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基于高通量测序的2型糖尿病易感基因靶向测序panel设计及临床应用
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作者 李春瑞 邢玉华 +2 位作者 裴智勇 刘满姣 陈禹保 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期91-97,共7页
目的利用高通量测序(NGS)和多重PCR技术设计基于扩增子的靶向测序panel,对T2DM易感基因进行测序,并评估其与T2DM患者临床特征的关系。方法通过Illumina测序平台,设计多重PCR扩增的靶向测序panel,对16个T2DM易感基因21个SNP位点进行测序... 目的利用高通量测序(NGS)和多重PCR技术设计基于扩增子的靶向测序panel,对T2DM易感基因进行测序,并评估其与T2DM患者临床特征的关系。方法通过Illumina测序平台,设计多重PCR扩增的靶向测序panel,对16个T2DM易感基因21个SNP位点进行测序。收集1043份确诊T2DM患者的外周血DNA样本进行检测。结果 PCR扩增子在不同样本之间的测序深度具有良好的可重复性,且不同扩增子测序数据分布具有高度一致性,除rs864745和rs712523外,测序深度达到1000×以上。18个SNP位点差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论通过NGS技术,利用基于扩增子的靶向测序panel进行T2DM易感基因检测的可行性和实用性,验证了KCNQ1、CDKAL1、CDKN2B是T2DM发病的风险基因。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 易感基因 多重PCR 二代测序 靶向测序panel 全基因组关联研究
牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎可视化基因芯片检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 魏春霞 孙淼 +8 位作者 赵炜 陈延飞 刘怀东 张敏 李岭 陈建 才学鹏 曾巧英 薛青红 《中国兽药杂志》 2019年第4期6-15,共10页
针对现有牛病病原检测方法指标单一,操作复杂的现状,拟建立一种可高效检测牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎的基因芯片技术。根据已公布的各病原核酸序列,设计引物和探针。利用多重PCR方法... 针对现有牛病病原检测方法指标单一,操作复杂的现状,拟建立一种可高效检测牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎的基因芯片技术。根据已公布的各病原核酸序列,设计引物和探针。利用多重PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针特异性杂交,芯片反应显色后肉眼观察进行检测结果判定。优化反应条件、建立检测方法,同时对检测方法的灵敏度、可重复性、特异性、保存期等进行评价。结果显示,该基因芯片检测方法单一病原灵敏度检测可达1.0×10^-6ng/μL,混合病原灵敏度检测可达1.4×10^-5ng/μL;各病原间无交叉反应,检测健康牛血清、组织,牛流行性热病毒也均无响应;针对同一阳性质控品,芯片重复率达100%。保存期试验表明,芯片在2~8℃至少可保存6个月。检测30份临床样本,结果与标准方法结果一致。实验建立的方法具有高通量、高灵敏度、高特异性等特点,可在3h内完成同时对七种牛重要疫病的检测,在牛群疫病诊断、净化及流行病学调查等方面有良好的应用前景。 展开更多
关键词 牛布鲁氏菌病 结核 炭疽 口蹄疫 病毒性腹泻黏膜病 副流感 传染性鼻气管炎 多重PCR 基因芯片
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多重PCR技术在病原微生物检测中的应用 预览 被引量:2
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作者 白菊红 康建平 +4 位作者 张星灿 华苗苗 刘建 杨健 钟雪婷 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期322-325,331共5页
多重PCR技术特异性强、灵敏度高,被广泛应用于生命科学研究的各个领域。本文阐述了多重PCR技术原理,并就其近年来在人类、动物疾病、农作物病害、食源性致病微生物等方面的研究进行了介绍,提出了该技术目前存在的问题,并对其前景进行了... 多重PCR技术特异性强、灵敏度高,被广泛应用于生命科学研究的各个领域。本文阐述了多重PCR技术原理,并就其近年来在人类、动物疾病、农作物病害、食源性致病微生物等方面的研究进行了介绍,提出了该技术目前存在的问题,并对其前景进行了展望,旨在为多重PCR技术更好的应用提供参考。 展开更多
关键词 多重PCR 原理 病原微生物检测
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基于毛细管电泳多重PCR方法对小儿呼吸道感染病原分析
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作者 刘宇奇 黄艳智 +7 位作者 孙利伟 姜洪波 田玉玲 孟婷玉 马岩 贺岩 赵艳玲 马英伟 《中国小儿急救医学》 CAS 2019年第10期764-770,共7页
目的探讨基于毛细管电泳的多重PCR方法检测小儿呼吸道感染病原效果,为临床及时有效诊断和治疗提供科学依据.方法按照"十二五"国家科技重大专项发热呼吸道症候群的监测方案要求定义病例;标本来源为2017年1月至2018年2月长春市... 目的探讨基于毛细管电泳的多重PCR方法检测小儿呼吸道感染病原效果,为临床及时有效诊断和治疗提供科学依据.方法按照"十二五"国家科技重大专项发热呼吸道症候群的监测方案要求定义病例;标本来源为2017年1月至2018年2月长春市儿童医院住院的呼吸道感染患儿的鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等.应用一步法多重PCR扩增,然后毛细管电泳分离扩增产物,Genemapper software软件分析检测结果.检测病原包括甲型流感病毒(InfA)、人腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、人鼻病毒(HRV)、新型InfA﹣09H1(InfA﹣09H1)和季节性流感病毒(InfA﹣H3N2)、副流感病毒(HPIV)、人偏肺病毒(HMPV)、乙型流感病毒(InfB)、肺炎支原体(Mp)、肺炎衣原体(CP)、冠状病毒(HCOV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV).结果多重PCR﹣毛细管电泳有效检测率为95.71%;呼吸道病原阳性检出率为62.84%,混合感染率9.61%,混合感染主要为InfA和HRSV;阳性检出率前3位分别是InfA、HRSV、Mp.不同年龄组检出的病原不同,HRSV阳性检出率0~3岁组明显增高;不同季节检出病原不同,呼吸道病毒感染高发季节为12月至次年3月.2017年1月至3月流感流行季以InfA﹣09H1为主;2017年11月、12月流感流行季节以InfA﹣H3N2为主;2017年末2018年初长春地区大范围的流感爆发以InfB为主.HRSV均检出自11月至次年3月份长春地区最寒冷季节.不同感染检出病原不同,HRSV是肺炎患儿最主要的病原,InfA﹣03H2、HPIV是急性支气管炎患儿的主要病原,HRV、InfA是上呼吸道感染患儿的主要病原.结论基于毛细管电泳多重PCR方法检测呼吸道感染病原高效、快速、准确,开发适合临床诊断的试剂,将有广阔的应用前景. 展开更多
关键词 毛细管电泳 呼吸道感染 呼吸道病原 多重PCR
土鸡源ALV-K HB2018003株的分离鉴定
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作者 陈雪阳 梁雄燕 +2 位作者 方春 顾玉芳 杨玉莹 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第20期73-75,176共4页
为确认湖北某土鸡养殖场鸡只消瘦并伴有个别死亡的现象是否由禽白血病所引起,试验采用禽白血病群特异性抗原P27 ELISA和特异性针对禽白血病病毒(ALV)-A/J/K的多重PCR(Multi-PCR)的方法对送检的20只病鸡进行检测,对阳性样品进行病毒分离... 为确认湖北某土鸡养殖场鸡只消瘦并伴有个别死亡的现象是否由禽白血病所引起,试验采用禽白血病群特异性抗原P27 ELISA和特异性针对禽白血病病毒(ALV)-A/J/K的多重PCR(Multi-PCR)的方法对送检的20只病鸡进行检测,对阳性样品进行病毒分离。结果表明:送检的20只病鸡中有11只为P27抗原阳性,阳性率为55%,将群特异性抗原P27和PCR检测均为阳性的病鸡血液接种DF-1细胞,成功分离到一株ALV-K,命名为HB2018003。说明该湖北土鸡养殖场鸡只感染ALV-K。 展开更多
关键词 土鸡 ALV-K 病毒分离 鉴定 多重PCR
福氏志贺氏菌QRDR基因gyrA,parC及毒力基因ipaH的多重PCR检测 预览
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作者 王倩 徐新明 +5 位作者 胡蕊 谢常宝 王尹 王鑫 顾兵 陈莹 《临床与病理杂志》 2019年第1期22-26,共5页
目的:建立快速检测福氏志贺菌致病性、耐药性的多重PCR方法。方法:根据福氏志贺菌耐药性基因gyrA,parC及毒力致病性基因ipaH,分别设计了3对引物,其PCR扩增产物分别为648,248和423 bp,并进行单基因PCR和单管多重PCR扩增特异性和Tm值的优... 目的:建立快速检测福氏志贺菌致病性、耐药性的多重PCR方法。方法:根据福氏志贺菌耐药性基因gyrA,parC及毒力致病性基因ipaH,分别设计了3对引物,其PCR扩增产物分别为648,248和423 bp,并进行单基因PCR和单管多重PCR扩增特异性和Tm值的优化。结果:该方法可同时检测福氏志贺菌gyrA,parC及ipaH三种标志性靶基因,其最优退火温度为57.5 ℃。结论:本方法操作简单,检测周期短,能够实现对福氏志贺菌样本的喹诺酮耐药决定区基因、毒力基因的并行快速检测。 展开更多
关键词 多重PCR 福氏志贺菌 耐药基因 致病基因
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牛源荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其种特异性基因的序列分析
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作者 阚威 王谢忠 +6 位作者 李兆才 蔡金山 王文勇 马艳萍 韩蓉 周继章 王云平 《中兽医医药杂志》 2019年第4期18-22,共5页
从病死牛组织中分离到4株致病菌,编号分别为P1、P2、P3、P4。经菌落形态学观察、培养特性、生化反应和小鼠毒力试验,初步鉴定为多杀性巴氏杆菌。参考多杀性巴氏杆菌16S rRNA和种特异性kmt1基因以及荚膜血清型基因A(capA)、B(capB)、D(ca... 从病死牛组织中分离到4株致病菌,编号分别为P1、P2、P3、P4。经菌落形态学观察、培养特性、生化反应和小鼠毒力试验,初步鉴定为多杀性巴氏杆菌。参考多杀性巴氏杆菌16S rRNA和种特异性kmt1基因以及荚膜血清型基因A(capA)、B(capB)、D(capD)、E(capE)和F(capF)合成引物,利用多重PCR扩增16S rRNA、kmt1和荚膜血清型基因,对PCR产物测序并进行同源性分析。结果显示,P1~P4都扩增出了16S rRNA、kmt1和荚膜血清型A型基因的特异性目的条带;P1~P4的16S rRNA、kmt1、A型基因序列与Genbank数据库中的多杀性巴氏杆菌相应序列具有高度同源性(>99.0%);P2、P3、P4间的16S rRNA基因同源性较高(>99.0%),而P1与其它3株(P2~P4)同源性较低,P1~P4间的kmt1基因、荚膜血清型A型的同源性较高(>99.0%)。说明本次分的4株病原菌P1~P4均为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 16S RRNA kmt1 荚膜 A型 多重PCR
基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪病毒检测方法的建立与初步应用 预览
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作者 邬旭龙 肖璐 +5 位作者 林华 杨泽晓 姚学萍 王印 张鹏飞 姜睿姣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期824-829,共6页
为建立同时检测7种常见猪病毒的毛细管凝胶电泳方法,本研究针对猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及非洲猪瘟病毒保守基因,设计7对特异引物,并在引物的5’端加入一段非同... 为建立同时检测7种常见猪病毒的毛细管凝胶电泳方法,本研究针对猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及非洲猪瘟病毒保守基因,设计7对特异引物,并在引物的5’端加入一段非同源性标签序列,再设计一对可识别标签序列的通用引物。经反应条件优化,建立了一种基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪常见病毒多重PCR检测方法。该方法与O型猪口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等均无交叉反应,特异性强;所建立方法对7种病毒质粒标准品的检测下限分别为4.56×10^3拷贝/μL、6.35×10^3拷贝/μL、1.98×10^3拷贝/μL、1.32×10^4拷贝/μL、3.21×10^3拷贝/μL、4.51×10^3拷贝/μL、3.37×10^3拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示各靶条带数值间的变异系数均小于1%,该方法稳定,重复性高。该方法对65份临床样本检测结果与国标或行标单一PCR检测方法相比,二者对单一病原和混合病原检测的一致性分别为94.3%(33/35)、77.7%(14/18)。本研究建立的方法为毛细管凝胶电泳技术在动物疾病病原检测中的应用提供一定的参考。 展开更多
关键词 多重PCR QIAxcel毛细管凝胶电泳(QIAxcel CGE) 猪伪狂犬病病毒 猪乙型脑炎病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪细小病毒 非洲猪瘟病毒
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7种鼠传病原体多重PCR检测方法的建立与应用
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作者 康央 宋秀平 +2 位作者 张燕君 刘起勇 栗冬梅 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2019年第5期487-493,共7页
目的应用QIAxcel毛细管电泳系统建立一种能够同时检测7种鼠传病原体的多重PCR检测方法。方法应用微生物数据分析云平台(https://analysis.mypathogen.org/)中'special marker gene'工作流,筛选恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体... 目的应用QIAxcel毛细管电泳系统建立一种能够同时检测7种鼠传病原体的多重PCR检测方法。方法应用微生物数据分析云平台(https://analysis.mypathogen.org/)中'special marker gene'工作流,筛选恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体、莫氏立克次体、土拉弗朗西斯菌、贝氏柯克斯体、问号钩端螺旋体和巴尔通体特异基因,据此设计引物。根据温度转换PCR原理构建特异性嵌合引物,建立多重PCR反应体系,应用QIAxcel毛细管电泳系统对扩增产物进行检测,评价该体系灵敏度、特异性和可重复性。通过对模拟样品和野外样品进行检测,评价该方法对样品的检测能力。结果特异性检测显示,每种病原体扩增均只出现单一目的条带,无交叉反应;多引物单模板灵敏度检测限为11~76拷贝/μl,多引物多模板灵敏度检测限为20~200拷贝/μl。经样品检测显示,多重PCR法检测能力与单重实时荧光定量PCR法相当,优于普通单重PCR法。结论运用QIAxcel毛细管电泳系统成功建立鼠传病原体多重PCR检测方法,可同时高效、快速检出7种病原体,为相关鼠传疾病的诊断、监测和流行病学调查提供有效手段。 展开更多
关键词 鼠传病原体 多重PCR 毛细管电泳 温度转换PCR 人兽共患病
液相芯片技术在沙门菌抗原缺失血清型鉴定中的应用 预览
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作者 毛旭建 唐宏兵 +4 位作者 屠博文 赵莹 钱红 黎俊宏 杜强 《江苏预防医学》 CAS 2019年第3期337-339,共3页
目的探讨液相芯片技术在检测、鉴定抗原缺失的沙门菌中的应用。方法依据国标GB 4789.4-2016和盲样考核手册,对3份考核盲样进行增菌分离培养和生化鉴定,分别采用血清凝集和多重PCR液相芯片技术进行血清型分型,比较其优缺点。结果3份考核... 目的探讨液相芯片技术在检测、鉴定抗原缺失的沙门菌中的应用。方法依据国标GB 4789.4-2016和盲样考核手册,对3份考核盲样进行增菌分离培养和生化鉴定,分别采用血清凝集和多重PCR液相芯片技术进行血清型分型,比较其优缺点。结果3份考核样经分离、纯化,以血清凝集法和多重PCR液相芯片技术进行分型分析,鉴定结果一致,2份样品为阿贡纳沙门菌和婴儿沙门菌,1份样品为未检出。2017S-10(5)-1 H相中第二相未观察到凝集现象,2017S-10(5)-3第一相观察不到凝集现象,分别经3次、2次诱导后才获得鉴定结果,分别耗时3d、2d,平均成本为1 000元/样本;液相芯片技术分型耗时4h,平均成本为500元/样本。结论利用液相芯片技术能够快速、准确鉴定抗原缺失血清型沙门菌,可在有条件的机构推广。 展开更多
关键词 沙门菌 细菌鉴定 血清型分型 血清凝集法 多重PCR 液相芯片
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水稻粒宽基因GW5和GW8功能标记的开发与多重PCR检测
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作者 刘李鑫哲 何宇涵 +2 位作者 炎会敏 李俊周 赵全志 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期4280-4288,共9页
水稻粒宽是衡量粒型、影响产量和品质的重要性状。本研究基于功能标记的开发,设计了水稻粒宽主效基因GW5和GW8的多重PCR检测体系,利用该体系对58份水稻新品系和品种进行鉴定。结果表明,GW5和GW8的多重PCR体系稳定、高效、重复性好。多重... 水稻粒宽是衡量粒型、影响产量和品质的重要性状。本研究基于功能标记的开发,设计了水稻粒宽主效基因GW5和GW8的多重PCR检测体系,利用该体系对58份水稻新品系和品种进行鉴定。结果表明,GW5和GW8的多重PCR体系稳定、高效、重复性好。多重PCR检测发现粳稻品种津粳优2186和象牙香占等7个籼稻品种为GW5和GW8双插入型,平均粒宽2.32 mm;乐播1号和盐稻15198为GW8插入型,平均粒宽3.16 mm;其余48个品种为两基因缺失型,平均粒宽3.27 mm。研究结果为水稻粒型改良提供材料资源和分子标记检测技术手段。 展开更多
关键词 水稻 粒宽 GW5 GW8 多重PCR
多重PCR鉴定APP/PS1双转基因小鼠的基因型 预览
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作者 王玉梅 褚光辉 付玉 《医药前沿》 2019年第15期234-235,共2页
目的:实现APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠的繁殖并采用多对引物同时进行的多重PCR对子代小鼠进行基因型鉴定.方法:将阳性转基因雄鼠与野生型雌鼠一对一进行交配,利用多引物多重PCR鉴定子代小鼠的基因型.结果:在合适的PCR条件下三... 目的:实现APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠的繁殖并采用多对引物同时进行的多重PCR对子代小鼠进行基因型鉴定.方法:将阳性转基因雄鼠与野生型雌鼠一对一进行交配,利用多引物多重PCR鉴定子代小鼠的基因型.结果:在合适的PCR条件下三引物体系可以准确有效鉴定出子代小鼠的基因型.结论:正确饲养繁殖及利用多引物同时进行的多重PCR对子代小鼠进行基因鉴定可以快速有效获得APP/PS1双转基因小鼠,为后续研究提供有效的AD动物模型. 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 APP/PS1双转基因小鼠 多重PCR 基因型鉴定
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CSFV、PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及其应用
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作者 顾文源 范京惠 +3 位作者 邸晶美 罗尚星 刘宝京 左玉柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期193-197,共5页
由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引... 由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引物,并对反应中的影响因素进行优化,建立了同时检测CSFV、PRV和PRRSV的多重PCR方法。该方法扩增的基因片段大小分别为570(CSFV),232 (PRRSV)和173bp(PRV)。敏感性和特异性试验结果显示,该方法对3种病毒的核酸最低检出量分别为23.88(CSFV),13.10(PRRSV)和14.60pg(PRV),对大肠杆菌(Ec.oli)、沙门菌(Salmonella)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。对2015年5月至2016年1月收集的168份临床样本检测结果显示,CSFV阳性率为24.4%,PRRSV阳性率为21.4%,提示河北省该段时间内引起猪繁殖障碍性疫病的主要病原为CSFV和PRRSV。经多重PCR检测为PRRSV、PRV或CSFV阳性的临床样本,再次使用商品化的试剂盒进行检测,符合率为100.0%。这些结果表明,本试验建立的多重PCR方法省时、高效,可用于PRRSV、PRV和CSFV感染的临床诊断。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 伪狂犬病病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重PCR
乌鲁木齐地区少数民族无偿献血者Yt^b、Kp^c、K稀有血型抗原筛选
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作者 乔艳辉 梁静 《中国输血杂志》 CAS 2019年第9期859-862,共4页
目的了解乌鲁木齐地区少数民族献血者Yt和Kell血型系统稀有抗原的分布情况。方法采用2套多重PCR体系,以每5份DNA标本混合检测方式,对1 020份无血缘关系健康少数民族献血者的血液DNA标本进行Yt^b、Kp^c和K稀有血型抗原基因分型。通过单一... 目的了解乌鲁木齐地区少数民族献血者Yt和Kell血型系统稀有抗原的分布情况。方法采用2套多重PCR体系,以每5份DNA标本混合检测方式,对1 020份无血缘关系健康少数民族献血者的血液DNA标本进行Yt^b、Kp^c和K稀有血型抗原基因分型。通过单一PCR-SSP方法,分别检测多重PCR中含有Yt^b、Kp^c和K阳性标本的高频等位基因Yt^a、Kp^b或k。结果在1 020例少数民族献血者中,检出90例Yt^a/Yt^b,4例Yt^b/Yt^b,未检出Kp^c阳性个体,检出24例K阳性标本均为杂合子K/k,Yt^b、K稀有血型抗原基因频率分别为4.8%和1.18%。结论通过筛选获得的稀有血型数据,为本地稀有血型库的建设、临床稀有血型患者输注配合性血液提供了重要参考资料。 展开更多
关键词 多重PCR PCR-SSP 稀有血型 基因频率
多重PCR检测耐除草剂转基因作物 预览
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作者 邢珍娟 董立明 +4 位作者 刘娜 夏蔚 李葱葱 谢彦博 李飞武 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期255-261,共7页
为建立耐除草剂转基因作物的高通量检测方法,本试验以目前生产上广泛应用的5种除草剂抗性基因dmo、pat、CP4EPSPS、bar和aad1为靶标进行多重PCR(MPCR)研究。通过引物适用性测试、反应体系中的不同引物浓度和反应程序中的退火温度测试、... 为建立耐除草剂转基因作物的高通量检测方法,本试验以目前生产上广泛应用的5种除草剂抗性基因dmo、pat、CP4EPSPS、bar和aad1为靶标进行多重PCR(MPCR)研究。通过引物适用性测试、反应体系中的不同引物浓度和反应程序中的退火温度测试、灵敏度和特异性验证等,建立了能同时检测5种除草剂抗性基因的MPCR检测方法。结果表明,当dmo、pat、CP4EPSPS、bar、aad1基因的检测引物终浓度分别为0.2、0.2、0.3、0.4、0.2μmol·L^-1,退火温度为63℃时5种靶标扩增效果较好,且特异性条带清晰且均一。此外,MPCR检测方法具有较好的特异性,对每种靶标的检测灵敏度均可达到0.1%。适用性测试结果显示,MPCR检测方法可对含有5种除草剂抗性基因的多种转基因作物的单个品系或多个品系混合物进行筛选检测。无假阳性和假阴性结果表明,MPCR检测方法对实际样品具有很好的适用性。本试验结果为筛选高效耐除草剂转基因作物检测技术提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 转基因作物 除草剂抗性基因 多重PCR 筛选检测
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7种猪场常见高致死病原GeXP检测方法的建立 预览
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作者 王秋实 李江凌 +1 位作者 赵素君 刘锐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1283-1289,共7页
本研究旨在建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、坏死梭杆菌(Fn)和副猪嗜血杆菌(Hps)7种猪场常见高致死性流行病原的多重PCR检测方法。利用7种病... 本研究旨在建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、坏死梭杆菌(Fn)和副猪嗜血杆菌(Hps)7种猪场常见高致死性流行病原的多重PCR检测方法。利用7种病原体的保守序列设计7对特异性引物,同时合成了Cy-5标记的通用引物。将通用引物分别连接到特异性引物的5′端形成7对特异性嵌合引物。优化反应条件,分别使用7组嵌合引物和通用引物混合,扩增7种病原的混合cDNA/DNA,验证其单重PCR的特异性。利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,混合7种嵌合引物和通用引物,扩增单一病原的cDNA/DNA,验证其多重PCR特异性;将其他常见猪病病原的基因组作为干扰的阳性标本,利用7对混合嵌合引物和通用引物进行多重PCR分析,扩增加入了阳性标本的混合模板,验证其多重PCR的抗干扰能力。利用重组质粒和体外转录的RNA进行梯度稀释,确定GeXP多重检测体系的灵敏度。结果表明,7种不同引物分别进行GeXP单重及多重检测,均能检测出特异性目的片段的信号,无明显的干扰片段信号出现;GeXP多重检测抗干扰试验结果显示,在混入3种干扰病原模板后,依然可同时特异性检测出7种病原;GeXP多重检测灵敏度分析显示,在10~3拷贝/μL浓度条件下能检测到7种不同基因的特异性结果。本研究建立的同时检测7种猪场常见高致死性流行病原的GeXP检测方法具有高通量、高特异性和高灵敏度的特点,为快速诊断猪流行性疾病的交叉感染和混合感染提供了新型的检测方法。 展开更多
关键词 高致死疾病 流行病原 GeXP 特异性嵌合引物 多重PCR
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柑橘4种病毒多重PCR检测技术的建立及应用
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作者 黄爱军 王莹 +2 位作者 丁敏 卢占军 易龙 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1616-1622,共7页
柑橘衰退病毒(CTV)、柑橘碎叶病毒(CTLV)、柑橘黄化脉明病毒(CYVCV)和柑橘叶斑驳病毒(CLBV)是影响柑橘生产的重要病毒性病害,建立快速、准确的检测方法是防控该病害的基础。本研究通过筛选针对4种病毒基因组保守区域设计的特异性引物,... 柑橘衰退病毒(CTV)、柑橘碎叶病毒(CTLV)、柑橘黄化脉明病毒(CYVCV)和柑橘叶斑驳病毒(CLBV)是影响柑橘生产的重要病毒性病害,建立快速、准确的检测方法是防控该病害的基础。本研究通过筛选针对4种病毒基因组保守区域设计的特异性引物,优化影响多重RT-PCR扩增的引物浓度、退火温度,建立了可同时扩增4种病毒的多重RT-PCR检测体系。该检测体系扩增的特异片段大小分别是CTLV 889 bp、CYVCV 612 bp、CTV 462 bp和CLBV 294 bp,扩增产物清晰,特异,检测灵敏度较普通单重RT-PCR灵敏度低约10倍。采用多重RT-PCR和单重RT-PCR对收集到的59份田间样品分别进行检测,结果显示2种方法检测结果一致,4种病毒的检出率在11.9%~54.2%之间。建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、灵敏地检测单一或复合侵染的4种柑橘病毒。 展开更多
关键词 柑橘 柑橘衰退病毒 柑橘碎叶病毒 柑橘黄化脉明病毒 柑橘叶斑驳病毒 多重PCR
多重PCR法检测造血干细胞移植患者多种疱疹病毒感染
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作者 姬玉涵 朱子玲 +9 位作者 杨露露 谢伊瑜 陈佳 刘红 马骁 刘跃均 何军 韩悦 吴德沛 吴小津 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期125-131,共7页
目的采用多重PCR方法分析造血干细胞移植(HSCT)患者多种疱疹病毒的感染状况,并探讨HSCT患者多种疱疹病毒感染与临床特征的相关性及其对移植并发症和预后的影响。方法以苏州大学附属第一医院血液科2017年2月至2017年8月行HSCT的90例患者... 目的采用多重PCR方法分析造血干细胞移植(HSCT)患者多种疱疹病毒的感染状况,并探讨HSCT患者多种疱疹病毒感染与临床特征的相关性及其对移植并发症和预后的影响。方法以苏州大学附属第一医院血液科2017年2月至2017年8月行HSCT的90例患者为研究对象,收集预处理至移植后90 d内不同时间点的外周血标本共734份,Lab-Aid824核酸提取Mini试剂抽提DNA,应用多重PCR方法同时扩增8种人类疱疹病毒,分析多种疱疹病毒感染发生率及其与临床特征的相关性及对移植后并发症和预后的影响。结果至随访终点,中位随访时间为192(35~308)d。移植前疱疹病毒感染发生率为35.6%(32/90),其中1种疱疹病毒感染发生率为12.2%(11/90),多种病毒感染的发生率为23.3%(21/90)。移植后疱疹病毒感染发生率为77.8%(70/90),其中1种疱疹病毒感染发生率为20.0%(18/90),多种疱疹病毒感染的发生率为57.8%(52/90)。在多种疱疹病毒感染的患者中,2种病毒感染30例(57.7%),3种疱疹病毒感染18例(34.6%),不同时间点样本检测的4种疱疹病毒感染4例(7.7%)。移植后多种疱疹病毒感染中,HHV-6和HHV-7感染存在相关性(OR=13.880,Q=0.026),EBV和HHV-7感染也存在相关性(OR=0.093,Q=0.044)。25例患者移植后出现疱疹病毒感染相关临床表现,主要为出血性膀胱炎、间质性肺炎、肠炎、病毒性脑炎和不明原因发热。移植前HHV-1感染与年龄、HHV-2感染与发病时间、CMV感染与原发病为淋巴瘤具有一定的相关性。移植后EBV感染与HLA不全相合、供受者ABO血型不一致及Ⅱ~Ⅳ度急性GVHD呈正相关;多种疱疹病毒感染与HLA不全相合、非血缘供者及Ⅱ~Ⅳ度急性GVHD呈正相关。结论HSCT前后存在多种疱疹病毒感染,HLA不全相合、非血缘供者和Ⅱ~Ⅳ度急性GVHD与移植后多种疱疹病毒感染存在一定的相关性。 展开更多
关键词 多重PCR 造血干细胞移植 多种疱疹病毒
B族链球菌快速筛查及耐药性检测多重PCR体系构建 预览
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作者 祝丽晶 潘艳 +1 位作者 陈小颖 侯盼飞 《中国实验诊断学》 2019年第11期1900-1902,共3页
目的建立B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)鉴定及克林霉素、红霉素耐药性检测的多重PCR反应体系,为快速筛查和临床治疗提供依据。方法以cfb基因、ermB基因和linB基因为靶点设计引物,构建B族链球菌快速筛查和克林霉素、红霉素耐药... 目的建立B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)鉴定及克林霉素、红霉素耐药性检测的多重PCR反应体系,为快速筛查和临床治疗提供依据。方法以cfb基因、ermB基因和linB基因为靶点设计引物,构建B族链球菌快速筛查和克林霉素、红霉素耐药检测的多重PCR反应体系,并对反应条件进行优化。结果成功构建GBS筛查和药敏的PCR反应体系,56℃为最佳退火温度。结论本研究建立的GBS鉴定、耐药性检测为一体的多重PCR体系,对围产期GBS筛查、临床治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 B群链球菌 耐药基因 多重PCR
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6类致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测体系的建立
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作者 张明明 梁美丹 +2 位作者 黄志深 劳嘉倩 肖剑 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第14期4667-4672,共6页
目的构建食源性致泻大肠埃希氏菌高效、快速、特异性强的检验方法。方法根据6类致泻大肠埃希菌11种毒力基因引物,采用煮沸法制备细菌基因组DNA作为模板构建致泻大肠埃希氏菌单菌多重PCR检测体系;采用试剂盒法制备细菌基因组DNA作为模板... 目的构建食源性致泻大肠埃希氏菌高效、快速、特异性强的检验方法。方法根据6类致泻大肠埃希菌11种毒力基因引物,采用煮沸法制备细菌基因组DNA作为模板构建致泻大肠埃希氏菌单菌多重PCR检测体系;采用试剂盒法制备细菌基因组DNA作为模板构建6类菌十重PCR检测体系,对2种检测体系进行优化并对其进行特异性、重复性验证。结果构建了6类致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测体系,包括单菌多重PCR、6类菌十重PCR检测体系。仅6类致泻大肠埃希氏菌阳性菌株有特异性条带产生;不同类型致泻大肠埃希氏菌菌株均检出其特异性阳性条带,该多重PCR检测方法重复性好,稳定性强。结论该方法可高效快速地确定待测样是否为大肠埃希氏菌及其致病型,为食品中致泻大肠埃希氏菌的监控、预警及爆发引起食物中毒后溯源等提供参考。 展开更多
关键词 食品 致泻大肠埃希氏菌 多重PCR 毒力基因
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