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比较单独消化法及分步消化法培养新生大鼠原代软骨细胞的生物学特性 预览
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作者 邓林峡 余慕雪 +3 位作者 潘思年 郭楚怡 丘小汕 曹志毓 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第25期4047-4052,共6页
背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发... 背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发育的程序化研究提供实验基础。方法:无菌条件下取出新生SD大鼠关节软骨,分别采用Ⅱ型胶原蛋白酶单独消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶分步消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。光学显微镜下观察软骨细的形态,CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性,半定量免疫荧光分析软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白表达。结果与结论:①单独消化法和分步消化法都可以得到大量软骨细胞,但分步消化法较单独消化法所得软骨细胞的纯度更高;②光学显微镜下观察,两种方法消化所得细胞在形态学上无明显差异;③单独消化法所得细胞生长速度更快;④免疫荧光半定量分析显示两种方法所得软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达一致;⑤以上结果表明,分步消化法更适于新生大鼠原代软骨细胞的分离培养。 展开更多
关键词 原代软骨细胞 细胞培养 Ⅱ型胶原蛋白酶 胰蛋白酶 半定量免疫荧光 细胞增殖 生长曲线 Ⅱ型胶原蛋白 干细胞 广东省自然科学基金 软骨细胞 细胞 培养 胰蛋白酶 胶原酶类 胶原Ⅱ型 组织工程
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颅内动脉瘤手术废弃脑组织中成人自体神经干细胞的培养与鉴定 预览
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作者 王佳 赵全军 +5 位作者 黑博 王兆涛 孙移坤 王涛 崔绍杰 王培新 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第21期3381-3386,共6页
背景:对胎儿、胎鼠及成鼠神经干细胞培养已有大量研究,但成体人自体神经干细胞培养相关研究较少。目的:通过改进原代培养方法,从颅内动脉瘤破裂脑出血患者血肿腔周边废弃脑组织中培养和鉴定神经干细胞,并进行冻存与复苏研究,建立... 背景:对胎儿、胎鼠及成鼠神经干细胞培养已有大量研究,但成体人自体神经干细胞培养相关研究较少。目的:通过改进原代培养方法,从颅内动脉瘤破裂脑出血患者血肿腔周边废弃脑组织中培养和鉴定神经干细胞,并进行冻存与复苏研究,建立成人自体神经干细胞库。方法:收集3例动脉瘤破裂脑出血(2例大脑中动脉瘤及1例前交通动脉瘤)手术中血肿腔周边的废弃脑组织各约500 mg以上,采用细小组织块接种法进行原代无血清悬浮培养成人自体神经干细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,免疫荧光细胞化学技术检测神经干细胞标志物巢蛋白(Nestin)的表达。培养获得的神经干细胞球以体积分数4%胎牛血清诱导其贴壁生长,待细胞增殖达到一定数量后传代培养。传代后部分细胞予以冻存建库,并复苏继续传代及诱导分化培养。体积分数10%胎牛血清诱导神经干细胞分化,通过免疫荧光细胞化学技术检测胶质纤维酸性蛋白(标记星形胶质样细胞),β-tubulin Ⅲ(标记神经元样细胞),SOX10(标记少突胶质样细胞)蛋白的表达来测定神经干细胞的分化能力。结果与结论:改进培养方法后,3例患者废弃脑组织中, 在无血清培养液中均可形成Nestin阳性表达的神经球, 并可在体外大量扩增和连续传代。在给予体积分数10%FBS条件下神经球可分化为神经元样细胞、少突胶质细胞及星形胶质细胞,即β-tubulin Ⅲ,SOX10及胶质纤维酸性蛋白阳性表达。经传代培养至5代后,仍呈Nestin阳性即可维持其神经干细胞特征。冻存细胞复苏后生长状态良好且呈Nestin阳性,可继续传代扩增。结果表明,从动脉瘤破裂脑出血患者不同脑区(颞极及额底)血肿腔周边废弃脑组织中可成功培养获得自体神经干细胞,并可向神经元样细胞、少突胶质样细胞及星形胶质样细胞� 展开更多
关键词 颅脑手术 动脉瘤 脑出血 成人 自体 神经干细胞 细胞培养 干细胞库 分化 组织工程 细胞 培养 干细胞
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趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在肝癌侵袭转移中的作用及机制 预览 被引量:1
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作者 张引 余力信 +3 位作者 张发鹏 余晓雯 王文龙 罗志强 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第1期20-26,共7页
目的 探讨趋化因子受体 CXCR4 及其配体 CXCL12 (CXCL12/CXCR4) 在原发性肝癌侵袭转移中的作用及机制.方法 分别采用 Westernblot、 免疫组化和 Real-timePCR 等方法检测 60 例肝癌及对应癌旁组织标本中CXCL12/CXCR4 蛋白及 mRNA 表... 目的 探讨趋化因子受体 CXCR4 及其配体 CXCL12 (CXCL12/CXCR4) 在原发性肝癌侵袭转移中的作用及机制.方法 分别采用 Westernblot、 免疫组化和 Real-timePCR 等方法检测 60 例肝癌及对应癌旁组织标本中CXCL12/CXCR4 蛋白及 mRNA 表达水平.常规培养 4 种肝癌细胞 (Huh7、 MHCC97h、 HepG2、 Hep3B) 和正常肝细胞(7702), Real-timePCR 检测上述细胞中 CXCL12、 CXCR4 mRNA 的表达, 筛选合适的实验细胞.将 CXCR4 干扰质粒 (sh-CXCR4) 和对应空载体 (sh-control) 分别转染至 MHCC97h 构建稳转细胞系.Transwell 侵袭实验、 细胞划痕实验、 MTT 实验分别检测 2 组细胞的侵袭、 迁移和增殖能力.取稳定表达的 sh-control 和 sh-CXCR4 MHCC97h 细胞,接种至 6 只裸鼠皮下, 观察瘤体生长情况.Westernblot 检测 sh-control 和 sh-CXCR4 MHCC97h 细胞及对应裸鼠移植瘤中血管内皮生长因子-C (VEGF-C) 的表达, 同时对转染 CXCR 过表达质粒的 MHCC97h 中 VEGF-C 的表达水平进行检测.结果 (1) Westernblot、 免疫组化和 Real-timePCR 的结果均证实肝癌组织中 CXCL12/CXCR4 蛋白及mRNA 表达水平均高于癌旁组织.(2) Huh7、 MHCC97h、 HepG2、 Hep3B 细胞中 CXCL12/CXCR4 mRNA 表达水平均高于 7702 细胞, 选取 MHCC97h 为实验细胞.转染 sh-CXCR4 的 MHCC97h 细胞的侵袭、 迁移和增殖能力均明显低于sh-control 组, 同时接种含 sh-CXCR4 的 MHCC97h 细胞的裸鼠移植瘤的生长速度也明显小于 sh-control 组.(3) 体外和体内实验均证实 sh-CXCR4 组的 VEGF-C 表达水平均低于 sh-control 组, 而过表达 CXCR4 后, VEGF-C 的蛋白表达明显上调.结论 CXCL12/CXCR4 在原发性癌组织和肝癌细胞中呈现高表达, CXCL12/CXCR4 可能通过调控VEGF-C 蛋白表达从而抑制肝癌细胞的增殖、 侵袭和转移. 展开更多
关键词 肝肿瘤 趋化因子CXCL12 受体 CXCR4 肿瘤细胞 培养 细胞增殖 动物实验 血管内皮生长因子受体
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miR-125b通过靶向致癌基因LIN28B调控肝细胞癌细胞的增殖和侵袭行为 被引量:1
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作者 李建华 韩玲 杨志良 《实用肿瘤杂志》 CAS 2018年第2期128-132,共5页
目的探讨miR-125b通过靶向致癌基因LIN28B调控肝细胞癌的增殖和侵袭行为及其机制。方法qPCR检测肝癌和癌旁正常肝组织中miR-125b和LIN28B的表达情况。双荧光素酶实验分析293U细胞中miR-125b和LIN28B之间的相互关联。MTT增殖实验检测miR-... 目的探讨miR-125b通过靶向致癌基因LIN28B调控肝细胞癌的增殖和侵袭行为及其机制。方法qPCR检测肝癌和癌旁正常肝组织中miR-125b和LIN28B的表达情况。双荧光素酶实验分析293U细胞中miR-125b和LIN28B之间的相互关联。MTT增殖实验检测miR-125b对肝癌HepG2细胞增殖能力的变化。Transwell侵袭实验检测miR-125b对HepG2细胞侵袭能力的变化。结果与癌旁正常肝组织比较,肝癌组织中miR-125b和L1N28B表达增高(均P〈0.05)。双荧光素酶实验证明rniR-125b能与LIN28B的3’UTR特异性结合。抑制miR-125b可以抑制肝癌细胞增殖和侵袭能力(均P〈0.05)。结论miR-125b在肝癌发生和发展过程中发挥作用,可能是通过调控LIN28B的表达影响肝癌细胞的增殖和侵袭能力。 展开更多
关键词 肝细胞/病理学 癌基因/遗传学 微RNAS 锌指 基因表达 肿瘤侵润 细胞增殖 肿瘤细胞 培养 聚合酶链反应
三维细胞培养技术的进展及其在肿瘤研究中的应用
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作者 卓志远 陈刚 刘华 《肿瘤》 CSCD 北大核心 2018年第5期502-507,共6页
肿瘤细胞的体外培养对研究肿瘤复杂的病理生理机制做出了巨大的贡献。近年来,三维细胞培养广泛应用于生物医学研究的各个领域,尤其是在肿瘤研究中发展迅速。肿瘤细胞的三维培养可以更准确地在体外模拟体内肿瘤真实的生长环境,肿瘤细胞... 肿瘤细胞的体外培养对研究肿瘤复杂的病理生理机制做出了巨大的贡献。近年来,三维细胞培养广泛应用于生物医学研究的各个领域,尤其是在肿瘤研究中发展迅速。肿瘤细胞的三维培养可以更准确地在体外模拟体内肿瘤真实的生长环境,肿瘤细胞在各种三维培养装置中呈立体球状生长,表现出与体内肿瘤相似的形态学和细胞生物学特性。应用三维细胞培养技术在体外构建肿瘤模型逐渐成为连接体外肿瘤细胞二维培养和体内肿瘤动物模型之间的桥梁,目前已广泛应用于研究肿瘤生物学行为、肿瘤微环境、肿瘤干细胞、肿瘤血管生成和抗肿瘤药物筛选等方面。本文就近年来三维细胞培养的进展及其在肿瘤研究中的应用作一综述。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 培养 肿瘤微环境 三维
钩藤碱对培养的大鼠海马星形胶质细胞氧-葡萄糖剥夺后兴奋性氨基酸转运体2和NMDA受体2B mRNA表达的影响
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作者 陈艳红 楼小亮 +7 位作者 周征成 胡学勇 席秋江 杨宏武 肖丽华 李欣弘 李晓萍 范华 《国际脑血管病杂志》 2018年第9期684-688,共5页
目的 探讨钩藤碱对氧-葡萄糖剥夺后星形胶质细胞兴奋性氨基酸转运体2(excitatory amino acid transporter 2,EAAT2)和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(N-methyl-D-aspartic acid receptor 2B,NR2B)mRNA表达的影响.方法 将传代培养至第3代... 目的 探讨钩藤碱对氧-葡萄糖剥夺后星形胶质细胞兴奋性氨基酸转运体2(excitatory amino acid transporter 2,EAAT2)和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(N-methyl-D-aspartic acid receptor 2B,NR2B)mRNA表达的影响.方法 将传代培养至第3代的海马区星形胶质细胞接种至6孔板,待细胞贴壁并长出突起后分为空白对照组、缺血缺氧组以及小剂量(0.02 mg/ml)和大剂量(0.2 mg/ml)钩藤碱组.提取各组总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组星形胶质细胞EAAT2和NR2B mRNA表达水平.结果 与空白对照组比较,缺血缺氧组星形胶质细胞NR2B和EAAT2 mRNA表达水平均显著增高(P均〈0.05).小剂量钩藤碱组NR2B和EAAT2 mRNA表达水平较缺血缺氧组降低,但差异无统计学意义.大剂量钩藤碱组NR2B和EAAT2 mRNA表达水平显著降低,与缺血缺氧组和小剂量钩藤碱组相比差异均有统计学意义(P均〈0.05).结论 体外培养的海马区星形胶质细胞缺血缺氧后EAAT2和NR2B mRNA表达显著增高,钩藤碱干预可呈浓度依赖性方式显著下调其表达. 展开更多
关键词 星形胶质细胞 细胞 培养 钩藤碱 葡萄糖 缺氧 兴奋性氨基酸转运蛋白2 受体 N-甲基-D-天冬氨酸 基因表达 大鼠
陷窝蛋白-1参与白蛋白改善蛛网膜下腔出血后血脑屏障通透性
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作者 许丽丽 曹辉 +3 位作者 张尧 谢怡 叶瑞东 刘新峰 《国际脑血管病杂志》 2018年第3期195-200,共6页
目的 探讨人血清白蛋白(albumin,Alb)对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响以及内皮细胞摄取Alb的途径.方法 在Transwell小室中培养小鼠脑内皮细胞(bEnd.3细胞系)建... 目的 探讨人血清白蛋白(albumin,Alb)对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响以及内皮细胞摄取Alb的途径.方法 在Transwell小室中培养小鼠脑内皮细胞(bEnd.3细胞系)建立BBB模型,在培养基中加入10 μmol/L氧合血红蛋白构建SAH体外模型,将细胞分为对照组、SAH组和Alb组(10 mg/ml).采用跨细胞电阻(transendothelial electric resistance,TEER)检测BBB通透性,共聚焦显微镜观察荧光标记的Alb能否被bEnd.3摄取,免疫共沉淀检测Alb能否与细胞中的陷窝蛋白-1(caveotin-1,Cav-1)相互作用.根据siRNA原理,将Cav-1 siRNA转染人bEnd.3细胞抑制Cav-1表达,采用蛋白质印迹分析检测bEnd.3细胞能否摄取Alb,采用TEER检测BBB通透性.结果 与SAH组相比,Alb组TEER值显著升高(P=0.011).Alb可被bEnd.3细胞摄取,并且在bEnd.3细胞中与Cav-1相互作用.Cav-1 siRNA转染可显著抑制bEnd.3细胞Cav-1表达,降低细胞对Alb的摄取能力(P=0.025),导致Alb对BBB的保护作用显著降低(P <0.001).结论 Alb可能在Cav-1参与下被内皮细胞摄取并改善SAH后BBB通透性. 展开更多
关键词 白蛋白类 陷窝蛋白1 内皮 血管 细胞 培养 胞吞作用 蛛网膜下腔出血 血脑屏障
骨形态发生蛋白复合多孔钛铌合金试件的体外成骨分化研究 预览
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作者 彭亮权 许鉴 +5 位作者 周勇 陈康 李瑛 陆伟 朱伟民 王大平 《中国骨科临床与基础研究杂志》 2018年第5期285-292,共8页
目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)复合多孔钛铌合金试件的体外成骨分化能力。方法将多孔钛铌合金试件分为单纯实验试件组(A组)和复合rhBMP-2实验试件组(B组),将两组试件分别加至兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)中。通过倒置显微镜、扫描电镜、血... 目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)复合多孔钛铌合金试件的体外成骨分化能力。方法将多孔钛铌合金试件分为单纯实验试件组(A组)和复合rhBMP-2实验试件组(B组),将两组试件分别加至兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)中。通过倒置显微镜、扫描电镜、血清碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素指标检测,观察BMSCs在两组钛铌合金试件中的生长情况及金属-组织界面的结合情况。结果B组培养液中血清ALP浓度、骨钙素含量较A组明显提升;培养2周后电镜扫描示A组有大量细胞附着于材料外表面和孔洞内,细胞形态呈梭形,表现为单层生长,B组则表现为复层生长;培养4周后B组材料孔洞内可见钙沉积,而A组材料孔洞内未有钙沉积。结论多孔钛铌合金材料细胞相容性良好,兔BMSCs在试件中形态正常,具有良好的增殖分化能力;经BMP诱导,BMSCs在多孔钛铌合金材料中可向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 合金 生物相容性材料 多孔材料 骨代用品 骨形态发生蛋白质类 骨髓细胞 间质干细胞 细胞 培养 碱性磷酸酶 骨钙素 细胞分化 细胞增殖 骨生成 体外研究
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^188Re标记纳米颗粒BaGdF5-PEG抑制肝癌细胞增殖及兔模型SPECT显像 被引量:1
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作者 王涛 彭烨 +5 位作者 李潇 贾国荣 王秋虎 程超 孙高峰 左长京 《中华核医学与分子影像杂志》 北大核心 2018年第11期721-725,共5页
目的利用188Re标记CT/MR双模态纳米颗粒BaGdF5-聚乙二醇(PEG),观察其对肝癌细胞增殖的影响并将其用于SPECT显像。方法采用水热法合成纳米颗粒BaGdF5-PEG,以二乙撑三胺五乙酸(DTPA)作为双功能螯合剂进行188Re标记。四甲基偶氮唑... 目的利用188Re标记CT/MR双模态纳米颗粒BaGdF5-聚乙二醇(PEG),观察其对肝癌细胞增殖的影响并将其用于SPECT显像。方法采用水热法合成纳米颗粒BaGdF5-PEG,以二乙撑三胺五乙酸(DTPA)作为双功能螯合剂进行188Re标记。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度BaGdF5-PEG、188ReO4-、188Re-DTPA-BaGdF5作用24 h后肝癌细胞SMCC 7721的增殖率。经兔耳缘静脉注射188ReO4-后30、60 min行SPECT全身及CT断层显像,注射188Re-DTPA-BaGdF5后分别行10 min内SPECT动态显像及30、60、120 min后SPECT/CT显像。建立兔肝VX2瘤模型,将微导管经兔股动脉插管至肝动脉,将188Re-DTPA-BaGdF5与碘油的混合液注入肝肿瘤,30 min后行SPECT/CT显像。组间数据比较采用两样本t检验。结果BaGdF5-PEG粒径约10 nm,呈近方形。188Re-DTPA-BaGdF5最大标记率为94.1%,具有良好的体内外稳定性。BaGdF5-PEG对肝癌细胞的增殖无明显影响;188ReO4-和188Re-DTPA-BaGdF5均能抑制肝癌细胞的增殖,且放射性浓度为74.0、370.0×104 Bq/ml时,后者对细胞的增殖抑制作用强于前者(t=4.21、4.09,均P〈0.01)。在体内,188ReO4-主要被兔颌面腺体摄取,并很快经肾脏代谢进入膀胱;188Re-DTPA-BaGdF5经静脉入血后迅速被肝、脾摄取,经肝动脉介入给药后其在肝肿瘤部位高浓度聚集。结论188Re-DTPA-BaGdF5在体外对肝癌细胞增殖具有抑制作用,经肝动脉介入给药后其在肝肿瘤部位聚集;该药不仅可用于肿瘤SPECT显像,还有潜在的治疗作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肿瘤细胞 培养 纳米粒 体层摄影术 发射型计算机 单光子 体层摄 影术 X线计算机
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肺癌细胞株侧群细胞的分选及干细胞特性的鉴定
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作者 陈鑫 骆洪雁 +4 位作者 高晶 姜晓文 齐超 张永娟 刘东海 《实用肿瘤杂志》 CAS 2018年第3期209-213,共5页
目的肺癌细胞株侧群(side poulation,SP)细胞的分选及干细胞特性的鉴定。方法选择肺癌细胞株SK-MES-1和NCI-H460,采用流式细胞仪分选SP和非SP(non-SP,NSP)细胞,分别接种于正常培养液和干细胞培养液中培养并传代,观察细胞表型和分化... 目的肺癌细胞株侧群(side poulation,SP)细胞的分选及干细胞特性的鉴定。方法选择肺癌细胞株SK-MES-1和NCI-H460,采用流式细胞仪分选SP和非SP(non-SP,NSP)细胞,分别接种于正常培养液和干细胞培养液中培养并传代,观察细胞表型和分化能力。电子显微镜观察细胞的超微结构。免疫荧光检测干细胞标志物CD44的表达。Cell counting kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力。集落形成、transwell侵袭实验和裸鼠成瘤实验明确细胞的恶性程度。结果初次分选SK-MES-1和NCI-H460细胞株SP和NSP百分比以及再纯化百分比之间比较,差异均无统计学意义(均P〉0.05)。2种细胞株的SP和NSP细胞在干细胞培养液中均不能形成干细胞球,但增殖速度加快。SP细胞呈集聚生长,NSP细胞呈接触抑制的单层生长。SP细胞培养至第5代时,细胞表型变化不明显;NSP细胞第5代出现混杂表型。电子显微镜下SP细胞核质比较高,NSP细胞核质比低。SK-MES-1和NCIH460细胞株SP细胞可高表达CD44,组间比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。CCK-8法检测显示,SK-MES-1和NCI-H460细胞株SP细胞第2、5和7天的吸光度均高于NSP细胞,差异均具有统计学意义(均P〈0.05)。SKMES-1和NCI-H460细胞株SP细胞克隆数和克隆形成率高于NSP细胞,侵袭过膜的细胞数增加,裸鼠成瘤数增多(均P〈0.05);均无转移灶,瘤体HE和免疫组织化学染色证实为典型肺癌细胞。结论肺癌细胞株SP细胞具有干细胞特性,参与肿瘤的增殖、分化、侵袭和成瘤过程。 展开更多
关键词 肺肿瘤/病理学 肿瘤干细胞/细胞学 肿瘤干细胞测定 抗原 CD44 染色与标记 流式细胞术 细胞 培养
半胱氨酰白三烯受体对小鼠小胶质细胞吞噬功能的调节作用
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作者 王晓蓉 卢韵碧 +2 位作者 张纬萍 魏尔清 方三华 《浙江大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期10-18,共9页
目的:研究半胱氨酰白三烯(CysLT)受体(CysLT1R和CysLT2R)对小鼠BV2小胶质细胞吞噬功能的调节作用。方法:以经典炎症激活剂脂多糖和CysLT受体激动剂LTD4处理BV2细胞,采用免疫荧光计数法和流式细胞仪检测BV2细胞吞噬功能,免疫荧光... 目的:研究半胱氨酰白三烯(CysLT)受体(CysLT1R和CysLT2R)对小鼠BV2小胶质细胞吞噬功能的调节作用。方法:以经典炎症激活剂脂多糖和CysLT受体激动剂LTD4处理BV2细胞,采用免疫荧光计数法和流式细胞仪检测BV2细胞吞噬功能,免疫荧光共染法观察BV2细胞中CysLT1R和CysLT2R表达分布。结果:脂多糖和LTD4均能增强BV2细胞吞噬功能,而CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379均能抑制脂多糖和LTD4诱导的BV2细胞吞噬功能增强;脂多糖和LTD4激活BV2细胞后可引起CysLT1R和CysLT2R在细胞内分布变化,两种亚型的受体分布变化趋势基本一致,且存在共表达。结论:CysLT1R和CysLT2R均可以调节BV2细胞的吞噬功能,且两者具有协同性。 展开更多
关键词 半胱氨酸/代谢 受体 白三烯/代谢 吞噬作用/药物作用 小神经胶质细胞/药物作用 脂多糖类/药理学 细胞 培养
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MyD88非依赖性信号通路在枸杞多糖抑制糖尿病小鼠肿瘤坏死因子α中的作用
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作者 刘婷婷 王凌霄 +2 位作者 杨晓辉 姚智卿 蔡慧珍 《浙江大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期35-40,共6页
目的:研究枸杞多糖对髓样分化因子88(My D88)非依赖性信号通路的影响,探讨枸杞多糖影响TNF-α生成的机制。方法:采用高糖高脂饲料联合链脲菌素诱导My D88基因敲除小鼠形成2型糖尿病模型。将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、阳性... 目的:研究枸杞多糖对髓样分化因子88(My D88)非依赖性信号通路的影响,探讨枸杞多糖影响TNF-α生成的机制。方法:采用高糖高脂饲料联合链脲菌素诱导My D88基因敲除小鼠形成2型糖尿病模型。将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和枸杞多糖组,另取8只小鼠作为健康对照组。干预三个月后,采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1和TNF-α基因和蛋白表达,ELISA法测定小鼠血清TNF-α水平。结果:枸杞多糖抑制了糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中Tram、Trif、Traf6和Tnf-α的基因表达,激活了Rip1基因(均P〈0.05),但对TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1和TNF-α蛋白表达和血清TNF-α水平无影响(均P〉0.05)。结论:枸杞多糖可能不能通过My D88非依赖性信号通路抑制TNF-α的生成。 展开更多
关键词 髓样分化因子88/生理学 信号传导 肿瘤坏死因子α/生物合成 多糖类/药理学 枸杞/化学 糖尿病 2型 疾病模型 动物 细胞 培养
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GE11多肽对表皮生长因子受体阳性乳腺癌脑转移瘤的靶向性研究
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作者 李琳 聂芳 +3 位作者 杨健 薛倩 张建琼 滕皋军 《中华核医学与分子影像杂志》 北大核心 2018年第8期543-548,共6页
目的探讨GE11多肽对表皮生长因子受体(EGFR)阳性乳腺癌脑转移瘤靶向结合的可行性,为构建特异性靶向乳腺癌脑转移瘤的分子探针寻找合适的靶向基团。方法应用Western blot及流式细胞仪检测人三阴性乳腺癌脑转移细胞株(MDA-MB-231-BR)... 目的探讨GE11多肽对表皮生长因子受体(EGFR)阳性乳腺癌脑转移瘤靶向结合的可行性,为构建特异性靶向乳腺癌脑转移瘤的分子探针寻找合适的靶向基团。方法应用Western blot及流式细胞仪检测人三阴性乳腺癌脑转移细胞株(MDA-MB-231-BR)的EGFR表达,采用细胞免疫荧光染色及流式细胞仪检测荧光标记的GE11多肽对MDA-MB231-BR细胞株的体外靶向结合特性,选择GK-13多肽为对照肽,并利用皮下荷瘤裸鼠进行活体水平靶向性验证。采用两样本t检验分析数据。结果Western blot及流式细胞检测结果显示EGFR在MDA-MB-231-BR细胞株中表达率为88.60%,呈高表达。流式细胞检测结果显示,10 μmol/L浓度GE11多肽与MDA-MB-231-BR细胞结合率为38.4%,明显高于相同浓度对照肽的结合率(0.6%;t=16.941,P〈0.01);细胞荧光染色结果显示GE11多肽与细胞共温育后可检测出更强的荧光信号,且结合具有浓度及温度依赖性。活体实验结果显示GE11多肽在肿瘤部位有较强的信号,其他组织信号较弱。结论GE11多肽与EGFR阳性的乳腺癌脑转移瘤具有特异性靶向结合特性。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 肿瘤转移 受体 表皮生长因子 肽类 肿瘤细胞 培养 小鼠
小鼠腹腔及骨髓源性肥大细胞的培养与鉴定
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作者 邵亦心 王朵勤 +3 位作者 沈燕芸 朱奕铸 徐金华 唐慧 《中华皮肤科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期575-579,共5页
目的 探讨小鼠腹腔及骨髓源性高纯度肥大细胞体外诱导培养方法,并鉴定其功能。方法 分别从小鼠腹腔灌洗液及股骨获得腹腔及骨髓细胞,用白细胞介素3和干细胞因子分别联合诱导培养2周及4周,光镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定肥大... 目的 探讨小鼠腹腔及骨髓源性高纯度肥大细胞体外诱导培养方法,并鉴定其功能。方法 分别从小鼠腹腔灌洗液及股骨获得腹腔及骨髓细胞,用白细胞介素3和干细胞因子分别联合诱导培养2周及4周,光镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定肥大细胞成熟度,流式细胞仪检测细胞表面分子CD117和FcεRⅠα的表达情况,不同浓度Compound48/80刺激后镜下计数肥大细胞脱颗粒率,分光光度法测定肥大细胞β己糖胺酶释放率。结果 分别诱导培养2周及4周后,小鼠腹腔及骨髓细胞呈大小均一且具折光性的悬浮细胞。甲苯胺蓝染色示上述两种细胞胞质内含紫红色的异染颗粒。两种细胞表面CD117及FcεRⅠα单阳性率均高于95%,双阳性率分别为97.68% ± 0.80%及96.12% ± 0.76%。100和1 000 mg/L Compound48/80刺激组与空白对照组肥大细胞相比,脱颗粒率差异有统计学意义(均P 〈 0.01)。100 mg/L Compound48/80组骨髓源性肥大细胞以及10 mg/L、100 mg/L Compound48/80组腹腔源性肥大细胞β己糖胺酶释放率均较空白对照组显著升高(P 〈 0.01或0.05)。结论 白细胞介素3和干细胞因子联合可诱导小鼠骨髓干细胞及腹腔细胞定向分化增殖,从而获得高纯度成熟且具有脱颗粒功能的肥大细胞,为后续细胞生物学研究奠定基础。 展开更多
关键词 肥大细胞 骨髓祖代细胞 诱导多能干细胞 小鼠 细胞 培养 白细胞介素3 干细胞因子
急性重型颅脑创伤患者外周血微小RNA和白细胞介素-1表达变化及分子机制研究
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作者 蒋达锦 王晨秋 +2 位作者 吴杰 陈君 李严 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2018年第11期824-829,共6页
目的 探讨急性重型颅脑创伤患者血清白细胞介素-1α和1β(IL-1α和IL-1β)表达变化以及外周血单个核细胞微小RNA(miRNA)相对表达量,并探讨其分子机制。方法 采用生物学信息软件TargetScan Release 7.1分析调控IL-1α和IL-1β基因的m... 目的 探讨急性重型颅脑创伤患者血清白细胞介素-1α和1β(IL-1α和IL-1β)表达变化以及外周血单个核细胞微小RNA(miRNA)相对表达量,并探讨其分子机制。方法 采用生物学信息软件TargetScan Release 7.1分析调控IL-1α和IL-1β基因的miRNA;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-1α和IL-1β表达变化,逆转录-聚合酶链反应检测外周血单个核细胞miRNA相对表达量;双荧光素酶报告基因载体验证基因之间相互作用。结果 IL-1α是miRNA-24-3p调控的靶基因,IL-1β是miRNA-383-3p调控的靶基因。急性重型颅脑创伤患者血清IL-1α[(4.09±2.32)ng/L对(0.56±0.02)ng/L;t=124.369,P=0.030]和IL-1β[(3.99±1.73)ng/L对(0.89±0.03)ng/L;t=163.123,P=0.010]水平高于正常对照者。急性重型颅脑创伤患者外周血miRNA-24-3p和miRNA-383-3p相对表达量为23%和17%,IL-1α和IL-1β基因相对表达量为390%和420%。双荧光检测显示,各处理组细胞IL-1α基因(F=40 154.000,P=0.000)和IL-1β基因(F=4015.000,P=0.003)表达量差异有统计学意义,其中miRNA-24-3p组细胞IL-1α基因表达量低于空白对照组(P=0.000)、miRNA-24-3p抑制剂组(P=0.023)、阴性对照组(P=0.023)和阴性抑制剂组(P=0.023),miRNA-383-3p组细胞IL-1β基因表达量低于空白对照组(P=0.000)、miRNA-383-3p抑制剂组(P=0.000)、阴性对照组(P=0.000)和阴性抑制剂组(P=0.000);经过转染克隆IL-1α-mut-3'UTR和IL-1β-mut-3'UTR质粒后,各处理组细胞IL-1α基因(F=72.400,P=0.001)和IL-1β基因(F=37.000,P=0.000)表达量差异有统计学意义,但miRNA-24-3p组细胞IL-1α基因表达量与空白对照组、miRNA-24-3p抑制剂组、阴性对照组和阴性抑制剂组差异无统计学意义(均P〉 0.05),miRNA-383-3p组细胞IL-1β基因表达量与空白对照组、miRNA-383-3p抑制剂组、阴性对照组和阴性抑制剂组差异无统计学意义(均P〉0.05)。结论 急性重型颅脑创伤患者血 展开更多
关键词 颅脑损伤 微RNAS 白细胞介素1 基因 转染 逆转录聚合酶链反应 细胞 培养
脂质体介导SV40LT基因转染构建羊水染色体核型分析质控细胞系研究
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作者 翁炳焕 徐威 +4 位作者 苏岚 沈敏 李蓉 虞晓鹏 李兰娟 《浙江大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期520-524,共5页
目的:研究羊水染色体核型分析质控细胞系的构建方法。方法:以T4DNA连接经BamHⅠ单酶切的SV40LTag-pcDNA和pcDNA3.1 (-) DNA,重组SV40LTag-pcDNA3.1(-)克隆,以脂质体介导法将重组克隆转染至染色体结构异常的羊水细胞,以G418筛选阳性克隆... 目的:研究羊水染色体核型分析质控细胞系的构建方法。方法:以T4DNA连接经BamHⅠ单酶切的SV40LTag-pcDNA和pcDNA3.1 (-) DNA,重组SV40LTag-pcDNA3.1(-)克隆,以脂质体介导法将重组克隆转染至染色体结构异常的羊水细胞,以G418筛选阳性克隆,观察细胞系的传代生长特性及其作为染色体核型分析质量评估的可行性。结果:构建了染色体核型为46,XY,t(8;19)(q24.3;q13.1)的羊水细胞系,传至第15代的细胞系经染色体核型分析,其核型与原代细胞一致。结论:染色体结构异常的羊水细胞转染SV40LT基因后可转化为无限扩增且染色体核型稳定的细胞系,从而制成羊水细胞染色体核型分析的质控细胞系。 展开更多
关键词 猴病毒40/免疫学 猴病毒40/遗传学 脂质体 转染 羊水/细胞学 遗传载体 质量控制 细胞 培养
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以蛋白酶激活受体-1为靶点的^99Tc^m-(HYNIC-BMS-200261)(tricine)(TPPTS)荷乳腺癌裸鼠显像
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作者 刘杰 刘晓建 +6 位作者 李红磊 金超岭 王猛 方纬 戴皓洁 颜珏 郑玉民 《中华核医学与分子影像杂志》 北大核心 2018年第3期195-198,共4页
目的探讨^99Tc^m-[联肼尼克酰胺(HYNIC)-BMS-200261](N-三羟甲基甘氨酸)[三苯基膦三间磺酸钠盐(TPPTS)][^99Tc^m-(HYNIC-BMS-200261)(tricine)(TPPTS)]显像用于检测人乳腺癌蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达水平的可靠性。方... 目的探讨^99Tc^m-[联肼尼克酰胺(HYNIC)-BMS-200261](N-三羟甲基甘氨酸)[三苯基膦三间磺酸钠盐(TPPTS)][^99Tc^m-(HYNIC-BMS-200261)(tricine)(TPPTS)]显像用于检测人乳腺癌蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达水平的可靠性。方法选取PAR-1表达水平高、中、低的3种人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435、MDA-MB-231和MCF-7)制备荷瘤裸鼠,每种各5只,行^99Tc^m-(HYNIC-BMS-200261)(tricine)(TPPTS) γ显像,勾画感兴趣区,计算肿瘤/正常组织放射性(T/NT)比值;显像结束后取出肿瘤组织,计算其放射性摄取值[每克组织百分注射剂量率(%ID/g)],并行PAR-1免疫荧光染色进行半定量分析。采用单因素方差分析和Pearson相关分析处理数据。结果MDA-MB-435、MDA-MB-231和MCF-7荷瘤裸鼠注射后2 h显像的T/NT比值分别为3.03±0.32、2.27±0.25和1.51±0.13;肿瘤组织对应的放射性摄取值分别为(1.03±0.15)、(0.56±0.14)和(0.30±0.06) %ID/g;肿瘤组织免疫荧光染色PAR-1表达水平分别为(17.22±2.71)%、(10.78±1.95)%和(2.80±1.18)%;上述指标均为MDA-MB-435〉MDA-MB-231〉MCF-7(F值:47.66、46.36和62.35,均P〈0.05)。注射后2 h显像的T/NT比值、肿瘤组织放射性摄取值与免疫荧光染色PAR-1表达水平有相关性(r值:0.934和0.929,均P〈0.05)。结论^99Tc^m-(HYNIC-BMS-200261)(tricine)(TPPTS)显像有望成为探测乳腺癌PAR-1受体表达水平的有效方法。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 受体 蛋白酶激活 拮抗剂 放射性核素显像 肿瘤细胞 培养 小鼠
生物玻璃复合P-15多肽修复兔颅骨缺损的实验研究 预览
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作者 王帅 李成库 周延民 《现代医药卫生》 2018年第19期2969-2972,共4页
目的 探讨生物玻璃复合P-15多肽对兔颅骨缺损的修复能力。方法 将骨髓基质细胞与复合不同质量浓度P-15多肽(100、200、400μg/mL)的生物玻璃(复合材料)进行体外培养(实验组),并以未复合P-15的生物玻璃作为阴性对照组;接种后1、3、... 目的 探讨生物玻璃复合P-15多肽对兔颅骨缺损的修复能力。方法 将骨髓基质细胞与复合不同质量浓度P-15多肽(100、200、400μg/mL)的生物玻璃(复合材料)进行体外培养(实验组),并以未复合P-15的生物玻璃作为阴性对照组;接种后1、3、7、10 d检测骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性,筛选出多肽质量浓度最适宜的复合材料植入兔颅骨缺损内(复合材料组),植入后4、6、8周通过软X射线和组织学染色观察新骨形成情况。结果 P-15多肽质量浓度为200μg/mL时与生物玻璃共培养的骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性明显高于质量浓度为100、400μg/mL的实验组及阴性对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05);4、6、8周时复合材料组兔颅骨缺损内新骨形成均优于同时间点阴性对照组。结论 生物玻璃复合P-15多肽可促进兔颅骨缺损的修复。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 细胞 培养 生物玻璃 生物相容性材料 肽类 颅骨/外科学 动物 实验
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DLL4-RNAi影响胃癌细胞增殖和迁移
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作者 孔桂美 邵丽娟 +5 位作者 朱晓舟 杨亚旭 孙国壮 万丹 卜平 朱浩君 《实用肿瘤杂志》 CAS 2018年第4期317-324,共8页
目的探讨Delta-like配体4(Delta-like ligand 4,DLL4)在胃癌中的表达情况及对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 RT-PCR验证胃癌细胞中DLL4 mRNA的表达。构建DLL4-RNAi质粒转染胃癌AGS细胞,0.2μg/m L嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株。... 目的探讨Delta-like配体4(Delta-like ligand 4,DLL4)在胃癌中的表达情况及对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 RT-PCR验证胃癌细胞中DLL4 mRNA的表达。构建DLL4-RNAi质粒转染胃癌AGS细胞,0.2μg/m L嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株。MTT检测细胞株细胞增殖情况;划痕实验观察细胞株细胞的迁移情况。结果RT-PCR结果显示,DLL4和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA在胃癌AGS细胞中的表达高于正常细胞GES-1中的表达(均P〈0.05),且DLL4与VEGF mRNA的表达呈正相关(r=0.617,P=0.032)。DLL4-RNAi(34251)和DLL4-RNAi(34253)质粒转染可抑制胃癌AGS细胞DLL4 mRNA的表达(均P〈0.05)。DLL4-RNAi(34251)可抑制VEGF mRNA的表达(P〈0.05)。MTT实验结果显示,转染DLL4-RNAi(34253)和DLL4-RNAi(34251)的AGS细胞增殖速率减慢(均P〈0.01)。划痕实验结果显示,转染DLL4-RNAi(34253)的AGS细胞的迁移率降低(P〈0.01)。结论胃癌AGS细胞中DLL4表达上调,并影响细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 胃肿瘤/病理学 膜蛋白质类/生理学 配体 血管内皮生长因子A 细胞系 肿瘤细胞 培养 细胞增殖 RNA干扰 细胞运动
PI3K/AKT信号通路对神经母细胞瘤细胞增殖的作用及抑癌机制分析
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作者 杜海松 康康 《实用肿瘤杂志》 CAS 2018年第4期329-333,共5页
目的探讨PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中的作用以及其抑癌机制。方法选取神经母细胞瘤患者143例,提取其神经母细胞瘤细胞,选取对数期细胞接种,24 h后添加PI3K/AKT抑制剂LY294002进行处理,处理后24 h和48 h用四甲基偶氮唑蓝(... 目的探讨PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中的作用以及其抑癌机制。方法选取神经母细胞瘤患者143例,提取其神经母细胞瘤细胞,选取对数期细胞接种,24 h后添加PI3K/AKT抑制剂LY294002进行处理,处理后24 h和48 h用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyl tetrazolium bromide,MTT)法测量其吸光度(absorbance value,A)值;更换培养液继续培养12 h后添加PI3K/AKT促进剂类胰岛素生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)再次处理,处理后12 h和24 h测量A值。同期选择不添加抑制剂、促进剂细胞培养液作为对照组,并在抑制剂48 h、促进剂24 h荧光测定聚合酶链扩增反应(polymerase chain reaction,PCR)酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase receptor A,TYKA)基因mRNA含量。结果神经母细胞瘤细胞在20、40、50、60和100μmo1/L浓度PI3K/AKT抑制剂处理后24 h和48 h A值均小于对照组,差异均具有统计学意义(均P〈0.05);在25、50、100、150和200ng/mL PI3K/AKT促进剂IGF-1处理后12 h和24 h A值均大于对照组,差异均具有统计学意义(均P〈0.05)。抑制剂48 h时间点TYKA基因mRNA含量低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);促进剂24 h时间点TYKA基因mRNA含量高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中发挥作用。抑制PI3K/AKT信号通路可能通过抑制TYKA基因mRNA表达发挥抑癌作用。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤/病理生理学 1-磷脂酰肌醇3-激酶/拮抗剂和抑制剂 细胞增殖 细胞 培养 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 信号传导
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