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RNA干扰染色体空间重组因子1对宫颈腺癌放化疗敏感性的影响
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作者 谢兆光 王翔宇 +10 位作者 饶林丽 郭秋芬 吴倩 崔春辉 张婷婷 陈金龙 贾珏 许晋铨 魏玲 王兴武 孙丽 《肿瘤药学》 CAS 2019年第1期20-25,共6页
目的 探讨siRNA干扰染色体空间重组因子1(Rsf-1/HBXAP)对宫颈腺癌细胞放化疗敏感性的影响,为宫颈腺癌的基因靶向治疗提供实验依据。方法 采用Rsf-1/HBXAP特异性的小分子干扰RNA(siRNA)转染人宫颈腺癌HeLa细胞,通过荧光实时定量聚合酶链... 目的 探讨siRNA干扰染色体空间重组因子1(Rsf-1/HBXAP)对宫颈腺癌细胞放化疗敏感性的影响,为宫颈腺癌的基因靶向治疗提供实验依据。方法 采用Rsf-1/HBXAP特异性的小分子干扰RNA(siRNA)转染人宫颈腺癌HeLa细胞,通过荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测HeLa细胞Rsf-1/HBXAP mRNA的表达,CCK-8实验检测HeLa细胞增殖情况,平板克隆实验检测HeLa细胞克隆形成情况,流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡情况。结果 Rsf-1/HBXAP特异性的siRNA-1可显著抑制Rsf-1/HBXAP基因的表达。紫杉醇对siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP组与非干扰组的IC50分别为7.24 nM [95%CI:(3.14, 18.60)]和3.66 nM [95%CI:(1.65, 7.86)]。平板克隆实验结果表明siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP基因可提高放疗敏感性。流式细胞术结果显示siRNA-1干扰Rsf-1/HBXAP基因可促进HeLa细胞凋亡。结论 Rsf-1/HBXAP基因表达下调可增强宫颈腺癌细胞对放化疗的敏感性,可能成为宫颈腺癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 宫颈腺癌 染色体空间重组因子1 分子干扰RNA 放疗敏感性 化疗敏感性
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小分子干扰RNA沉默果蝇zeste基因增强子同源物2对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响 预览
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作者 秦海霞 李少平 +2 位作者 朱利红 张全华 王世进 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第2期116-120,共5页
目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,收集对数生长期Hela细胞继续培养,待贴壁细胞长满底部面积80%~90%时进行转染。将Hela细胞随机分为空白... 目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,收集对数生长期Hela细胞继续培养,待贴壁细胞长满底部面积80%~90%时进行转染。将Hela细胞随机分为空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组,空白对照组Hela细胞不作处理,control siRNA组Hela细胞转染control siRNA,EZH2 siRNA组Hela细胞转染EZH2 siRNA。收集3组转染后Hela细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Hela细胞中EZH2 mRNA表达,Western blot法检测Hela细胞中EZH2蛋白表达,流式细胞术检测Hela细胞的细胞周期。收集3组转染后Hela细胞,分别加入不同质量浓度(0.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 g·L^-1)的顺铂,48 h后采用四甲基偶氮唑蓝法检测Hela细胞在顺铂作用下的体外存活率。结果Control siRNA和EZH2 siRNA可高效转染Hela细胞,转染率均达90%以上。空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量分别为396.7±88.4、389.2±70.6和98.5±20.3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2.057、2.015,P<0.01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.476,P>0.05)。空白对照组、control siRNA组和EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量分别为509.4±110.7、497.5±80.4和120.4±31.3,EZH2 siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量显著低于空白对照组和control siRNA组(t=2.682、2.597,P<0.01),空白对照组与control siRNA组Hela细胞中EZH2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.943,P>0.05)。EZH2 siRNA组G 0/G 1期细胞比例显著高于空白对照组和control siRNA组(t=2.893、3.087,P<0.05),EZH2 siRNA组S期、G 2/M期细胞比例显著低于空白对照组和control siRNA组(EZH2 siRNA组与空白对照组比较:t=2.526、5.462,P<0.05;EZH2 siRNA组与control siRNA组比较:t=2.498、5.417,P<0.05), 展开更多
关键词 zeste基因增强子同源物2 宫颈癌 分子干扰RNA 顺铂 药物敏感性
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小分子干扰RNA沉默黏着斑激酶基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响 预览
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作者 余俊 刘彤鸥 李晓兰 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第4期266-271,共6页
目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默黏着斑激酶(FAK)基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响。方法 培养人宫颈癌Hela细胞,根据转染物的不同分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测细胞中FA... 目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默黏着斑激酶(FAK)基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响。方法 培养人宫颈癌Hela细胞,根据转染物的不同分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测细胞中FAK基因表达,噻唑蓝法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中FAK、RAF原癌基因丝氨酸/苏氨酸激酶-1(Raf-1)、磷酸化-Raf-1(p-Raf-1)、丝裂原活化蛋白激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化-MEF1/2(p-MEK1/2)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化-ERK(p-ERK)蛋白表达。结果 空白对照组、siRNA-阴性对照组、siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞凋亡率、细胞迁移细胞数、侵袭细胞数、FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白相对表达量及细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与siRNA-阴性对照组细胞中FAK mRNA的相对表达量、细胞增殖能力、细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05);siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK蛋白相对表达量均显著低于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05),细胞凋亡率及Raf-1、MEK1/2和ERK蛋白相对表达量均显著高于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05)。结论 特异性抑制人宫颈癌Hela细胞中FAK基因可减少细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制Raf/MEK/ERK信号通路有关。 展开更多
关键词 宫颈癌 黏着斑激酶 分子干扰RNA 丝氨酸/苏氨酸激酶/丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶 信号通路
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RNAi沉默β-arrestin2基因对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响 预览 被引量:1
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作者 胡美琴 高琨 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第9期1337-1340,共4页
目的:通过体外实验观察β-arrestin2的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响。方法:针对β-arrestin2基因设计siRNA序列,克隆到空载体PGPU6/GFP/Neo,转化DH5α菌株,提取质粒,进行测序分析。... 目的:通过体外实验观察β-arrestin2的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的影响。方法:针对β-arrestin2基因设计siRNA序列,克隆到空载体PGPU6/GFP/Neo,转化DH5α菌株,提取质粒,进行测序分析。在脂质体lipofectamineTM2000的介导下转染Bcap37细胞,同时转染空白对照组及阴性对照组。转染后用定量Western blot检测Bcap37细胞β-arrestin2蛋白的表达情况,流式细胞仪检测Bcap37细胞的凋亡情况。结果:我们的研究表明,β-arrestin2的siRNA能有效下调β-arrestin2的表达,与对照组相比,β-arrestin2干扰组β-arrestin2的表达明显下降(P〈0.05);β-arrestin2干扰组Bcap37细胞凋亡率显著高于对照组。结论:β-arrestin2干扰组能有效降低β-arrestin2的表达,有效促进Bcap37细胞凋亡;β-arrestin2可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 β-arrestin2 分子干扰RNA Bcap37细胞 细胞凋亡
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靶向沉默DEK对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响 预览
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作者 李伟伟 耿晓松 +3 位作者 孙建伟 段树鹏 宋新文 申保生 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第3期173-176,共4页
目的 探讨靶向沉默DEK对肝癌细胞株增殖及细胞周期的影响。方法 常规培养人肝癌细胞株HepG2,待细胞生长至90%融合度时分为空白对照组、小分子干扰RNA(siRNA)对照组和DEK siRNA组。空白对照组细胞正常培养,不做任何处理;siRNA对照组和D... 目的 探讨靶向沉默DEK对肝癌细胞株增殖及细胞周期的影响。方法 常规培养人肝癌细胞株HepG2,待细胞生长至90%融合度时分为空白对照组、小分子干扰RNA(siRNA)对照组和DEK siRNA组。空白对照组细胞正常培养,不做任何处理;siRNA对照组和DEK siRNA组细胞分别在LipofectamineTM2000脂质体介导下进行siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体转染。应用实时定量聚合酶链反应检测HepG2细胞中DEK mRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测HepG2细胞中DEK、Cyclin D1蛋白的表达,四甲基偶氮唑盐法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术观察细胞周期变化。结果 空白对照组、siRNA对照组和DEK siRNA组HepG2细胞中DEK mRNA表达分别为0.826±0.052、0.776±0.051、0.420±0.050,DEK蛋白表达分别为0.691±0.073、0.726±0.061、0.311±0.038,Cyclin D1蛋白表达分别为0.712±0.069、0.780±0.074、0.434±0.039;DEK siRNA组HepG2细胞中DEK mRNA及DEK、Cyclin D1蛋白表达均低于空白对照组和siRNA对照组(P〈0.05);空白对照组和siRNA对照组HepG2细胞中DEK mRNA及DEK、Cyclin D1蛋白表达比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。DEK siRNA组转染后24、48、72、96、120 h时细胞增殖能力均低于空白对照组和siRNA对照组(P〈0.05);空白对照组和siRNA对照组各时间点细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。DEK siRNA组G_0+G_1期细胞所占比例高于空白对照组和siRNA对照组(P〈0.05);DEK siRNA组S期、G_2+M期细胞所占比例均低于空白对照组和siRNA对照组(P〈0.05);空白对照组和siRNA对照组G_0+G_1期、S期、G_2+M期细胞所占比例比较差异无统计学意义(P〉0.05)。Pearson相关分析显示,Cyclin D1蛋白表达与DEK mRNA和DEK蛋白表达均呈正相关(r=0.909、0.899,P〈0.05)。结论 DEK siRNA可下调HepG2细胞中DEK基因表达,抑制HepG2细胞增殖,改变细胞周期分布,这一过程可能与下调Cyclin D1表达有关。 展开更多
关键词 DEK 肝癌 分子干扰RNA 细胞增殖
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Cofilin-1 siRNA的设计及其对细胞自噬的影响
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作者 李爱群 黄桢钧 刘少军 《新医学》 2017年第9期609-612,共4页
目的设计Cofilin-1的小分子干扰RNA(siRNA),并利用该方法初步探索干扰Cofilin-1对细胞自噬的影响。方法利用在线软件及根据文献报道设计出3对靶向人Cofilin-1的siRNA,转染人胚肾细胞HEK293,蛋白免疫印迹法检测细胞Cofilin-1、p62、LC... 目的设计Cofilin-1的小分子干扰RNA(siRNA),并利用该方法初步探索干扰Cofilin-1对细胞自噬的影响。方法利用在线软件及根据文献报道设计出3对靶向人Cofilin-1的siRNA,转染人胚肾细胞HEK293,蛋白免疫印迹法检测细胞Cofilin-1、p62、LC3Ⅰ及LC3Ⅱ蛋白的表达变化。mRFP-GFP-LC3双荧光观察细胞自噬流(自噬体及自噬溶酶体的变化)。结果蛋白免疫印迹法证实siRNA-a及siRNA-b有较好的干扰效果。成功干扰Cofilin-1后,HEK293细胞的p62表达下调、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增大、自噬体和自噬溶酶体增多。结论 siRNA能有效干扰Cofilin-1的表达,Cofilin-1参与细胞自噬过程。 展开更多
关键词 Cofilin-1 干扰 分子干扰RNA 细胞自噬
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鞘内注射TRPV3-siRNA慢病毒对骨癌痛大鼠疼痛行为的影响 被引量:1
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作者 郑翔 方志成 +1 位作者 李阳 冯莹 《中华行为医学与脑科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期400-404,共5页
目的探讨鞘内注射热敏感TRPV3离子通道的小分子干扰RNA(siRNA)慢病毒对骨癌痛大鼠疼痛行为的影响。方法鞘内成功置管雌性sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为4组(每组10只),假手术组(S组),骨癌痛模型组(B组),空载慢病毒... 目的探讨鞘内注射热敏感TRPV3离子通道的小分子干扰RNA(siRNA)慢病毒对骨癌痛大鼠疼痛行为的影响。方法鞘内成功置管雌性sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为4组(每组10只),假手术组(S组),骨癌痛模型组(B组),空载慢病毒组(C组)和TRPV3-siRNA慢病毒组(T组)。大鼠右侧胫骨平台接种Waker256细胞或者灭活细胞。造模后第1-6天,C组和T组分别鞘内给予5μl空载慢病毒和TRPV3-siRNA慢病毒。于造模前、造模后第1、3、6、9、12、15、18、21天测量同侧足底热辐射刺激潜伏期(PWTL)和机械刺激痛阈值(PWMT),并取L4-L6段腰膨大处,RT-PCR和WesternBlot检测TRPV3含量变化。结果造模后第6天,B组PWTL、PWMT较S组和基础值减小,差异具有统计学意义(P〈0.05)。造模后第9天,T组PWTL[(17.52±2.15)s]较C组PWTL[(14.36±1.67)s]显著增高(P〈0.05)。造模后第21天,T组PWMT[(16.89±1.54)g]与C组PWMT[(15.53±1.36)g]无明显差异(P〉0.05)。RT—PCR和WB结果表明T组TRPV3的mRNA和蛋白比C组明显减少(P〈0.05)。结论鞘内注射TRPV3-siRNA慢病毒,抑制TRPV3离子通道表达,从而降低骨癌痛大鼠的PWTL,但不能改变PWMT。 展开更多
关键词 骨癌痛 TRPV3离子通道 分子干扰RNA 慢病毒
DNA载体介导的小干扰RNA Tet-on基因表达系统的调控效应检测 预览 被引量:2
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作者 李朵璐 周玉冰 +5 位作者 韩超 安琪 李峰 段震峰 张晓坚 阚全程 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期30-35,共6页
目的观察构建的DNA载体介导的小干扰RNATet—on基因表达系统的调控效应。方法构建DNA载体介导的小干扰RNA(siRNA)Tet-on表达载体,pDIRS4.1 siRNA。以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和白细胞介素6(IL-6)基因为目的基因,应用脂质体... 目的观察构建的DNA载体介导的小干扰RNATet—on基因表达系统的调控效应。方法构建DNA载体介导的小干扰RNA(siRNA)Tet-on表达载体,pDIRS4.1 siRNA。以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和白细胞介素6(IL-6)基因为目的基因,应用脂质体介导的瞬时转染方法,分别将pDIRS4.1/EGFPsiRNA载体和pEGFP—N3质粒、pDIRS4.1IL-6 siRNA载体和pIRES IL-6质粒共转染人成骨肉瘤细胞,加入系列浓度的四环素(Dox)后,观察其诱导效应。结果pDIRS4.1 siRNA在人成骨肉瘤细胞中能够高效转染;随着Dox浓度升高,pDIRS4.1 siRNA载体在人成骨肉瘤细胞中对目的基因的沉默作用有较好的调控性,且目的基因的表达与Dox具有严格的剂量依赖关系,高浓度Dox时,IL-6表达水平降低约12倍。结论该研究构建的以DNA载体介导的能够高效调控siRNA沉默基因效应的Tet—On基因表达系统,能够促进其在更多模型系统中进行基因功能研究的应用。 展开更多
关键词 分子干扰RNA 四环素调控系统 DNA载体 基因调控
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CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA)纳米粒递送HIF-1α siRNA联合顺铂对鼻咽癌裸鼠移植瘤影响研究
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作者 连戴政 徐钢 +5 位作者 杨东 李子煌 吴事海 周亚燕 李壮玲 李先明 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期10-15,共6页
目的 乏氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)增强抗肿瘤药物敏感性研究在国内外已有诸多报道。本研究拟探讨纳米聚合物壳聚糖-聚乙二醇1 000维生素E琥珀酸酯-聚乙内酯-聚乙醇酸〔d-α-tocopheryl polyethylene glyco... 目的 乏氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)增强抗肿瘤药物敏感性研究在国内外已有诸多报道。本研究拟探讨纳米聚合物壳聚糖-聚乙二醇1 000维生素E琥珀酸酯-聚乙内酯-聚乙醇酸〔d-α-tocopheryl polyethylene glycol 1 000succinate-b-poly(ε-caprolactone-ran-glycolide),CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA),简称CNP〕包载HIF-1α小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)联合顺铂(cisplatin,DPP)对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法 皮下接种CNE-2细胞建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,应用随机数字表法分磷酸盐缓冲液组(Control)、单纯纳米粒组(CNP,200μg/kg)、单纯顺铂组(DPP,100μg/kg)、单纯纳米粒联合顺铂组(CNP 200μg/kg+DPP 100μg/kg)、载HIF-1αsiRNA纳米粒组(CNP-siRNA,200μg/kg)和载HIF-1αsiRNA纳米粒联合顺铂组(CNP-siRNA 200μg/kg+DPP 100μg/kg)6组。每组5只,腹腔注射3d1次,共7次。干预过程中3d测量1次肿瘤体积,治疗22d后拉颈处死裸鼠,称取瘤质量,计算抑瘤率;利用蛋白质印迹与RT-PCR检测移植瘤中HIF-1α和多重耐药基因-1/P糖蛋白(multidurg resistance gene 1/P-glycoprotein,MDR-1/P-gp)基因蛋白表达水平,HE染色观察各组肿瘤组织病理形态改变。结果与Control组相比,CNP组抑瘤率为18.32%,DPP组为37.59%,CNP-siRNA组为43.32%,CNP+DPP组为47.64%,CNP-siRNA+DPP组为70.21%。其中CNP-siRNA+DPP组抑瘤效果最为显著,与其他治疗组相比,差异有统计学意义,F=253.511,P〈0.001。在HIF-1αmRNA表达上,与Control组相比,CNP组mRNA表达量为0.89±0.04,DPP组为0.99±0.02,CNP-siRNA组为0.95±0.02,CNP+DPP组为0.35±0.04,CNP-siRNA+DPP组为0.15±0.07。CNP-siRNA+DPP组mRNA抑制效果最为显著,与其他组相比,差异有统计学意义,F=351.194,P〈0.001。蛋白质印迹结果亦显示,CNP-siRNA+DPP组中HIF-1α蛋白条带宽度明显低于其余各实验组,MDR-1/P-gp表达水平表现出与HIF-1α基因蛋白表达相似的� 展开更多
关键词 CS-TPGS-b-(PCL-ran-PGA) 纳米粒 分子干扰RNA siRNA 乏氧诱导因子 HIF-1Α 鼻咽癌 顺铂 DDP
RNA干扰血管内皮生长因子受体2基因表达提高结肠癌细胞对奥沙利铂敏感性的研究 预览 被引量:1
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作者 杨平 魏建昌 +3 位作者 陈华翠 张通 曾山崎 曹杰 《中国医药导报》 CAS 2017年第20期16-19,共4页
目的研究RNA干扰血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)基因表达对人结肠癌细胞生长的抑制作用和对奥沙利铂的化疗增敏作用。方法构建靶向VEGFR-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染人结肠癌细胞株SW480;通过RT-PCR和Western blot... 目的研究RNA干扰血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)基因表达对人结肠癌细胞生长的抑制作用和对奥沙利铂的化疗增敏作用。方法构建靶向VEGFR-2基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染人结肠癌细胞株SW480;通过RT-PCR和Western blot方法检测VEGFR-2 siRNA对人结肠癌细胞株SW480 VEGFR-2mRNA和蛋白表达的影响;采用MTT实验和流式细胞术检测该siRNA及协同奥沙利铂对细胞增殖及凋亡的影响。结果 VEGFR-2 siRNA显著下调结肠癌细胞VEGFR-2 mRNA和蛋白的表达(P〈0.05)。VEGFR-2 siRNA协同奥沙利铂使结肠癌细胞的生长变得更加缓慢,增殖受到明显抑制,细胞抑制及凋亡明显增强(P〈0.05)。结论RNA干扰VEGFR-2基因表达可以抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,促进其凋亡,并能提高结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性。 展开更多
关键词 结肠癌 血管内皮生长因子受体2 分子干扰RNA 奥沙利铂
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主被动双靶向纳米凝胶递送RRM2-siRNA的体外抗肿瘤效应
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作者 张莉 王颖 +2 位作者 金崇 董霞 李威 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期720-726,共7页
目的制备靶向输送针对核糖核苷酸还原酶RR小亚基M2(RRM2)的siRNA(RRM2-siRNA)的聚N-异丙基丙烯酰胺/聚乙烯亚胺(PNIPAM/PEI)纳米凝胶,通过研究其体外的抗肿瘤效应,以期构建新型靶向纳米凝胶递送基因系统。方法采用自由基接枝共聚... 目的制备靶向输送针对核糖核苷酸还原酶RR小亚基M2(RRM2)的siRNA(RRM2-siRNA)的聚N-异丙基丙烯酰胺/聚乙烯亚胺(PNIPAM/PEI)纳米凝胶,通过研究其体外的抗肿瘤效应,以期构建新型靶向纳米凝胶递送基因系统。方法采用自由基接枝共聚合(radical graft copolymerization)反应制备具有"核-壳"结构的PNIPAM/PEI聚阳离子温度敏感型纳米凝胶,评价其粒径、zeta电位等理化性质;根据电荷相互作用原理,并通过偶联抗人表皮生长因子受体2(Her2)抗体,形成包裹RRM2-siRNA的靶向性PNIPAM/PEI-siRNA纳米凝胶复合体。利用凝胶电泳确定PNIPAM/PEI-siRNA纳米凝胶复合体包裹siRNA效果,通过荧光显微镜定性观察和流式细胞术定量检测人胃癌细胞NCI-N87对该纳米凝胶复合体的摄取情况,利用qPCR法检测该纳米凝胶递送siRNA后靶基因RRM2的表达情况,用Transwell法检测该纳米凝胶复合体对NCI-N87细胞迁移的影响。结果本研究合成具有"核-壳"结构的温度敏感型PNIPAM/PEI纳米凝胶,颗粒均匀,粒径为359.8nm,zeta电位为21.4mV。在此基础上,我们制备出靶向凝胶包裹RRM2-siRNA的纳米凝胶复合体,确定最佳包裹比例为N/P=60(N/P:聚阳离子纳米凝胶中氨基与质粒DNA中磷酸基的摩尔比)。不同温度下(37℃、42℃)细胞内吞实验证实,该纳米凝胶复合体具有良好的靶向性和温度响应性,且可以下调靶基因RRM2的表达,抑制NCI-N87细胞的迁移。结论成功制备抗体靶向的PNIPAM/PEI聚阳离子温度敏感型纳米凝胶,其可以结合并投递siRNA进入靶细胞,该纳米复合体可以作为新型抗肿瘤基因治疗的给药系统。 展开更多
关键词 纳米凝胶 抗体靶向 温度响应性 药物递送系统 分子干扰RNA
siRNA干扰膜联蛋白A1基因对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖的影响 预览 被引量:1
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作者 钟雪梅 林一民 +3 位作者 李倩倩 邓世山 邵如月 丁浩 《中国老年学杂志》 北大核心 2017年第16期3920-3922,共3页
目的通过小干扰RNA(siRNA)干扰膜联蛋白(ANX)A1基因在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中的表达,探讨ANXA1对甲状腺乳头状癌细胞生物学特性的影响。方法设计并筛选使用高效的siRNA在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株中特异性干扰ANXA1的表达,然后... 目的通过小干扰RNA(siRNA)干扰膜联蛋白(ANX)A1基因在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中的表达,探讨ANXA1对甲状腺乳头状癌细胞生物学特性的影响。方法设计并筛选使用高效的siRNA在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株中特异性干扰ANXA1的表达,然后用CCK8法观察ANXA1干扰后对TPC-1细胞增殖能力的影响。结果筛选的siRNA可高效沉默ANXA1在TPC-1细胞中的表达,显著抑制甲状腺乳头状癌的增殖。结论 siRNA干扰ANXA1表达,可抑制甲状腺乳头状癌的增殖,提示ANXA1可能是甲状腺乳头状癌治疗的一个重要的生物学靶标。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 膜联蛋白A1 TPC-1细胞 分子干扰RNA
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靶向TLR9基因siRNA的筛选及其对BHV-1增殖规律的影响 预览
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作者 呼凤丽 徐丽媛 +1 位作者 张志飞 周伟光 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期303-310,共8页
为研究牛胚胎气管(bovine embryonic tracheal,EBTr)细胞Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)在牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus type 1,BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本试验利用小分子干扰RNA(siRNA)技术,以TLR9... 为研究牛胚胎气管(bovine embryonic tracheal,EBTr)细胞Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)在牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus type 1,BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本试验利用小分子干扰RNA(siRNA)技术,以TLR9为靶向分别设计并合成3条siRNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测应用siRNA-TLR9干扰后TLR9基因的表达变化,筛选出最佳的siRNA-TLR9干扰序列,继而转染EBTr细胞使其TLR9基因沉默后感染BHV-1,用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测BHV-1不同时间点的增殖变化。结果显示,转染48h后,与阴性对照组相比,siRNA-TLR9A、siRNA-TLR9B和siRNA-TLR9C分别对TLR9mRNA表达量下调了60.90%、24.05%和40.75%。筛选出siRNA-TLR9A片段在12-72h可以显著抑制TLR9mRNA表达(P〈0.05)。用该片段转染EBTr细胞再感染BHV-1后,6-72hsiRNA-TLR9A组BHV-1DNA拷贝数低于对照组。本试验成功筛选出了特异性的抑制EBTr细胞TLR9基因的siRNA序列,并证明抑制TLR9的表达可降低BHV-1的增殖能力。 展开更多
关键词 分子干扰RNA 牛胚胎气管细胞 TOLL样受体9 牛疱疹病毒Ⅰ型 实时荧光定量PCR
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非编码RNA与炎症性肠病关系的研究进展 被引量:1
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作者 胡菊香 郑蓉 周宇 《新医学》 2016年第7期425-429,共5页
炎症性肠病(IBD)是慢性复发性或进行性发展的炎症性疾病,通过遗传、环境因素和黏膜免疫系统之间的复杂作用而发生、发展,可累及整个胃肠道,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。非编码RNA是指不能翻译为蛋自质的功能性RNA分子,其中常见的... 炎症性肠病(IBD)是慢性复发性或进行性发展的炎症性疾病,通过遗传、环境因素和黏膜免疫系统之间的复杂作用而发生、发展,可累及整个胃肠道,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。非编码RNA是指不能翻译为蛋自质的功能性RNA分子,其中常见的具有调控作用的非编码RNA包括微小RNA(miRNA)、长链非编码職A(hmRNA)及小分子干扰RNA(siRNA)&近年来大量研究表明非编码RNA在:IBD的发生、发展中起着重要的作用。该文主要对上述三种常见非编码RNA在IBD中的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 非编码RNA RNA 长链非编码RNA 分子干扰RNA 炎症性肠病
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乙酰肝素酶调控大鼠肝再生机制探讨
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作者 张友磊 韩秋成 +4 位作者 卢文峰 付雍 朱楠 杨宁 杨广顺 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1459-1463,共5页
目的 探讨乙酰肝素酶(HPSE)调控大鼠肝再生的机制。方法 设计合成HPSE小干扰RNA(siRNA),以in vivo-jetPEI-Gal为载体转染70%肝切除大鼠,转染后免疫组化检测大鼠肝组织肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,... 目的 探讨乙酰肝素酶(HPSE)调控大鼠肝再生的机制。方法 设计合成HPSE小干扰RNA(siRNA),以in vivo-jetPEI-Gal为载体转染70%肝切除大鼠,转染后免疫组化检测大鼠肝组织肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,蛋白质印迹法检测肝组织基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达,Ⅷ因子免疫组化检测肝组织微血管密度(MVD)。结果 使用siRNA干扰HPSE后,大鼠肝组织中HGF、VEGF蛋白的表达降低,MVD降低,MMP-2和MMP-9表达降低,差异均有统计学意义(P〈0.01)。结论 HPSE可通过释放激活细胞外基质(ECM)中的HGF促进肝细胞增殖、增加VEGF的表达加速血管生成以及上调MMP-2和MMP-9的表达等途径调控大鼠肝再生。 展开更多
关键词 乙酰肝素酶 分子干扰RNA 肝切除术 肝脏再生
LAIR-1 siRNA对幽门螺杆菌诱导单核细胞THP-1凋亡的影响 被引量:4
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作者 孙辉 张莹 +3 位作者 季晓飞 陈醒醒 李娇娇 李波清 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第8期690-695,共6页
目的研究LAIR-1基因沉默对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)诱导单核细胞THP-1凋亡的影响。方法以Hp ATCC26695分别感染THP-1细胞6、12、24和48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡及LAIR-1蛋白的表达。应用Lipofectamine RNAiMAX转染3对LAI... 目的研究LAIR-1基因沉默对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)诱导单核细胞THP-1凋亡的影响。方法以Hp ATCC26695分别感染THP-1细胞6、12、24和48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡及LAIR-1蛋白的表达。应用Lipofectamine RNAiMAX转染3对LAIR-1siRNAs入单核细胞THP-1中,采用半定量RT-PCR及流式细胞术检测沉默效应,筛选出的较有效的一对siRNA再转染入单核细胞THP-1,48h后加入Hp培养24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Hp感染THP-1细胞6、12、24和48h后的细胞凋亡率分别为(84±1.77)%、(69.13±4.29)%、(48.3±3.37)%和(21.1±4.67)%,LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为14 934±178、14 369±244、12 259±523和7438±539;转染后48h较有效的siRNA对LAIR-1mRNA及蛋白沉默效率分别为(39.1±4.67)%和(38.4±3.18)%;将筛选出的siRNA转染细胞48h后,用Hp感染24h,流式细胞仪检测显示转染组与阴性对照组细胞凋亡率分别为(56.1±9.8)%和(36.9±3.2)%,转染后感染组与空白组LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为12 181±219和10 228±136。结论在Hp感染细胞THP-1 48h内,随着感染时间延长LAIR-1的表达及THP-1细胞凋亡率显著降低即LAIR-1siRNA能抑制LAIR-1的表达及THP-1细胞的凋亡。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 单核细胞 凋亡 白细胞相关免疫球蛋白样受体-1 分子干扰RNA
大鼠Rars基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定 预览
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作者 沈寅 符荣 +3 位作者 赵洪洋 王海均 王文良 张立志 《中国临床神经外科杂志》 2016年第5期290-293,共4页
目的构建针对大鼠Rars基因的siRNA重组腺病毒载体,并观察大鼠神经元细胞病毒转染前后目的蛋白表达量变化。方法将原代培养的大鼠神经元细胞随机分为观察组、阴性对照组及空白对照组。观察组细胞转染携带RarssiRNA序列的重组腺病毒,阴... 目的构建针对大鼠Rars基因的siRNA重组腺病毒载体,并观察大鼠神经元细胞病毒转染前后目的蛋白表达量变化。方法将原代培养的大鼠神经元细胞随机分为观察组、阴性对照组及空白对照组。观察组细胞转染携带RarssiRNA序列的重组腺病毒,阴性对照组细胞转染携带Scramble无意义序列的重组腺病毒,空白对照组不转染任何病毒。观察各对照组表达绿色荧光蛋白(GFP)的阳性细胞数,计算转染率,并检测转染前后Rars基因对应产物精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)蛋白的表达量,评价基因沉默效率。结果成功构建包含Rars基因干扰序列及Scramble序列的重组腺病毒,病毒滴度达10^10级。利用重组腺病毒感染大鼠神经元细胞48h后,绝大部分细胞表达GFP,转染率〉95%。含Rats干扰序列的病毒转染细胞可使ArgRS蛋白表达量显著降低(P〈0.01),沉默效率〉60%。含Scramble对照序列的病毒则不能产生明显的基因沉默效应。结论本实验所构建的siRNA重组腺病毒载体可有效沉默大鼠Rars基因,降低ArgRS蛋白表达。 展开更多
关键词 Rars基因 分子干扰RNA 重组腺病毒载体 精氨酰-TRNA合成酶
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共载siRNA与多西他赛的透明质酸修饰的还原敏感型纳米粒质量评价 预览 被引量:2
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作者 李亚楠 王珏 +2 位作者 李霁 沈雁 涂家生 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期429-436,共8页
研究和评价共载特异性抑制环氧化酶(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)和多西他赛(DTX)的透明质酸修饰二硫键交联的聚乙酰亚胺(PEIss)与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)形成的还原敏感型肿瘤靶向纳米粒(DTX/si COX-2/HRPSP NPs)的... 研究和评价共载特异性抑制环氧化酶(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)和多西他赛(DTX)的透明质酸修饰二硫键交联的聚乙酰亚胺(PEIss)与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)形成的还原敏感型肿瘤靶向纳米粒(DTX/si COX-2/HRPSP NPs)的体外质量。首先,通过溶剂挥发法制备DTX/si COX-2/HRPSP NPs,同时制备不含二硫键交联的透明质酸修饰的PEI-PLGA纳米粒(DTX/si COX-2/HPP NPs)作为对照。结果显示,两者NPs呈核壳圆形,粒径处于150~200 nm之间,体外释放实验表明,DTX/si COX-2/HRPSP NPs中的DTX在24 h内呈现缓释行为,且HRPSP NPs在p H 5.0中8 h时的累积释药量较p H 7.4中释药量高10%~25%,证明酸性条件更有利于纳米粒中DTX的释放,具有肿瘤微环境敏感性。体外细胞摄取实验表明,当N/P比为40/1,孵育时间在14~16 h时,纳米粒的摄取量最高,受体靶向抑制试验显示,HRPSP NPs能特异性结合CD44受体,具有肿瘤细胞靶向性。最后,通过Western blot方法测定不同纳米粒对细胞内Bcl-2,bax,caspase-3和COX-2蛋白的相对表达效率。结果显示,实验组与对照组相比,促凋亡蛋白bax和caspase-3显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2显著下降,COX-2蛋白的表达也相应降低,尤其以DTX/si COX-2/HRPSP NPs组最为明显(P〈0.01),实现了小分子药物和siRNA协同特异性治疗的目的。 展开更多
关键词 COX-2 分子干扰RNA 多西他赛 纳米粒 还原敏感 凋亡 聚乙酰亚胺 聚乳酸-羟基乙酸共聚物
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转录信号转导子与激活子3小分子干扰RNA增强乳腺癌对多柔比星的药物敏感性 被引量:2
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作者 李朵璐 周玉冰 +5 位作者 韩超 安琪 李峰 段振峰 张晓坚 阚全程 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期896-903,共8页
目的 进一步明确转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)信号通路在调节乳腺癌多柔比星耐药中的作用,促进转录信号转导子与激活子3信号通路抑制剂在逆转肿瘤耐药方面的临床应用。方法... 目的 进一步明确转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)信号通路在调节乳腺癌多柔比星耐药中的作用,促进转录信号转导子与激活子3信号通路抑制剂在逆转肿瘤耐药方面的临床应用。方法 首先在临床乳腺癌组织标本水平,应用Western blotting检测转录信号转导子与激活子3与活化磷酸化转录信号转导子与激活子3(phosphorylated STAT3,p STAT3)的表达水平,同时应用RT-PCR及Western blotting检测转录信号转导子与激活子3/磷酸化转录信号转导子与激活子3在乳腺癌敏感及耐药细胞中的表达水平;再应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术阻断转录信号转导子与激活子3表达,通过Western blotting方法检测转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA对转录信号转导子与激活子3表达的影响;最后分别应用细胞免疫荧光法和四甲基偶氮唑蓝法,检测阻断转录信号转导子与激活子3表达后,乳腺癌细胞的增殖活性及IC50值,从而观察转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA是否能够抑制乳腺癌细胞增殖,以及能否增强乳腺癌细胞对多柔比星的敏感性。结果 转录信号转导子与激活子3/磷酸化转录信号转导子与激活子3在肿瘤组织以及在多柔比星敏感及耐药的乳腺癌细胞中均呈现高水平表达,并且在多柔比星耐药乳腺癌细胞中的表达高于在相应敏感细胞中的表达水平。转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA明显下调转录信号转导子与激活子3蛋白表达,并抑制了敏感乳腺癌细胞的生长。转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA和多柔比星联合应用后,与单独应用多柔比星比较,使多柔比星耐药乳腺癌细胞的IC50降低了4倍,同时抑制了转录信号转导子与激活子3信号通路介导的抗凋亡蛋白的表达。结论 转录信号转导子与激活子3信号通路活化与乳腺癌发� 展开更多
关键词 转录信号转导子与激活子3 乳腺癌 耐药 多柔比星 分子干扰RNA
siRNA沉默mfn2表达对睾酮抑制大鼠血管平滑肌源性泡沫细胞形成的影响 预览
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作者 周炜 陈曼华 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第10期1323-1328,共6页
目的研究线粒体融合素2基因(mfn2)在睾酮抑制大鼠血管平滑肌源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法设计并化学合成靶向mfn2基因的小分子干扰RNA(siRNA),脂质体法将mfn2-siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),实时荧光定量PCR和免疫... 目的研究线粒体融合素2基因(mfn2)在睾酮抑制大鼠血管平滑肌源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法设计并化学合成靶向mfn2基因的小分子干扰RNA(siRNA),脂质体法将mfn2-siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测mfn2 mRNA及蛋白的表达。培养大鼠VSMCs,利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成泡沫细胞。实验分组:1)对照组;2)睾酮组;3)睾酮+阴性对照siRNA组;4)睾酮+mfn2-siRNA组。后3组预先加入睾酮和(或)siRNA预处理12 h,再与ox-LDL共培养48 h。油红O染色及酶荧光法检测细胞内脂质含量,免疫印迹法检测细胞内Mfn2、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达。结果转染mfn2-siRNA后12、24、36和48 h均能有效沉默mfn2 mRNA和蛋白的表达(P〈0.05)。与对照组比较,睾酮组及睾酮+阴性对照siRNA组脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P〈0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P〈0.05),CD36表达降低(P〈0.05),细胞泡沫化受到抑制。与睾酮+阴性对照siRNA组比较,睾酮+mfn2-siRNA组脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P〈0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P〈0.05),CD36表达增加(P〈0.05)。结论睾酮通过调节mfn2及其下游CD36和ABCA1表达,抑制ox-LDL诱导下VSMCs转变为泡沫细胞。 展开更多
关键词 分子干扰RNA 线粒体融合素2 睾酮 血管平滑肌细胞 泡沫细胞
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