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肺炎克雷伯菌整合子分布与耐药性关系 预览
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作者 王欢 马祉茜 +5 位作者 林淑云 汤英贤 李玉珍 温伟洪 李介华 徐令清 《中国实验诊断学》 2019年第2期309-312,共4页
目的通过调查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子在临床分离产ESBL与非产ESBL肺炎克雷伯菌中的分布情况,分析其与细菌耐药性关系。方法收集并保存临床送检标本分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌30株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌50株;采用BD phoenix100全自动细菌... 目的通过调查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子在临床分离产ESBL与非产ESBL肺炎克雷伯菌中的分布情况,分析其与细菌耐药性关系。方法收集并保存临床送检标本分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌30株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌50株;采用BD phoenix100全自动细菌鉴定仪进行鉴定及药敏试验;整合子及可变区测定采用聚合酶链式反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳,并对可变区阳性菌株进行测序分析。结果 80株肺炎克雷伯菌中检测出整合子Ⅰ阳性菌株共30株;其中,在产ESBL菌株中检出率为73.3%(22/30);非产ESBL肺炎克雷伯菌中检出率为16%(8/50);未检出Ⅱ类及Ⅲ类整合子。有8株成功扩增出可变区,检出dfrA1,dfrA12,dfrA17,dfrA25,AaadA1,aadA2,aadA5,orfC,orfF,cmlA1共10种耐药基因盒,与耐药表型有一定的相关性。结论 I类整合子在ESBL和非产ESBL的肺炎克雷伯菌中的分布存在明显差异,显示其与细菌耐药性关系密切,应予以足够重视。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 整合子 可变 超广谱Β内酰胺酶
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院内感染病原菌整合子结构的检测与耐药机制研究 预览
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作者 何学仙 何晓艳 +2 位作者 吴若芬 王乐 王振海 《宁夏医学杂志》 CAS 2018年第1期20-22,共3页
目的 研究整合酶I在院内感染病原菌中的分布及整合子结构介导的耐药分子机制。方法 分离2016年重症监护室、烧伤科、神经外科、普胸外科院内感染病原菌29株,用VITEK2 COMPACT全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏检测。采用聚合酶链式... 目的 研究整合酶I在院内感染病原菌中的分布及整合子结构介导的耐药分子机制。方法 分离2016年重症监护室、烧伤科、神经外科、普胸外科院内感染病原菌29株,用VITEK2 COMPACT全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏检测。采用聚合酶链式反应检测整合酶I基因,分析阳性株携带的整合子结构介导的耐药分子机制。结果 29株院内感染病原菌整合酶I检出率为93.10%,整合酶I在革兰氏阳性菌中也普遍存在。携带整合子可变区的菌株占整合酶I阳性株的51.72%,可变区包含aac A4-cat B8-aad A1、dfr A17-aad A5、aac A7、dfr A12-aad A2、aac C1-aad A1、aad A5-dfr A1-orf C、aac C1-dfr A1、aac C4-cml A1、aac C4-orf C-aac A1、dfr A17-aad A5、aac C4-cat B8-aad A1基因盒,携带整合子可变区的院内感染病原菌中对氨基糖苷类药物产生耐药的病原菌比例明显高于未携带整合子可变区的病原菌(P〈0.05)。结论 整合酶I在院内感染病原菌中分布广泛,整合子结构主要介导氨基糖苷类抗菌药物耐药性,整合子在耐药基因传播中起重要作用。 展开更多
关键词 院内感染病原菌 整合子 可变 耐药性
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羊口疮病毒单抗可变区氨基酸序列及同源建模分析
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作者 张雪 谭强 +5 位作者 赵文博 段旭阳 冯振月 马金柱 崔玉东 于永忠 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期863-870,共8页
为了解羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)单克隆抗体2E4的抗体可变区的分子特征,选择其轻链和重链可变区基因分别进行体外扩增和测序,并通过IgBLAST程序分析(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/),确定了2E4抗体可变区的互... 为了解羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)单克隆抗体2E4的抗体可变区的分子特征,选择其轻链和重链可变区基因分别进行体外扩增和测序,并通过IgBLAST程序分析(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/),确定了2E4抗体可变区的互补决定区(complementarity determining regions,CDRs)和骨架区(framework regions,FRs)氨基酸结构。继而,采用SWISS-MODEL同源建模方法,展示抗体分子轻、重链可变区的三维空间构型,并推测出可能的OR—FVB细胞抗原表位多肽结合部位(pocket)。目的基因测序结果显示:2E4轻链可变区(V L)基因扩增全长为324bp,编码108个氨基酸;2E4重链可变区(VH)基因扩增全长为345bp,编码115个氨基酸。IgBLAST结果显示:轻链与GenBank公布的GHP53(GI:197494)单抗轻链可变区序列基因序列一致性达到97.6%;重链与vHsAF34(GI:215263227)单抗重链可变区基因序列一致性达到98.6%。并且,2E4轻链CDRs(CDR1-CDR3)分别位于25~348a、52~54aa和91~98aa的序列位置;重链CDRs(CDR1-CDR3)分别位于25~32a8、50~57aa和96~104aa的序列位置。同源建模分析结果显示:这些CDRs区域共同形成的“pocket”极可能作为抗原表位多肽结合的位点。最终成功克隆2E4单抗可变区基因,分析了抗体轻、重链可变区CDRs构成形式,模拟了其空间构型,为进一步了解和验证“CDRs-表位”特异性结合的分子机制,并在Orf免疫保护中加以应用提供了可能。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 单克隆抗体 可变 基因克隆 序列分析 同源建模
耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌整合子检测与耐药性分析 被引量:3
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作者 李情操 卢雯君 +1 位作者 吴巧萍 魏取好 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2172-2175,共4页
目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中整合子的分布及可变区中基因盒的类型与细菌耐药性的关系,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法对宁波市医疗中心李惠利医院2012-2014年临床分离的33... 目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中整合子的分布及可变区中基因盒的类型与细菌耐药性的关系,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法对宁波市医疗中心李惠利医院2012-2014年临床分离的336株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌第1、2类整合子进行筛查,并对整合子阳性菌株的可变区序列进行测序分析;采用WHONET5.6和SPSS18.0软件对数据进行统计分析。结果 336株临床菌株中第1类整合子阳性菌株共有42株,阳性率为12.5%;没有筛选到第2类整合子阳性菌株;42株整合子阳性菌株中,23株可变区基因盒为aadA6△-orfd,10株可变区基因盒为aadA6△-ISPa21-aadA6△-orfd,为氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因,其余9株可变区未整合基因盒;整合基因盒aadA6△-orfd菌株组阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率均明显高于未整合基因盒菌株组(P〈0.05);而整合基因盒aadA6△-ISPa21-aadA6△-orfd菌株组阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率介于上述两组之间;42株整合子阳性菌株对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、头孢吡肟、头孢他啶、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率分别为57.1%、73.8%、85.7%、80.9%、95.2%、83.3%和88.1%,均显著高于整合子阴性菌株(P〈0.01)。结论耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌整合子的携带率相对较低,可变区所携带的耐药基因主要为氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因,基因盒与菌株的耐药性呈高度相关,整合子可能还存在着其他机制参与耐药表型的产生。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 整合子 可变 耐药性
抗体与抗体药物的前世今生 预览 被引量:2
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作者 许卓斌 王旻 《自然杂志》 2016年第4期271-277,共7页
抗体药物是生物技术制药领域的一个重要方面。抗体具有识别抗原的特异性,因而利用抗体诊断与治疗疾病是医药研究者长期以来追求的目标。抗体的发现与应用离不开免疫学。从免疫系统入手,详细介绍了抗体物质发现的历史进程与临床应用。... 抗体药物是生物技术制药领域的一个重要方面。抗体具有识别抗原的特异性,因而利用抗体诊断与治疗疾病是医药研究者长期以来追求的目标。抗体的发现与应用离不开免疫学。从免疫系统入手,详细介绍了抗体物质发现的历史进程与临床应用。近年来,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术已成为生物技术制药领域的热点。抗体药物的研制与产业化正以迅速的发展势头进入新的时代。 展开更多
关键词 抗体 可变 单克隆抗体 人源化 基因工程
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抗-D抗原决定簇互补区多肽遮蔽RhD抗原的效果 预览 被引量:1
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作者 庄乃保 吴凡 +2 位作者 徐华 周华友 张印则 《广东医学》 CAS 北大核心 2016年第3期336-339,共4页
目的建立抗-D抗原决定簇互补区(CDRs)多肽遮蔽Rh D抗原的方法,并对遮蔽效果进行评价。方法根据抗-D CDRs氨基酸残基顺序合成多肽,使用流式细胞术检测红细胞表面Rh D抗原在多肽遮蔽前后的荧光强度;荧光显微镜下观察多肽与Rh D抗原的结... 目的建立抗-D抗原决定簇互补区(CDRs)多肽遮蔽Rh D抗原的方法,并对遮蔽效果进行评价。方法根据抗-D CDRs氨基酸残基顺序合成多肽,使用流式细胞术检测红细胞表面Rh D抗原在多肽遮蔽前后的荧光强度;荧光显微镜下观察多肽与Rh D抗原的结合情况;使用在线分析工具对有效多肽进行理化性质及二级结构分析。结果不同多肽对Rh D抗原的遮蔽效果有较大差异,其中3号多肽遮蔽效果较理想,荧光强度显著降低。结论抗-D CDRs多肽可有效遮蔽Rh D抗原。 展开更多
关键词 抗-D 可变 Rh D抗原 多肽 遮蔽
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特异性嵌合抗原受体的T细胞肿瘤免疫治疗相关专利申请状况分析与研发进展 预览 被引量:1
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作者 王溯铭 高巍 《中国医药生物技术》 2015年第4期326-329,共4页
1989年,Eshhar研究小组首次提出将针对肿瘤抗原单克隆抗体的可变区和T细胞受体(T cell receptor,TCR)的亚基融为一体,重定向T细胞的免疫反应。表达特异性嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的T细胞以抗原依赖、非MHC限制... 1989年,Eshhar研究小组首次提出将针对肿瘤抗原单克隆抗体的可变区和T细胞受体(T cell receptor,TCR)的亚基融为一体,重定向T细胞的免疫反应。表达特异性嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的T细胞以抗原依赖、非MHC限制的方式结合肿瘤抗原,启动并活化下游级联反应,特异性杀伤肿瘤。这一尝试开启了嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T immunotherapy)的序幕。 展开更多
关键词 抗原受体 T细胞肿瘤 肿瘤免疫治疗 特异性 抗原单克隆抗体 肿瘤抗原 可变 免疫反应 专利申请 细胞毒活性
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一株抗JEV单抗可变区的计算机建模及其与JEVE蛋白的分子对接
8
作者 寇甜甜 杨滨 +1 位作者 王媛 丁天兵 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期289-292,共4页
目的利用计算机建模获得单克隆抗体2F2可变区三维结构,再与日本脑炎病毒(JEV)E蛋白进行模拟分子对接,了解JEV E蛋白上与2F2作用的关键氨基酸位点,为阐明2F2的中和作用机制奠定基础。方法利用BLASTP软件在蛋白质数据库(PDB)中搜索2F... 目的利用计算机建模获得单克隆抗体2F2可变区三维结构,再与日本脑炎病毒(JEV)E蛋白进行模拟分子对接,了解JEV E蛋白上与2F2作用的关键氨基酸位点,为阐明2F2的中和作用机制奠定基础。方法利用BLASTP软件在蛋白质数据库(PDB)中搜索2F2同源蛋白。以同源蛋白为模板,用Modeller软件对2F2可变区主链、侧链进行建模,组装出完整的2F2可变区三维结构模型并进行一系列分子动力学优化,得到能量最低的单抗可变区三维结构。最后利用Discovery Studio软件模拟2F2可变区与JEV E蛋白的分子对接。结果获得2F2可变区三维结构模型。模拟分子对接结果显示JEV E蛋白上与2F2可变区相互接触、作用的氨基酸位点有9个,即Ⅰ区的13位谷氨酸、16位丝氨酸、37位天冬氨酸和300位苏氨酸,Ⅲ区的336位赖氨酸、347位天冬氨酸、354位亮氨酸、387位精氨酸和388位甘氨酸残基。其中Ⅰ区13位谷氨酸、16位丝氨酸和37位天冬氨酸可能是中和表位必需的氨基酸。Ⅲ区的387位精氨酸和388位甘氨酸位于优势中和抗原表位区域,336位赖氨酸与已报道的337位中和表位非常接近。结论通过计算机建模确定JEV E蛋白上有9个与单克隆抗体2F2作用的主要氨基酸位点,为利用E蛋白突变体阐明2F2单抗的中和机制提供了依据。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 E蛋白 单克隆抗体 可变 计算机建模 分子对接
抗ORFV免疫球蛋白重链可变区基因序列的RT-PCR扩增及其多样性 被引量:1
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作者 包英夫 宋德光 +6 位作者 贺文琦 张希牧 李吉达 王改丽 毕经影 赵魁 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期526-529,共4页
利用RT-PCR方法从羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染绵羊脾脏总RNA中扩增获得免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)重链可变区cDNA克隆,随机挑选52个阳性克隆进行测序,获得49条完整的不重复序列。序列比对结果显示,49条序列的核苷酸... 利用RT-PCR方法从羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染绵羊脾脏总RNA中扩增获得免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)重链可变区cDNA克隆,随机挑选52个阳性克隆进行测序,获得49条完整的不重复序列。序列比对结果显示,49条序列的核苷酸同源性分别为84.3%(H7与H38)-100%(H5与H6)不等;绵羊IgH可变区V片段氨基酸聚类结果显示,克隆H1-H49的VH区段自动聚类为2个相对独立的单位。通过BLAST-N程序在GenBank数据库在线搜索,并结合其他参考序列进行比较分析,分析数据显示,D片段从9到46个碱基长度不等,无论是在核苷酸还是氨基酸序列上,其同源性均存在高度的变异性;结合其亲水性分布图可知,可变区的亲水性氨基酸主要分布在VH区域和D高变区,对照抗原指数图和表面可能性图,亲水性强的VH区域和D高变区易形成抗原决定簇。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 免疫球蛋白 重链 可变
A型流感病毒通用型人源化抗体的构建及初步鉴定 被引量:4
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作者 王铁成 任志广 +19 位作者 桑晓宇 于志君 张坤 高晓龙 孙伟洋 李元果 郑学星 高玉竹 耿海东 徐钰 解林红 吴长江 张晓田 孙贺廷 初冬 赵永坤 杨松涛 王化磊 高玉伟 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第6期481-485,560共6页
目的制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定。方法通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swis—sprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法... 目的制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定。方法通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swis—sprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法分析抗体的轻、重链可变区基因结构,用昆虫细胞偏嗜密码子优化氨基酸序列,合成抗流感病毒抗体轻、重链可变区基因;对合成氨基酸序列中的轻、重链可变区基因作酶切鉴定,将轻链可变区基因与杆状病毒表达载体PAC—K—CH3连接,构建PAC-κ—L-CH3,酶切合成的重链可变区基因与PAC—κ—L-CH3连接,构建PAC—FL—H—cH3重组表达载体,鉴定正确后,同杆状病毒DNA共转染至昆虫细胞(sf9)中,于27℃用无血清培养基培养,收集上清,应用各亚型流感病毒株灭活后进行血凝抑制试验和ELISA试验,检测制备的抗体对流感病毒的通用性;通过荧光抗体试验检测抗体在细胞中的表达。结果重组杆状病毒表达载体转染sf细胞后,传代上清中检测到抗体;血凝抑制试效价为1:2;ELIsA结果显示有3株制备的抗体对3种流感病毒呈阳性反应,1株对实验用的流感病毒株没有反应;转染后传代细胞的荧光抗体鉴定结果显示有阳性抗体表达。结论成功采用计算机筛选合成抗流感病毒抗体基因,初步获得A型流感病毒通用型抗体。 展开更多
关键词 人源化抗体 流感病毒 可变 PAC—rcH3
甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析
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作者 李慧瑾 李研 +7 位作者 孙晶莹 高锦伟 赵向绒 封青 谭天天 胡巧侠 李元 胡军 《生物技术通讯》 CAS 2013年第1期61-64,共4页
目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠... 目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果:巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论:建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 单克隆抗体 可变 巢式PCR 序列分析
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乙肝免疫球蛋白抗体的多样性 被引量:1
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作者 周世权 周吉航 +4 位作者 徐岳军 庄晓玲 李翊卫 李世波 刘晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期479-484,共6页
目的基于重链可变区的编码基因序列对乙肝免疫球蛋白(HBIG)中的IgG抗体进行分类。方法借用文献提供的引物,以HBsAb强阳性健康个体外周血中的总RNA为模板进行RT—PCR和Nested—PCR扩增,通过将产物克隆到T载体、随机挑选测序,分析并... 目的基于重链可变区的编码基因序列对乙肝免疫球蛋白(HBIG)中的IgG抗体进行分类。方法借用文献提供的引物,以HBsAb强阳性健康个体外周血中的总RNA为模板进行RT—PCR和Nested—PCR扩增,通过将产物克隆到T载体、随机挑选测序,分析并统计出插入子的VH-D-JH-Cγ组合方式。结果共获得56个有效克隆,全部为人VH-D-JH-Cγ序列,可分成49种序列,其中5种序列有2或3个序列完全相同的克隆。4个c1功能基因也全部出现,其中IGHG2频率最高(28次);23个VH3功能基因有11个出现,其中频率最高的是IGHV3-23(29次);23个D功能基因有16个出现,其中频率最高的是IGHD1—26(8次);6个JH功能基因则全部出现,其中频率最高的是IGHJ4(33次)。VH3-D—JH组合有33种,频率最高的是IGHV3·23/IGHD1—26/IGHJ4(8次),其中5种与IGHG2拼接,但这5种VH3-D—JH-c12序列仍有明显的差异。结论成功地从HBsAb强阳性健康个体外周血中克隆到由V。3亚家族参与重排的IgG重链可变区序列;初步证实可变区序列不仅在VH3-D-JH-Cγ组合方式上具有极大的多样性,而且在序列上也具有明显的差异性;基于可变区测序对IgG抗体或B细胞进行分类是可行的,但需大大提高挑取克隆的数量或改用新-代大规模测序技术。 展开更多
关键词 乙肝免疫球蛋白 重链 可变 反转录一聚合酶链反应 DNA测序
Anti-CHMP5 single chain variable fragment antibody retrovirus infection induces programmed cell death of AML leukemic cells in vitro
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作者 Hai-rong WANG Zhen-yu XIAO +7 位作者 Miao CHEN Fei-Iong WANG Jia LIU Hua ZHONG Ji-hua ZHONG Ren-rong OU-YANG Yan-lin SHEN Shu-ming PAN 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2012年第6期 809-816,共8页
目的: 过去表示的 CHMP5 被发现充当可能参予了引起白血病的 oncogene。在这研究,我们构造了 CHMP5 单个链变量碎片抗体(CHMP5-scFv ) retrovirus 并且由 retrovirus 在感染以后学习了 AML 白血病的房间的规划房间死亡(PCD ) 的变化。
关键词 程序性细胞死亡 白血病细胞 逆转录病毒 单克隆抗体 病毒感染 体外诱导 AML 可变
从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区 被引量:1
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作者 周吉航 周世权 +3 位作者 王晔恺 曾芳 马利娜 刘晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期479-483,共5页
目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGK)、Jκ(IGK)和cκ(IGK)的eDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收... 目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGK)、Jκ(IGK)和cκ(IGK)的eDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型。结果共设计出4对引物,其中引物对Rκ-C1[4-5-9]无产物,引物对Rκ.C1[1-2-7]、Rκ.C1[3-6-8]和Rκ.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列。没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5’端序列,其中Vκ·Jκ-1GK1组合的克隆33个,Vκ·Jκ.IGK2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGK1S10*01(12次),其次是IGK1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGK1-2-01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGK1*01和IGK2*03。33个Vκ-[IGK1-2*01]-[IGK1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGK1-2*01]-[IGK1-01](7次)。18个Vκ-[IGK1-2*01]-[IGK2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGK1S10*01]-[IGK1-2*01]-[IGKC2*03](5次)。Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异。结论利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因。 展开更多
关键词 外周血 免疫球蛋白 轻链 可变 反转录聚合酶链式反应
从兔外周血直接克隆IgG重链可变区 被引量:1
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作者 周世权 廖智 +2 位作者 杨林 周吉航 刘晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期762-766,共5页
目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段V_H(IGHV)、D(ICHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(I... 目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段V_H(IGHV)、D(ICHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的LocalBlast功能比对出c1的基因型,同时提交到IMGT/V—QUEST分析出所属的V_H、D和J_H胚系基因。结果获得25个克隆的插人子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的V_H、D、J_H胚系基因片段,以及C-y基因第1个外显子(CHl)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。V_H-D-J_H组合方式共出现18种,即使VH-D—JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。 展开更多
关键词 外周血 免疫球蛋白 重链 可变 反转录-聚合酶链反应 序列分析
水痘-带状疱疹病毒Oka株与临床分离株可变区基因的序列分析 被引量:1
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作者 陈哲文 金于兰 +2 位作者 瞿爱东 马相虎 王亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第11期1468-1471,共4页
目的对水痘-带状疱疹病毒(Varicella.zostervirus,VZV)Oka株(V-Oka株)与分离于临床水痘患者的野毒株进行可变区基因序列比对分析。方法提取V-Oka株和VZV临床分离株的基因组DNA,对其串联重复序列区(R区)进行PCR扩增和测序;将R... 目的对水痘-带状疱疹病毒(Varicella.zostervirus,VZV)Oka株(V-Oka株)与分离于临床水痘患者的野毒株进行可变区基因序列比对分析。方法提取V-Oka株和VZV临床分离株的基因组DNA,对其串联重复序列区(R区)进行PCR扩增和测序;将R3基因的纯化产物与pMDl8.T载体连接,转化感受态大肠杆菌JMl09,提取质粒,经双酶切鉴定及测序;将测序结果与GenBank中登录的V—Oka株基因序列进行比对分析。结果R1~R5基因扩增产物及R3基因重组质粒的双酶切产物片段大小均与预期相符;V—Oka株较稳定,测序结果与GenBank中登录的V-Oka株R1-R5基因序列一致,野毒株R区序列呈现多态性,与V-Oka株有差异,1t4区序列区别明显。结论水痘患者的致病毒株为野毒株;R4的重复单位拷贝数可为临床快速鉴别V—Oka株与野毒株提供科学的手段。 展开更多
关键词 水痘疫苗 疱疹病毒3型 可变
群落分析中的16SrRNA及其基因16SrDNA优化扩增 被引量:19
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作者 周琳 张杰 《微生物学报》 CAS 北大核心 2010年第1期7-14,共8页
本文较为完整地综述了16SrRNA在细胞中的地位和作用、转录组成、其全长基因中可变区与保守区的位置、在不同种类中的拷贝数、二级结构,及其在群落研究过程中PCR扩增产生的16SrRNA的异常序列与解决方法;以期为更多的科研工作者提供可... 本文较为完整地综述了16SrRNA在细胞中的地位和作用、转录组成、其全长基因中可变区与保守区的位置、在不同种类中的拷贝数、二级结构,及其在群落研究过程中PCR扩增产生的16SrRNA的异常序列与解决方法;以期为更多的科研工作者提供可靠参考和借鉴,提高以16SrRNA为靶分子的群落研究结果的准确性和真实性。 展开更多
关键词 16S RRNA 可变 保守 异常序列
单链抗体在兽医上的应用前景 预览 被引量:1
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作者 任锐 王艳伟 吕雪峰 《兽医导刊》 2010年第12期 39-40,共2页
抗原刺激动物免疫系统产生抗体,抗体识别抗原的部位在其重链和轻链的可变区。抗体是机体防御系统的重要分子,用来识别和清除外来入侵物。为了尽可能的与各种外来物发生作用,免疫系统需要无数种特异性的抗体分子。
关键词 单链抗体 应用 兽医 免疫系统 防御系统 外来入侵 种特异性 可变
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利用RLM-RACE克隆抗DR5单克隆抗体重链可变区基因 预览
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作者 刘峰涛 季泽俊 马远方 《河南大学学报:医学版》 2010年第2期 86-88,共3页
目的:克隆抗DR5单抗重链可变区基因。方法:使用Trizol从杂交瘤366EC提取总RNA,采用RLM-RACE进行抗体重链可变区基因的扩增。结果:扩增出一个800 bp的基因片段,与小鼠抗体重链可变区基因高度同源。结论:RLM-RACE是一种非常有效的扩... 目的:克隆抗DR5单抗重链可变区基因。方法:使用Trizol从杂交瘤366EC提取总RNA,采用RLM-RACE进行抗体重链可变区基因的扩增。结果:扩增出一个800 bp的基因片段,与小鼠抗体重链可变区基因高度同源。结论:RLM-RACE是一种非常有效的扩增抗体重链可变区基因的方法。 展开更多
关键词 RLM-RACE 重链基因 可变 死亡受体5
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人鼠嵌合抗体的基因构建 被引量:4
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作者 胡迪超(综述) 张爱华(审校) 杨晓明(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS 2009年第9期933-936,940共5页
为了克服鼠单克隆抗体在人体治疗中出现的问题,经典的基因工程抗体技术将人源抗体恒定区替代鼠抗体的恒定区,即构建人鼠嵌合抗体。嵌合抗体不仅保留了亲本抗体的特异性和亲和力,大大降低了人抗鼠抗体(HAMA)反应,而且可表现出不同的生... 为了克服鼠单克隆抗体在人体治疗中出现的问题,经典的基因工程抗体技术将人源抗体恒定区替代鼠抗体的恒定区,即构建人鼠嵌合抗体。嵌合抗体不仅保留了亲本抗体的特异性和亲和力,大大降低了人抗鼠抗体(HAMA)反应,而且可表现出不同的生物学功能和半衰期。本文就嵌合抗体鼠抗体可变区基因的克隆、人抗体恒定区基因的钓取、鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因的拼接及表达载体和宿主细胞的构建作一综述。 展开更多
关键词 嵌合抗体 可变 恒定
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