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骨髓间充质干细胞及其来源的微泡在慢性肾衰竭中的修复机制 预览
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作者 秦军建 邢艳芳 +2 位作者 莫江彬 刘筱萍 侯铁奇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期398-403,408共7页
目的:探讨骨髓间充质干细胞及其来源的微泡制备方法及在慢性肾衰竭中的修复机制,为慢性肾衰竭治疗提供方法。方法:①骨髓间充质干细胞制备。选择2只SD大鼠,取大鼠胫骨、股骨髓,利用密度梯度离心法完成单一核细胞分离,采用贴壁方法完成... 目的:探讨骨髓间充质干细胞及其来源的微泡制备方法及在慢性肾衰竭中的修复机制,为慢性肾衰竭治疗提供方法。方法:①骨髓间充质干细胞制备。选择2只SD大鼠,取大鼠胫骨、股骨髓,利用密度梯度离心法完成单一核细胞分离,采用贴壁方法完成细胞的培养,采用流式细胞仪制备细胞表面特异性抗原,完成细胞的鉴定。②慢性肾衰竭模型制备及处理方法。选择2015年5月~2016年3月医院实验室进行试验的SD大鼠40只,取10只大鼠设为空白对照组,30只大鼠采用肾切除六分之五合并高盐饮食三个月方法建立大鼠慢性肾衰竭模型,随机数字法分为阳性对照组(n=10)、干细胞组(n=10)及微泡干预组(n=10)。阳性对照组建模成功后不采取任何措施处理,干细胞组建模成功后采用移植制备的骨髓间充质干细胞进行治疗,微泡干预组移植骨髓间充质干细胞后采用超声微泡辐照,比较不同组大鼠慢性肾衰竭修复效果。结果:①细胞换液一次细胞纯化呈梭状、纺锤状,以旋涡方式生长,细胞贴壁后生长迅速,细胞传代一次需要3d,经过三代培养后细胞数量相对较多;②流式细胞仪测定结果表明:对照组细胞表面CD29几乎不表达,而MSC细胞表面CD29阳性率为91.54%,符合骨髓间充质细胞表面特征;③Westernblot法结果表明:HGF蛋白在4组相对分子量为82000部位存在特异性条带,而EGF蛋白则在4组相对分子量为5500部位存在特异性条带;④微泡干预组TNF-α水平低于干细胞组与阳性对照组(P<0.05),微泡干预组细胞黏附分子1水平高于干细胞组与阳性对照组(P<0.05);⑤阳性对照组建模后未经任何处理,肾脏损伤明显,存在大量炎性细胞;空白对照组未参与建模,肾脏组织完整,未见肾脏组织损伤,干细胞组修复30d后肾脏损伤缓解,仍存在少许炎性细胞,微泡干预组修复后30d肾脏组织损伤改善,未见炎性细胞。结论:采用全骨髓法能分离 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 慢性肾衰竭 脉冲超声辐照 贴壁方法 密度梯度离心法 流式细胞仪 高盐饮食
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三种常用的密度梯度离心方法富集有核红细胞的比较
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作者 隋玉杰 李凌云 +4 位作者 吴飞 杜珍武 杨麒巍 张桂珍 宋旸 《中国体视学与图像分析》 2018年第3期247-253,共7页
目的探讨富集母血中胎儿有核红细胞的适宜密度梯度离心方法。方法对10例脐血分别用Percoll 1090单密度梯度离法、Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法、Ficoll 1077单密度梯度离心法3种方法进行有核红细胞的分离,然后用适宜的... 目的探讨富集母血中胎儿有核红细胞的适宜密度梯度离心方法。方法对10例脐血分别用Percoll 1090单密度梯度离法、Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法、Ficoll 1077单密度梯度离心法3种方法进行有核红细胞的分离,然后用适宜的密度梯度离心法分离12例10 mL母血中的胎儿有核红细胞。结果 (1)Percoll 1090单密度梯度离法每mL脐血富集(70. 58±5. 67)×10^4个有核红细胞;Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法每mL脐血富集(23. 62±1. 90)×10^4个有核红细胞; Ficoll1077单密度梯度离心法每mL脐血富集(4. 53±0. 26)×10^4个有核红细胞。(2)采用Percoll 1090单密度梯度离法从12例10 mL母血中富集到的平均有核红细胞数为12. 9±5. 4个。结论 Percoll 1090单密度梯度分离法可有效增加脐血中有核红细胞的分离数量,并从孕妇外周血中成功富集到胎儿有核红细胞。 展开更多
关键词 密度梯度离心法 脐血 有核红细胞 孕妇外周血
人外周血晚期内皮祖细胞中的高糖记忆效应
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作者 唐康 张敏 周波 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期751-756,共6页
目的:探索人外周血晚期内皮祖细胞(endothelial progenitorcens,EPCs)是否存在高糖代谢记忆。方法:密度梯度离心法分离获取人外周血中的单个核细胞,诱导培养2周时间待细胞呈现立体的鹅卵石状后,即为晚期EPCs,采用细胞免疫化学... 目的:探索人外周血晚期内皮祖细胞(endothelial progenitorcens,EPCs)是否存在高糖代谢记忆。方法:密度梯度离心法分离获取人外周血中的单个核细胞,诱导培养2周时间待细胞呈现立体的鹅卵石状后,即为晚期EPCs,采用细胞免疫化学染色对分离培养的细胞进行鉴定。MTT比色法摸索出高糖作用的浓度和时间梯度后,分3组处理细胞,即正糖组(NG,5.5mmol/LD-葡萄糖×6d),高糖组(HG,30mmol/LD-葡萄糖×6d),记忆组(MG,30mmol/L D-葡萄糖×6d+5.55mmol/LD-葡萄糖×6d)处理细胞,采用粘附实验、MTT比色法、EdU实验、Transwell小室实验、成管实验,测定3组细胞的粘附、增殖、迁移、成管功能。结果:粘附结果显示高糖组(38.296±6.615)、记忆组(37.815±6.196)均较正糖组(63.370±10.363)粘附能力下降(P〈0.05);M1T结果显示高糖组(79.041±19.678)、记忆组(81.524±6.710)均较正糖组(100.000±0.000)增殖能力下降(P〈0.05);EdU结果显示高糖组(45.809±7.945)、记忆组(37.740±8.206)均较正糖组(88.858±5.727)增殖能力下降(P〈0.05);迁移结果显示高糖组(25.111±6.051)、记忆组(25.778±6.037)均较正糖组(64.889±10.729)迁移能力下降(P〈0.05);成管结果显示高糖组(12.690±3.616)、记忆组(14.198±4.073)均较正糖组(64.407±6.358)成管能力下降(P〈0.05);记忆组与高糖组相比,粘附、增殖、迁移、成管功能均未能改善(P〉0.05)。结论:晚期EPCs存在高糖代谢记忆。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 密度梯度离心法 高糖 代谢记忆
人胰腺星状细胞的新型分离方法
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作者 孟府陶 黄玫 +1 位作者 刘振 黄强 《中华肝胆外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期455-458,共4页
目的探讨人胰腺星状细胞(PSCs)的新型分离方法。方法通过gentleMACS“组织处理器.恒温震荡消化制备正常胰腺组织、胰腺癌组织的单细胞悬液。通过密度梯度离心法分离获得静息态和活化态的PSCs。结果通过新型的分离法,1g人正常胰腺组... 目的探讨人胰腺星状细胞(PSCs)的新型分离方法。方法通过gentleMACS“组织处理器.恒温震荡消化制备正常胰腺组织、胰腺癌组织的单细胞悬液。通过密度梯度离心法分离获得静息态和活化态的PSCs。结果通过新型的分离法,1g人正常胰腺组织能够获得约(2.6±0.7)×10^6个静息态PSCs,平均活率约为90.0%,细胞形态符合典型的静息态特征,328Jim激发波长下可观察到短暂蓝绿色自发荧光;1g人胰腺癌组织能够获得约(4.1±1.1)×10^6个活化状态的PSCs,平均活率约为92.0%,活化态的细胞均表达d一平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)等特征性标记。结论本研究所用新型分离方法,适用于静息态与活化态两种表型的PSCs,不但分离纯度较高,分离时间亦极大缩短,值得推广借鉴。 展开更多
关键词 胰腺星状细胞 分离方法 技术改良 密度梯度离心法
大鼠肝内淋巴细胞的分离与培养
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作者 张曼卡 马慧敏 +3 位作者 张健 李玉凤 叶小慧 李鑫 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2018年第4期387-389,共3页
目的建立一种简单易行的大鼠肝内原代淋巴细胞分离与培养方法,为肝脏免疫学研究提供可靠的体外细胞模型。方法 采用原位灌注及密度梯度离心法分离培养,即在无菌条件下取大鼠正常肝脏组织,研磨后,利用离心法及淋巴细胞分离液进行纯化,通... 目的建立一种简单易行的大鼠肝内原代淋巴细胞分离与培养方法,为肝脏免疫学研究提供可靠的体外细胞模型。方法 采用原位灌注及密度梯度离心法分离培养,即在无菌条件下取大鼠正常肝脏组织,研磨后,利用离心法及淋巴细胞分离液进行纯化,通过倒置生物显微镜对所培养细胞进行形态学观察,并结合流式细胞术来鉴定大鼠T淋巴细胞。结果 通过倒置生物显微镜观察到细胞呈典型的淋巴细胞形态,流式细胞术分析显示,T细胞比例为51.2%。结论 本实验利用原位灌注及密度梯度离心法相结合的方式,成功分离和培养了大鼠肝内淋巴细胞,操作简单,重复性好,成功率高,为进一步开展肝脏的免疫学研究提供了非常好的体外细胞模型。 展开更多
关键词 肝内淋巴细胞 培养 密度梯度离心法
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全骨髓贴壁法与密度梯度离心法培养小鼠内皮祖细胞的方法比较
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作者 赵文飘 戴霞 +3 位作者 刘玉花 翟露 林媛 罗组纯 《广西医科大学学报》 CAS 2018年第3期286-289,共4页
目的:比较全骨髓贴壁法与密度梯度离心法分离培养小鼠内皮祖细胞(EPCs)的差异。方法:取8周龄雄性近交系昆明小鼠,提取原代EPCs,分别采用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法分离培养细胞,观察细胞形态、细胞摄取Ii-acLDL、结合FITC-UEA-I双阳... 目的:比较全骨髓贴壁法与密度梯度离心法分离培养小鼠内皮祖细胞(EPCs)的差异。方法:取8周龄雄性近交系昆明小鼠,提取原代EPCs,分别采用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法分离培养细胞,观察细胞形态、细胞摄取Ii-acLDL、结合FITC-UEA-I双阳性率及细胞生长增殖情况。结果:全骨髓贴壁法培养第4天,可见较多贴壁细胞,呈圆形、短梭形,部分为长梭形;第6~8天贴壁细胞多为梭形及类圆形;随着培养时间的延长,梭形细胞数量渐渐增多,可出现细胞集落,10d后EPCs大量增殖,14d细胞长满培养瓶底部。密度梯度离心法接种24h后可见圆形贴壁细胞,并逐渐增多变形;音养至第4~7天,可以观察到贴壁细胞明显增多且体积变大,细胞为类圆形、梭形或多边形,第7~9天,细胞呈集落生长,多数细胞呈多边形或长梭型;培养至第2周可见贴壁细胞生长呈“铺路石”样外观。全骨髓贴壁法细胞摄取DiI-acLDL和结合FITC-UEA-I双阳性率高于密度梯度离心法(P〈0.05),但两种方法细胞增殖率比较无明显差异(P>0.05)。结论:全骨髓贴壁法与密度梯度离心法均可培养出EPCs,且两种方法培养的细胞增殖活性相当,但前者更简单易行,EPCs培养成功率更高。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 细胞培养 全骨髓贴壁法 密度梯度离心法
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3类洗涤法处理不同质量精液标本的效果比较及在IUI中的应用选择 预览
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作者 饶金鹏 邱枫 +1 位作者 蔡益婷 金敏 《中国医学创新》 CAS 2017年第1期58-61,共4页
目的:通过比较密度梯度离心法(density-gradient centrifugation,DGC)、上游法(swim-up,SU)和简单洗涤法(simple washing,SW)处理不同质量精液标本的效果,优选出最合适的宫腔内人工授精(Intrauterine insemination,IUI)精液洗... 目的:通过比较密度梯度离心法(density-gradient centrifugation,DGC)、上游法(swim-up,SU)和简单洗涤法(simple washing,SW)处理不同质量精液标本的效果,优选出最合适的宫腔内人工授精(Intrauterine insemination,IUI)精液洗涤方法。方法:选取男科实验室行精液常规检查的患者中收集精液量≥3 m L的精液标本90份,其中精子浓度〈15×10^6/m L的少精症患者精液标本23份,浓度与活力正常(浓度≥15×10^6/m L,PR≥32%且PR+NP≥40%)的精液标本67份,每份精液标本各取3个1 m L分别用密度梯度离心法、上游法和简单洗涤法处理。通过不同方法的洗涤处理,比较各组精子洗涤前后的浓度、活力(PR)及回收率。结果:3种处理方法洗涤后的PR较洗涤前均有显著提高(P〈0.05);在处理后的精子浓度方面,简单洗涤法处理要显著高于其余两类方法(P〈0.05);在处理后的PR和活率(PR+NP)方面,密度梯度离心法和上游法又要高于简单洗涤法(P〈0.05);在回收率方面,密度梯度离心法和简单洗涤法则显著高于上游法组(P〈0.05)。结论:在处理少精症患者精液标本时,上游法因其较低的回收率不适宜被采用;当精子浓度〈15×10^6/m L且精子总数小于正常值(39×10^6个)时,为保证处理后最终前向精子总数〉10×10^6个,精子标本不适合过多次数的洗涤处理,宜采用简单洗涤法;而只有当精液体积较大时,在保证IUI精子终浓度的同时,密度梯度离心法较简单洗涤法能更好地去除白细胞和不成熟生殖细胞等杂质,而更适宜被采用;在处理浓度活力正常精液标本时,密度梯度离心法和上游法较之简单洗涤法能获得更高的精子活力(P〈0.05)而更适宜被采用;同时,密度梯度离心法因较之上游法具有更高的回收率(P〈0.05),且具备操作易标准化和操作时间短等特点而更具实用价值。 展开更多
关键词 密度梯度离心法 上游法 简单洗涤法 少精症 IUI
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不同样品处理方法对T淋巴细胞亚群及功能分析的影响
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作者 任静 张耀方 +1 位作者 王桂琴 樊卫平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期298-301,共4页
目的研究Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、先裂解红细胞后标记抗体、先标记抗体后裂解红细胞3种不同处理方法对T淋巴细胞(T细胞)亚群及功能分析的影响。方法采用3种方法制备样本后,采用流式细胞术检测T细胞表面分子及亚群比例,台盼蓝... 目的研究Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、先裂解红细胞后标记抗体、先标记抗体后裂解红细胞3种不同处理方法对T淋巴细胞(T细胞)亚群及功能分析的影响。方法采用3种方法制备样本后,采用流式细胞术检测T细胞表面分子及亚群比例,台盼蓝染色检测细胞存活率,Con A刺激检测细胞活性。结果 Ficoll-Hypaque密度梯度离心法与两种裂解红细胞法相比,T细胞亚群比例差异无统计学意义(P〉0.05),细胞存活率及细胞活性均较高(P〈0.05)。两种裂解红细胞法处理样本结果无差异。结论 Ficoll-Hypaque密度梯度离心法适合研究工作,先标记抗体后裂解红细胞的方法更适合临床检验。 展开更多
关键词 密度梯度离心法 裂解红细胞法 T淋巴细胞亚群分析
Induction of ultra-morphological features of apoptosis in mature and immature sperm
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作者 Sonja Grunewald Guenther Fitzl Christopher Springsguth 《亚洲男性学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第5期533-537,共5页
有建议激活的 apoptosis 在呼喊的人的精子发信号否定地影响他们的授精潜力的证据的基本身体。然而,发信号的这 apoptotic 是否是与精子发生有关的未成功的 apoptosis 的一件遗物,仍然是争论的或如果它应该在导致 stereotypical 的成... 有建议激活的 apoptosis 在呼喊的人的精子发信号否定地影响他们的授精潜力的证据的基本身体。然而,发信号的这 apoptotic 是否是与精子发生有关的未成功的 apoptosis 的一件遗物,仍然是争论的或如果它应该在导致 stereotypical 的成熟精子被认为是一条功能的 preformed 小径词法变化思考原子拆卸。探讨这个问题, apoptosis 在密度坡度 centrifugation 充实的成熟、不成熟的呼喊的人的精子用 betulinic 酸被导致。apoptosis 的执行被经由传播电子显微镜学观察极端词法的变化监视。在体的房间的 apoptosis 的典型词法符号与 apoptotic 身体,损害 mitochondrial 正直,原子信封的缺点,和原子破碎的形成包括血浆膜 blebbing;这些形态学也在人的精子被观察了。另外,这些 apoptotic 特征在与成熟精子相比的不成熟的精子是更经常的。后面的 betulinic 酸处理, apoptosis 相关的词法变化从健康施主在成熟精子被导致。这效果更不在不成熟的精子被读。而且在两部分, betulinic 酸处理增加了反应 acrosome 的精子的百分比。我们的极端词法的学习的结果在成熟呼喊的人的精子证明 apoptosis 的功能的胜任。一个唯一的未成功的过程的理论可能为不成熟的精子仅仅是有效的。由刺激 apoptosis 的 acrosome 反应的正式就职可能使精子 apoptosis 的生物关联清楚些。 展开更多
关键词 形态学特征 细胞凋亡 成熟精子 精子发生 密度梯度离心法 感应 细胞超微结构 透射电镜观察
实验兔骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定
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作者 马笃军 彭力平 +5 位作者 王立新 余阗 裴军宇 李明华 徐宁达 肖伟 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期99-104,共6页
探讨建立兔骨髓间质干细胞(BMSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为BMSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。首先抽取兔髂骨骨髓,采用Percoll密度梯度离心法得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代... 探讨建立兔骨髓间质干细胞(BMSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为BMSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。首先抽取兔髂骨骨髓,采用Percoll密度梯度离心法得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代培养扩增,倒置相差显微镜观察细胞生长状态,细胞免疫组化检测CD73、CD34。结果表明,成功建立了兔BMSCs体外分离及培养扩增的方法,发现BMSCs表现贴壁生长,P0代时呈集落生长,细胞呈梭形,传代后细胞增殖速度加快,形态开始多样化;细胞免疫组化显示BMSCs表达CD73,未表达CD34,反复传代后CD73表达效率增高。上述研究表明,Percoll密度梯度离心联合骨髓贴壁法,能有效分离、纯化和扩增BMSCs,提取的细胞具有BMSCs的生长特性和抗原表型,其中P3~P6代细胞增殖能力强,可用于进一步的研究工作。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 密度梯度离心法
小鼠原代胸腺上皮细胞分离方法的比较与优化
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作者 夏洁云 袁姝姝 +3 位作者 付瑞雪 王军杰 徐开林 赵恺 《徐州医科大学学报》 CAS 2017年第5期298-303,共6页
目的比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞(TEC)分离方法的效果,筛选简单、高效、实用的分离方法。方法将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组:胶原酶Ⅰ组 (Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml)、DispaseⅡ组 (DisⅡ组, 3 m... 目的比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞(TEC)分离方法的效果,筛选简单、高效、实用的分离方法。方法将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组:胶原酶Ⅰ组 (Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml)、DispaseⅡ组 (DisⅡ组, 3 mg/ml)、Col IE+低浓度DisⅡ组 (Col IE/Dis Ⅱ-L组, 0.75 mg/ml)、Col IE+中浓度DisⅡ组 (Col IE/Dis Ⅱ-M组, 1.5 mg/ml)、Col IE+高浓度DisⅡ组(Col IE/DisⅡ-H组, 3 mg/ml)。优选出最适消化方法后,将所得单细胞悬液分成Percoll实验组以及Percoll对照组。采用血细胞计数板进行总细胞数计数,台盼蓝染色法观察细胞的活性;使用流式细胞术检测胸腺基质细胞(TSC)以及TEC的比例。结果与单独使用DisⅡ与Col IE相比,Col IE与不同浓度Dis Ⅱ联合使用均能加快胸腺组织消化(P〈0.01),获取单个胸腺的总细胞数较多,尤以中、高浓度DisⅡ与Col IE联合消化效果更佳(P〈0.05或P〈0.01)。与单独使用酶消化组相比,Col IE与中、高浓度DisI联合消化均可不同程度地增加获取TSC和TEC的比例(P〈0.01)。与Percoll对照组相比,Percoll密度梯度离心进一步提高获取TSC和TEC的比例(P〈0.05)。此外,各种消化分离方法均可获得高活细胞率的细胞。结论Col IE与DisⅡ联合消化,结合Percoll密度梯度离心可获取数量多、活性高的小鼠原代TEC。 展开更多
关键词 胸腺上皮细胞 单细胞分离 胶原酶 中性蛋白酶 密度梯度离心法
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密度梯度离心法和红细胞裂解法对小鼠外周血淋巴细胞表面分子表达的影响 预览
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作者 周扬 钟锐华 唐利波 《中外医疗》 2017年第14期31-33,共3页
目的比较密度梯度离心法和全血红细胞裂解法对小鼠外周血淋巴细胞表面分子表达的影响。方法采用流式细胞术检测密度梯度离心法和全血红细胞裂解法获得的小鼠外周血存活淋巴细胞比例以及表型分子(CD3、CD4、CD8、CD19和CXCR5)的频数。... 目的比较密度梯度离心法和全血红细胞裂解法对小鼠外周血淋巴细胞表面分子表达的影响。方法采用流式细胞术检测密度梯度离心法和全血红细胞裂解法获得的小鼠外周血存活淋巴细胞比例以及表型分子(CD3、CD4、CD8、CD19和CXCR5)的频数。结果密度梯度离心法获得的小鼠外周血存活淋巴细胞比例较全血红细胞裂解法获得的存活淋巴细胞显著升高(92.70%vs 85.90%,P〈0.05)。与密度梯度离心法相比,全血红细胞裂解法可使外周血淋巴细胞中CD3、CD4和CD8表达显著下降(60.10%vs 35.90%,P〈0.05;42.90%vs 20.30%,P〈0.05;24.60%vs 14.80%,P〈0.05),而CD19和CXCR5表达则显著升高(12.80%vs 35.30%,P〈0.05;15.00%vs 35.10%,P〈0.05)。结论密度梯度离心法获得的小鼠外周血淋巴细胞活力强且表型稳定,可作为分离此类细胞的优选方法。 展开更多
关键词 流式细胞术 小鼠外周血 淋巴细胞 密度梯度离心法 全血红细胞裂解法
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密度梯度离心联合传代贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞 预览 被引量:1
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作者 丁冬 闫鑫 +7 位作者 李晓亮 张博闻 董梦婷 温鹏 姚占川 黄永禄 杨子洋 赵飞 《宁夏医学杂志》 CAS 2017年第11期977-979,I0001共4页
目的 探讨密度梯度离心联合传代贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞的可行性。方法 应用密度梯度离心联合传代贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞,观察细胞形态变化,应用免疫荧光法鉴定细胞并计算纯度,应用八肽胆囊收缩素(CCK-8)法... 目的 探讨密度梯度离心联合传代贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞的可行性。方法 应用密度梯度离心联合传代贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞,观察细胞形态变化,应用免疫荧光法鉴定细胞并计算纯度,应用八肽胆囊收缩素(CCK-8)法绘制细胞生长曲线。结果 应用密度梯度离心联合传代贴壁法可以分离、培养兔骨髓间充质干细胞,第3代细胞接种后2~8 d进入细胞增殖对数期,兔骨髓间充质干细胞的纯度可达(81.77±2.10)%,3代细胞纯度组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 应用密度梯度离心联合传代贴壁法可以分离、培养并获取正常活性及理想纯度的兔骨髓间充质干细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 密度梯度离心法 传代贴壁法 细胞增殖
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Bone Marrow Mononuclear Cell Extraction. Does the Operator Performance Affect Processing Efficacy? 预览
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作者 Jakobsons Eriks Cakstina Inese +9 位作者 Erglis Kristaps Erglis Martins Pirtniece Liene Elina Krumina NarbuteInga Briede Ieva Jegere Sanda Smolova Rita Muiznieks Indrikis Erglis Andrejs 《药剂与药理学:英文版》 2016年第5期192-198,共7页
关键词 骨髓单个核细胞 细胞提取 操作人员 性能 密度梯度离心法 群体产量 细胞分离 临床试验
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直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞 预览 被引量:1
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作者 方晓 王康康 +2 位作者 高维陆 张辉 尹宗生 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1696-1699,共4页
取90gSPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间... 取90gSPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量,CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义(P〈0.01)。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 骨髓 直接贴壁法 密度梯度离心法
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C反应蛋白对大鼠骨髓内皮祖细胞参与血管形成的影响 预览
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作者 朱智 刘勇 何延政 《生物技术世界》 2016年第2期119-120,共2页
目的:析CRP对大鼠骨髓内皮祖细胞参与血管形成的影响,同时剖析其在动脉粥样硬化病中的作用机制.方法:密度梯度离心法制作好的大鼠骨髓内皮祖细胞,标记、凝聚双染后在共聚焦显微镜下观察分析.将细胞与不同浓度C反应蛋白一起培养,建立... 目的:析CRP对大鼠骨髓内皮祖细胞参与血管形成的影响,同时剖析其在动脉粥样硬化病中的作用机制.方法:密度梯度离心法制作好的大鼠骨髓内皮祖细胞,标记、凝聚双染后在共聚焦显微镜下观察分析.将细胞与不同浓度C反应蛋白一起培养,建立体外血管形成模型,观察C反应蛋白对内皮祖细胞活性和形成能力的影响,并检测其他相关指标.结果:四组比较,当C反应蛋白浓度升高时,10mg/L组的OD490增值数、管腔数以及渗入细胞数,明显低于其他三组,差异具有统计学意义(P〈0.05).结论:CRP在一定程度上可起到减弱内祖皮细胞活性与形成能力的双重作用,并导致动脉粥样硬化类疾病在短时间内实现进一步发展. 展开更多
关键词 C反应蛋白 大鼠骨髓内皮祖细胞 影响 密度梯度离心法
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两种精子处理方法对精子活力及正常形态率影响比较 被引量:1
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作者 谢文燕 白爱红 《中国继续医学教育》 2016年第19期135-137,共3页
目的比较上游法和密度梯度离心法对正常精液的处理效果。方法回顾性分析2014年1月~2015年12月男方精液正常因女方因素来我院进行IUI的临床资料,比较上游法和密度梯度离心法后处理前后精子活力及正常形态率。结果两种方法处理后精子活力... 目的比较上游法和密度梯度离心法对正常精液的处理效果。方法回顾性分析2014年1月~2015年12月男方精液正常因女方因素来我院进行IUI的临床资料,比较上游法和密度梯度离心法后处理前后精子活力及正常形态率。结果两种方法处理后精子活力和正常形态精子率均较处理前升高,精子活力的提高差异有统计学意义(P〈0.05),与上游法相比,密度梯度离心法处理的精液具有更高的密度和正常形态精子比率(P〈0.05)。结论对正常的精液,两种处理方法均能得到合适的精子,但对于液化不好的,或者精子总数少的以及精液正常精子比例少的患者,可采用密度梯度离心法处理精液。 展开更多
关键词 精液处理 上游法 密度梯度离心法
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Nycodenz密度梯度离心法提取及纯化大鼠心肌线粒体 被引量:1
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作者 李科 魏义勇 +4 位作者 刘云 曹嵩 刘兴奎 王海英 喻田 《遵义医学院学报》 2016年第5期525-528,共4页
目的建立一种利用Nycodenz密度梯度离心法提取组织线粒体的方法。方法传统离心方法得到粗提线粒体后,在Nycodenz密度梯度介质中超高速离心得到纯化线粒体,进一步在经改良的线粒体分离介质中重复离心2次,得到高纯度的线粒体。利用透射电... 目的建立一种利用Nycodenz密度梯度离心法提取组织线粒体的方法。方法传统离心方法得到粗提线粒体后,在Nycodenz密度梯度介质中超高速离心得到纯化线粒体,进一步在经改良的线粒体分离介质中重复离心2次,得到高纯度的线粒体。利用透射电镜和Western Blot检测线粒体纯度。结果使用Nycodenz密度梯度离心法和线粒体分离介质提纯的线粒体量多、纯度较高(COXⅣ含量纯化组:粗提组=220%±26%vs.160%±34%,P〈0.05),且电镜照片显示结构完整。结论使用Nycodenz密度梯度离心法可获得高纯度且结构较完整的线粒体。 展开更多
关键词 线粒体 密度梯度离心法 Nycodenz 大鼠
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实验室常用离心技术与应用 预览 被引量:3
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作者 李万杰 胡康棣 《生物学通报》 2015年第4期10-12,共3页
离心机是生物学教学、科研领域中常见的仪器,离心技术也是分离、制备、纯化生物样品的重要手段。沉淀离心法、差速离心法、密度梯度离心法是实验室常用的3种离心技术,对其工作原理及应用范围做出简单的分析和比较。
关键词 离心技术 沉淀离心法 差速离心法 密度梯度离心法
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SHR大鼠前额叶、纹状体突触体的提取方法 预览 被引量:8
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作者 周荣易 韩新民 +1 位作者 王娇娇 孙继超 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期59-64,共6页
目的介绍SHR大鼠前额叶、纹状体突触体的提取方法。方法采用Percoll密度梯度离心法制备突触体,透射电镜观察其形态和结构完整性。结果本实验所获取的突触体形态上呈连续膜封闭的椭圆结构,周围有完整的膜包围;突触前成分可见一个或多个... 目的介绍SHR大鼠前额叶、纹状体突触体的提取方法。方法采用Percoll密度梯度离心法制备突触体,透射电镜观察其形态和结构完整性。结果本实验所获取的突触体形态上呈连续膜封闭的椭圆结构,周围有完整的膜包围;突触前成分可见一个或多个线粒体和大量突触小囊泡;突触间隙清晰可见,且突触后部分特征性的致密部结构完整,形态清晰,密度较高。突触体突触前膜、突触间隙、突触后膜保存完好,突触体分布密度较高,具有典型的突触体形态结构特征。结论本实验提供了一种耗时少,产出率高,结构完整、形态典型且可运用于精细化研究的突触体制备新技术,补充了传统技术的不足,为神经系统疾病的研究提供技术支持。 展开更多
关键词 PERCOLL 密度梯度离心法 SHR大鼠 前额叶、纹状体 制备
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