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TLR7激动剂增强肾癌患者PBMCs抗肿瘤能力 预览
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作者 吴波 叶鑫 +5 位作者 陈林 杨进 张汉超 刘俊莹 陈亮 刁建军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期753-757,共5页
目的:探讨Toll样受体7(TLR7)激动剂刺激肾癌患者外周血单个核细(PBMCs)胞后其抗肿瘤活性的变化。方法:将经TLR7激动剂刺激的肾癌患者外周血单个核细胞与来源于该患者术后标本的原代肾癌细胞共培养。ELISA检测培养基中细胞因子γ-干扰素(... 目的:探讨Toll样受体7(TLR7)激动剂刺激肾癌患者外周血单个核细(PBMCs)胞后其抗肿瘤活性的变化。方法:将经TLR7激动剂刺激的肾癌患者外周血单个核细胞与来源于该患者术后标本的原代肾癌细胞共培养。ELISA检测培养基中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)水平,流式细胞术检测肾癌细胞周期,[51Cr]释放实验检测PBMCs抗肿瘤活性变化,Western blot检测肾癌细胞Skp2及其下游通路的蛋白水平。结果:TLR7激动剂刺激外周血单个核细胞后,共培养的培养基中IFN-γ、TNF-α和IL-2表达增加,肾癌细胞的增殖指数明显受抑制、PBMCs对肾癌细胞的杀伤率显著提高(P<0.05)。肾癌细胞Skp2蛋白水平在刺激后有明显的下降,下降的规律和细胞增殖指数的变化一致;下游p27蛋白水平明显增加,与Skp2蛋白水平变化的规律相反,而p21和p53无明显变化。结论:TLR7激动剂能够有效增强肾癌患者外周血单个核细胞抗肿瘤活性,使肾癌细胞生长受抑制,其机制可能与抑制Skp2/p27通路使细胞周期停滞有关。 展开更多
关键词 细胞 外周血单个细胞 细胞因子 TOLL样受体7 Skp2/p27信号通路
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卡介菌对尖锐湿疣患者外周血单个核细胞增殖及细胞周期阻滞的影响研究 预览
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作者 徐超 林丽萍 +2 位作者 马肩超 王红霞 陶勇峰 《现代实用医学》 2019年第2期217-218,I0002共3页
目的探讨卡介苗(BCG)体外对分离培养的尖锐湿疣(CA)患者外周血单个核细胞(PBMC)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法分离培养PBMC,予BCG作用不同时间后采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法检测PBMC的生长、增殖活性,流式细胞仪分析测定细胞周期各... 目的探讨卡介苗(BCG)体外对分离培养的尖锐湿疣(CA)患者外周血单个核细胞(PBMC)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法分离培养PBMC,予BCG作用不同时间后采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法检测PBMC的生长、增殖活性,流式细胞仪分析测定细胞周期各时相的变化。结果BCG对CA患者外周血PBMC的增殖抑制率随着作用时间的增加而升窗,各时间点OD值与未加入BCG(Oh)碧异均有统计学意义(均P<0.05);各时间点G0/G1、S及G2/ M差异均有统计学意义(均P<0.05);随着作用时间延长,CyclinDl蛋白表达逐渐减弱,相对表达量与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论BCG能抑制CA患者外周血PBMC的体外増殖,其机制可能与细胞周期阻滞有关。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 卡介苗 外周血单个细胞 细胞增殖 细胞周期
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TIPE2、Foxp3、CTLA-4 mRNA在慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义 预览
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作者 孔丽 金萌 +2 位作者 王卫真 赵素贤 王闪闪 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期323-327,共5页
目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)、调节性T淋巴细胞(Treg)功能分子叉头样转录因子3(Foxp3)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达及临床意义。方法 选取2012年5月-2016... 目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)、调节性T淋巴细胞(Treg)功能分子叉头样转录因子3(Foxp3)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达及临床意义。方法 选取2012年5月-2016年12月在河北医科大学第三医院门诊及住院的未经抗病毒药物和免疫调节药物治疗的慢性丙型肝炎患者80例,另选取同期健康志愿者45例作为对照。应用实时荧光定量PCR法检测PBMC中TIPE2、Foxp3、CTLA-4 mRNA表达水平,并观察与肝脏血清生化指标及HCV RNA水平的相关性及TIPE2对Foxp3和CTLA-4的影响。计量资料两组间比较采用t检验;计数资料两组间比较采用χ^2检验;相关分析采用Pearson相关性检验。结果 慢性丙型肝炎患者PBMC中TIPE2 mRNA表达较健康对照组显著降低(0.564±0.232 vs 0.704±0.165,t=3.569,P<0.001);Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA表达较健康对照组明显升高(0.701±0.405 vs 0.527±0.184,t=2.725,P=0.007;0.638±0.211vs 0.448±0.134,t=5.449,P<0.001)。TIPE2 mRNA表达与ALT、AST、TBil水平及HCV RNA载量均呈负相关(r值分别为-0.368、-0.417、-0.416、-0.327,P值分别为0.001、<0.001、<0.001、0.003);Foxp3 mRNA表达与TBil水平呈负相关(r=-0.284,P=0.011);TIPE2 mRNA表达与Foxp3 mRNA、CTLA-4 mRNA表达均呈正相关(r值分别为0.461、0.257,P值分别为<0.001、0.021)。结论 慢性丙型肝炎患者存在TIPE2基因表达及Treg功能分子Foxp3、CTLA-4 mRNA表达数量和功能的异常,并且与肝细胞损伤程度和病毒复制有一定的关系,TIPE2基因可能通过正性调控Treg介导的免疫反应参与了慢性丙型肝炎的发病过程。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 慢性 肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2 叉头转录因子类 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 外周血单个细胞
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类风湿关节炎患者破骨细胞分化情况及其与骨破坏的关系 预览
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作者 蔡辉 徐子涵 +3 位作者 商玮 郭郡浩 赵智明 沈俊逸 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期604-607,共4页
目的:观察类风湿关节炎(RA)患者破骨细胞(OC)的分化情况,并分析其与RA骨破坏的关系。方法:采用密度梯度离心法分离12例RA患者和10例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF... 目的:观察类风湿关节炎(RA)患者破骨细胞(OC)的分化情况,并分析其与RA骨破坏的关系。方法:采用密度梯度离心法分离12例RA患者和10例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养为OC,进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数阳性细胞数,分别通过甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察骨吸收陷窝;对RA组患者进行Sharp评分及骨密度(BMD)检测,将RA组外周血生成的OC数量与Sharp评分、BMD(T值)进行相关性分析。结果:RA组和对照组生成的OC形态相似;RA组TRAP阳性细胞数(个/10个视野)为127.67±6.96,较对照组79.40±3.86显著升高(P<0.05);RA组OC骨吸收功能较对照组明显增强;RA组OC数量与Sharp评分呈显著正相关(r=0.810,P=0.001),与BMD(T值)呈显著负相关(r=-0.685,P=0.014)。结论:RA患者PBMC向OC分化的能力明显增强,RA患者OC的分化能力与RA骨破坏密切相关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 破骨细胞 外周血单个细胞 抗酒石酸酸性磷酸酶 骨吸收陷窝 双能X线吸收法 骨密度
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焦炉工多环芳烃接触与外周血单个核细胞CYP1A1基因和酶活力的关系
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作者 李新 张红梅 +5 位作者 钱波 高雁萍 吴苗 潘宝龙 王清花 杨可达 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期104-109,共6页
目的探讨焦炉工多环芳烃(PAHs)接触与外周血单个核细胞CYP1A1基因和酶活力的相关关系,为焦炉工健康损害的生物监测提供一定的基础。方法对118名焦炉工和63名对照人群(同一企业的能源动力工)进行问卷调查,用高效液相色谱-荧光检测器法检... 目的探讨焦炉工多环芳烃(PAHs)接触与外周血单个核细胞CYP1A1基因和酶活力的相关关系,为焦炉工健康损害的生物监测提供一定的基础。方法对118名焦炉工和63名对照人群(同一企业的能源动力工)进行问卷调查,用高效液相色谱-荧光检测器法检测工人班后尿中1-羟基芘(1-OH-Py)的浓度;采集晨起空腹肘静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC),用彗星实验检测DNA损伤情况;用实时荧光定量-聚合酶链反应(QT-PCR)法和荧光分光光度法检测外周血单个核细胞中CYP1A1基因表达和CYP1A1酶(EROD)活力;用单因素方差分析、多元线性回归等统计方法分析尿1-OH-Py与CYP1A1基因和酶活力之间的关系。结果与对照组比较,焦炉工尿1-OH-Py浓度和DNA尾距明显较高,外周血单个核细胞CYP1A1基因表达水平和EROD活力明显较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归结果显示,尿中1-OH-Py浓度每增加10倍,焦炉工外周血单个核细胞CYP1A1基因表达水平降低0.77个单位(95%CI:-1.33~-0.21),EROD活力降低0.25个单位(95%CI:-0.67~-0.17)。结论焦炉工PAHs接触可引起外周血单个核细胞DNA损伤,可能与外周血CYP1A1基因表达水平和EROD活力下调有关。 展开更多
关键词 外周血单个细胞 DNA损伤 CYP1A1基因 酶活力
TXNIP/NLRP3炎性小体通路在COPD患者机体炎症反应中的作用研究 预览
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作者 王晓玲 黄钟 +3 位作者 邓广雪 何子凡 刘冬(指导) 卢献灵(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期729-734,共6页
目的:探讨TXNIP/NLRP3炎性小体通路在COPD患者发病机制中的可能作用。方法:选取2017年11月至2018年5月住院的40例COPD患者为急性加重期组,其经过治疗进入稳定期后纳入稳定期组,40例健康体检者为对照组。荧光定量PCR法测定外周血单个核... 目的:探讨TXNIP/NLRP3炎性小体通路在COPD患者发病机制中的可能作用。方法:选取2017年11月至2018年5月住院的40例COPD患者为急性加重期组,其经过治疗进入稳定期后纳入稳定期组,40例健康体检者为对照组。荧光定量PCR法测定外周血单个核细胞中TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA水平,Western blot法检测外周血单个核细胞中TXNIP及NLRP3蛋白表达水平。结果:(1)COPD患者急性加重期组NLRP3、TXNIP的mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0. 05)和稳定期组(P<0. 05);COPD患者稳定期组的NLRP3 mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组(P<0. 05)。(2)相关性分析:急性加重期组NLRP3 mRNA表达量与FEV1%pred、FEV1/FVC负相关;急性加重期组和稳定期组的NLRP3 mRNA、TXNIP mRNA表达量均与CAT评分正相关。结论:TXNIP/NLRP3炎性小体通路参与COPD患者的机体炎症反应。 展开更多
关键词 COPD TXNIP NLRP3炎性小体 外周血单个细胞
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miR-155与类风湿关节炎相关性Meta分析 预览
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作者 杨国梅 宁耀贵 +1 位作者 钱红燕 陈世菊 《中国卫生标准管理》 2019年第1期51-55,共5页
目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种系统性自身免疫性疾病,伴有关节进行性损伤。miR-155被报道参与包括RA在内多种自身免疫性疾病。文章对miR-155与类风湿关节炎相关性进行Meta分析。方法通过对Pubmed、Embase、万方数据... 目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种系统性自身免疫性疾病,伴有关节进行性损伤。miR-155被报道参与包括RA在内多种自身免疫性疾病。文章对miR-155与类风湿关节炎相关性进行Meta分析。方法通过对Pubmed、Embase、万方数据库、维普数据库和中国知网中国期刊全文数据等相关文献进行搜索,采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果共纳入8个研究,共计273例RA患者和183名健康人员。通过随机效应模型进行亚组分析,结果显示外周血单核细胞中miR-155与RA风险有关[MD=1.10,95%CI(0.15,2.06)],差异有统计学意义(P=0.02),外周血白细胞[MD=0.34,95%CI(-0.65,1.34)]、血浆miR-155表达[MD=0.24,95%CI(-0.83,1.31)]与RA无相关性,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论Meta分析结果提示外周血PBMC中miR-155是RA的危险因素。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 外周血单个细胞 MIR-155 风险 META分析 随机模型
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不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化 预览
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作者 熊静 王思雨 +4 位作者 张云惠 吴利红 邓弘仙 刘阳 罗兴燕 《检验医学与临床》 CAS 2019年第3期289-291,共3页
目的 观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法 采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果 分离离心力结果:... 目的 观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法 采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果 分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300~900g分离时差异无统计学意义(P >0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300~2400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1200g时,存活细胞数显著减少。结论 分离离心力在600~900g及洗涤离心力在300~600g均可用于PBMC的分离。 展开更多
关键词 外周血单个细胞 聚蔗糖密度梯度离心法 离心力
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慢性免疫性血小板减少症患者miR-491-5p表达情况及临床意义 预览
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作者 周艳 钱琤 《检验医学与临床》 CAS 2019年第9期1153-1155,共3页
目的研究micro-RNA(miR)-491-5p在慢性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及临床意义。方法收集滁州市第一人民医院健康体检者38例(健康对照组),慢性ITP患者38例(慢性ITP组),其中治疗后缓解组为26例,未缓解组1... 目的研究micro-RNA(miR)-491-5p在慢性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及临床意义。方法收集滁州市第一人民医院健康体检者38例(健康对照组),慢性ITP患者38例(慢性ITP组),其中治疗后缓解组为26例,未缓解组12例。所有研究对象均采集外周静脉血2mL,分离PBMC,提取细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以U6为内参,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法检测miR-491-5p的表达量;采用Pearson相关分析慢性ITP患者miR-491-5p与血小板计数之间的相关性。应用ROC曲线分析miR-491-5p分子标志物的诊断价值。结果慢性ITP组与健康对照组相比,miR-491-5p的表达增高;治疗后与治疗前比较,PBMC的miR-491-5p的表达下降;慢性ITP患者PBMC中miR-491-5p的表达量与血小板计数呈负相关(r=-0.6612,P<0.05)。慢性ITP患者PBMC的miR-491-5pROC曲线下面积为0.9294。结论miR-491-5p参与慢性ITP的发病过程,有望成为慢性ITP诊断治疗、预后实时监测的标志物。 展开更多
关键词 miR-491-5p 外周血单个细胞 慢性免疫性小板减少症
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自体外周血单个核细胞对反复种植失败患者子宫内膜容受性标志分子和冻融胚胎移植妊娠结局影响研究
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作者 项云改 禹果 +4 位作者 宋玉霞 李艳 万利静 马丽影 谭丽 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期347-351,共5页
目的探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)对反复种植失败(RIF)患者子宫内膜容受性标志分子[白血病抑制因子(LIF)、整合素αvβ3]表达的影响及自体PBMC选取2015年1月至2016年12月于郑州大学第二附属医院生殖医学部行体外受精-胚胎移植(IVF-ET... 目的探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)对反复种植失败(RIF)患者子宫内膜容受性标志分子[白血病抑制因子(LIF)、整合素αvβ3]表达的影响及自体PBMC选取2015年1月至2016年12月于郑州大学第二附属医院生殖医学部行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的RIF患者,收集子宫内膜和PBMC细胞。建立体外培养模型,观察组添加PBMC培养,对照组添加等量培养液,培养至第6天,取第1、3、5天培养液,应用酶联免疫法检测其中LIF和整合素αvβ3的浓度。拟行冻融胚胎移植的患者78例,随机分为PBMC宫腔灌注组(56例)和不灌注组(22例),比较两组冻融胚胎移植助孕的妊娠结局。结果培养第3天观察组与对照组培养液中LIF浓度差异无统计学意义(P>0.05);培养第5天时,与对照组相比,观察组培养液中LIF浓度明显升高(P<0.05)。培养第3天两组培养液中整合素αvβ3浓度差异无统计学意义(P>0.05);培养第5天时,与对照组相比,观察组整合素培养液中αvβ3浓度明显升高(P<0.05)。行冻融胚胎移植的RIF患者,宫腔灌注组的胚胎种植率和临床妊娠率均高于不灌注组(P<0.05)。结论自体PBMC可以提高RIF患者子宫内膜细胞体外培养条件下LIF和整合素αvβ3的浓度,进而上调子宫内膜容受性;自体PBMC宫腔灌注可以提高RIF患者行冻融胚胎移植助孕的胚胎种植率和临床妊娠率,可以做为改善RIF患者子宫内膜容受性及助孕结局的一种方法。 展开更多
关键词 外周血单个细胞 反复种植失败 病抑制因子 整合素ΑVΒ3
梅毒患者外周血单个核细胞miR-1204的表达及其功能预测分析
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作者 杨结仪 黄涛 +4 位作者 陈文韬 赵云虎 廖仪文 郑碧英 郑和平 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期431-436,共6页
目的探讨梅毒患者外周血单个核细胞miR-1204的表达及其潜在功能,为进一步研究miR-1204在梅毒螺旋体感染中生物学功能以及作用机制奠定基础。方法收集梅毒患者外周血83例、健康人12例,密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-qPCR检测miR-1204;... 目的探讨梅毒患者外周血单个核细胞miR-1204的表达及其潜在功能,为进一步研究miR-1204在梅毒螺旋体感染中生物学功能以及作用机制奠定基础。方法收集梅毒患者外周血83例、健康人12例,密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-qPCR检测miR-1204;采用Target Scan7.1和DIANA对miR-1204靶基因进行预测并取交集的基因集合,最后通过Consensus PathDB对基因集合进行GO功能及KEGG信号转导通路富集分析。结果一期梅毒患者PBMCs中miR-1204表达水平显著上调,高于二期梅毒患者(P<0.05)、血清治愈患者(P<0.05),差异具有统计学意义。miR-1204在现症梅毒组中表达水平高于血清学治愈组(P<0.05),差异具有统计学意义;GO功能富集分析显示miR-1204靶基因主要参与调节细胞发育、细胞分化、血管通透性、趋化性、抗原刺激的炎症反应等生物学过程。信号转导通路富集分析显示miR-1204 Top10信号转导通路为间隙连接、趋化因子信号通路、ErbB信号通路、GnRH信号通路、非洲锥虫病、松弛素信号通路、NK细胞介导的细胞毒作用、乙型肝炎、磷脂酶D信号通路、致病性大肠杆菌感染。结论miR-1204可能成为一期梅毒/评估梅毒治疗效果潜在的分子标志物,参与早期梅毒感染的发生。 展开更多
关键词 miR-1204 梅毒 外周血单个细胞 功能预测
高通量测序分析类风湿关节炎患者外周血单个核细胞circRNAs表达谱差异
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作者 杨旋 张梦洁 张蓓 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期262-268,共7页
目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中环状RNA (circRNA)表达谱的差异,并结合临床验证筛选出可辅助RA诊断的分子标志物。方法采用高通量测序技术,检测4例RA患者和3例健康对照者PBMCs中circRNA和mRNA表达;基因聚类分... 目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中环状RNA (circRNA)表达谱的差异,并结合临床验证筛选出可辅助RA诊断的分子标志物。方法采用高通量测序技术,检测4例RA患者和3例健康对照者PBMCs中circRNA和mRNA表达;基因聚类分析差异表达的circRNAs,KEGG pathway分析差异表达的mRNAs;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法在32例RA患者和20例健康对照者中验证部分差异表达circRNAs,结合ROC曲线分析其作为RA诊断分子标志物的潜力。结果高通量测序结果显示,RA组和健康对照组中共有71种显著差异表达的circRNAs,其中41种上调,30种下调,生物信息学分析显示,涉及的通路多与炎症和转录活性相关。多样本qRT-PCR验证结果显示hsacirc0000396和hsacirc0130438在RA患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照组(P<0.05),ROC曲线分析进一步表明显示hsacirc0000396有望成为RA诊断分子标志物。结论在RA患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs,它们在RA的发生发展过程中可能起调控作用,其中hsacirc0000396有成为RA诊断分子标志物的潜能。 展开更多
关键词 高通量测序 类风湿关节炎 环状RNA 外周血单个细胞 hsa_circ_0000396
SLE患者PBMC中lncRNA表达变化及意义 预览
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作者 阿霄 袁李梅 +1 位作者 曹文婷 邓丹琪 《山东医药》 CAS 2019年第1期20-23,共4页
目的筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中差异性表达的长链非编码RNA(lncRNA),并探讨其表达变化的临床意义。方法SLE女性患者18例(SLE组)、体检健康女性志愿者18例(NC组),两组均随机抽取5例用于高通量测序技术(RNA-seq... 目的筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中差异性表达的长链非编码RNA(lncRNA),并探讨其表达变化的临床意义。方法SLE女性患者18例(SLE组)、体检健康女性志愿者18例(NC组),两组均随机抽取5例用于高通量测序技术(RNA-seq)测序。根据入院24h尿蛋白定量检测结果将13例SLE患者分为蛋白尿阳性组4例、蛋白尿阴性组9例;根据补体C3水平将患者分为低补体组7例、正常补体组6例。收集两组外周静脉血,用人外周血淋巴细胞分离液提取PBMC。采用RNA-seq筛选差异表达基因。采用qRT-PCR技术检测PBMC中linc00861表达。结果RNA-seq筛选出SLE患者PBMC中差异表达的lncRNA为linc00861;SLE组PBMC中linc00861相对表达量低于NC组(P<0.05)。SLE患者PBMC中linc00861相对表达量与SLEDAI评分呈负相关(r=-6.27,P<0.05)。蛋白尿阳性组PBMC中linc00861相对表达量低于蛋白尿阴性组(P<0.05)。低补体组PBMC中linc00861相对表达量低于正常补体组(P<0.05)。结论从SLE患者PBMC中筛选出低表达的linc00861,其表达变化可反映SLE的疾病活动度及肾脏受累程度。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 长链非编码RNA 外周血单个细胞 高通量测序
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温化蠲痹方作用于鸟嘌呤释放蛋白1影响微小RNA-146a对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞DNA甲基化调控作用研究
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作者 刘喜德 冯莹莹 +6 位作者 蔡龙 周红娟 王珊珊 叶丽红 王云卿 杜静 郑琳琳 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第1期10-14,共5页
目的:研究鸟嘌呤释放蛋白1(RASGRP1)在中药温化蠲痹方影响微小RNA-146a(miRNA-146a)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)DNA甲基化调控中的作用,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机制。方法:随机将健康雌性Wistar大鼠分为造模... 目的:研究鸟嘌呤释放蛋白1(RASGRP1)在中药温化蠲痹方影响微小RNA-146a(miRNA-146a)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)DNA甲基化调控中的作用,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机制。方法:随机将健康雌性Wistar大鼠分为造模组和正常对照组(n=10,正常组),造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂,建立胶原诱导性关节炎模型。30只造模成功大鼠随机分组如下:模型组(n=10)、甲氨蝶呤组(n=10,MTX组)及中药温化蠲痹方组(n=10,中药组)。中药组大鼠按22.9g/(kg·d)灌胃中药温化蠲痹方,模型组给予生理盐水灌胃,两组大鼠都是每天1次,MTX组灌胃MTX混悬液(0.78mg/kg),每周1次,共观察30d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,对正常组、模型组PBMC细胞培养,模型组加入ras-MARKs阻断剂,阻断剂①SB230580、阻断剂②PD98059、阻断剂③SP600125,模型组加中药,正常组转染miRNA-146a,模型组转染反义miRNA-146a。采用实时定量PCR法检测miRNA-146a、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)表达水平,WesternBlot检测RASGRP1表达。结果:(1)与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01);MTX组与中药组比较,大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)体内实验:与正常组比较,模型组大鼠外周血RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药组、MTX组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。中药组、MTX组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。体外实验:与正常组比较,模型组、正常转染miRNA-146a组PBMCRASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,模型加中药组、模型转染反义miRNA-146a组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)� 展开更多
关键词 胶原诱导性关节炎 外周血单个细胞 DNA甲基化转移酶 miRNA-146a RASGRP1 温化蠲痹方
自身免疫甲状腺炎患者外周血单个核细胞高表达Siglec-1并与炎症反应指标相关
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作者 吴莹 郭庆玲 +8 位作者 龚珣 孙威 张文谦 赵桐 杨阳 范晨玲 李咏泽 滕卫平 单忠艳 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期99-104,共6页
目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(Siglec-1)在自身免疫甲状腺炎(autoimmune thyroiditis, AIT)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达水平,分析其与AIT炎症反应指标的相关性;并进一步在培养的PBMC原代细胞中探讨Siglec-1激活对调节... 目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(Siglec-1)在自身免疫甲状腺炎(autoimmune thyroiditis, AIT)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达水平,分析其与AIT炎症反应指标的相关性;并进一步在培养的PBMC原代细胞中探讨Siglec-1激活对调节辅助性T细胞分化、促进炎症反应的作用。方法收集30例甲状腺功能正常的AIT患者、30例年龄及性别匹配的健康对照者的外周全血和血清,ELISA检测血清可溶性Siglec-1(sSiglec-1)水平,RT-PCR、WB检测各组PBMC中Siglec-1的水平,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中Siglec-1水平及Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%);体外培养AIT患者和正常对照组PBMC,单独应用脂多糖(LPS)或与不同浓度的碘化钠共同刺激72 h,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中Siglec-1水平及Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%)变化。结果AIT患者血清sSiglec-1、PBMC中Siglec-1 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P<0.01);CD14+单核细胞上Siglec-1水平显著高于正常对照组(P<0.01);Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%)显著高于正常对照组(P<0.01)。原代培养PBMC 72 h,5×10^-5 mmol/L至1×10^-2 mmol/L浓度的碘化钠上调正常人及AIT患者PBMC中Siglec-1表达(P<0.01)。AIT患者Th1细胞比例(%)和Th17细胞比例(%)升高(P<0.01),并呈浓度依赖性,正常对照中无显著性差异(P>0.05)。结论Siglec-1在PBMC和单核细胞中的表达有可能作为AIT的生物标记;碘可能通过激活AIT患者Siglec-1并影响Th1细胞和Th17细胞分化来调节AIT的免疫炎症反应。 展开更多
关键词 自身免疫甲状腺炎 SIGLEC-1 外周血单个细胞
姜黄素对类风湿关节炎破骨细胞分化中NF-κB p65和NFATc1表达的影响 预览
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作者 商玮 徐子涵 +3 位作者 郭郡浩 董晓蕾 赵智明 蔡辉 《中国骨质疏松杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期467-472,共6页
目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic ... 目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1)表达的影响。方法密度梯度离心法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)诱导培养为OC,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及骨吸收功能检测鉴定OC,分别用不同浓度(0、2.5、5及10μmol/L)的Cur进行干预。采用CCK-8法进行Cur细胞毒性检测;计数TRAP染色阳性细胞数;Western-blotting检测NF-κB p65、NFATc1蛋白的表达;免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位。结果 CCK-8结果示,Cur2.5、5和10μmol/L的浓度对PBMC未产生细胞毒性;TRAP染色结果示,Cur抑制RANKL诱导的RA-OC分化;Westernblotting结果示,经不同浓度Cur干预后,NF-κB p65在细胞浆中的表达明显升高,在细胞核中的表达明显降低,NFATc1的蛋白表达明显降低;免疫荧光染色结果示Cur抑制NF-κB p65核易位。结论 Cur能明显抑制NF-κB的入核表达,降低NFATc1的表达,从而抑制RA-OC的分化。 展开更多
关键词 姜黄素 类风湿关节炎 破骨细胞 外周血单个细胞 因子-κB P65 活化T细胞因子c1
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IL-7和IL-21修饰的NK-92MI细胞对其自身及正常人外周血T细胞的影响
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作者 张平 李亚芬 +1 位作者 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期281-287,共7页
目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法... 目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后,用流式细胞术检测PBMC中T细胞的表型变化;同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以及对肿瘤细胞的毒性比较。结果:成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7&21细胞;NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化,但是NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高;NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC中T细胞的活化有一定的促进作用;活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞毒性;同时,当T细胞和3种NK细胞共存时,T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。结论:基因工程修饰的NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高,它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用;T细胞和NK-92MI细胞之间无细胞毒性,同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。 展开更多
关键词 NK-92MI细胞 NK-92MI/IL-21细胞 NK-92MI/IL-7&21细胞 外周血单个细胞 细胞毒性
姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少类风湿关节炎破骨细胞生成 预览
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作者 徐子涵 商玮 +1 位作者 郭郡浩 蔡辉 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期180-185,共6页
目的 研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者破骨细胞生成的影响及可能机制。方法 分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导培养为破骨细胞,不同浓度Cur(0、... 目的 研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者破骨细胞生成的影响及可能机制。方法 分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导培养为破骨细胞,不同浓度Cur(0、2.5、5和10μmol/L)进行干预。培养14 d后行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色标记成熟破骨细胞并计数;Western blot法检测各组细胞中核因子-κB抑制蛋白α(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达;Western blot法检测细胞质和细胞核中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的表达。结果 Cur2.5、5和Cur 10μmol/L组TRAP阳性细胞数(个/10个视野)分别为103.00±4.36、89.33±4.93和67.33±4.16,与Control组146.67±6.11相比均明显减少(P〈0.05);IκBα蛋白表达水平明显升高,p-IκBα的表达水平明显下降(P〈0.05);细胞质中NF-κB p65表达水平明显升高,细胞核中NF-κB p65表达水平明显下降(P〈0.05)。结论 姜黄素通过抑制NF-κB信号活化减少RA破骨细胞生成。 展开更多
关键词 姜黄素 类风湿关节炎 破骨细胞 外周血单个细胞 因子ΚB
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瘦素通过白细胞介素-6调控类风湿关节炎患者外周血调节性T细胞的增殖
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作者 叶芸杉 李寒 +3 位作者 欧阳寻丽 袁启航 王冰 张彦 《中华风湿病学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期660-663,共4页
目的初步探讨瘦素对RA患者外周血调节性T细胞增殖的影响。方法分离培养6例RA患者PBMCs,分别用抗CD3(3 μg/ml)/抗CD28(2 μg/ml)、抗CD3(3 μg/ml)/抗CD28(2 μg/ml)加瘦素(100 ng/ml)、抗CD3(3 μg/ml)/抗CD28(2 μg/ml... 目的初步探讨瘦素对RA患者外周血调节性T细胞增殖的影响。方法分离培养6例RA患者PBMCs,分别用抗CD3(3 μg/ml)/抗CD28(2 μg/ml)、抗CD3(3 μg/ml)/抗CD28(2 μg/ml)加瘦素(100 ng/ml)、抗CD3(3 μg/ml)/抗CD28(2 μg/ml)以及瘦素(100 ng/ml)加IL-6R拮抗剂(0.5 μg/ml)刺激72 h。收集悬浮细胞,流式细胞术检测调节性T细胞百分率;ELISA检测细胞培养上清中IL-6、TGF-β水平。采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析。结果①与对照组比较,瘦素刺激72 h后调节性T细胞比例下降[13.6(11.6,14.8)%和9.8(7.0,10.0)%,Z=-2.201,P〈0.05];IL-6、TGF-β水平均上升[548.9(508.6,608.4)ng/L和631.8(538.4,672.6)ng/L,Z=-1.992,P〈0.05;1175.0(1 045.4,1 373.1)ng/L和1 580.2(1 315.3,1 906.5)ng/L,Z=-2.201,P〈0.05];②加入IL-6R拮抗剂后,瘦素刺激PBMCs分泌IL-6水平下降[631.8(538.4,672.6)ng/L和522.7(339.3,593.3)ng/L,Z=-2.201,P〈0.05];调节性T细胞比例上升[9.8(7.0,10.0)%和12.3(9.7,13.8)%,Z=-1.997,P〈0.05]。结论瘦素可能通过上调IL-6,进而对外周血调节性T细胞的增殖起到负调控作用。 展开更多
关键词 瘦素 关节炎 类风湿 外周血单个细胞 调节性T细胞 细胞介素-6
Immune Cell SR对冻存PBMNC诱导培养CIK的效果研究
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作者 马冬磊 林科佳 +4 位作者 陈晨 魏宗科 魏志璋 罗晓玲 王宇环 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期894-899,共6页
目的:探讨Immune Cell SR(血清替代物)在冻存复苏后PBMNC诱导CIK细胞培养过程中的效果,为免疫细胞的工业化生产提供一个新的策略。方法:提取健康志愿者外周血单个核细胞,经短期冻存后复苏并诱导培养CIK细胞,采用台盼蓝拒染法检测细... 目的:探讨Immune Cell SR(血清替代物)在冻存复苏后PBMNC诱导CIK细胞培养过程中的效果,为免疫细胞的工业化生产提供一个新的策略。方法:提取健康志愿者外周血单个核细胞,经短期冻存后复苏并诱导培养CIK细胞,采用台盼蓝拒染法检测细胞活率,流式细胞术分析免疫细胞亚群,并用Calcein-AM/PI双染法检测其杀伤活性;结果:冻存后PBMNC中在对照组未能正常扩增,与新鲜组相比,2%SR组细胞扩增倍数较低,且差异显著(P〈0.05),5%SR组、10%AP组与新鲜组比较,差异均无统计学意义(P〉0.05);冻存前后CD3^+、CD3^+CD8^+、CD3^+ CD56^+细胞亚群比较均无明显差异(P〉0.05);细胞培养后,各组间CD3^+、CD3^+CD4^+、CD3^+CD8+、CD3^+CD56^+、CD3^-CD56^+亚群及体外杀伤活性比较均无明显差异(P〉0.05);结论:采用5%SR替代自体血浆可以很好地诱导冻存的PBMNC培养CIK细胞,且无外源性蛋白,安全可靠,为免疫细胞冻存技术在细胞治疗中的应用提供条件。 展开更多
关键词 外周血单个细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 冻存 浆替代物
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