146a的表达以及应用Western blot法检测增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)、NFκBp65的表达情况。结果苏木精-伊红染色,光镜下显示,除未损伤组外,单纯损伤组、PLL组、AMO-miR-146a组、P/M=3:1组、P/M=5:1组大鼠颈总动脉血管新生内膜有不同程度的增生,而中膜面积无明显改变;与单纯损伤组比较,PLL组、AMO-miR-146a组新生内膜面积差异无统计学意义(P〉0.05),P/M=3:1组和P/M=5:1组新生内膜面积明显减少,差异有统计学意义(P〈0.05),后两组组间比较差异无统计学意义(P〉0.05);q-PCR及Western blot检测显示P/M=3:1组和P/M=5:1组miR-146a及目的蛋白PCNA、NFκBp56的表达较未损伤组高,差异有统计学意义(P〈0.05),但明显低于单纯损伤组、PLL组、AMO-miR-146a组,差异有统计学意义(P〈0.05),而P/M=3:1组和P/M=5:1组组间miR-146a、PCNA、NFκBp56的表达差异无统计学意义(P〉0.05);单纯损伤组、PLL组、AMO-miR-146a组组间miR-146a、PCNA、NFκBp56的表达差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 MPC30-DEA70可与AMO-miR-146a络合,借助PLL进入VSMC,有效抑制球囊损伤后VSMC的miRNA-146a的表达,使PCNA、NFκBp56下调,抑制新生内膜增生,防止血管狭窄。 展开更多
关键词 阳离子磷胆碱聚合物 反义寡核苷酸 MIR-146A 血管狭窄 基因载体
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IGF1R在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义
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作者 李莎 吴章颖 +3 位作者 张淳 张庆华 王世宣 汪雯雯 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2017年第8期583-587,共5页
目的:检测IGF1R在正常子宫内膜及卵巢子宫内膜异位囊肿(EMs)患者异位内膜中的表达,并探讨其与疾病发生的关系。方法:免疫组化SP染色及Western blot法检测IGF1R在50例正常子宫内膜及55例卵巢EMs异位内膜中的表达情况,并根据月经周期... 目的:检测IGF1R在正常子宫内膜及卵巢子宫内膜异位囊肿(EMs)患者异位内膜中的表达,并探讨其与疾病发生的关系。方法:免疫组化SP染色及Western blot法检测IGF1R在50例正常子宫内膜及55例卵巢EMs异位内膜中的表达情况,并根据月经周期对样本进行分期分析。构建IGF1R的反义寡核苷酸,转染至正常内膜的原代细胞,运用Ed U技术研究IGF1R对细胞增殖的影响。结果:免疫组化检测显示,IGF1R表达于正常内膜及EMs组织的腺上皮细胞质及胞膜,异位内膜中表达量较高(P=0.014)。增生期正常内膜及异位内膜中IGF1R的表达差异无统计学意义;分泌期异位内膜中IGF1R的表达量高于分泌期正常子宫内膜(P=0.036)。分泌期子宫内膜中IGF1R表达显著高于增生期子宫内膜,差异有统计学意义(P〈0.001)。Western blot检测结果显示,异位内膜中IGF1R表达量较正常内膜高(P〈0.05);增生期正常内膜和异位内膜中IGF1R表达量差异无统计学意义;分泌期正常子宫内膜和异位内膜中IGF1R表达量分别为(0.26±0.13)和(0.65±0.16),差异有统计学意义(P=0.023)。正常内膜的原代细胞中沉默IGF1R表达后,细胞增殖能力明显下降(P=0.014)。结论:IGF1R在异位内膜中的表达量较正常内膜高,并且参与异位内膜的细胞增殖,提示IGF1R可能通过促进异位内膜细胞的增殖参与EMs的发生发展。 展开更多
关键词 IGF1R 子宫内膜异位症 反义寡核苷酸 细胞增殖
Livin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞活性的影响 预览
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作者 黎承军 流小舟 +3 位作者 施鑫 孙畅 章磊 吴苏稼 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2017年第6期493-499,共7页
目的 探讨Livin在骨肉瘤细胞中的表达及Livin反义寡核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞活性及功能的影响。方法 设计针对Livin的ASODN序列,根据转染效率评价结果,选择下调作用最强的ASODN序列制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染MG-63细胞。采用... 目的 探讨Livin在骨肉瘤细胞中的表达及Livin反义寡核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞活性及功能的影响。方法 设计针对Livin的ASODN序列,根据转染效率评价结果,选择下调作用最强的ASODN序列制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染MG-63细胞。采用免疫细胞染色法及Western blotting检测转染24 h后MG-63细胞中Livin的表达情况,Cell TiterGlo法检测转染72 h后MG-63细胞的增殖情况,划痕法检测ASODN对MG-63细胞迁移能力的影响,流式细胞仪检测转染24h后MG-63细胞的凋亡情况和细胞周期。结果 Livin蛋白主要表达于MG-63细胞的胞质。选用下调作用最强的ASODN转染MG-63细胞后,Livin蛋白表达显著下降;不同浓度Livin ASODN对MG-63细胞的增殖及迁移有剂量依赖抑制作用;而ASODN组的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P〈0.05)。结论 靶向Livin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力并促进其凋亡。 展开更多
关键词 骨肉瘤 反义寡核苷酸 LIVIN蛋白 细胞活性
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AS1411介导STAT3反义寡核苷酸靶向抗肿瘤的作用 预览
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作者 刘宝修 黄建胜 朱乃硕 《复旦学报:医学版》 CSCD 北大核心 2017年第4期422-429,共8页
目的 研究核仁素核酸适配体(AS1411)介导信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)靶向抗肿瘤的作用。方法以RNA为耦联分子,连接靶向分... 目的 研究核仁素核酸适配体(AS1411)介导信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)靶向抗肿瘤的作用。方法以RNA为耦联分子,连接靶向分子AS1411和效应分子ASO。以RNA Structure软件对预合成的不同RNA碱基耦联构建的嵌合体分子二级结构进行预测分析。以琼脂糖凝胶电泳检测嵌合体分子在血清及细胞裂解液中的稳定性。通过流式细胞术和荧光共聚焦实验检测AS1411介导STAT3 ASO进入肿瘤细胞的情况。通过CCK-8试剂盒检测STAT3 ASO对肿瘤细胞生长的抑制情况。通过RT-PCR和Western blot分析ASO对肿瘤生长相关基因表达的影响。结果AS1411可介导STAT3 ASO高效进入肿瘤细胞,抑制C-myc、Cyclin D1、Bcl-xl和PD-L1基因的转录和翻译,并能抑制Du145细胞的生长。结论 AS1411可介导STAT3 ASO靶向进入肿瘤细胞,从而发挥抗肿瘤的作用。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 AS1411 抗肿瘤 靶向
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小干扰RNA与反义寡核苷酸技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果比较 预览
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作者 张玉峰 叶坤英 钟丹 《山东医药》 北大核心 2017年第34期5-8,共4页
目的对比观察小干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASODN)技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果。方法将培养的大鼠肝星状细胞株HSC-T6随机分为siRNA组和ASODN组,两组又分别分为A、B、C、D各4个亚组;siRNA组和ASODN组中的A亚组不转染质粒,C... 目的对比观察小干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASODN)技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果。方法将培养的大鼠肝星状细胞株HSC-T6随机分为siRNA组和ASODN组,两组又分别分为A、B、C、D各4个亚组;siRNA组和ASODN组中的A亚组不转染质粒,C、D、B亚组分别采用siRNA、ASODN技术转染大鼠RhoA特异性Rat1、Rat2质粒及HK-A阴性对照质粒。转染48 h取各组细胞,以RT-PCR技术检测细胞中的RhoA、Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中的透明质酸(HA)及层粘连蛋白(LN)。结果 siRNA组与ASODN组中RhoA、ColⅠmRNA均以C亚组表达量最低,组内A、C亚组比较差异有统计学意义(P均〈0.05),组内其余亚组间比较差异无统计学意义(P均〉0.05);siRNA组C亚组RhoA、ColⅠmRNA相对表达量低于ASODN组(P均〈0.05),两组A、B、D同亚组间比较差异无统计学意义(P均〉0.05)。siRNA组与ASODN组细胞上清液HA、LN水平均以C亚组最低,组内A、C亚组比较差异有统计学意义(P均〈0.05),组内其余亚组间比较差异无统计学意义(P均〉0.05);siRNA组C亚组细胞上清液HA、LN水平低于ASODN组(P均〈0.05),两组A、B、D同亚组间比较差异无统计学意义(P均〉0.05)。结论 siRNA和ASODN均可抑制大鼠HSC-T6细胞的RhoA表达,但siRNA下Rat1质粒所介导的RNA干扰技术相对于ASODN能更有效抑制HSC-T6细胞外基质HA、ColⅠ、LN的生成。 展开更多
关键词 小干扰RNA 反义寡核苷酸 RHOA 透明质 Ⅰ型胶原 层粘连蛋白 肝星状细胞
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氰基丙烯酸烷氧基酯新纳米基因载体的制备及评价
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作者 李云凤 孟艳秋 徐亮 《国际药学研究杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1155-1162,共8页
目的制备新化学结构的氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,研究负载和递送转化生长因子-β2(TGF-β2)反义寡核苷酸(ASON)的能力,评价体外抗肿瘤活性。方法氰基丙烯酸(甲氧基二乙二醇)酯单体,以二乙氨乙基-葡聚糖(DEAE-Dextran)... 目的制备新化学结构的氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,研究负载和递送转化生长因子-β2(TGF-β2)反义寡核苷酸(ASON)的能力,评价体外抗肿瘤活性。方法氰基丙烯酸(甲氧基二乙二醇)酯单体,以二乙氨乙基-葡聚糖(DEAE-Dextran)为阳离子稳定剂,采用乳化聚合法制备空白纳米微球(NS),负载ASON后以聚山梨醇-80进行脑靶向修饰。透射电镜观察形态;动态光散射粒度仪(DLS)测定粒径、Zeta电位;紫外分光光度法测定包封率及载药量;琼脂糖凝胶电泳分析其最佳负载比例以及在DNA酶Ⅰ(DNaseⅠ)及血清环境下对ASON的保护能力;透析法测定ASON的释放速率;激光共聚焦考察细胞摄取情况;MTS法评价对肿瘤细胞A172的体外抑制活性。结果微球外形圆整且无粘连,平均粒径为(79.04±4.33)nm,Zeta电位为(33.60±0.60)mV,负载ASON的包封率为(83.14±1.90)%,载药量为(11.59±0.56)%。可有效延缓ASON在DNaseⅠ及血清环境下的降解。能有效递送ASON进入A172肿瘤细胞并产生抑制活性。结论成功制备出新氰基丙烯酸烷氧基酯脑靶向纳米微球,具有良好的ASON负载及递送能力,为核酸药物提供了新的载体。 展开更多
关键词 氰基丙烯烷氧基酯 纳米微球 转化生长因子-Β2 反义寡核苷酸 胶质瘤
黄芩苷和沉默基因acrA、marA和acrD对耐药大肠埃希菌环丙沙星敏感性的影响
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作者 付赛赛 吴华 +3 位作者 苑丽 潘玉善 胡功政 刘建华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期303-307,共5页
为探讨反义寡核苷酸(ASODN)沉默acrA、marA和acrD基因前后,黄芩苷对,临床耐药大肠埃希菌(Ecold环丙沙星敏感性的影响,设计并合成3个基因的ASODN引物,设置空白对照组、黄芩苷组、ASODN沉默组、ASODN沉默+黄芩苷组,分别转染到临... 为探讨反义寡核苷酸(ASODN)沉默acrA、marA和acrD基因前后,黄芩苷对,临床耐药大肠埃希菌(Ecold环丙沙星敏感性的影响,设计并合成3个基因的ASODN引物,设置空白对照组、黄芩苷组、ASODN沉默组、ASODN沉默+黄芩苷组,分别转染到临床耐药菌感受态细胞中,涂布于一定浓度环丙沙星平板上,培养观察菌落生长情况并计数。结果发现,相对于空白对照组,黄芩苷组菌落数显著降低;acrA、acrD和marA基因沉默组与空白对照组相比,除了acrD基因沉默1号菌株和marA基因沉默的Y17菌株外,其余菌株在环丙沙星平板上的菌落数也出现不同程度地下降,具有显著性差异;acrA、acrD和marA基因沉默+黄芩苷组与黄芩苷组相比,多数菌株在环丙沙星平板上的菌落数均出现不同程度地下降;acrA基因沉默+黄芩苷组与acrA基因沉默组相比,4株菌株变化差异不显著,Y17号菌株菌落数有所上升,J45号菌株在该基因沉默后,环丙沙星平板上的菌落数出现下降的趋势,差异显著;acrD基因沉默+黄芩苷组与acrD基因沉默组相比,除了1号菌株变化差异不显著外,其余5株菌株变化差异显著,但Y17号菌株菌落数上升;marA基因沉默+黄芩苷组与marA基因沉默组相比,除了Y17、Y35这2株菌株变化差异显著外,其余4株菌株变化差异不显著。以上结果表明,黄芩苷主要通过抑制acrA和marA发挥外排抑制作用,acrD不是其增强环丙沙星敏感性的主要靶点。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 大肠埃希菌 环丙沙星 黄芩苷
miR-21反义寡核苷酸联合顺铂对裸鼠骨肉瘤生长的抑制 预览
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作者 吴子晏 张卫国 《华中科技大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2017年第5期571-574,共4页
目的探讨miR-21反义寡核苷酸(anti-miR-21)联合顺铂对人骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的作用。方法将人骨肉瘤MG-63细胞株接种于裸鼠皮下,建立骨肉瘤裸鼠模型,并将裸鼠随机分为4组(对照组、顺铂组、anti-miR-21组、anti-miR-21+顺铂组),ant... 目的探讨miR-21反义寡核苷酸(anti-miR-21)联合顺铂对人骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的作用。方法将人骨肉瘤MG-63细胞株接种于裸鼠皮下,建立骨肉瘤裸鼠模型,并将裸鼠随机分为4组(对照组、顺铂组、anti-miR-21组、anti-miR-21+顺铂组),anti-miR-21采用瘤内直接注射、顺铂采用尾静脉注射,每日称量裸鼠体重、测量瘤体体积及取瘤后称量瘤体重量,并计算抑瘤率;体外实验将MG-63细胞分为对照组、顺铂组、anti-miR-21组、anti-miR-21+顺铂组,分组处理后用MTT法检测转染后细胞体外的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果经anti-miR-21联合顺铂治疗的肿瘤生长较对照明显要慢,且无论是在重量和体积上都与顺铂组有显著性差异。体外经anti-miR-21联合顺铂处理的肿瘤细胞增殖受到显著抑制,凋亡率明显增高,与顺铂组比较差异均具有统计学意义。结论 miR-21反义寡核苷酸联合顺铂在体外能显著抑制细胞生长、促进细胞凋亡;在体内能明显地抑制肿瘤生长,对人骨肉瘤裸鼠移植瘤具有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 MIR-21 反义寡核苷酸 顺铂 骨肉瘤
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COX-2反义寡核苷酸抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的研究
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作者 刘霞 刘文楼 +1 位作者 吴迪 卓士超 《中国临床研究》 CAS 2016年第9期1257-1259,共3页
目的 通过研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用并分析其抑制原理,探讨COX-2反义寡核苷酸对乳腺癌的作用意义。方法 MDA-MB-231细胞分为3组培养:对照组、正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸组。MTT实验... 目的 通过研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用并分析其抑制原理,探讨COX-2反义寡核苷酸对乳腺癌的作用意义。方法 MDA-MB-231细胞分为3组培养:对照组、正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸组。MTT实验检测细胞的增殖情况;转染48 h后,Western blot检测COX-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 与对照组、正义寡核苷酸组比较,COX-2反义寡核苷酸转染的细胞增殖受到明显抑制;蛋白表达明显下调;G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞所占比例显著降低(P均〈0.05)。结论COX-2反义寡核苷酸可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖;下调COX-2蛋白的表达;并调节细胞周期的分布。 展开更多
关键词 环氧合酶-2 正义寡核苷酸 反义寡核苷酸 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 细胞增殖
靶向Survivin反义寡核苷酸逆转MCF-7乳腺癌细胞三苯氧胺耐药的研究
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作者 宋燕 魏海峰 +4 位作者 宋文哲 谢忠士 宋世俊 张春福 谭岩 《中国妇幼保健》 CAS 2016年第8期1744-1747,共4页
目的探讨Survivin基因在乳腺癌细胞获得性三苯氧胺(TAM)耐药性形成中的作用以及靶向Survivin mRNA逆转乳腺癌细胞TAM耐药性的可行性。方法建立TAM耐药细胞株(TAM-R),用靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸(ASODN)联合10^-5M TAM分别... 目的探讨Survivin基因在乳腺癌细胞获得性三苯氧胺(TAM)耐药性形成中的作用以及靶向Survivin mRNA逆转乳腺癌细胞TAM耐药性的可行性。方法建立TAM耐药细胞株(TAM-R),用靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸(ASODN)联合10^-5M TAM分别作用于MCF-7细胞和MCF-7/TAM-R细胞72 h后,采用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞仪、原位杂交法检测细胞活性、克隆形成率、凋亡率及Survivin mRNA表达的变化。结果 MCF-7/TAM-R组的Survivin mRNA表达明显高于MCF-7组;ASODN联合应用TAM能够逆转MCF-7/TAM-R细胞对TAM的耐药性,其细胞活性、克隆形成率以及凋亡抑制程度明显强于TAM组(P〈0.05);靶向Survivin的反义寡核苷酸能够抑制Survivin mRNA的表达。结论 MCF-7细胞可能通过上调Survivin基因来对抗长期TAM刺激所诱导的细胞凋亡,从而促进TAM耐药性的形成,靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸能够逆转MCF-7细胞对TAM的耐药。 展开更多
关键词 乳腺癌 三苯氧胺耐药 凋亡抑制基因 反义寡核苷酸
Functional up-regulation of Nav1.8 sodium channel on dorsal root ganglia neurons contributes to the induction of scorpion sting pain
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作者 Pin Ye Liming Hua +6 位作者 Yunlu Jiao Zhenwei Li Shichao Qin Jin Fu Feng Jiang Tong Liu Yonghua Ji 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期132-144,共13页
BmK 我,从蝎子 Buthus martensi Karsch (BmK ) 的毒液净化了,是电压门钠隧道(VGSC ) 的一个受体 site-3-specific 调节的人并且能在老鼠导致疼痛相关的行为。tetrodotoxin 抵抗(TTX-R ) 钠隧道 Nav1.8 贡献大多数在背面的根 ganglia ... BmK 我,从蝎子 Buthus martensi Karsch (BmK ) 的毒液净化了,是电压门钠隧道(VGSC ) 的一个受体 site-3-specific 调节的人并且能在老鼠导致疼痛相关的行为。tetrodotoxin 抵抗(TTX-R ) 钠隧道 Nav1.8 贡献大多数在背面的根 ganglia (DRG ) 位于行动潜力向上的一击下面的钠水流神经原并且可以用作 BmK 指向的一条批评离子隧道我。此处,使用 electrophysiological,分子、行为的途径,我们调查了在 DRG 的 Nav1.8 的异常表示是否贡献 BmK 导致的疼痛的产生我。Nav1.8 的表示被发现显著地在跟随 BmK 的 intraplantar 注射的 mRNA 和蛋白质层次被增加我在老鼠。另外, TTX-R Nav1.8 钠隧道的当前的密度显著地被增加, Nav1.8 的 gating 动力学也从 BmK 我对待老鼠在 DRG 神经原被改变。而且,自发的疼痛和机械 allodynia,然而并非热痛觉过敏由 BmK 导致了我,被它的选择 blocker A-803467 显著地通过 Nav1.8 钠隧道的任何一个封锁减轻或在由在老鼠指向 Nav1.8 的 antisense oligodeoxynucleotide (AS-ODN ) 的 DRG 的 Nav1.8 表示击倒。最后,我被给看导致的 BmK 提高了疼痛行为在里面完全的 freund 的助手(CFA ) 在 DRG 由于 Nav1.8 的在表示上部分煽动了老鼠,它是。我们的结果建议 DRG 神经原上的 Nav1.8 隧道的功能的起来规定在老鼠贡献 BmK 我导致疼痛的发展。 展开更多
关键词 背根神经节神经元 电压门控钠通道 蝎子 DRG神经元 感应 调控 行为方式 反义寡核苷酸
HIF-1α反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制 预览
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作者 杨宝明 王顺祥 +4 位作者 吴晓慧 李建坤 黄宁 张越山 冯宁宁 《河北医药》 CAS 2016年第5期645-649,共5页
目的本研究通过应用HIF-1α反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)处理SMMC-7721肝癌细胞,观察其对SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制。方法肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照... 目的本研究通过应用HIF-1α反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)处理SMMC-7721肝癌细胞,观察其对SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制。方法肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞施加HIF-1α的ASODN干预,设浓度梯度和时间梯度。检测不同药物浓度、不同时间对SMMC-7721细胞的增殖的作用及对细胞周期和凋亡率的影响。对bcl-2、bax、surviving mRNA表达产物相对定量,并对SMMC-7721细胞胞浆bcl-2、bax、survivin蛋白进行相对定量分析。结果与对照组相比,各处理组OD值均有显著下降,细胞数量降低,且各实验组相比呈明显的时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义(P〈0.05)。不同浓度HIF-1α的ASODN处理细胞后,均可使各处理组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,且呈时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义(P〈0.05)。不同浓度HIF-1α的ASODN处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组bcl-2 mRNA和survivin mRNA表达均有显著下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。而bax的mRNA无明显变化趋势(P〉0.05)。不同浓度HIF-1α的ASODN处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组bcl-2和survivin的蛋白表达显著下降,bax的蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 HIF-1α的ASODN可以将SMMC-7721肝癌细胞株阻滞于G0/G1期,影响细胞周期进程,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。HIF-1α促进增殖抑制凋亡的可能机制是上调肝癌细胞Survivin和bcl-2的表达,下调bax的表达。针对HIF-1α抑制剂的应用为肝癌的治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 肝肿瘤 HIF-1Α bcl-2 BAX SURVIVIN 反义寡核苷酸 缺氧 增殖 凋亡
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靶向survivin基因反义寡核苷酸对MCF-7人乳腺癌细胞系凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响 预览 被引量:1
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作者 高砚春 陈竞 李金穗 《医学综述》 2016年第14期2865-2868,F0003共5页
目的探讨靶向:survivin基因反义寡核苷酸(asON)对MCF-7人乳腺癌细胞系凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。方法McF-7人乳腺癌细胞株分为正常组、脂质体组、正义组和反义组,正常组常规培养,并用Opti.MEM培养液代替转染液进行转... 目的探讨靶向:survivin基因反义寡核苷酸(asON)对MCF-7人乳腺癌细胞系凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。方法McF-7人乳腺癌细胞株分为正常组、脂质体组、正义组和反义组,正常组常规培养,并用Opti.MEM培养液代替转染液进行转染;脂质体组采用Lipofectamine2000一Opti.MEM代替转染液进行转染;正义组采用survivin正义寡核苷酸进行转染;反义组采用survivin基因asON转染。采用反转录聚合酶链反应检测各组survivinmRNA表达水平,四甲基偶氮唑盐法检测细胞抑制率;分别用紫杉醇处理McF-7细胞株,并检测紫杉醇处理后survivinmRNA表达水平和细胞抑制率。结果asON转染后,MCF-7细胞中survivinmRNA表达水平显著降低,其中反义组survivinmRNA表达水平显著低于正常组、脂质体组和正义组(0.34±0.10比0.63±0.10、0.74±0.20、0.73.±0.10),细胞抑制率:显著高于正常组、脂质体组和正义组[(51.32±7.42)%比(3.72±0.10)%、(4.12±0.10)%、(4.53±0.10)%],差异有统计学意义(P〈0.05)。转染后反义组细胞周期被阻滞于G2/M期;其中反义组G2/M期细胞比率显著高于正常组、脂质体组和正义组[(34.9±2.7)%比(21.5±2.8)%、(19.4±2.6)%、(18.8±1.9)%],反义组细胞凋亡率亦显著高于正常组、脂质体组和正义组[(16.3±1.2)%比(5.1±0.4)%、(5.3±0.5)%、(5.7±0.5)%],差异有统计学意义(P〈0.05)。各组经紫杉醇处理后survivinmRNA表达水平和细胞抑制率均显著增加,与不加药组比较差异有统计学意义(P〈0.05);其中反义组survivinmRNA表达水平显著低于正常组、脂质体组和正义组(0.62±0.15比1.37±0.33、1.47±0.33、1.33±0.26),细胞抑制率显著高于正常组、脂质体组和正义组[(84.75±9.62)%比(36.44 展开更多
关键词 乳腺癌 反义寡核苷酸 细胞凋亡 耐药 凋亡抑制蛋白
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