期刊文献+
共找到204篇文章
< 1 2 11 >
每页显示 20 50 100
轮状病毒反向遗传学研究进展
1
作者 赵毕妍 曾渊君 +1 位作者 李廷栋 葛胜祥 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期544-550,共7页
反向遗传学技术可直接在基因水平上对病毒的基因组进行操作,从而快速直接的对病毒复制、致病等机制进行详细的研究。目前,呼肠孤病毒科的多种病毒,例如,哺乳动物正呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,... 反向遗传学技术可直接在基因水平上对病毒的基因组进行操作,从而快速直接的对病毒复制、致病等机制进行详细的研究。目前,呼肠孤病毒科的多种病毒,例如,哺乳动物正呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)等均已利用反向遗传学技术这一有力工具,在病毒各项基础研究中取得了较大进展。但是,对于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员,反向遗传学操作系统的构建进展缓慢。自2006年成功建立依赖于辅助病毒的反向遗传学系统开始,直到2017年才成功建立完全只依赖于质粒的反向遗传学系统。本文将对轮状病毒反向遗传学发展过程作一简要综述,并对未来轮状病毒反向遗传学研究方向作一展望,以期为加快轮状病毒的感染机制等基础研究提供技术支撑。 展开更多
关键词 轮状病毒 反向遗传学 呼肠孤病毒科 感染性克隆 辅助病毒
表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒的构建
2
作者 黄星 宋杰 +5 位作者 李嘉祺 郑惠文 李洪哲 李恒 郭磊 刘龙丁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期446-453,共8页
柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫... 柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫苗的研发仍处于实验室研究阶段。本研究从改善CV-A16诱导体液免疫能力的角度出发,利用反向遗传学手段构建共表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A16-Chemokine(C-X-C motif)ligand 13,CV-A16-CXCL13)。首先利用全基因合成方法设计合成MluⅠ-T7-5’UTR-CXCL13-VP4-VP2-NdeⅠ片段,将该片段插入pCR-XL-TOPO-CV-A16载体中,获得pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13克隆载体。将该载体线性化,体外转录出重组病毒RNA并转染细胞,最终获得包装成功的CV-A16-CXCL13重组病毒。使用PCR检测到病毒感染细胞后趋化因子配体13(Chemokine(C-X-C motif)ligand 13,CXCL13)及结构蛋白VP1在基因水平的表达;免疫印记及免疫荧光结果检测到(CXCL13与VP1蛋白水平的表达;电镜结果显示重组病毒为直径20~30nm球状颗粒;增殖曲线显示重组病毒能够在细胞中正常复制。本研究成功构建了CV-A16-CXCL13病毒,为CV-A16感染特征的研究和疫苗研发提供参考。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型(CV-A16) 趋化因子配体13(CXCL13) 重组病毒 反向遗传学
登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆的构建、鉴定及稳定性分析
3
作者 房恩岳 王玲 +3 位作者 赵丹华 李明 刘明磊 李玉华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期827-834,共8页
目的构建稳定的登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆,为深入研究登革病毒毒力位点及嵌合疫苗研发提供参考。方法根据登革病毒4型Ban18HK20株基因组序列设计特异引物,将病毒全长cDNA分6段进行亚克隆构建,再将其逐一拼接连入高拷贝质粒pSPTM... 目的构建稳定的登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆,为深入研究登革病毒毒力位点及嵌合疫苗研发提供参考。方法根据登革病毒4型Ban18HK20株基因组序列设计特异引物,将病毒全长cDNA分6段进行亚克隆构建,再将其逐一拼接连入高拷贝质粒pSPTM中,获得稳定的病毒全长cDNA克隆,以其为模板体外转录RNA,并将RNA电转染Vero细胞,获得恢复病毒。通过蚀斑法、间接免疫荧光法、生长动力学试验、小鼠脑内致病力研究对恢复病毒的生物学特性进行鉴定,并利用RT-PCR扩增对传代病毒进行遗传稳定性研究。结果酶切及测序表明感染性克隆构建成功。获得的恢复病毒在蚀斑形态、病毒E蛋白表达、生长特征及小鼠脑内致病力等生物学特性方面同母本株一致,测序表明恢复病毒基因组序列与母本病毒相同,且遗传稳定。结论构建获得了稳定的Ban18HK20感染性克隆,建立了用于登革病毒研究的反向遗传学技术平台。 展开更多
关键词 登革病毒 反向遗传学 感染性克隆 恢复病毒
表达双基因的重组新城疫病毒载体的构建
4
作者 高超 李德山 肖莉杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第21期87-90,178,179,共6页
为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[rClone30-EGFP(NP/P)-RFP(P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘... 为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[rClone30-EGFP(NP/P)-RFP(P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘制生长曲线;通过免疫荧光试验检测重组新城疫病毒感染HepG2细胞后荧光蛋白的表达情况。结果表明:试验成功构建并拯救了表达双基因的重组新城疫病毒;重组新城疫病毒的生长动力学与亲本病毒相似,差异不显著(P>0.05);重组新城疫病毒能够在HepG2细胞中稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)。说明重组新城疫病毒感染HepG2细胞后可稳定表达双外源基因。 展开更多
关键词 重组新城疫病毒 反向遗传学 双基因 生长曲线 免疫荧光试验 增强型绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白
H5与H7亚型流感流行株嵌合病毒株的拯救及初步鉴定
5
作者 赵梦琳 孙伟洋 +11 位作者 张醒海 宫语晨 毕津豪 张亚敏 李元果 冯娜 王铁成 王化磊 赵永坤 杨松涛 夏咸柱 高玉伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期381-385,393共6页
目的探讨H5与H7亚型流感流行株嵌合病毒的拯救并进行鉴定,为新型流感疫苗的研发奠定基础。方法采用脂质体转染的方法,首先依照A型流感病毒A/PR/8/34 HA嵌合片段的设计对H5 2.3.4.4谱系HA和H7亚型的HA进行改造,利用反向遗传技术拯救A/B... 目的探讨H5与H7亚型流感流行株嵌合病毒的拯救并进行鉴定,为新型流感疫苗的研发奠定基础。方法采用脂质体转染的方法,首先依照A型流感病毒A/PR/8/34 HA嵌合片段的设计对H5 2.3.4.4谱系HA和H7亚型的HA进行改造,利用反向遗传技术拯救A/B型嵌合减毒株,对拯救成功的病毒株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定病毒滴度;从中选择H5亚型嵌合减毒株以104EID50/50μl的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察、记录小鼠的体重变化及死亡情况,并测定攻毒后第3 d及第6 d小鼠肺脏病毒复制能力。结果成功拯救出2种A/B型嵌合减毒株,分别命名为rA/B-H5-NS110和rA/B-H7-NS110,测序显示两株嵌合减毒株的序列与预期一致,并在电镜下观察到了流感病毒样粒子。rA/B-H5-NS110和rA/B-H7-NS110株在MDCK细胞上的病毒滴度均为104.50TCID50/ml;在鸡胚上的病毒滴度rA/B-H5-NS110为105.25EID50/ml,rA/B-H7-NS110株为105.44EID50/ml。小鼠致病性实验中H5亚型嵌合病毒感染组小鼠与对照组相比体重无明显下降,攻毒后小鼠存活率100%;攻毒后第3 d可在小鼠肺脏内检测到嵌合减毒株rA/B-H5-NS110的轻微复制,第6 d时未检测到病毒复制。结论成功地拯救出2株包含有H5 2.3.4.4谱系HA基因以及H7N9流感病毒HA基因的嵌合减毒株,为B型流感病毒包装机制的研究以及新型流感疫苗的研发提供了新的思路。 展开更多
关键词 B型流感病毒 致病性 反向遗传学
CSFV的反向遗传系统 预览
6
作者 赵妍 《中小企业管理与科技》 2018年第35期182-183,共2页
对于家猪和野猪来说,猪瘟是一种具有极高传染力及高致死率的烈性传染病。猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的病毒性传染病,CSFV属于黄病毒科,瘟病毒属,是一种单股正义RNA病毒。在CSFV的研究当中,反向遗传学应用十... 对于家猪和野猪来说,猪瘟是一种具有极高传染力及高致死率的烈性传染病。猪瘟是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever Virus,CSFV)引起的病毒性传染病,CSFV属于黄病毒科,瘟病毒属,是一种单股正义RNA病毒。在CSFV的研究当中,反向遗传学应用十分广泛,论文主要介绍几种比较成熟的CSFV反向遗传系统。近年来,反向遗传学在CSFV的研究方面得到不断发展,论文就CSFV的几种反向遗传系统进行系统阐述,以期为CSFV的研究及防控提供参考。 展开更多
关键词 CSFV 猪瘟 反向遗传学
在线阅读 下载PDF
反向遗传技术与猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗 预览
7
作者 李永霞 《兽医导刊》 2018年第7期46-47,共2页
反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学的认知路线为由表及里,是从生物体自身的性状、表型出发到它的遗传物质来研究生命的发生和发展规律。而反向遗传学则与经典遗传学恰恰相反,是一条由里及表的认知路线,其首先是获得生... 反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学的认知路线为由表及里,是从生物体自身的性状、表型出发到它的遗传物质来研究生命的发生和发展规律。而反向遗传学则与经典遗传学恰恰相反,是一条由里及表的认知路线,其首先是获得生物体基因组的全部序列,然后对靶基因有目的地进行加工和修饰,如基因插入、基因缺失、基因置换及定点突变等,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体,研究生物体基因组的结构与功能,以确定这些变化对表型性状的直接影响,与之相关的技术为反向遗传技术。 展开更多
关键词 反向遗传技术 二价灭活疫苗 猪口蹄疫 经典遗传学 反向遗传学 O型 A型 表型性状
在线阅读 下载PDF
猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9基因第642位氨基酸突变对病毒复制的影响 预览
8
作者 李华玮 姬鹏超 +3 位作者 王永芬 赵绪永 何健 赵孟孟 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第3期11-14,19共5页
为了探索Nsp9基因上与病毒复制相关的关键氨基酸位点,通过融合PCR方法突变第642位氨基酸,之后进行病毒的拯救,并对病毒的滴度进行测定。结果表明,突变第642位氨基酸之后可以成功拯救病毒,突变毒株的滴度与亲本毒株的滴度未有明显差异,... 为了探索Nsp9基因上与病毒复制相关的关键氨基酸位点,通过融合PCR方法突变第642位氨基酸,之后进行病毒的拯救,并对病毒的滴度进行测定。结果表明,突变第642位氨基酸之后可以成功拯救病毒,突变毒株的滴度与亲本毒株的滴度未有明显差异,但突变毒株的转录水平有所下降。初步得出结论:猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9基因第642位氨基酸与病毒滴度无关,与病毒转录相关。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因 反向遗传学 病毒拯救 642位氨基酸
在线阅读 下载PDF
犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定
9
作者 文兆海 毛丽萍 +5 位作者 胡远 程瑶 周海莹 陈凯云 翟少华 简子健 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2334-2338,共5页
探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)... 探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。 展开更多
关键词 重组狂犬病病毒 犬瘟热病毒N基因 反向遗传学 RT-PCR 间接免疫荧光
RNA病毒反向遗传技术及其应用
10
作者 周冬 高孟 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2018年第3期208-211,共4页
RNA病毒的反向遗传技术是RNA病毒在分子水平上的操作,用于研究病毒的遗传规律和生物学特性。它已广泛应用于生命科学研究的各个领域。文章从RNA病毒反向遗传技术的关键环节,即完整cDNA克隆技术,感染性转录体制备技术出发,进一步探... RNA病毒的反向遗传技术是RNA病毒在分子水平上的操作,用于研究病毒的遗传规律和生物学特性。它已广泛应用于生命科学研究的各个领域。文章从RNA病毒反向遗传技术的关键环节,即完整cDNA克隆技术,感染性转录体制备技术出发,进一步探究影响RNA病毒感染性的因素,在此基础上介绍反向遗传学技术在病毒研究各个领域的应用,最后对反向遗传技术的前景作出展望。 展开更多
关键词 RNA病毒 反向遗传学 完整cDNA克隆技术
两质粒系统重配甲型HIN1流感病毒株的研究 被引量:1
11
作者 周珊珊 杨晓岚 +5 位作者 孙芳 程晋霞 谷宏婧 段跃强 杨鹏辉 王希良 《免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期353-358,共6页
目的 构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。 方法 本研究通过构建克隆载体pfastbac△plhHTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体... 目的 构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。 方法 本研究通过构建克隆载体pfastbac△plhHTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plhHTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入pENTR-1A质粒,获得pENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。 结果 本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为28,形态符合流感病毒典型特征,大小80-120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。 结论 两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。 展开更多
关键词 反向遗传学 两质粒系统 流感病毒
新城疫病毒为疫苗载体的研究进展 预览
12
作者 董东晓 张东超 张文壮 《畜牧兽医科学(电子版)》 2018年第4期1-3,192共4页
文章综述了新城疫病毒(NDV)的分子生物学特征、基因组结构,同时,重点介绍病毒载体的研究进展、反向遗传学、新城疫病毒载体的应用研究进展等,为新城疫病毒载体的后续研究奠定了基础。
关键词 新城疫病毒 反向遗传学 载体
在线阅读 下载PDF
以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架的重组嵌合登革4病毒的构建与鉴定 预览
13
作者 解东洋 祝琴 +5 位作者 刘忠钰 赵慧 邓永强 叶青 李晓峰 秦成峰 《寄生虫与医学昆虫学报》 2018年第2期80-86,共7页
登革4型病毒近年来在我国东南沿海地区时有流行,威胁人民健康与公共卫生安全.本研究以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架,通过反向遗传学技术构建了携带登革4型病毒主要结构蛋白prM/E基因重组嵌合病毒(ChinDENV4);进一步通过蚀斑、 生长... 登革4型病毒近年来在我国东南沿海地区时有流行,威胁人民健康与公共卫生安全.本研究以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架,通过反向遗传学技术构建了携带登革4型病毒主要结构蛋白prM/E基因重组嵌合病毒(ChinDENV4);进一步通过蚀斑、 生长曲线、 动物实验等对其生物学特征进行了鉴定.结果显示,重组嵌合病毒ChinDENV4可高效表达登革4型病毒的结构蛋白,蚀斑大小与亲本株类似;ChinDENV4并能够在BHK-21、C6/36等细胞中高效复制,滴度分别达到1.26×105和1.58×106 PFU/mL.更重要的是,嵌合病毒ChinDENV4在乳鼠模型中的神经毒力显著弱于亲本株.本研究成功构建了乙脑/登革4型嵌合病毒,为下一步四价嵌合登革减毒活疫苗研究奠定了重要基础. 展开更多
关键词 乙脑病毒 登革4型病毒 反向遗传学 减毒活疫苗 嵌合病毒
在线阅读 下载PDF
人肠道病毒D68型微复制子的建立
14
作者 潘明磊 高帅 +4 位作者 成金燕 徐亚楠 李显煌 段宇琴 王涛 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期153-158,共6页
建立人肠道病毒D68型(EV-D68)微复制子体系。利用增强绿色荧光蛋白(EGFP)或萤火虫荧光素酶(FLuc)报告基因替换病毒编码区,通过酶切连接,构建EV-D68 T7和PolⅠ系统微复制子体系,获得重组质粒pT7-miniEGFP、pT7-miniFLuc、pHH21-min... 建立人肠道病毒D68型(EV-D68)微复制子体系。利用增强绿色荧光蛋白(EGFP)或萤火虫荧光素酶(FLuc)报告基因替换病毒编码区,通过酶切连接,构建EV-D68 T7和PolⅠ系统微复制子体系,获得重组质粒pT7-miniEGFP、pT7-miniFLuc、pHH21-miniEGFP、pHH21-miniFLuc和pHH21-miniFLucΔpolyC。微复制子转染RD细胞,48h后荧光显微镜观察EGFP表达情况或用双报告系统检测荧光素酶表达水平。T7和PolⅠ系统微复制子均可表达报告基因,但PolⅠ系统荧光素酶表达水平是T7系统的5倍。并且病毒非编码区的PolyC区域对于病毒蛋白的表达起着重要的作用。本研究成功构建了EV-D68微复制子体系,为EV-D68非编码区功能研究提供工具。 展开更多
关键词 人肠道病毒D68型(EV-D68) 反向遗传学 微复制子 RNA聚合酶Ⅰ 报告基因
口蹄疫病毒反向遗传操作技术体系建立及应用
15
作者 刘在新 李平花 +3 位作者 白兴文 孙普 卢曾军 包慧芳 《中国科技成果》 2018年第21期40-42,共3页
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生偶蹄动物共患的一种烈性传染病。该病是OIE法定必报的动物传染病之一,我国也将其列为一类动物疫病。长期以来,口蹄疫在世界范围内广泛流行,危害巨大。有效防控该病需要厘... 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生偶蹄动物共患的一种烈性传染病。该病是OIE法定必报的动物传染病之一,我国也将其列为一类动物疫病。长期以来,口蹄疫在世界范围内广泛流行,危害巨大。有效防控该病需要厘清病原的特性,研发适合对路的疫苗。本研究历经16年,在国内率先建立了口蹄疫病毒反向遗传操作技术体系,通过对我国历史代表株和当前流行株的致病性、基因功能、遗传表型变异的分子基础等研究,创制了国际首例口蹄疫标记疫苗,契合国家推进口蹄疫免疫无疫区建设之急需,将为我国口蹄疫的净化提供不可或缺的技术支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 反向遗传学 病原特性 标记疲苗
反向遗传操作技术在呼肠孤病毒中的研究与应用
16
作者 汤亚方 曾伟伟 +5 位作者 王庆 王英英 石存斌 冯茹 高辉 王承宝 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期950-958,共9页
呼肠孤病毒科成员复杂,宿主范围广,对动物危害较大,使用经典遗传学方法解决呼肠孤病毒研究中出现的诸多科学问题受到限制,反向遗传学技术的发展和应用极大促进了呼肠孤病毒的基因组功能、蛋白质的作用、致病机制、新型疫苗开发等方面的... 呼肠孤病毒科成员复杂,宿主范围广,对动物危害较大,使用经典遗传学方法解决呼肠孤病毒研究中出现的诸多科学问题受到限制,反向遗传学技术的发展和应用极大促进了呼肠孤病毒的基因组功能、蛋白质的作用、致病机制、新型疫苗开发等方面的研究。本文概述了呼肠孤病毒反向遗传操作技术的发展过程以及应用该技术取得的一些研究成果,并对该技术在呼肠孤病毒研究领域的推动作用进行了展望。 展开更多
关键词 呼肠孤病毒 反向遗传学 病毒拯救 应用进展
猪流行性腹泻病毒反向遗传操作技术及其应用 被引量:2
17
作者 于瑞嵩 董世娟 +5 位作者 司伏生 蒋凤英 谢春芳 陈冰清 喻利 李震 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期205-216,共12页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起猪(特别是新生仔猪)急性、高度传染性消化道疾病的主要病原之一;2010年底以来,猪流行性腹泻(PED)的再次暴发给我国乃至全球养猪业造成了巨大经济损失。最近,研究者已先后建立了基于靶向RNA重组技术... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起猪(特别是新生仔猪)急性、高度传染性消化道疾病的主要病原之一;2010年底以来,猪流行性腹泻(PED)的再次暴发给我国乃至全球养猪业造成了巨大经济损失。最近,研究者已先后建立了基于靶向RNA重组技术、细菌人工染色体(BAC)载体系统和体外连接技术的PEDV反向遗传学操作技术,为PEDV编码的蛋白质的功能、致病机制以及新型疫苗的研发开辟了新的思路。本文对PEDV反向遗传操作技术的研究进展及其在PEDV胰酶依赖性、S蛋白和ORF3蛋白的功能以及新一代疫苗研制等方面的应用现状进行了综述与展望。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 反向遗传学 胰酶 S蛋白 ORF3蛋白 细胞适应性 疫苗
新城疫疫苗载体研究进展 预览
18
作者 杨溢欢 赵久刚 +2 位作者 张素辉 付利芝 孙裕光 《畜禽业》 2017年第11期1-3,共3页
新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽类急性、热性、败血性和高度接触性传染病。新城疫病毒属禽副黏病毒I型,为不分节段单股负链病毒,能有效诱导机体产生强大的免疫应答,部分毒... 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽类急性、热性、败血性和高度接触性传染病。新城疫病毒属禽副黏病毒I型,为不分节段单股负链病毒,能有效诱导机体产生强大的免疫应答,部分毒株对鸡有强烈的致病性。新城疫病毒由于其病毒属性,可利用反向遗传学方法对其进行改造,构建疫苗载体。主要对NDV的基因组及利用NDV来构建疫苗载体的方法进行概述,对利用反向遗传学构建NDV疫苗载体,重组NDV病毒的研究进展进行了综合讨论。 展开更多
关键词 新城疫病毒 疫苗载体 分子生物 反向遗传学 重组病毒
在线阅读 免费下载
流感病毒为载体重组病毒株rHCV/FLU的构建及初步评价 被引量:1
19
作者 孙芳 胡雪凇 +4 位作者 任天宇 段跃强 王希良 张绍庚 杨鹏辉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期13-18,共6页
目的构建及拯救以流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株r HCV/FLU并对其进行评价。方法利用反向遗传学技术,选择流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将HCV 1b亚型的E1抗原基因经序列优化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置... 目的构建及拯救以流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株r HCV/FLU并对其进行评价。方法利用反向遗传学技术,选择流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将HCV 1b亚型的E1抗原基因经序列优化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,构建重组质粒p NS1-HCV,测序正确的重组质粒p NS1-HCV与PR8的7个重组质粒p HW191-PB2、p HW192-PB1、p HW193-PA、p HW194-HA、p HW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M转染共培养的COS-1和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株,命名为r HCV/FLU,并通过血凝试验、RT-PCR、Western blot、电镜观察病毒形态等方法对重组病毒鉴定。接着,重组病毒接种SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化。纯化获得的重组病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0 d、14 d免疫2次,设置104TCID50、105TCID50、106TCID503个剂量组,初步评价其免疫效果。结果成功拯救重组病毒株r HCV/FLU,血凝效价(HA)为29-10,病毒滴度Log10(TCID50/ml)为6.5。滴鼻免疫小鼠二免后14 d取小鼠血清及脾淋巴细胞,3个剂量组针对流感病毒的血抑(HI)效价均值分别为80、640和1 280,初步证明重组病毒株r HCV/FLU在小鼠体内能够产生较强体液免疫和细胞免疫应答反应。结论成功制备的重组病毒株r HCV/FLU在动物体内具有较好的免疫效果,为新型HCV疫苗的研制提供新的研究策略。 展开更多
关键词 反向遗传学 丙型肝炎病毒 重组病毒 PR8流感病毒
猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造 预览 被引量:2
20
作者 赵孟孟 钱娟娟 +5 位作者 崔甜甜 冯松林 王文佳 邢星 冯嘉萍 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期2852-2858,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性,本研究利用反向遗传... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性,本研究利用反向遗传学技术将PRRSV弱毒疫苗毒CH-1R的Nsp9基因进行克隆,酶切后连接到强毒株XH-GD的感染性克隆上,进行病毒的拯救。结果表明,成功构建替换了CH-1RNsp9基因的重组病毒。对重组病毒的生物学特性研究发现,拯救病毒的生长速度和病毒滴度明显高于亲本毒株rXH-GD,但是低于疫苗毒CH-1R,重组毒株的噬斑大小与CH-1R相似,初步推测疫苗株CH-1R的聚合酶有助于提高病毒的滴度。本试验为进一步研究Nsp9基因对病毒毒力的影响奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因 反向遗传学 病毒拯救
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 11 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈