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乙型脑炎病毒疫苗株包膜蛋白K138E回复突变对其神经毒力的影响
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作者 袁磊 唐丽萍 +4 位作者 黄荣 冯亚岚 杨会强 杨健 李玉华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期790-795,共6页
目的探索乙型脑炎疫苗株包膜蛋白(E蛋白)138位氨基酸向野毒株回复突变对其神经毒力与神经侵袭力的影响。 方法采用重叠延伸PCR技术扩增含有K138E突变位点的DNA片段,构建乙脑疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突变的病毒感染性克隆,体外转录病毒R... 目的探索乙型脑炎疫苗株包膜蛋白(E蛋白)138位氨基酸向野毒株回复突变对其神经毒力与神经侵袭力的影响。 方法采用重叠延伸PCR技术扩增含有K138E突变位点的DNA片段,构建乙脑疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突变的病毒感染性克隆,体外转录病毒RNA,电转染BHK21细胞拯救病毒,绘制病毒生长曲线,采用蚀斑试验与测序鉴定突变病毒,通过动物试验评价突变病毒与疫苗株对昆明小鼠的神经毒力和神经侵袭力。 结果酶切和测序表明K138E突变病毒感染性克隆构建成功,并通过电转染BHK21细胞包装得到K138E突变病毒。蚀斑试验显示突变病毒的蚀斑稍大于疫苗株,两株病毒的生长曲线与神经侵袭力无明显不同,但突变病毒神经毒力显著升高。 结论乙脑疫苗株E138位氨基酸回复突变后神经毒力增强,E138位氨基酸是调控疫苗株神经毒力的重要位点。 展开更多
关键词 乙型脑炎 回复突变 神经毒力 感染性克隆
哈茨木霉C2H2型转录因子Tha09974功能研究 预览
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作者 李昕玥 王丽荣 +2 位作者 李梅 吴蓓蕾 蒋细良 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期407-415,共9页
哈茨木霉Th33菌株能拮抗多种植物病原真菌,具有重要的研究和应用价值。实验室前期研究了哈茨木霉Th33 Gα蛋白基因Thga1的功能,发现Thga1敲除突变株的分生孢子梗和分生孢子量显著减少。对该敲除株和Th33进行转录组测序,发现共有29个转... 哈茨木霉Th33菌株能拮抗多种植物病原真菌,具有重要的研究和应用价值。实验室前期研究了哈茨木霉Th33 Gα蛋白基因Thga1的功能,发现Thga1敲除突变株的分生孢子梗和分生孢子量显著减少。对该敲除株和Th33进行转录组测序,发现共有29个转录因子发生显著差异表达。本文选取差异表达量最大的C2H2型转录因子基因Tha09974进行功能研究。构建了Tha09974敲除突变株△9974及其回复突变株R9974,对野生菌Th33、△9974和R9974分别进行了生长、产孢及拮抗特性检测。结果显示,与野生菌Th33相比,△9974的菌落生长速度没有显著差异,菌丝生物量降低了51.5%,产孢量降低了73.6%;△9974较野生菌Th33对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea Pers.和黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum的生长抑制率分别降低了41.67%和45.15%。R9974和Th33的生长速度、生物量、产孢量及对番茄灰霉病菌的抑制率没有显著差异,对黄瓜枯萎病菌的抑制率低于野生菌Th33,但高于△9974。以上结果说明,Tha09974能够正调控Th33的生长、产孢和对病原菌的拮抗能力,并受到Thga1的正调控。本研究为进一步揭示木霉菌的产孢调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 哈茨木霉 转录因子Tha09974 基因敲除 回复突变 基因功能
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乙型脑炎病毒E315回复突变对小鼠神经毒力的影响
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作者 范凤鸣 付茵 +7 位作者 刘莉娜 杨欢 谢安平 石晓玲 刘杰 曾献武 李玉华 杨会强 《国际生物制品学杂志》 CAS 2019年第4期184-188,共5页
目的构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2包膜蛋白第315位氨基酸(E315)回复突变株,并分析该位点回复突变株在小鼠体内的神经毒力变化.方法采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获... 目的构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2包膜蛋白第315位氨基酸(E315)回复突变株,并分析该位点回复突变株在小鼠体内的神经毒力变化.方法采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获得回复突变株M315.通过比较SA14-14-2与突变株的噬斑大小和一步生长曲线,分析M315的增殖特征.采用小鼠模型测定该突变株的脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力和乳鼠传代返祖能力,分析疫苗株E315位点回复突变后毒力的变化.结果成功构建了回复突变株M315,其噬斑大小和增殖特征与疫苗株相似.M315对17~19日龄小鼠无皮下或腹腔感染入脑神经毒力,鼠脑病毒有很低但可检测的脑内神经毒力〔小于3.0 lg噬斑形成单位(plaque forming unit,PFU)/0.03 ml〕,皮下注射不致病.3~5日龄乳鼠脑内接种后发病,但脑内病毒毒力低于3.0 lgPFU/0.03 ml.结论在分子水平证明了E315位点是影响乙型脑炎疫苗安全性的关键位点之一,但影响较小.E315位点的回复突变虽使SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力和乳鼠传代返祖能力增强,但没有超出中国药典规定的毒力范围. 展开更多
关键词 脑炎病毒 日本 疫苗 减毒 回复突变 神经毒力 神经侵袭力
乙型脑炎病毒E264位点回复突变对疫苗安全性的影响 预览
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作者 刘莉娜 孙艳 +7 位作者 范凤鸣 杨欢 牟建超 陈智 刘俐 刘杰 曾献武 杨会强 《微生物学免疫学进展》 2018年第5期1-6,共6页
目的通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响。方法通过融合PCR扩增含基因组第1 769核苷酸位点回复突变的基因... 目的通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响。方法通过融合PCR扩增含基因组第1 769核苷酸位点回复突变的基因片段(T→G),替换SA14-14-2相应区域,使得编码E264位点的氨基酸位点由SA14-14-2的组氨酸(H)回复突变成强毒株SA14的谷氨酰胺(Q),将该回复突变株命名为r JEV264(H→Q),通过测定蚀斑大小和一步生长曲线,分析r JEV264的增殖特征;通过测定该突变株的昆明种小鼠脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力,分析E264位点回复突变后对小鼠毒力的影响。结果成功构建了回复突变株r JEV264,该突变株蚀斑大小与SA14-14-2相似,在PHK细胞上的增殖特征与SA14-14-2没有明显差异。r JEV264对小鼠有可检测的脑内神经毒力,毒力为5.51 lg PFU/LD50,但无论是皮下注射还是腹腔注射,都没有使小鼠发病。结论在分子水平证明了E264位点是影响乙脑减毒活疫苗安全性的关键位点之一,E264位点的回复突变增强了SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力,但没有增强小鼠神经侵袭力。 展开更多
关键词 乙型脑炎减毒活疫苗 E264 回复突变 神经毒力 遗传稳定性
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产L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌诱变后突变基因对生长和产酸的影响 预览
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作者 陈紫薇 张晓梅 +1 位作者 史劲松 许正宏 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2018年第7期49-54,共6页
在前期研究中,通过比较基因组学分析发现产L-丝氨酸野生型谷氨酸棒杆菌SYPS-062及其突变株SYPS-062-33a之间有12个基因突变。对其中5个差异基因进行回复突变或敲除的研究,发现丙酮酸脱氢酶亚基ace E点突变与突变株SYPS-062-33a副产物积... 在前期研究中,通过比较基因组学分析发现产L-丝氨酸野生型谷氨酸棒杆菌SYPS-062及其突变株SYPS-062-33a之间有12个基因突变。对其中5个差异基因进行回复突变或敲除的研究,发现丙酮酸脱氢酶亚基ace E点突变与突变株SYPS-062-33a副产物积累量直接相关。在此基础上其余7个突变基因对菌株产酸和生长的影响将进一步研究,在高产L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌ΔSSAAI中分别敲除这7个基因,发现敲除基因SD36_RS01255后,菌株OD562下降25.8%,L-丝氨酸产量下降26.4%,仅积累19.25 g/L。通过比对NCBI蛋白数据库,对基因SD36_RS01255编码的蛋白进行功能预测分析,发现其编码的蛋白部分区域与质粒pRi A4b ORF-3编码的蛋白类似,参与DNA修复。敲除基因SD36_RS01255影响DNA的修复,从而造成菌株生长和L-丝氨酸产量的下降。而过表达基因SD36_RS01255对谷氨酸棒杆菌ΔSSAAI的生长、L-丝氨酸的产量却未造成显著影响。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 L-丝氨酸 基因敲除 回复突变
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腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24退化的遗传机制与控制研究 预览 被引量:1
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作者 任韶霞 刘磊 +2 位作者 常利草 李金鑫 刘国生 《工业微生物》 CAS 2017年第2期24-28,共5页
经人工诱变获得的腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24很容易发生退化,通过分析回变菌株的遗传性状和考察理化条件对回复突变的影响,研究退化的机制,找到控制的方法。在选择培养基上筛选回变菌株,生长谱法分析其遗传型;于743 nm条件... 经人工诱变获得的腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24很容易发生退化,通过分析回变菌株的遗传性状和考察理化条件对回复突变的影响,研究退化的机制,找到控制的方法。在选择培养基上筛选回变菌株,生长谱法分析其遗传型;于743 nm条件下分光光度法测定回复突变细胞内积累的特有红色物质,研究各理化条件对回复突变的影响。退化原因是由于组氨酸缺陷型发生回复突变所致,突变菌株腺苷产量大幅度下降;降低保藏温度、减少传代次数可以有效地减缓菌种的衰退;种子制备过程中适当降低培养温度2℃-3℃、缩短培养时间(8 h)、降低培养基pH至中性偏酸性(6.5)以及加入胡萝卜素、叶酸等物质都可以有效降低回变率,在此条件下制备的种子生产性能得到提高,其腺苷产量可比对照提高9%。 展开更多
关键词 腺苷 菌种退化 组氨酸缺陷型 回复突变
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大肠杆菌不同菌株木糖代谢差异性的遗传本质 预览 被引量:1
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作者 孙金凤 田康明 +2 位作者 沈微 陈献忠 王正祥 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2017年第10期68-73,共6页
在木糖无机盐培养基中,不同大肠杆菌菌株的生长速率存在较大差异。在缓慢生长菌株Escherichia coli B0013和E.coli B2198中表达快速生长菌株E.coli K12的木糖运输和分解代谢的2个操纵子(xylBA-xylFGH),能够显著提高其利用木糖生长的... 在木糖无机盐培养基中,不同大肠杆菌菌株的生长速率存在较大差异。在缓慢生长菌株Escherichia coli B0013和E.coli B2198中表达快速生长菌株E.coli K12的木糖运输和分解代谢的2个操纵子(xylBA-xylFGH),能够显著提高其利用木糖生长的速率。进一步研究发现,单独表达木糖运输基因xylFGH即可以显著提高菌株起始生长速率。对菌株K12、B0013和B2198的xylFGH基因序列进行测定和分析比对,发现菌株B0013和B2198利用木糖生长缓慢是由于木糖运输载体基因发生无义突变而导致读框中断,B0013的xylH基因中TGG突变为TAG(Trp126*),B2198的xylG基因中CGA突变为TGA(Arg241*),木糖运输效率低下。在B0013中过量表达其自身的另一种木糖运输载体基因xylE或调控基因xylR,可以适当提高其生长速率。但是木糖高效运输系统xylFGH缺陷而导致的生长缓慢表型,并不能够仅仅通过表达低效运输载体基因xylE而显著改善。对菌株B0013的xylH基因进行回复突变,突变株恢复快速生长表型。测序结果发现,xylH基因第126个密码子因无义突变而形成的终止密码TAG,重新回复为Trp密码TGG。 展开更多
关键词 大肠杆菌 木糖运输载体 生长差异分析 回复突变 遗传本质
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BRCA2回复突变与卵巢癌获得性铂类耐药的研究进展 被引量:1
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作者 余智 黄建鸣 张国楠 《肿瘤预防与治疗》 2015年第2期104-107,共4页
目的:获得性铂类耐药是在卵巢癌治疗过程中的一个严重问题,也是复发性卵巢癌的一个主要临床特征。然而,其耐药机制尚未阐明。BRCA2突变的卵巢癌通过BRCA2(breast cancer susceptibilitygene 2,BRCA2)开放阅读框(opening reading fra... 目的:获得性铂类耐药是在卵巢癌治疗过程中的一个严重问题,也是复发性卵巢癌的一个主要临床特征。然而,其耐药机制尚未阐明。BRCA2突变的卵巢癌通过BRCA2(breast cancer susceptibilitygene 2,BRCA2)开放阅读框(opening reading frame,ORF)的回复突变恢复BRCA2蛋白功能,这可能是导致获得性以铂类为基础化疗抵抗的一个主要临床因素。本文综述了BRCA2回复突变与卵巢癌铂类耐药的研究进展。 展开更多
关键词 BRCA2基因 回复突变 卵巢癌 获得性铂类抵抗
农药登记中的Ames试验-概述 预览
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《农化市场十日讯》 2015年第19期36-37,共2页
Ames试验:即污染物致突变性检测,也称为鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验).污染物对人体的潜在危害,已引起人们的普遍关注.世界上已发展了百余种短期快速测试法,检测污染物的遗传毒性效应.B.N.Ames等经十余年努力,于1975年建立... Ames试验:即污染物致突变性检测,也称为鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验).污染物对人体的潜在危害,已引起人们的普遍关注.世界上已发展了百余种短期快速测试法,检测污染物的遗传毒性效应.B.N.Ames等经十余年努力,于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验(亦称Ames试验)已被世界各国广为采用. 展开更多
关键词 AMES试验 农药登记 鼠伤寒沙门氏菌 遗传毒性效应 回复突变 污染物 突变 潜在危害
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黄连素等中草药提取物对多重耐药性大肠杆菌gyrA基因的作用 预览 被引量:2
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作者 黄衍强 刘坤友 +5 位作者 莫小强 黄小凤 韦连登 韦红玉 陈源红 唐华英 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第17期2445-2448,共4页
目的:探索黄连素等中草药提取物对大肠杆菌耐药基NgyrA的回复突变作用.方法:用纸片扩散法(K-B)法筛选多重耐药大肠杆菌.在含黄连素等中草药提取物的威迫环境下培养多重耐药性大肠杆菌,每2d传代1次,共传15次,提取中药提取物作... 目的:探索黄连素等中草药提取物对大肠杆菌耐药基NgyrA的回复突变作用.方法:用纸片扩散法(K-B)法筛选多重耐药大肠杆菌.在含黄连素等中草药提取物的威迫环境下培养多重耐药性大肠杆菌,每2d传代1次,共传15次,提取中药提取物作用前后的耐药性大肠杆菌DNA,PCR扩增gyrA基因,并检测基因序列,对比前后突变情况.结果:对氧氟沙星、环氧沙星和诺氟沙星等耐药的多重耐药性大肠杆菌均出现gyrA基因突变,主要是第83和87位点分别出现C-T和G-A的突变;黄连素等中药提取物作用30d后未发现基因回复突变.结论:对喹诺酮类药物耐药的大肠杆菌有gyrA耐药基因突变,黄连素等中药提取物在30d内尚未能威迫多重耐药性大肠杆菌gyrA耐药基因发生回复突变. 展开更多
关键词 黄连素 多重耐药性 大肠杆菌 GYRA基因 回复突变
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E92A 是 HIV-1 整合酶耐药突变 N155S 的活性回复突变
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作者 李杉 刘斌 +3 位作者 李春华 谭建军 张小轶 王存新 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第5期472-479,共8页
HIV-1整合酶是目前抗艾滋病药物研发的重要靶点之一,整合酶的耐药突变是导致整合酶抑制剂类药物治疗失败的主要原因,但突变产生耐药性的机理仍不清楚.本工作通过人工构建突变型整合酶,测试其活性和耐药性,对整合酶的耐药机理进行... HIV-1整合酶是目前抗艾滋病药物研发的重要靶点之一,整合酶的耐药突变是导致整合酶抑制剂类药物治疗失败的主要原因,但突变产生耐药性的机理仍不清楚.本工作通过人工构建突变型整合酶,测试其活性和耐药性,对整合酶的耐药机理进行初步探索.构建整合酶的突变型包括E92A、N155S两种单突变及E92A/N155S双突变.通过基因工程操作引入突变、构建质粒、表达纯化得到整合酶蛋白.用基于磁珠的整合酶链转移ELISA测试整合酶的链转移活性,用S-1360和Raltegravir两种抑制剂测试整合酶的耐药性.另外,用Autodock软件做了S-1360和整合酶核心区(包括野生型和突变型)的分子对接.结果表明,N155S突变使整合酶链转移活性下降约80%,而E92A/N155S双突变仅使活性下降约42%,这表明N155S突变基础上的E92A突变可使整合酶的活性大幅回复.E92A和E92A/N155S对不同的抑制剂可产生不同的耐药性,它们对Raltegravir的耐药性强于对S-1360,突变对整合酶活性和耐药性的影响主要是通过改变整合酶活性中心结构实现的,E92A突变可能导致其与周围残基静电相互作用减弱,间接影响到D64和D116残基,产生活性回复作用. 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒(HIV) 整合酶 耐药性 回复突变
乙型脑炎疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸回复突变对其毒力的影响 预览 被引量:2
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作者 杨健 李玉华 +6 位作者 李竹石 林华 汪伟 刘丽娜 倪谦枝 曾献武 杨会强 《川北医学院学报》 CAS 2013年第4期325-330,共6页
目的:探索乙型脑炎病毒(JEV)疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸(E279)M?K回复突变(M279K)对其毒力的影响。方法:用重叠延伸PCR技术和基因克隆技术构建含有SA14-14-2包膜蛋白M279K突变的全长cDNA质粒pACNR-JEV(M279K),并... 目的:探索乙型脑炎病毒(JEV)疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸(E279)M?K回复突变(M279K)对其毒力的影响。方法:用重叠延伸PCR技术和基因克隆技术构建含有SA14-14-2包膜蛋白M279K突变的全长cDNA质粒pACNR-JEV(M279K),并以其为模板体外转录RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞得到恢复病毒rJEV(M279K),并比较恢复病毒和疫苗病毒在蚀斑大小以及对小鼠神经毒力等方面的差别。结果:酶切及测序表明质粒模板成功构建,除人为引入的突变外(碱基1813处T→A),无任何碱基突变,并发现rJEV(M279K)形成比疫苗株更小的蚀斑,但毒力与疫苗株无显著差异。结论:E279 回复突变影响乙脑疫苗SA14-14-2 病毒蚀斑大小,但并未明显增强疫苗株对小鼠的神经毒力。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 疫苗 回复突变
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破壁灵芝孢子粉致突变性的初步研究 预览 被引量:2
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作者 李志 杨颖 +2 位作者 张静 陈秀绢 黄俊明 《江西医药》 CAS 2013年第4期300-302,共3页
目的研究破壁灵芝孢子粉致突变的可能性,探讨其是否具有遗传毒性。方法通过微核试验、精子畸形试验和Ames试验,观察不同剂量的破壁灵芝孢子粉对小鼠骨髓细胞微核形成、精子畸形的产生和鼠伤寒沙门氏菌的回复突变情况的影响。结果2.5-10... 目的研究破壁灵芝孢子粉致突变的可能性,探讨其是否具有遗传毒性。方法通过微核试验、精子畸形试验和Ames试验,观察不同剂量的破壁灵芝孢子粉对小鼠骨髓细胞微核形成、精子畸形的产生和鼠伤寒沙门氏菌的回复突变情况的影响。结果2.5-10.0g/kg.BW破壁灵芝孢子粉处理的各剂量组小鼠的骨髓细胞微核形成率和精子畸形率都未出现明显增加,与相应的对照组相比无显著性差异;在加和不加代谢活化系统条件下,8-5000μg/皿破壁灵芝孢子粉处理的各剂量组的鼠伤寒沙门氏菌回复突变率均未出现明显升高,与相应的对照组相比无显著性差异。结论在本研究条件下未发现破壁灵芝孢子粉具有直接或间接的致突变作用,也未发现其具有遗传毒性。 展开更多
关键词 灵芝 遗传毒性 回复突变
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腺苷生产菌株的回复突变和性质检验 预览 被引量:1
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作者 孙谦 《曲靖师范学院学报》 2013年第6期40-44,70共6页
腺苷具有重要的医学价值,由RNA降解获取腺苷成本极高,用微生物发酵法生产腺苷具有重大的经济意义.作为腺苷的生产菌株,黄嘌呤缺陷型的枯草芽孢杆菌如果在生产过程中发生回复突变将会降低腺苷产量.本实验研究了枯草杆菌的黄嘌呤缺陷性菌... 腺苷具有重要的医学价值,由RNA降解获取腺苷成本极高,用微生物发酵法生产腺苷具有重大的经济意义.作为腺苷的生产菌株,黄嘌呤缺陷型的枯草芽孢杆菌如果在生产过程中发生回复突变将会降低腺苷产量.本实验研究了枯草杆菌的黄嘌呤缺陷性菌株是否会回复突变、以及突变菌株的各种性质,进行了V.P.,硝酸盐,高盐浓度,淀粉水解检验,以及进一步的IMP脱氢酶、黄嘌呤氧化酶、腺苷脱氨酶的活性分析,发现大量菌株发生回复突变,该缺陷型菌株遗传非常不稳定,这些突变菌株与生产菌株相比,IMP脱氢酶活发生显著变化,黄嘌呤氧化酶与腺苷脱氨酶的活力没有明显变化. 展开更多
关键词 枯草杆菌 腺苷 黄嘌呤 发酵 酶活 回复突变
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曲克芦丁原料药在Ames实验中的抗突变作用研究 预览 被引量:2
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作者 杨刚 陈雪 +2 位作者 杨崇甫 闵志强 杨奎 《黑龙江医药》 CAS 2012年第5期共3页
目的:探讨曲克芦丁原料药对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行评价.方法:采用直接平皿掺入法,将曲克芦丁原料药以5、1、0.2、0.04、0.008mg曲克芦丁/皿为终浓度,在活化与非活化条件下,分别与... 目的:探讨曲克芦丁原料药对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行评价.方法:采用直接平皿掺入法,将曲克芦丁原料药以5、1、0.2、0.04、0.008mg曲克芦丁/皿为终浓度,在活化与非活化条件下,分别与鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变菌株,37℃接触48小时,计数回变菌落数.结果:在5~0.008mg曲克芦丁原料药/皿的不同测试浓度,+S9与-S9两种测试系统条件下,其作用的5种测试菌株的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加,回变菌落背景正常,未显示其有抑菌作用.且无剂量-反应关系.结论:曲克芦丁原料药在本试验所确定的5mg/皿剂量范围内,对TA系列测试菌株无明显致DNA碱基置换及移码突变性. 展开更多
关键词 AMES试验 遗传毒性 回复突变 曲克芦丁
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一种溶菌酶样蛋白对肺炎链球菌毒力及荚膜多糖合成的影响
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作者 黄健 姜学美 +4 位作者 黄美容 杨晓亮 刘明伟 王虹 孟江萍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期59-65,共7页
【目的】为了研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)的一种假想的溶菌酶样蛋白在细菌生物学性状及其致病中的作用。【方法】利用长臂同源PCR对该基因进行敲出,并同时构建带有拯救质粒的缺失菌株,观察D39野生菌、缺失菌与带... 【目的】为了研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)的一种假想的溶菌酶样蛋白在细菌生物学性状及其致病中的作用。【方法】利用长臂同源PCR对该基因进行敲出,并同时构建带有拯救质粒的缺失菌株,观察D39野生菌、缺失菌与带有拯救质粒的缺失菌株在相关生物学性状及其致病力改变,从而鉴定这种假想溶菌酶样蛋白的功能。【结果】缺失菌与野生菌相比,细菌生长减缓,毒力下降,荚膜多糖合成明显减少。而将拯救质粒转入缺失菌株后,该溶菌酶样蛋白的mRNA表达水平较野生菌高,其毒力及荚膜合成较缺失菌显著增高,但未达到野生菌水平。【结论】这种溶菌酶样蛋白是肺炎链球菌的一种新毒力因子,可能通过参与调控肺炎链球菌增殖及荚膜多糖的表达而影响毒力。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 溶菌酶 毒力 回复突变 荚膜
乙型脑炎病毒减毒活疫苗株(SA14-14-2)神经毒力减弱的分子基础 被引量:6
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作者 李静 俞永新 +2 位作者 安琪 孔燕 杨立宏 《中国病毒病杂志》 2011年第1期51-57,共7页
目的将乙型脑炎病毒减毒活疫苗株SA14-14-2经乳鼠脑内回传毒力回复后,对回复后病毒测其神经毒力和全长基因序列并与减毒株SA14-14-2和母株SA14进行核苷酸和氨基酸序列比较。方法将回传一代SA14-14-2 M1和SA14-14-2 M3病毒在幼鼠脑内测... 目的将乙型脑炎病毒减毒活疫苗株SA14-14-2经乳鼠脑内回传毒力回复后,对回复后病毒测其神经毒力和全长基因序列并与减毒株SA14-14-2和母株SA14进行核苷酸和氨基酸序列比较。方法将回传一代SA14-14-2 M1和SA14-14-2 M3病毒在幼鼠脑内测神经毒力和全基因组序列。运用RT-PCR方法,分段扩增出覆盖基因组全长的基因片段,PCR产物纯化后直接测序,针对5′和3′端的片段TA克隆后进行测序。经核苷酸序列测定后,利用DNAStar软件,进行序列比对分析。结果实验结果表明SA14-14-2 M1病毒毒力未见增强,SA14-14-2 M3病毒的脑内致病力明显增强,但皮下接种仍无致病性。通过序列比对分析发现,M1和M3病毒均在非结构区的NS3-343、NS4A-57位发生氨基酸回复突变,但只有M3病毒在E区毒力相关的E107、E138位点发生回复突变。结论在SA14-14-2减毒株病毒结构基因中E蛋白区E107、E138位氨基酸是与毒力密切相关的重要位点,应该是神经毒力减弱的重要分子基础,非结构区的个别位点对神经毒力减弱也可能起一定的协同作用。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 乳鼠脑内回传 神经毒力 回复突变 基因全序列测序
美他多辛作用的研究 预览 被引量:2
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作者 黄国锋 《黑龙江医药》 CAS 2010年第3期 419-421,共3页
目的:因美他多辛对乙醇性肝病的生化杌理有积极作用,同时用于急性和慢性乙醇中毒、乙醇性肝病,但该药的致突变作用未见报道。本文在于检测关他多辛致突变性。方法:通过微生物回复突变试验、小鼠微核试验、哺乳动物培养细胞染色体试... 目的:因美他多辛对乙醇性肝病的生化杌理有积极作用,同时用于急性和慢性乙醇中毒、乙醇性肝病,但该药的致突变作用未见报道。本文在于检测关他多辛致突变性。方法:通过微生物回复突变试验、小鼠微核试验、哺乳动物培养细胞染色体试验证明。结果:美他多辛的三个试验结果均呈阴性。结论:美他多辛在用于治疗急性和慢性乙醇中毒、乙醇性肝病无致突变性。 展开更多
关键词 突变性检测(Ames)实验 回复突变 微核试验 CHL细胞染色体畸变试验 美他多辛
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Wiskott-Aldrich综合征致病基因的回复突变现象及其临床意义 被引量:6
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作者 赵琴 赵晓东 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期236-239,共4页
Wiskott-Aldrich综合征(WAS)即湿疹、血小板减少、免疫缺陷综合征,为X连锁隐性遗传,是以湿疹、血小板减少、反复感染、易患淋巴系统恶性肿瘤和自身免疫性疾病为特征的原发性免疫缺陷病(PID)。该病致病基因编码的蛋白质为WASP,是... Wiskott-Aldrich综合征(WAS)即湿疹、血小板减少、免疫缺陷综合征,为X连锁隐性遗传,是以湿疹、血小板减少、反复感染、易患淋巴系统恶性肿瘤和自身免疫性疾病为特征的原发性免疫缺陷病(PID)。该病致病基因编码的蛋白质为WASP,是由502个氨基酸构成的富含脯氨酸的蛋白质。 展开更多
关键词 WISKOTT-ALDRICH综合征 致病基因 临床意义 回复突变 原发性免疫缺陷病 淋巴系统恶性肿瘤 免疫缺陷综合征 X连锁隐性遗传
一种胆固醇氧化酶高产菌株筛选方法的建立 预览 被引量:1
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作者 霍惠芝 张玲 +2 位作者 孙艳 杨海麟 王武 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 643-647,共5页
用亚硝基胍(1mg/mL)与超声波(200W,50kHz)复合诱变的方法,对产胆固醇氧化酶短杆菌Brevibacterium sp.DGCDC-82进行诱变处理,得到一株桔红色突变株其产胆固醇氧化酶能力提高140%,酶活达到1.24U/mL,又用同样的方法对桔红色... 用亚硝基胍(1mg/mL)与超声波(200W,50kHz)复合诱变的方法,对产胆固醇氧化酶短杆菌Brevibacterium sp.DGCDC-82进行诱变处理,得到一株桔红色突变株其产胆固醇氧化酶能力提高140%,酶活达到1.24U/mL,又用同样的方法对桔红色突变株进行回复突变处理,得到一株白色回复突变株和一株淡粉色回复突变株,两株回复突变株产胆固醇氧化酶的能力又明显下降,酶活分别为0.17U/mL和0.69U/mL。说明短杆菌Brevibacterium sp.产胆固醇氧化酶能力与其产红色素成正相关偶联关系,这种相关性模型的建立可以作为以后诱变或定向进化研究的筛子。 展开更多
关键词 胆固醇氧化酶(COD) 短杆菌 红色素 复合诱变 回复突变
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