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MP-SAT技术在小儿肺炎支原体肺炎中的早期诊断价值 认领
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作者 徐雨霁 朱炳伟 刘永林 《浙江临床医学》 2020年第2期257-258,共2页
目的探讨肺炎支原体(MP)RNA检测对儿童肺炎支原体肺炎的早期诊断价值.方法收集210例小儿肺炎患者咽拭子标本,分别进行RNA实时荧光恒温扩增检测(MP-SAT)与DNA实时荧光定量PCR检测(MP-DNA),并将两者检测结果进行分析比较.结果210例肺炎患... 目的探讨肺炎支原体(MP)RNA检测对儿童肺炎支原体肺炎的早期诊断价值.方法收集210例小儿肺炎患者咽拭子标本,分别进行RNA实时荧光恒温扩增检测(MP-SAT)与DNA实时荧光定量PCR检测(MP-DNA),并将两者检测结果进行分析比较.结果210例肺炎患儿中,MP-SAT检测阳性率为29.0%,MP-DNA阳性率为27.6%,两种方法的符合率为91.9%,差异无统计学意义(P>0.05).SAT技术检测RNA的灵敏度为87.9%,特异度为93.4%.男性患儿阳性率为31.9%,女性阳性率为25.8%,男女间差异无统计学意义(P>0.05).其中MP-SAT检测4~9岁组阳性率最高为39.0%,其次是10~14岁组阳性率为33.3%,0~3岁组阳性率最低为16.7%,不同年龄组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论MP-SAT检测和MP-DNA检测两者检测结果相似,且具有更好的灵敏度和特异性,可以作为一种新的方法用于肺炎支原体的早期检测. 展开更多
关键词 肺炎支原体肺炎 实时荧光恒温扩增检测 实时荧光定量PCR 儿童
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急性心肌梗死病人血浆中微小RNA-21定量检测及其临床意义 认领
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作者 董松武 张静 《安徽医药》 CAS 2020年第2期337-341,共5页
目的探讨微小RNA(miRNA)-21表达在急性心肌梗死(AMI)病人血浆中的表达及其临床意义。方法选取2016年8月至2017年8月亳州市人民医院住院AMI病人40例为心肌梗死组,同期该院体检健康者作为健康对照40例为健康对照组,采用特异的茎环引物逆... 目的探讨微小RNA(miRNA)-21表达在急性心肌梗死(AMI)病人血浆中的表达及其临床意义。方法选取2016年8月至2017年8月亳州市人民医院住院AMI病人40例为心肌梗死组,同期该院体检健康者作为健康对照40例为健康对照组,采用特异的茎环引物逆转录及荧光定量PCR法检测miR-21达到设定荧光阈值时的Ct值,采用2-△△Ct相对定量法分析AMI组血浆中miR-21相对于健康对照组血浆中的表达量;采用受试者工作特征曲线(ROC)评价miRNA-21、肌钙蛋白在AMI病人中的诊断效率;采用Pearson相关性分析AMI病人血浆中miR-21表达和肌钙蛋白的相关性。结果 AMI病人血浆中miR-21相对表达量(2-△△Ct)为2.51(0.68~5.00),心肌梗死组血浆中miR-21表达明显高于健康对照组,与健康对照组血浆miR-21的表达水平差异有统计学意义(P<0.05);在AMI病人miR-21的AUC为0.88,肌钙蛋白的AUC为0.98;在AMI病人血浆中miR-21水平和肌钙蛋白浓度成正相关,相关系数为0.48(P<0.05)。结论 AMI病人血浆中miR-21高表达,可能与心肌梗死发生有关,有望成为心肌梗死诊断的新靶点,为临床诊疗提供新的思路。 展开更多
关键词 心肌梗死 肌钙蛋白 荧光免疫测定 实时聚合酶链反应 微小RNA-21 实时荧光定量PCR
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一例手足裂胎儿的临床特征及病因学分析 认领
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作者 李闯 吕远 +3 位作者 侯瑞 刘彩霞 李岭 李欢 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期462-466,共5页
目的分析一例手足裂胎儿的临床特征以及基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的情况。方法收集孕期胎儿超声以及引产儿X线检查资料并进行总结。应用二代测序(next generation sequencing,NGS)检测引产儿的CNVs。用NGS及荧光... 目的分析一例手足裂胎儿的临床特征以及基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的情况。方法收集孕期胎儿超声以及引产儿X线检查资料并进行总结。应用二代测序(next generation sequencing,NGS)检测引产儿的CNVs。用NGS及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)对其亲代进行分析,用实时荧光定量PCR对胎儿染色体异常区域的基因表达量进行检测。结果超声及X线检查提示胎儿右手及双足均呈"V"形开裂。NGS检测提示胎儿染色体7q21.3区存在约0.36 Mb的缺失。NGS及FISH检测提示其双亲均未携带相同的变异。实时荧光定量PCR结果提示胎儿DYNC1I1基因存在杂合缺失,而SEM1、DLX5、DLX6基因的拷贝数则未见异常。结论胎儿手足裂畸形的致病原因为7q21.3区微缺失,后者为新发变异。 展开更多
关键词 手足裂畸形 二代测序技术 荧光原位杂交 染色体拷贝数变异 实时荧光定量PCR
新型冠状病毒实验室核酸检测方法及实践 认领
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作者 匡慧慧 于梅 +5 位作者 于帅 周汉王 王依函 朱乔 肖征 李慧灵 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期830-833,共4页
目的研究新型冠状病毒(2019-nCoV)实验室核酸检测的原理方法,探讨实时荧光定量PCR方法在新型冠状病毒实验室检测中的价值与实验室注意事项。方法采用实时荧光定量PCR方法检测2020年1月23日-2020年2月2日就诊于解放军总医院海南医院发热... 目的研究新型冠状病毒(2019-nCoV)实验室核酸检测的原理方法,探讨实时荧光定量PCR方法在新型冠状病毒实验室检测中的价值与实验室注意事项。方法采用实时荧光定量PCR方法检测2020年1月23日-2020年2月2日就诊于解放军总医院海南医院发热门诊的患者以及筛查的湖北旅居者的咽拭子,采用实时荧光定量PCR的方法检测新型冠状病毒开放读码框1ab(ORF1ab)、核壳蛋白(N)基因。结果共检测的3824例标本中,阳性病例35例,阳性率0.91%。结论疫情期间对发热门诊患者及湖北旅居者进行2019-nCoV核酸筛查是非常有必要的,实时荧光定量PCR是一种检测2019-nCoV科学可靠的方法,能快速准确地检测待检标本中的2019-nCoV核酸,对监测和控制疫情有重要意义。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 实时荧光定量PCR 核酸 实验室检测
新型冠状病毒核酸检测分析 认领
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作者 李振昊 高小玲 +1 位作者 杨小娟 徐辉 《检验医学与临床》 CAS 2020年第10期1313-1315,共3页
2020年,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在国内和其他国家暴发流行。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法以其高灵敏度与强特异性,被认为是COVID-19的确诊方法。然而,SARS-CoV-2核酸检测对于阳性患者的阳性率仅... 2020年,由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在国内和其他国家暴发流行。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法以其高灵敏度与强特异性,被认为是COVID-19的确诊方法。然而,SARS-CoV-2核酸检测对于阳性患者的阳性率仅有30%~50%,临床较多的疑似病例需多次核酸检测之后才得到阳性结果,使SARS-CoV-2核酸检测阳性作为确诊标准备受质疑。本文结合相关文献及在SARS-CoV-2核酸检测中的工作经验,从病原学、标本采集、核酸提取过程、试剂盒等各个方面对SARS-CoV-2核酸检测方法的影响因素进行深入探讨,对SARS-CoV-2检测出现假阴性或假阳性的原因进行分析与归纳总结,为检测的准确性提供依据,也旨在为基层医院的核酸检测工作提供一定的帮助。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 实时荧光定量PCR 核酸检测
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人巨细胞病毒DNA检测在小儿人巨细胞病毒感染诊断中的应用 认领
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作者 朱艳 周灵玲 +3 位作者 蓝俊伟 刘思宇 黄建胜 赵志钢 《中华全科医学》 2020年第3期460-462,466共4页
目的探讨小儿血液、尿液及其母亲母乳的人巨细胞病毒DNA检测结果在人巨细胞病毒感染的诊断价值。方法选取2017年-2018年期间在浙江大学丽水医院就诊的疑似人巨细胞病毒感染的患儿328例为研究对象。收集患儿血液、尿液和对应母乳标本,进... 目的探讨小儿血液、尿液及其母亲母乳的人巨细胞病毒DNA检测结果在人巨细胞病毒感染的诊断价值。方法选取2017年-2018年期间在浙江大学丽水医院就诊的疑似人巨细胞病毒感染的患儿328例为研究对象。收集患儿血液、尿液和对应母乳标本,进行实时荧光定量PCR,检测人巨细胞病毒DNA载量;再将患儿血清用化学发光法检测HCMV-IgM,比较不同标本不同检测方法的阳性率。针对阳性患儿,对不同临床症状分布构成进行分析。结果 328例患儿检测总阳性率为71.04%,男性患儿和女性患儿阳性率分别为71.02%和69.74%,差异无统计学意义(χ~2=0.065,P=0.799)。血液、尿液和乳汁的人巨细胞病毒阳性率分别为49.09%、70.43%和58.23%,尿液阳性率最高,差异有统计学意义(χ~2=31.147,P<0.001)。新生儿组的乳汁阳性率最高,为72.41%,28 d到1岁之间和1岁以上患儿尿液阳性率最高,各年龄组之间阳性率差异有统计学意义(P<0.05);血人巨细胞病毒DNA和血清HCMV-IgM阳性率检出率分别为49.09%(161/328)和16.16%(53/328),2种方法联合检测的阳性检出率为49.69%,对比单一血DNA检测方法,两者差异无统计学意义(P>0.05)。临床症状小于1岁患儿主要以黄疸,腹泻为主,大于1岁的患儿主要以肝损害和肺炎为主。结论在小儿血液、尿液及其母亲母乳HCMV-DNA的检测中,尿液HCMV-DNA对诊断患儿人巨细胞病毒有更好的临床应用价值。且尿标本留取方便、无创,易为家长和小儿接受,所以采用FQ-PCR方法对小儿尿标本进行检测能起到快速、简洁、灵敏的作用,对提高HCMV感染的诊断率有实际的临床意义,对于小月龄患儿临床应推广尿液HCMV-DNA检测。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 感染 实时荧光定量PCR 化学发光
连翘花器官生长阶段内参基因筛选与评估 认领
7
作者 曹亚萍 王勇飞 +5 位作者 贾孟君 贺嘉欣 张鑫瑞 李政 乔永刚 宋芸 《山西农业科学》 2020年第3期298-303,共6页
为筛选连翘花器官生长阶段稳定表达的内参基因,选取12个(18S、60S、ACT7、EF1α、EF1αH、GAPDH、HIS、LIPL、RP、RPL17、TUB、UBQ)常用内参基因和7个(FS-1、FS-2、FS-3、FS-4、FS-5、FS-6、FS-7)新型基因,采用RT-qPCR技术及Ge Norm、No... 为筛选连翘花器官生长阶段稳定表达的内参基因,选取12个(18S、60S、ACT7、EF1α、EF1αH、GAPDH、HIS、LIPL、RP、RPL17、TUB、UBQ)常用内参基因和7个(FS-1、FS-2、FS-3、FS-4、FS-5、FS-6、FS-7)新型基因,采用RT-qPCR技术及Ge Norm、Norm Finder软件分析这19个候选内参基因在长花柱和短花柱连翘花现蕾期、露冠期、初花期、盛花期、末花期的表达稳定性,并利用Excel进行综合评估。结果表明,单从Ct值推测60S变化范围小,且表达量较高,适合作为内参基因;Ge Norm分析得出,ACT7+HIS组合为最适内参基因;Norm Finder分析表明,FS-4基因表达最稳定。综合评价结果显示,可选用FS-4与HIS作为连翘花器官生长阶段的内参基因。 展开更多
关键词 连翘 花器官生长 实时荧光定量PCR 内参基因
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牛轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 认领
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作者 贾伟强 曹禹 +8 位作者 周玉龙 孟野 胡林杰 翟海瑞 范增磊 盛守志 于力 常继涛 范春玲 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期1-5,共5页
旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件,制备阳性标准品,建立标准曲线,确定重复性、敏感性和特异性,... 旨在建立一种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牛轮状病毒(BRV)的方法,并采用针对BRV vp6基因序列保守区设计的引物,使用RT-qPCR方法进行目的基因扩增,优化反应条件,制备阳性标准品,建立标准曲线,确定重复性、敏感性和特异性,与常规PCR方法比较。结果显示,建立的RT-qPCR方法最佳引物浓度为5μmol/L,退火温度为58℃,40个循环,熔解温度为77℃±0.5℃,最小检出量8.13copies/μL。两种方法检出率分别为30.4%和19.6%,RT-qPCR具有较高敏感性。建立的RT-qPCR可为BRV感染早期诊断、分子流行病学调查及定量检测分析等提供技术保障。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR
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甘蔗热带种金属硫蛋白家族基因的克隆及响应重金属胁迫的表达分析 认领
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作者 高世武 傅志伟 +3 位作者 陈云 林兆里 许莉萍 郭晋隆 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期166-178,共13页
金属硫蛋白是一类富含巯基的低分子量蛋白,在植物的重金属解毒及细胞氧化还原调控等方面起重要的作用。本研究以甘蔗热带种Badila组培苗为材料,分别测定了其在CdCl2、ZnSO4和CuCl2水溶液培养条件下地上部和地下部的重金属含量,结果显示... 金属硫蛋白是一类富含巯基的低分子量蛋白,在植物的重金属解毒及细胞氧化还原调控等方面起重要的作用。本研究以甘蔗热带种Badila组培苗为材料,分别测定了其在CdCl2、ZnSO4和CuCl2水溶液培养条件下地上部和地下部的重金属含量,结果显示其对上述3种重金属有较强的耐受与富集能力。继而克隆了ScMT1(登录号为KJ504373)、ScMT2-1-5(登录号为MH191346)和ScMT3(登录号为KJ5043704)3个金属硫蛋白家族基因,它们分别属于植物MT亚家族中的MT1、MT2和MT3型基因。ScMT1含有1个内含子和2个外显子,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长228 bp,编码75个氨基酸;ScMT2-1-5含有2个内含子和3个外显子,ORF长246 bp,编码81个氨基酸;ScMT3含有1个内含子和2个外显子,ORF长198 bp,编码65个氨基酸。RT-qPCR显示,Cd2+胁迫下,在甘蔗地上部和地下部,ScMT2-1-5均连续显著上调表达,而ScMT1的上调应答出现延迟。ScMT3在地上部的上调应答出现延迟,在地下部呈“扬-抑”趋势,提示甘蔗响应Cd^2+胁迫过程中ScMT2-1-5起更积极的作用,ScMT1参与胁迫后期的分子响应,而ScMT3不起主导作用。Cu^2+胁迫下,地上部ScMT1连续显著上调表达,ScMT2-1-5和ScMT3呈总体上调的表达趋势;地下部,ScMT1和ScMT2-1-5的上调表答均出现延迟,仅在胁迫后期显著上调表达,而ScMT3仅在胁迫前期显著上调表达。该结果提示了ScMT1、ScMT2-1-5和ScMT3在Cu2+胁迫响应过程中的协作关系,三者共同参与了地上部的胁迫响应,其中ScMT1起更积极的作用;此外三者还先后参与了地下部对Cu^2+胁迫的分子响应。Zn^2+胁迫下,ScMT1和ScMT3分别仅在地上部和地下部显著上调表达;ScMT2-1-5在地上部和地下部均呈“扬-抑”的应答趋势;提示了在甘蔗响应Cd^2+胁迫应答过程中ScMT1和ScMT3分别在地上部和地下部起主要作用,ScMT2-1-5参与了胁迫前期的分子响应。ScMT1、ScMT2-1-5和ScMT3在甘蔗不同组织中及在重金属 展开更多
关键词 甘蔗 金属硫蛋白 重金属 实时荧光定量PCR
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不同消毒剂对HBV核酸和表面抗原的作用效果研究 认领
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作者 邱丰 周为民 +4 位作者 尹文娇 周文亭 曹经瑗 毕胜利 武桂珍 《医学研究杂志》 2020年第5期69-72,共4页
目的评价实验室常用的消毒剂对乙型肝炎病毒(HBV)的核酸和表面抗原的作用效果。方法采用悬液法将不同消毒剂与HBV混合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)评价消毒剂对乙肝表面抗原(HBsAg)的作用效果,通过实时荧光定量PCR评价消毒剂对HBV DNA... 目的评价实验室常用的消毒剂对乙型肝炎病毒(HBV)的核酸和表面抗原的作用效果。方法采用悬液法将不同消毒剂与HBV混合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)评价消毒剂对乙肝表面抗原(HBsAg)的作用效果,通过实时荧光定量PCR评价消毒剂对HBV DNA的作用效果。结果对于高浓度的HBV核酸和HBsAg,1%卫可(Virkon)处理1h可使HBV DNA和HBsAg变为阴性,含氯消毒剂和75%乙醇仅对低浓度HBV血清有效,而过氧化氢对所有浓度的HBV核酸和HBsAg效果都不明显。结论当实验室发生HBV阳性血清溅洒等生物安全事故时,采用20~40倍体积1%卫可处理1h较为适宜。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 消毒剂 酶联免疫吸附试验 实时荧光定量PCR
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越南参变种实时荧光定量PCR内参基因的筛选和验证 认领
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作者 朱灵英 王一博 +4 位作者 王宝婕 周青青 曾礼芳 徐福荣 马晓惠 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期327-335,共9页
实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术被广泛用于基因表达分析,筛选适宜的内参基因是运用这项技术的前提。本研究采用q RT-PCR筛选适用于越南参变种(Panax vietnamensis var.fuscidiscus)不同组织器官(根、根茎、茎和叶)的内参基因。基于越南... 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术被广泛用于基因表达分析,筛选适宜的内参基因是运用这项技术的前提。本研究采用q RT-PCR筛选适用于越南参变种(Panax vietnamensis var.fuscidiscus)不同组织器官(根、根茎、茎和叶)的内参基因。基于越南参变种转录组数据,筛选出13个候选基因(ACT1、ACT2、bTUB1、bTUB2、aTUB、GADPH、UBQ、elF、EF-1a、F-box、CYP、QCR、TCTP)。利用qRT-PCR技术检测候选内参基因在越南参变种四个组织部位中的表达情况,并用geNorm、NormFinder和BestKeeper综合分析候选基因的表达稳定性,发现ACT1和aTUB在越南参变种不同组织部位中表达稳定性最好。用内参基因ACT1和aTUB分析PvfDS在越南参变种不同组织部位的表达,发现二者表达规律一致。结果表明,越南参变种不同组织部位适宜的内参基因为ACT1和aTUB。 展开更多
关键词 越南参变种 内参基因 实时荧光定量PCR
靶向MSTN基因shRNA表达载体的构建与鉴定 认领
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作者 王丽俊 钮利喜 《医学研究杂志》 2020年第5期165-169,共5页
目的旨在构建靶向MSTN基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并鉴定其在小鼠体内的抑制效果。方法根据MSTN基因的mRNA序列(NM_010834.3)设计siRNA,并挑选出3条可能具有良好干扰效果的siRNA,设计合成shRNA,构建pSIREN-MSTN-shRNA表达载体... 目的旨在构建靶向MSTN基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并鉴定其在小鼠体内的抑制效果。方法根据MSTN基因的mRNA序列(NM_010834.3)设计siRNA,并挑选出3条可能具有良好干扰效果的siRNA,设计合成shRNA,构建pSIREN-MSTN-shRNA表达载体。通过肌内注射法将载体递送至小鼠体内,利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测干扰后小鼠肌肉组织中MSTN的mRNA表达量和蛋白质表达水平。结果测序鉴定表明pSIREN-MSTN-shRNA表达载体构建成功,3个重组质粒均能够明显降低肌肉组织中MSTN的mRNA和蛋白质水平,其中pSIREN-M819表达载体干扰效果最好,与对照组比较,MSTN的mRNA表达量降低了71%,蛋白水平也明显降低。结论成功构建了pSIREN-MSTN-shRNA表达载体,并在小鼠体内能够有效抑制MSTN基因的表达。 展开更多
关键词 抑肌素 RNA干扰 实时荧光定量PCR 免疫印迹
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鹅肾型星状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立 认领
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作者 邱思语 徐蓉 +1 位作者 郭远奎 吕英军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期300-306,共7页
本研究旨在建立一种灵敏、快速检测鹅肾型星状病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据鹅肾型星状病毒的ORF1b保守序列,设计出1对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的Ct值与标准质粒在2.42... 本研究旨在建立一种灵敏、快速检测鹅肾型星状病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据鹅肾型星状病毒的ORF1b保守序列,设计出1对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的Ct值与标准质粒在2.42×10^4~2.42×10^9copies/μL范围内呈良好的线性关系;敏感性高,最低检测限为24.2 copies/μL;该方法特异性强,对禽流感H9N2、鹅副黏病毒、鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒均无交叉反应;重复性好,批内和批间变异系数均小于2.5%。运用该方法对动物回归试验中攻毒的雏鹅的各脏器进行检测,结果显示,肾、脾和肝中病毒含量较高,其次是胰腺、肺及肠道,而心和脑中的病毒含量最低。上述结果表明,本研究成功建立了鹅肾型星状病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并根据此方法检测出该病毒对肾、脾及肝具有较强的亲嗜性,为该病原致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅肾型星状病毒 实时荧光定量PCR SYBR GreenⅠ 病毒分布
沉默囊泡分选蛋白(VPS)对辣椒疫霉效应因子Rx LR504功能的影响 认领
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作者 朱彤彤 马艳飞 +6 位作者 江韦霖 杨磊 李念袁 董一帆 辛琪 张修国 孙文秀 《山东农业大学学报:自然科学版》 北大核心 2020年第1期1-5,共5页
辣椒疫霉(Phytophthora capsici)是一种重要的病原卵菌,能产生大量的RxLR效应分子帮助病原菌定殖。前期实验证明RxLR504效应分子能够抑制INF1引发的细胞死亡,并证实囊泡分选蛋白(VPS)与其相互作用。本文借助VIGS tool在线工具设计靶标... 辣椒疫霉(Phytophthora capsici)是一种重要的病原卵菌,能产生大量的RxLR效应分子帮助病原菌定殖。前期实验证明RxLR504效应分子能够抑制INF1引发的细胞死亡,并证实囊泡分选蛋白(VPS)与其相互作用。本文借助VIGS tool在线工具设计靶标基因沉默片段;利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟靶标基因;提取沉默样品叶片组织RNA,构建c DNA文库;利用qRT-PCR检测靶标基因表达水平;在沉默植株叶片上表达RxLR504,24 h后接种INF1,观察病斑症状。结果表明:本氏烟中设计沉默片段长度为300 bp,构建c DNA文库质量较高;荧光定量PCR结果显示,沉默植株中靶标基因表达水平下降86.2%,与对照相比差异性显著;接种实验证明RxLR504在沉默植株与对照植株上均能抑制INF1引发的细胞死亡。RxLR504与VPS互作不影响其抑制INF1引起的细胞坏死,为进一步揭示病原物利用植物靶标基因抑制植物免疫从而促进自身寄生的机制打下基础。 展开更多
关键词 辣椒疫霉 效应因子 实时荧光定量PCR 基因沉默(VIGS)技术
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2018年晋中市手足口病病原学监测结果分析 认领
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作者 石强 李静虹 张忠龙 《临床检验杂志(电子版)》 2020年第1期1-2,共2页
目的分析晋中市2018年手足口病病原学特征,为晋中市手足口病预防控制提供科学依据。方法通过2018年晋中市各县区疾控上送手足口病患者的咽拭子标本进行实验,采用实时荧光定量PCR法进行核酸检测。结果2018年晋中市共采集手足口病例标本39... 目的分析晋中市2018年手足口病病原学特征,为晋中市手足口病预防控制提供科学依据。方法通过2018年晋中市各县区疾控上送手足口病患者的咽拭子标本进行实验,采用实时荧光定量PCR法进行核酸检测。结果2018年晋中市共采集手足口病例标本397份,经核酸检出阳性345份,阳性率为86.9%。其他EV核酸阳性率为7.81%。晋中市手足口病全年均有发病,6月达发病高峰,患者以3岁以下儿童为主,男童多于女童。结论应加强当地儿童手足口病的病原学监测,为手足口病防治提供明确的病原学依据。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒 实时荧光定量PCR
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结直肠癌Visfatin、MMP-14的表达及意义 认领
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作者 荣玮 徐晨 +2 位作者 李雪松 刘婷 于秀文 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期738-741,共4页
目的探讨内脂素(visfatin)、基质金属蛋白酶(MMP)-14在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法以64例结直肠癌标本作为观察组,对应远切端正常肠黏膜组织作为对照组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,检测visfatin mRN... 目的探讨内脂素(visfatin)、基质金属蛋白酶(MMP)-14在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法以64例结直肠癌标本作为观察组,对应远切端正常肠黏膜组织作为对照组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,检测visfatin mRNA与MMP-14 mRNA的表达并进行相关性分析,应用免疫组织化学方法,分析结直肠癌组织中visfatin和MMP-14表达与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移等临床症状的关系。结果两组visfatin mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.01)。两组MMP-14 mRNA相对表达水平差异有统计学意义(P<0.01)。两组visfatin mRNA和MMP-14 mRNA的表达呈显著正相关(r=0.758,P<0.01)。visfatin在观察组和对照组的阳性率分别为67.2%(43/64)、29.7%(19/64),两组间差异有统计学意义(P<0.001)。MMP-14在观察组和对照组的阳性率分别为62.5%(40/64)、17.2%(11/64),两组间差异有统计学意义(P<0.01)。visfatin和MMP-14的表达与患者年龄、性别和肿瘤的部位、大小无相关性,与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。visfatin和MMP-14在结直肠癌组织中的表达呈显著正相关(r=0.637,P<0.01)。结论visfatin与MMP-14在基因水平和蛋白水平均高表达及明显的正相关性说明二者参与结直肠癌的侵袭、转移,visfatin的上调与MMP-14的高表达相互影响。 展开更多
关键词 结直肠癌 内脂素(visfatin) 基质金属蛋白酶(MMP)-14 实时荧光定量PCR
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新型冠状病毒SARS-CoV-2基因检测及其影像学对照 认领
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作者 雷松菁 王刚平 +4 位作者 周刚 宋旭 周志厚 王伟光 李晶晶 《分子诊断与治疗杂志》 2020年第3期270-274,共5页
目的研究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸基因检测及其影像学对照。方法实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2 ORF1a/b和N基因,分析23例SARS-CoV-2核酸阳性患者临床及影像学资料。结果①无症状感染者3例,COVID-19确诊20例,潜伏期2~24天,成人... 目的研究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸基因检测及其影像学对照。方法实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2 ORF1a/b和N基因,分析23例SARS-CoV-2核酸阳性患者临床及影像学资料。结果①无症状感染者3例,COVID-19确诊20例,潜伏期2~24天,成人轻型5例,儿童轻型1例,青年轻型1例,成年普通型13例。②23例SARS-CoV-2基因阳性患者,痰标本的病毒含量和检测效果高于鼻咽拭子标本,N基因粪便比痰和鼻咽拭子阳性持续时间长。③20例COVID-19中,30.0%(6/20)CT扫描未见异常。病毒载量与影像学无正比对应关系。④发病部位以外周带(13/14)和下叶后基底段(11/14)多见,两个或多个肺叶受累(11/14),双侧病变(11/14)。⑤14例CT异常COVID-19中,影像学主要表现为毛玻璃影(10/14)、双肺斑片状阴影(10/14)、晕征(8/14)、细网格征(5/14),以及伴发小叶间隔增厚(5/14)、支气管充气征(5/14)和小血管增粗影(5/14)。结论病毒载量与影像学无正比对应关系,SARS-CoV-2核酸检测联合CT扫描、流行病学史可以提高COVID-19的检出率,不能孤立仅仅依靠核酸PCR检查或CT检查。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 新型冠状病毒病肺炎 实时荧光定量PCR
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基于转录组测序分析西门塔尔牛和安格斯牛脂肪沉积相关基因的差异表达 认领
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作者 赵伟明 吴慧光 +2 位作者 吴江鸿 王国富 高树新 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期693-701,共9页
肌内脂肪(intramuscular fat, IMF)的含量和分布是形成牛大理石花纹肉的物质基础。西门塔尔牛(Bos taurus)和安格斯牛(B. taurus)的脂肪沉积能力不同,安格斯牛IMF含量显著高于西门塔尔牛。本研究采用高通量测序技术筛选背膘脂肪沉积相... 肌内脂肪(intramuscular fat, IMF)的含量和分布是形成牛大理石花纹肉的物质基础。西门塔尔牛(Bos taurus)和安格斯牛(B. taurus)的脂肪沉积能力不同,安格斯牛IMF含量显著高于西门塔尔牛。本研究采用高通量测序技术筛选背膘脂肪沉积相关基因,旨在为西门塔尔牛和安格斯牛脂肪沉积机制研究提供参考依据。以西门塔尔牛和安格斯牛15月龄公牛各3头进行育肥屠宰实验,对屠宰后的胴体进行肉质性状测定。取两个品种牛背膘脂肪组织进行转录组测序和生物信息学分析。结果显示,2个品种牛在粗脂肪、滴水损失、眼肌面积和pH方面差异不显著,西门塔尔牛剪切力显著高于安格斯牛(P<0.01)。转录组数据分析结果表明,2个品种的牛在背膘脂肪组织存在1 296个差异表达基因,主要富集在代谢、生长、发育等55个功能条目和脂质代谢、碳水化合物代谢、能量代谢等44条代谢通路;根据通路和功能分析,选择丙酮酸脱氢酶激酶4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4, PDK4)、核受体第4亚族A组成员1 (nuclear receptor subfamily 4 group A member 1, NR4A1)和同源异型蛋白(prospero related homeobox, PROX1) 3个基因,利用实时荧光定量PCR技术进行基因表达量分析。结果显示,安格斯牛背膘脂肪中PROX1和PDK4的相对表达量分别比西门塔尔牛高47%和14%(P<0.01),NR4A1在西门塔尔牛背膘脂肪中相对表达量比安格斯牛高30%(P<0.05)。本研究获得的差异表达基因可作为肉牛肉质性状遗传育种改良的候选基因,可为深入探讨背膘脂肪生长发育的遗传机理提供基础资料。 展开更多
关键词 转录组 肉质性状 实时荧光定量PCR 候选基因
K亚群禽白血病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 认领
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作者 王瑞明 都玉印 +7 位作者 相英杰 郭龙宗 李玉燕 李阳 李建亮 赵鹏 王一新 崔言顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期524-529,共6页
根据K亚群禽白血病病毒(ALV-K)gp85基因序列设计1对引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ALV-K的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法在1~10^7 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到1copies/μL,是常规PCR... 根据K亚群禽白血病病毒(ALV-K)gp85基因序列设计1对引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ALV-K的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法在1~10^7 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到1copies/μL,是常规PCR方法的100倍。该方法与经典亚群ALV及其他常见禽免疫抑制病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。将ALV-K原型株JS11C1通过卵黄囊接种途径感染SPF鸡,运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法,对感染鸡体内各器官的病毒分布及病毒载量进行了检测。结果显示,在感染鸡的心脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官中均可检测到病毒,其载量无明显差异。结果表明,本试验所建立的实时荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和重复性好的优点,可用于ALV-K的快速、定量检测,该方法同时为ALV-K致病机制的研究提供了良好的技术手段。 展开更多
关键词 K亚群禽白血病病毒(ALV-K) 实时荧光定量PCR 病毒载量
1株禽传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其实时荧光定量PCR检测方法的建立 认领
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作者 金娟 李亚杰 鲍恩东 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第1期115-121,共7页
自禽传染性支气管炎病毒流行较严重地区的患鸡组织病料中分离得到1株疑似毒株,利用鸡胚培养、气管环及动物回归试验、电镜观察、RT-PCR等多种方法及对其S1基因序列进行比较分析,确定该分离毒株为禽传染性支气管炎病毒QX型。同时针对该... 自禽传染性支气管炎病毒流行较严重地区的患鸡组织病料中分离得到1株疑似毒株,利用鸡胚培养、气管环及动物回归试验、电镜观察、RT-PCR等多种方法及对其S1基因序列进行比较分析,确定该分离毒株为禽传染性支气管炎病毒QX型。同时针对该新分离的传染性支气管炎病毒建立了实时荧光定量PCR检测方法。结果显示:针对该分离毒株的S1基因区设计1对引物和TaqMan探针,制备质粒标准品,建立标准曲线,其线性关系为y=-3.385 7x+42.235,R^2=0.999,扩增效率为97.5%,该法能区分常见禽类流行病毒,检测灵敏度可达42.1拷贝数/μL,比普通PCR检测限度高,重复性良好,因而该实时荧光定量PCR检测方法可靠。本试验同时进行了拷贝数与半数鸡胚感染量(EID50)对应关系研究,证明了在控制病毒代次、冻融次数等条件下,建立线性关系为y=0.249 2x+1.341×10^6(以拷贝数为x轴,EID50为y轴),R^2=0.956 4,可实现拷贝数替代EID50。 展开更多
关键词 S1基因 实时荧光定量PCR 传染性支气管炎病毒
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