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与马立克病病毒编码的miR-M31-3p互作的宿主靶基因筛选与鉴定 预览
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作者 张雅 滕蔓 +4 位作者 李会珍 朱志坚 刘豪丽 罗俊 张改平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期441-448,共8页
血清Ⅰ型马立克病病毒(MDV-1)编码26个病毒miRNA,前期研究发现这些miRNA可能在鸡马立克病肿瘤发生中发挥重要调控作用。为研究MDV-1编码的miRNA基因miR-M31-3p在病毒感染及致病过程中的作用机制,本研究利用杂交PCR方法构建宿主cDNA文库... 血清Ⅰ型马立克病病毒(MDV-1)编码26个病毒miRNA,前期研究发现这些miRNA可能在鸡马立克病肿瘤发生中发挥重要调控作用。为研究MDV-1编码的miRNA基因miR-M31-3p在病毒感染及致病过程中的作用机制,本研究利用杂交PCR方法构建宿主cDNA文库,对与miR-M31-3p互作的宿主候选靶基因进行初步筛选,结果获得了49个候选靶基因。通过双荧光素酶报告试验证实miR-M31-3p与鸡GNPAT、TCF12、FIGNL1、CNDP2、MGST1和CD99L2的3'-UTR在体外存在相互作用。进一步通过qRT-PCR分析显示:过表达miR-M31-3p的CEF中,上述6个候选基因mRNA转录水平均显著下调;当MDV感染CEF时,除CD99L2之外的5个候选靶基因的转录水平均显著下调,而在miR-M31-3p基因缺失的MDV株感染的CEF中这5个靶基因均正常转录。上述结果证实CNDP2、GNPAT、TCF12、FIGNL1和MGST1为与miR-M31-3p互作的宿主靶基因。本研究为进一步揭示miR-M31-3p调控MDV感染宿主的致病机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 马立克病病毒 miRNA miR-M31-3p 宿主靶基因 CDNA文库
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马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定 预览
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作者 薛正飞 滕蔓 +5 位作者 李会珍 马圣明 宋利娜 张雅 罗俊 张改平 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期348-359,共12页
马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性... 马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关,这意味着miR-M4-5p可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色。本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定。提取鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA,反转录合成cDNA,用hybrid-PCR扩增候选靶基因片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞后挑选单克隆进行PCR鉴定及测序,通过BLAST比对分析,共获得88个宿主候选靶基因序列。优先选择miRNA结合靶点位于mRNA 3′-UTR且与miR-M4-5p种子序列(2-7nt)完全互补配对的29个候选靶基因,构建报告基因载体进行双荧光素酶报告试验,通过三轮双荧光素酶报告试验最终初步鉴定5个宿主靶基因:PRICKLE1、COLA、BCAT1、ANTXR1和TECPR1,为进一步揭示miR-M4-5p的分子调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 马立克病病毒 hybrid-PCR miR-M4-5p CDNA文库 宿主靶基因 肿瘤发生
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