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解淀粉芽孢杆菌的强启动子的克隆与鉴定
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作者 刘晓川 蔡旭新 陈华强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期41-43,82共4页
利用启动子探针质粒,从解淀粉芽孢杆菌XH7基因组中分离得到1个强度较高的启动子P28,该启动子在大肠杆菌中表达的β-半乳糖苷酶酶活为2350 Miller U/mL,在枯草芽孢杆菌中的酶活为3340 Miller U/mL。启动子的序列分析表明该启动子由σ^K... 利用启动子探针质粒,从解淀粉芽孢杆菌XH7基因组中分离得到1个强度较高的启动子P28,该启动子在大肠杆菌中表达的β-半乳糖苷酶酶活为2350 Miller U/mL,在枯草芽孢杆菌中的酶活为3340 Miller U/mL。启动子的序列分析表明该启动子由σ^K因子识别,由2个启动子串联而成,分别为编码羧基末端加工蛋白酶的基因(ctpA)和编码转醛酶的基因(tal)启动子,为芽孢杆菌启动子库提供了一个新的选择。 展开更多
关键词 启动子 解淀粉芽孢杆菌 Β-半乳糖苷酶
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非小细胞肺癌组织中抑癌基因RUNX3启动子甲基化与肿瘤侵袭相关基因E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达的关系 预览
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作者 张乐 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期316-319,324共5页
目的:探讨非小细胞肺癌组织中抑癌基因RUNX3启动子甲基化与肿瘤侵袭相关基因E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达的关系。方法:收集并分析我院2017年1月至2018年1月期间收治入院的65例非小细胞肺癌患者组织,采用巢氏甲基化特异性PCR(nMSP)法检... 目的:探讨非小细胞肺癌组织中抑癌基因RUNX3启动子甲基化与肿瘤侵袭相关基因E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达的关系。方法:收集并分析我院2017年1月至2018年1月期间收治入院的65例非小细胞肺癌患者组织,采用巢氏甲基化特异性PCR(nMSP)法检测RUNX3启动子甲基化情况;链霉菌素-生物素过氧化物酶(S-P)染色法检测肿瘤侵袭相关基因E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达并计数,并回顾性分析RUNX3启动子甲基化状态与临床病理特征、肿瘤侵袭相关基因表达的关系。结果:65例NSCLC组织样本中有27例出现RUNX3启动子的甲基化(41.54%)。RUNX3启动子甲基化与病理类型有关,腺癌(81.48%)高于鳞癌(18.52%,P=0.003);且与临床分期有关(P=0.003),主要分布于Ⅲ期(55.56%)和Ⅳ期(33.33%)。S-P染色并计数结果显示,E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达阳性率分别为56.92%、46.15%和52.31%;且在RUNX3基因启动子甲基化组中阳性表达率与非甲基化组中阳性率相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:RUNX3基因启动子的甲基化与NSCLC的侵袭和转移密切相关,有望为NSCLC的临床诊疗提供新的思路。 展开更多
关键词 RUNX3 启动子 甲基化 非小细胞肺癌 E-CAD MMP-7 TIMP-1
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小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响 预览
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作者 武晶晶 孔令慧 贾茹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-33,共5页
目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得... 目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得到小鼠Nkcc2基因启动子区片段(-1462 bp~+40 bp),并克隆入pGL3-Basic载体,构建萤光素酶报告基因载体;脂质体法将重组报告基因载体转染到HEK293T细胞24 h后,再以20-HETE处理转染细胞2 h,利用双萤光素酶报告基因检测系统分析萤光素酶活性。结果成功构建小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体;20-HETE可以显著下调小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的转录活性。结论 20-HETE通过转录调控机制下调小鼠Nkcc2基因的表达。 展开更多
关键词 Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白 启动子 20-HETE 基因克隆
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拟南芥AtNHX6基因启动子的克隆及表达分析 预览
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作者 王立光 陈军 李静雯 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期191-198,共8页
为了探明拟南芥内膜反向转运体AtNHX6基因的组织表达模式,从基因组中克隆了AtNHX6基因开放阅读框(ORF)上游侧翼调控区1 922bp序列,并成功构建AtNHX6基因启动子与GUS融合表达载体pCAM-BIA1381-proNHX6-GUS,通过农杆菌花序浸染法转化野生... 为了探明拟南芥内膜反向转运体AtNHX6基因的组织表达模式,从基因组中克隆了AtNHX6基因开放阅读框(ORF)上游侧翼调控区1 922bp序列,并成功构建AtNHX6基因启动子与GUS融合表达载体pCAM-BIA1381-proNHX6-GUS,通过农杆菌花序浸染法转化野生型拟南芥获得T3代纯合转基因拟南芥株系,经PCR检测扩增得到2 187bp目的条带。利用组织染色法鉴定转基因拟南芥的GUS表达模式发现,在子叶、下胚轴和花中GUS活性显著。在这些广泛表达的部位中,微管系统中的表达最为显著,真叶中只有局部检测到GUS表达;在根中GUS在根毛和侧根生长部位表达;在未成熟果荚中只有在果荚顶端和基部存在GUS活性,成熟果荚中只在果柄检测到GUS表达;在花中,雄蕊的花丝和花粉粒及雌蕊的柱头中检测到GUS表达。GUS染色分析结果表明,AtNHX6基因启动子与GUS的融合表达载体成功构建并正常启动GUS基因表达,且AtNHX6基因主要在拟南芥的子叶、下胚轴、根、花、果荚中的微管系统、根毛和侧根生长部位以及花丝、花粉、柱头中表达。 展开更多
关键词 AtNHX6基因 启动子 GUS 表达分析
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重组蔗糖异构酶在短短芽孢杆菌中的表达及发酵优化 预览
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作者 邹亮 吴敬 陈晟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期22-28,共7页
对重组菌株Brevibacillus choshinensis/pNCMO2-SI摇瓶发酵产蔗糖异构酶进行研究,进一步探讨了3L发酵罐不同发酵条件对菌体生长及产酶的影响。结果表明,摇瓶发酵后胞外酶活为50U/mL,最优3L发酵罐培养条件为:初始碳源为葡萄糖质量浓度10g... 对重组菌株Brevibacillus choshinensis/pNCMO2-SI摇瓶发酵产蔗糖异构酶进行研究,进一步探讨了3L发酵罐不同发酵条件对菌体生长及产酶的影响。结果表明,摇瓶发酵后胞外酶活为50U/mL,最优3L发酵罐培养条件为:初始碳源为葡萄糖质量浓度10g/L,初始氮源为多聚蛋白胨、牛肉浸膏质量浓度各15g/L,发酵温度30℃,溶氧30%,在此条件下得到的最高酶活为275U/mL。为了探索启动子对蔗糖异构酶表达的影响,分别选取来源于枯草芽孢杆菌的启动子Papr-E,Pnpr-E,Pamy以及来源于巨大芽孢杆菌的启动子Pxyl进行研究。结果表明,使用启动子Papr-E的表达量最高。进一步优化摇瓶发酵条件,重组菌株BCpNapr-SI摇瓶发酵的胞外上清酶活为137U/mL,在此条件下进行3L发酵罐发酵,最终发酵上清胞外酶活为485.5U/mL,是未优化启动子的1.76倍。 展开更多
关键词 蔗糖异构酶 短短芽孢杆菌 启动子 发酵优化
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蛋鸡骨钙素基因启动子变异及其转录活性研究
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作者 王涵 陈烨 +4 位作者 岳巧娴 周荣艳 陈辉 王德贺 锡建中 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期481-487,共7页
骨钙素(osteocalcin, OCN)是由成骨细胞分泌合成的一种非胶原骨基质蛋白,在骨重建、骨矿化等骨代谢过程中发挥重要作用。本研究旨在研究蛋鸡(Gallus gallus domesticus) OCN基因表达调控机制。选取20只50周龄大午粉蛋鸡,提取血液DNA;以E... 骨钙素(osteocalcin, OCN)是由成骨细胞分泌合成的一种非胶原骨基质蛋白,在骨重建、骨矿化等骨代谢过程中发挥重要作用。本研究旨在研究蛋鸡(Gallus gallus domesticus) OCN基因表达调控机制。选取20只50周龄大午粉蛋鸡,提取血液DNA;以Ensembl基因组数据库中OCN基因序列(ENSGALG00000029494)为模板设计引物,扩增OCN基因启动子;利用Sanger测序方法在OCN基因启动子区寻找潜在的遗传变异。采用JASPAR2018在线软件进行转录因子结合位点预测,并构建启动子不同单倍型荧光素酶报告基因重组载体,转染鸡成纤维细胞系DF-1后检测双荧光素酶活性。结果表明,所扩增蛋鸡OCN基因启动子区具有转录活性,含有维生素D受体(Vitamin D receptor, VDR)、RUNX (Runt related transcription factor)1、RUNX2和RUNX3等骨代谢相关转录因子结合位点,测序结果发现在启动子区存在插入片段CCGCACTCTGCACTTTGCGGCCG和缺失片段CCACA,以及C>G和A>G突变,组成4种单倍型;双荧光素酶检测结果表明,启动子区4种单倍型均具有转录活性,但不同单倍型间转录活性存在极显著差异(P<0.01),其中单倍型Ⅳ活性最高。本研究确定了OCN基因核心启动子区,且不同变异类型启动子的转录活性存在差异,为该基因在蛋鸡骨代谢中的转录调控提供了基础资料。 展开更多
关键词 蛋鸡 骨代谢 骨钙素基因(OCN) 启动子
黄颡鱼bmp2a与bmp4基因启动子的克隆及分析 预览
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作者 邰志鹏 徐异桓 +1 位作者 张电光 谭肖英 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期91-96,共6页
为研究黄颡鱼bmp2a与bmp4基因的功能及其相关转录因子的调控网络,采用RLM-5′RACE方法确定bmp2a与bmp4基因的转录起始位点,通过hiTAIL-PCR方法克隆bmp2a与bmp4基因启动子序列并运用生物信息学方法预测启动子序列上的关键转录因子结合位... 为研究黄颡鱼bmp2a与bmp4基因的功能及其相关转录因子的调控网络,采用RLM-5′RACE方法确定bmp2a与bmp4基因的转录起始位点,通过hiTAIL-PCR方法克隆bmp2a与bmp4基因启动子序列并运用生物信息学方法预测启动子序列上的关键转录因子结合位点。结果显示,bmp2a与bmp4基因的转录起始位点分别位于bmp2a与bmp4基因编码区上游的391 bp与351 bp处。克隆bmp2a与bmp4的1 830 bp、1 962 bp启动子序列,在启动子序列的基础上预测出AP1、SP1、E-box、GATA1、CREB、PPARγ、SOX5、SOX6和SOX9等转录因子的结合位点,提示这些转录因子对bmp2a与bmp4基因的转录调控发挥潜在的重要作用。 展开更多
关键词 黄颡鱼 骨形态形成蛋白 启动子 转录因
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华贵栉孔扇贝MSTN基因启动子的功能分析 预览
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作者 范嗣刚 赵超 +2 位作者 王鹏飞 闫路路 邱丽华 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期63-68,共6页
为了解肌肉生长抑制素 myostatin(MSTN)在华贵栉孔扇贝(Chalmys nobilis)闭壳肌肌肉生长和发育过程中所起的负调控作用,对华贵栉孔扇贝的 MSTN启动子序列进行了生物信息学分析。结果显示,MSTN启动子序列长 1358bp,有 4个转录起始位点。... 为了解肌肉生长抑制素 myostatin(MSTN)在华贵栉孔扇贝(Chalmys nobilis)闭壳肌肌肉生长和发育过程中所起的负调控作用,对华贵栉孔扇贝的 MSTN启动子序列进行了生物信息学分析。结果显示,MSTN启动子序列长 1358bp,有 4个转录起始位点。核心启动子区为-100~-51bp。有 1个 TATA-box(-92~-86bp)和 2个 E-box等顺式作用元件;潜在的转录因子结合位点有 MEF2、MEF3、FoxO、MTBF和 MyoD等;启动子区域无CpG岛。成功构建了 6个 MSTN启动子不同长度片段的荧光素酶表达载体,瞬时转染到 293T细胞并进行双荧光素酶报告基因活性检测,表明 6个启动子片段均有转录活性,PGL-534的活性最高,其次为 PGL-274、PGL-22和 PGL-102,最低的为 PGL-995。-216~-364区域可能存在负调控基因表达的转录因子结合位点,-364~-825区域可能存在正调控基因表达的转录因子结合位点. 展开更多
关键词 华贵栉孔扇贝 MSTN 启动子 瞬时转染 功能分析
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海南地区人群动脉硬化性脑梗死与PCK1启动子-232基因多态性的相关性研究
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作者 林树楷 陈明磊 +1 位作者 高唯一 林康 《神经损伤与功能重建》 2019年第3期113-115,131共4页
目的:探讨海南地区人群动脉硬化性脑梗死与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因(PCK1)启动子-232基因多态性的关系。方法:选取动脉硬化性脑梗死患者160例为观察组,另选取同期在我院行健康体检的成年人160例为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片... 目的:探讨海南地区人群动脉硬化性脑梗死与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因(PCK1)启动子-232基因多态性的关系。方法:选取动脉硬化性脑梗死患者160例为观察组,另选取同期在我院行健康体检的成年人160例为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测PCK1启动子-232基因多态性,采用超声多普勒技术检查颈总动脉内膜中层厚度和颈动脉斑块情况,并监测血糖和血脂情况。结果:观察组中GC基因型和GG基因型患者的餐后2h血糖和LDL高于CC基因型(F=12.811,54.169,均P<0.001)。与对照组相比,观察组中GC和GG基因型频率及G等位基因频率明显较高(χ^2=13.341、10.807,均P=0.001)。在易损斑块中,观察组GC基因型和GG基因型及G等位基因的分布明显大于非易损斑块(χ^2=5.186、7.276,P=0.023、0.007)。2组不同基因型之间两侧颈总动脉内膜中层厚度比较差异无统计学意义(F=0.742、0.485、1.139、0.727,P=0.478、0.617、0.325、0.487)。结论:PCK1启动子-232基因多态性与海南地区人群动脉硬化性脑梗死的发生情况有一定相关性,其中以G等位基因较为突出。 展开更多
关键词 脑梗死 PCK1 启动子 多态性
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启动子探针载体的构建及橡胶树白粉菌启动子筛选鉴定
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作者 徐良向 刘耀 +6 位作者 廖小淼 王义 M.J.N.Rajaofera 何其光 刘文波 林春花 缪卫国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期51-57,共7页
旨在构建适于快速检测橡胶树白粉病菌(Oidium heveae)HO-73启动子的探针载体。以卡那霉素抗性基因Kan作为报告基因,在pUC19骨架载体,构建获得启动子探针载体pUC19-K,连入CaMV35S启动子做启动子探针载体功能验证;利用启动子探针载体pUC1... 旨在构建适于快速检测橡胶树白粉病菌(Oidium heveae)HO-73启动子的探针载体。以卡那霉素抗性基因Kan作为报告基因,在pUC19骨架载体,构建获得启动子探针载体pUC19-K,连入CaMV35S启动子做启动子探针载体功能验证;利用启动子探针载体pUC19-K对预测的启动子片段LY1、LY2、LY3、LY4进行筛选鉴定。将CaMV35S启动子连入到启动子探针载体中,得到可检测启动子活性的启动子探针载体pUC19-K;应用生物信息学软件对部分橡胶树白粉菌HO-73全基因组数据预测,得到4个理论上具有活性的启动子序列LY1、LY2、LY3、LY4,利用构建的启动子活性探针载体进行活性比较,卡那耐受性实验检测发现含LY2和LY3的菌株随卡那霉素浓度的升高耐受性更强,最终得到2个活性较强的启动子LY2和LY3。以上结果表明,构建的启动子活性探针载体可以有效、灵敏地用于HO-73强启动子的筛选和启动子活性检测。 展开更多
关键词 橡胶树白粉菌 启动子 探针载体
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梨糖转运相关基因PbTMT4启动子克隆及功能分析
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作者 程寅胜 陈健秋 +5 位作者 陈丹 吕佳红 张俊 张绍铃 伍涛 张虎平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-36,共12页
以‘砀山酥梨’(Pyrus bretschneideri‘Dangshan Suli’)为材料,利用梨基因组数据库,通过PCR获得了糖转运相关基因PbTMT4(Pbr032130.1)2 211 bp的CDS序列及其编码起始位点上游长度为1 220 bp的启动子序列。使用农杆菌介导法将PbTMT4导... 以‘砀山酥梨’(Pyrus bretschneideri‘Dangshan Suli’)为材料,利用梨基因组数据库,通过PCR获得了糖转运相关基因PbTMT4(Pbr032130.1)2 211 bp的CDS序列及其编码起始位点上游长度为1 220 bp的启动子序列。使用农杆菌介导法将PbTMT4导入拟南芥,与野生型对照植株相比,转基因拟南芥植株的生长速度更快,抽薹、开花时间更早,叶片糖积累量更高。生物信息学分析表明,该启动子中含有多个与逆境应答、激素信号和光信号相关的顺式作用元件。为进一步分析PbTMT4启动子功能,构建了该启动子与GUS基因融合的植物表达载体并转化拟南芥。对T3代转基因拟南芥各组织进行GUS活性染色和半定量分析,发现GUS基因在根、茎、叶、花和果荚中均有表达,NaCl、干旱、GA3、MeJA以及光照处理均能一定程度上提高转基因拟南芥中GUS基因的转录水平。逆境处理发现,PbTMT4转基因株系较野生型植株受到的伤害小。研究结果初步表明,PbTMT4可促进转基因拟南芥发育并提高糖积累量,可能在抗非生物胁迫中起重要的调控作用。 展开更多
关键词 启动子 液泡膜单糖转运蛋白(TMT) GUS基因
鸡HSP90AA1基因SNP检测及启动子区CpG岛的甲基化研究 预览
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作者 晁哲 吴望军 +4 位作者 邢漫萍 黄丽丽 孙瑞萍 刘海隆 郑心力 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期504-511,共8页
试验旨在获得鸡热休克蛋白90α(HSP90AA1)基因序列并分析其基因结构和相关遗传变异,检测HSP90AA1基因启动子区CpG岛的甲基化状态,初步探索HSP90AA1基因在肌肉组织生长发育中的作用。以文昌鸡和北京油鸡为试验材料,利用PCR扩增鸡HSP90AA... 试验旨在获得鸡热休克蛋白90α(HSP90AA1)基因序列并分析其基因结构和相关遗传变异,检测HSP90AA1基因启动子区CpG岛的甲基化状态,初步探索HSP90AA1基因在肌肉组织生长发育中的作用。以文昌鸡和北京油鸡为试验材料,利用PCR扩增鸡HSP90AA1基因组序列;通过基因测序寻找该基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点;使用在线软件MethPrimer预测鸡HSP90AA1基因中CpG岛的位置;应用MassArray质谱法检测鸡胸肌中HSP90AA1基因启动子区CpG岛的甲基化水平,比较分析文昌鸡和北京油鸡HSP90AA1基因的甲基化差异。结果显示,在鸡HSP90AA1基因组中共发现7个SNPs位点,分别位于启动子区(A-189G,C-109T)、第1外显子(A+6G)、第2外显子(C+343T)、第2内含子(A+634G、A+836G)和第7内含子(A+3449G);鸡HSP90AA1基因包含10个外显子和9个内含子,其启动子区存在1个CpG岛,位于-1 802~-469bp处;在HSP90AA1基因启动子区共检测了42个CpG位点的甲基化水平,文昌鸡和北京油鸡中分别有9个(CpG16.17.18、CpG21.22.23、CpG32.33和CpG57)和4个CpG位点(CpG1、CpG5.6和CpG57)在胸肌生长发育过程中发生甲基化改变。结果表明,文昌鸡与北京油鸡HSP90AA1基因序列信息和启动子区CpG岛的甲基化水平不同,这可能导致两种鸡对于应激反应具有不同的耐受程度。以上试验结果将为文昌鸡和北京油鸡生长发育规律、系统选育等方面的研究提供表观遗传学依据。 展开更多
关键词 文昌鸡 北京油鸡 HSP90AA1基因 启动子 甲基化
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紫花苜蓿高温诱导启动子pMsMBF1c的克隆与功能分析 预览
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作者 李小冬 莫本田 +5 位作者 牟琼 娄芬 陈文贵 陈光吉 张瑜 韩永芬 《草业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期128-137,共10页
植物耐热性受复杂而精细的调控。热诱导启动子能经济、高效的激活或关闭耐热调节途径关键基因的表达,在植物功能基因组研究与现代分子育种技术中起十分重要的作用。以紫花苜蓿耐热候选基因MsMBF1c的编码序列为基础,采用酶切连接的方法... 植物耐热性受复杂而精细的调控。热诱导启动子能经济、高效的激活或关闭耐热调节途径关键基因的表达,在植物功能基因组研究与现代分子育种技术中起十分重要的作用。以紫花苜蓿耐热候选基因MsMBF1c的编码序列为基础,采用酶切连接的方法分离获得了其上游1748bp序列,生物信息学分析发现该区域具有HSE与GATA结合位点等2个与植物耐热调节相关的保守模体,此外还有5个ABA应答元件(ABRE、MYB2、MIC2、CBF与DPBF)和2个MYB蛋白结合位点,说明MsMBF1c除了参与植物耐热性调节外,还可能参与其他抗逆性调节。构建pBI121-MsMBF1c::GUS双元载体转化野生型拟南芥,荧光定量分析热诱导后的转基因植物中GUS与AtMBF1c基因的表达发现其分别上调了5.4与4.8倍,并且高温诱导下转基因植株的组织化学染色分析同样证明MsMBF1c启动子显著受高温诱导。分离获得紫花苜蓿MsMBF1c启动子序列并转化拟南芥,并且从生物信息学、组织化学染色与基因表达等方面验证该序列能显著被高温诱导,为探讨紫花苜蓿耐热调控机制及通过分子生物技术改善紫花苜蓿耐热性提供理论支撑,最终为培育适应南方高温气候条件的紫花苜蓿新品种提供技术储备。 展开更多
关键词 高温 MBF1c 紫花苜蓿 转基因 启动子
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水貂DCT基因5′UTR克隆分析与启动子活性探究
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作者 李兰会 杜小龙 +4 位作者 王麒 葛琳涵 张乐超 李雪梅 李祥龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期524-533,共10页
旨在克隆获得水貂DCT基因5′UTR序列并分析其结构特征,预测转录调控元件并检测启动子活性,为探究DCT基因在调控水貂毛皮颜色形成中的作用提供理论依据。本研究利用PCR扩增黑貂、白貂和咖啡貂DCT基因5′UTR,构建咖啡貂DCT基因5′UTR的pGL... 旨在克隆获得水貂DCT基因5′UTR序列并分析其结构特征,预测转录调控元件并检测启动子活性,为探究DCT基因在调控水貂毛皮颜色形成中的作用提供理论依据。本研究利用PCR扩增黑貂、白貂和咖啡貂DCT基因5′UTR,构建咖啡貂DCT基因5′UTR的pGL3-1~pGL3-7和黑貂pGL3-4~pGL3-6缺失片段的荧光素酶报告基因重组质粒,检测各片段的启动子活性;利用亚硫酸氢盐法检测3种毛色水貂DCT基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果,克隆获得水貂DCT基因长8203bp的5′UTR序列,发现g.7133-7336为长204bp的转座元件,与其高相似度的100条序列中,一条为蜕皮动物总门线虫纲的索巴利吸虫,其他均来自犬形亚目。P3和P4片段具有显著的启动子活性(P<0.05);咖啡貂的CpG岛甲基化水平显著高于黑貂和白貂(P<0.05);咖啡貂CC单倍型启动子活性显著低于黑貂的TT单倍型片段(P<0.05)。结果表明,水貂DCT基因5′UTR长204bp的犬形亚目特异短散在元件Can-SINEs由蜕皮动物门的索巴利吸虫侵入动物基因组形成;基因上游32bp元件和近端域共同作用发挥启动子活性,而GC-box和CpG岛结构沉默水貂DCT基因启动;g.-684和g.-621位点的T>C突变形成的CC单倍型导致咖啡貂DCT基因的高甲基化与低启动子活性,从而抑制真黑素合成,产生咖啡色被毛特征。 展开更多
关键词 水貂 DCT 启动子 Can-SINEs CPG岛 甲基化
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泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性 预览
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作者 刘建云 谢鑫 +1 位作者 吴萍 熊建军 《中南大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期122-127,共6页
目的:克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法:采用PCR扩增MKK6基因启动子片段,并以该片... 目的:克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法:采用PCR扩增MKK6基因启动子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果:成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体;USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论:在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的转录。 展开更多
关键词 泛素水解酶22 丝裂原活化蛋白激酶激酶6 启动子 转录
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胡杨DREB2A和WRKY19基因启动子逆境响应元件及其功能分析
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作者 王叶利 唐文思 王华芳 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期428-436,共9页
胡杨(Populus euphratica Oliv.)是唯一适应沙漠环境的高大乔木树种,抗逆性极强。其抗逆机制对植物抗性育种极为重要,国内外极为关注。本研究以生物信息学和转GUS基因烟草瞬时表达等手段解析胡杨PeDREB2A和PeWRKY19基因启动子序列顺式... 胡杨(Populus euphratica Oliv.)是唯一适应沙漠环境的高大乔木树种,抗逆性极强。其抗逆机制对植物抗性育种极为重要,国内外极为关注。本研究以生物信息学和转GUS基因烟草瞬时表达等手段解析胡杨PeDREB2A和PeWRKY19基因启动子序列顺式作用元件。结果表明,两个启动子均有干旱、NaCl、4℃、ABA响应顺式作用元件,CANNTG (N=A/T/C/G)、GRWAAW (R=G/A, W=A/T)、ACGT和CACATG等,增强GUS基因表达。PeDREB2A基因启动子序列1 886 bp,分别含干旱、盐、低温、ABA响应顺式作用元件等9个、11个、9个和5个;-888~-1 271 bp为盐负调控区,-1 271~-1 738 bp为干旱正调控区和ABA负调控区,-1 738~-1 878 bp为盐正调控区和干旱负调控区。PeWRKY19基因启动子序列为1 734 bp,分别含干旱、盐、低温和ABA响应顺式作用元件16个、5个、11个和4个;-176~-417 bp为盐负调控和ABA负调控区,-417~-696 bp为干旱负调控区和低温正调控区,-696~-849 bp为盐正调控区。本研究为阐释胡杨抗逆分子机制提供基础。 展开更多
关键词 胡杨(Populus euphratica) 启动子 顺式作用元件 DREB2A WRKY19
桂花扩展蛋白基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1启动子克隆及活性分析 预览
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作者 高晓月 董彬 +4 位作者 张超 付建新 胡绍庆 赵宏波 梁立军 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-29,共7页
为研究扩展蛋白基因在桂花花开放过程中的作用机制,利用染色体步移法,从桂花(Osmanthus fragrans)中克隆得到花开放相关基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1起始密码子上游1108、808、945bp的启动子序列。利用在线数据库Plantcare预测启动子... 为研究扩展蛋白基因在桂花花开放过程中的作用机制,利用染色体步移法,从桂花(Osmanthus fragrans)中克隆得到花开放相关基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1起始密码子上游1108、808、945bp的启动子序列。利用在线数据库Plantcare预测启动子中的顺式作用元件,发现这3个启动子序列中均存在基本元件TATA盒和CAAT盒,还含有脱落酸、生长素、水杨酸等激素诱导元件及响应干旱、高温等多个与植物非生物胁迫相关的元件,如MBS、HSE。分别将这3个启动子与β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)报告基因融合进行瞬时表达,结果显示:OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1的启动子均能够驱动GUS基因在转基因烟草叶片中的表达。 展开更多
关键词 桂花 扩展蛋白基因 启动子 β-葡萄糖苷酸酶基因
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青杄转录因子PwNAC30及其启动子序列的克隆与表达分析 预览
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作者 梁珂豪 孙永江 +1 位作者 袁义杭 张凌云 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期12-23,共12页
该研究以青杄(Picea wilsonii)为实验材料,通过PCR从青杄的cDNA文库中克隆得到一个NAC转录因子,命名为PwNAC30。生物信息学分析显示,PwNAC30开放阅读框1179bp,共编码392个氨基酸,在其N端存在保守的NAM(no apical meristem)结构域,可分为... 该研究以青杄(Picea wilsonii)为实验材料,通过PCR从青杄的cDNA文库中克隆得到一个NAC转录因子,命名为PwNAC30。生物信息学分析显示,PwNAC30开放阅读框1179bp,共编码392个氨基酸,在其N端存在保守的NAM(no apical meristem)结构域,可分为A~E等5个亚结构域。多序列对比和系统进化树分析显示,PwNAC30蛋白与同为云杉属的北美云杉(Picea sitchensis)聚为一类。启动子克隆分析显示,PwNAC30基因启动子上存在脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、TC-rich repeats等激素和逆境响应元件,在GA、ABA、MeJA、低温、干旱、盐的处理下,其启动子活性均明显增强。荧光定量PCR分析表明,PwNAC30在球果中的表达量最高,而在花粉和种子中的表达量最低。PwNAC30对于盐、干旱、低温、ABA、MeJA、GA处理均有响应,尤其对盐、干旱、MeJA的响应最为显著。亚细胞定位结果显示,PwNAC30蛋白定位于细胞核与细胞质,主要定位于细胞核中。酵母单杂及双杂结果表明,PwNAC30蛋白的全长和N端没有转录激活活性,而C端有转录激活活性,且PwNAC30自身能形成同源二聚体。研究表明,青杄PwNAC30基因可以作为一个转录因子发挥作用,其转录激活活性在C端,且自身能够形成同源二聚体结构;PwNAC30基因广泛参与了ABA、GA、MeJA等激素的信号通路,并对盐、干旱、低温处理有响应。 展开更多
关键词 青杄 NAC转录因 启动子 激素 逆境响应
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芥菜型油菜BjuA09DFR基因及其启动子的克隆与转化和表达 预览
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作者 袁玉辉 朱守晶 +4 位作者 邹杰 曾贤军 肖强 徐新仁 刘显军 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期24-31,共8页
该研究利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测了BjuA09DFR基因的时空表达特异性,并通过克隆BjuA09DFR基因启动子片段,构建该基因的启动子GUS融合表达载体,利用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,最后对拟南芥转基因材料不同发育时期的不... 该研究利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测了BjuA09DFR基因的时空表达特异性,并通过克隆BjuA09DFR基因启动子片段,构建该基因的启动子GUS融合表达载体,利用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,最后对拟南芥转基因材料不同发育时期的不同组织部位进行GUS组织化学染色,分析BjuA09DFR基因启动子的表达模式,为BjuA09DFR基因启动子功能的进一步研究提供理论依据。结果表明:(1)BjuA09DFR基因在芥菜型油菜的多个组织部位都有表达,尤其是在叶、花、角果和授粉后15d种子中表达量较高。(2)成功构建了BjuA09DFR基因启动子和GUS基因融合表达载体(pBjuA09DFR∷GUS),采用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,经卡那霉素筛选和PCR检测抗性苗,获得转基因拟南芥阳性苗。(3)GUS组织化学分析结果显示,转基因拟南芥材料的GUS活性具有明显的时空特异性,在叶、花、角果和种子中的染色较深,具有很强的GUS活性。 展开更多
关键词 芥菜型油菜 4-二氢黄酮醇还原酶基因(DFR) 启动子 拟南芥转化 GUS组织化学染色
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茧蜂病毒基因启动子的结构与调控 预览
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作者 蔡秋宸 何浩娟 +4 位作者 张力丹 陈冬梅 张莹 罗开珺 朱启顺 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期70-77,共8页
启动子的开启与关闭在基因的表达中起着重要的作用。启动子作为信号通路的终点,决定了信号通路最终的信息。本文通过利用预测启动子的生物信息学技术与方法,初步发现茧蜂病毒启动子可分为杆状病毒类似启动子和茧蜂病毒特有启动子两种,... 启动子的开启与关闭在基因的表达中起着重要的作用。启动子作为信号通路的终点,决定了信号通路最终的信息。本文通过利用预测启动子的生物信息学技术与方法,初步发现茧蜂病毒启动子可分为杆状病毒类似启动子和茧蜂病毒特有启动子两种,并且这两类启动子都具有真核启动子的结构。在茧蜂体内和鳞翅目宿主体内调控茧蜂病毒基因启动子的转录因子大不相同,因此启动茧蜂病毒基因启动子的通路也有所不同。在茧蜂病毒基因整合到宿主细胞的核DNA中后,利用激活的Toll信号通路和IMD信号通路完成自身的基因表达。本文以本实验室研究的双斑侧沟茧蜂病毒(Microplitis bicoloratus bracovirus)的Vank基因和寄主斜纹夜蛾Spodopteralitura的Innexin基因启动子为例,结合茧蜂病毒启动子研究的最新进展,综述了茧蜂病毒基因启动子的核心结构和NF-κB蛋白结合位点,为今后的研究打下一定基础。 展开更多
关键词 茧蜂病毒 启动子 转录因 信号通路 NF-ΚB
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