期刊文献+
共找到39篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸提取效率的比较
1
作者 桂飞 杨伟伟 +3 位作者 俞利平 戴方伟 杜江涛 宋晓明 《实验动物科学》 2019年第1期31-35,共5页
目的比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比... 目的比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。结果对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度:(549.70±52.38) ng/μL,Ct值:(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度:(274.13±6.87) ng/μL,Ct值:(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度:(288.13±15.11) ng/μL,Ct值:(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度:(348.80±15.85) ng/μL,Ct值:(24.70±0.13)]操作最为方便。结论粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 病毒RNA提取 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR
小鼠肝炎病毒研究进展
2
作者 陈雪婷 刘佳 《解剖科学进展》 2018年第4期438-440,443共4页
小鼠肝炎病毒是世界范围内最常见的感染实验小鼠的病原体。小鼠肝炎病毒是一种冠状病毒,传染性强。未成年小鼠感染小鼠肝炎病毒常引起较高比例的动物死亡,成年小鼠感染小鼠肝炎病毒后多呈隐性感染,但引起一系列的免疫反应,还可引发肝炎... 小鼠肝炎病毒是世界范围内最常见的感染实验小鼠的病原体。小鼠肝炎病毒是一种冠状病毒,传染性强。未成年小鼠感染小鼠肝炎病毒常引起较高比例的动物死亡,成年小鼠感染小鼠肝炎病毒后多呈隐性感染,但引起一系列的免疫反应,还可引发肝炎、脑炎和肠炎等病变,从而严重影响实验结果。人们建立了多种方法检测血清中抗体或组织中病毒核酸诊断小鼠肝炎感染。小鼠种群感染小鼠肝炎病毒后可以通过重新引种或胚胎移植的方法清除病毒。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 冠状病毒 RNA MHV 病毒包膜
小鼠肝炎病毒诊断技术的研究进展 预览
3
作者 刘森权 《现代农业研究》 2018年第7期45-46,共2页
小鼠肝炎是由小鼠肝炎病毒导致的一种传染病,小鼠肝炎病毒自然感染是经口和呼吸道途径。目前国内外的诊断技术主要有很多,例如病理学诊断、RT-PCR、IFA、MFI等。本文旨在对MHV的诊断技术做出综述,分析现有检测技术优缺点,为今后研究MHV... 小鼠肝炎是由小鼠肝炎病毒导致的一种传染病,小鼠肝炎病毒自然感染是经口和呼吸道途径。目前国内外的诊断技术主要有很多,例如病理学诊断、RT-PCR、IFA、MFI等。本文旨在对MHV的诊断技术做出综述,分析现有检测技术优缺点,为今后研究MHV的诊断技术提供理论依据。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 病理学诊断 RT-PCR 免疫胶体金
在线阅读 下载PDF
检测小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技术及其应用 被引量:1
4
作者 赵婷婷 王会娟 +4 位作者 王蕾 谭毅 王胜 张道华 赖国旗 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1084-1091,共8页
建立一种能对MHV1、MHV3、JHM、A59 4种常见小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)进行分型检测的SNa Pshot新方法。根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果,设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物,提取MHV 4种常见毒株RNA,... 建立一种能对MHV1、MHV3、JHM、A59 4种常见小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)进行分型检测的SNa Pshot新方法。根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果,设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物,提取MHV 4种常见毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNa Pshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳,根据电泳结果分析毒株基因型。优化SNa Pshot分析条件,进行灵敏度、特异性分析。用ELISA法和SNa Pshot方法检测41例小鼠(Mus musculus)血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测。当T1-T4引物修饰的poly T的数量分别为0、3、10和15,其浓度比为4:6:5:10,引物大小分别为16 bp、19 bp、26 bp和31 bp时,SNa Phot分型检测MHV c DNA的最低浓度为1.25 mg/L,特异性为100%,与ELISA和T-克隆测序比较,其准确性为100%(41/41),阳性样本均为JHM毒株。实验结果说明,所建立的SNa Pshot检测方法能对MHV1、MHV3、JHM、A59进行分型检测,并且具有灵敏、特异、准确的优点。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 SNaPshot检测 酶联免疫吸附试验
小鼠肝炎病毒A59毒株结构蛋白基因的克隆
5
作者 陈晓娟 卫振 刘迪文 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第8期80-82,共3页
为获得小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)结构蛋白基因S1、S2、M及N,分别构建了4个重组质粒。依据GenBank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计4对特异性引物,以A59 RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N这3个结构... 为获得小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)结构蛋白基因S1、S2、M及N,分别构建了4个重组质粒。依据GenBank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计4对特异性引物,以A59 RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N这3个结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体后,双酶切鉴定正确后,送出测序确认。将测序结果与GenBank序列比对,确认扩增得到的S1、S2、M及N的核酸序列与其相似度分别为100%,99%,100%和99%。试验成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立RT-PCR快速检测试验小鼠MHV的方法提供生物材料。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 RT-PCR 克隆
ICR 小鼠自然感染小鼠肝炎病毒后抗原抗体的变化 预览 被引量:4
6
作者 刘香梅 赵维波 +3 位作者 袁文 王静 吴玉娥 张钰 《中国比较医学杂志》 2014年第7期37-40,共4页
目的:了解小鼠肝炎病毒( MHV)污染的设施内,ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法选择50只ICR小鼠,通过更换“脏垫料”的方式进行饲养,分别在实验第2,4,8,14,21,28,35,42,56和84天各剖杀动物5只,采集血清、盲肠... 目的:了解小鼠肝炎病毒( MHV)污染的设施内,ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法选择50只ICR小鼠,通过更换“脏垫料”的方式进行饲养,分别在实验第2,4,8,14,21,28,35,42,56和84天各剖杀动物5只,采集血清、盲肠内容物、粪便、肝脏以及肺脏检测抗原抗体分布情况。结果实验开始第2天,肺脏中检出小鼠肝炎病毒,检出率为20%(1/5),第4天开始,肝脏、肺部、盲肠以及粪便中均可检出小鼠肝炎病毒;84天后,肺脏、盲肠、粪便和肝脏阳性检出率降为0。实验第8天,血清中抗体检出阳性,阳性率为100%(5/5),直至第84天实验结束,抗体阳性率仍维持在100%(5/5)。结论血清学方法可作为日常监督主要诊断方法,而抗原检测方法只能应用于早期诊断。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 自然感染 抗原抗体
在线阅读 下载PDF
ELISA法检测野生和驯养长爪沙鼠携带病毒情况 预览 被引量:2
7
作者 段明丽 杜小燕 +3 位作者 王迎 路静 李胜利 王钜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期366-368,374共4页
目的检测野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的病毒携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据。方法制备兔抗长爪沙鼠IgG抗体并用辣根酶标记。分别采集银川市、呼和浩特周边地区的野生长爪沙鼠以及长期驯养的长爪沙鼠血清... 目的检测野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的病毒携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据。方法制备兔抗长爪沙鼠IgG抗体并用辣根酶标记。分别采集银川市、呼和浩特周边地区的野生长爪沙鼠以及长期驯养的长爪沙鼠血清,用间接EI。ISA进行流行性出血热、淋巴细胞脉络丛脑膜炎等人兽共患病毒及仙台病毒、鼠痘病毒、小鼠肝炎病毒等啮齿类动物烈性传染病病毒抗体检测,并计算检出率。结果兔抗沙鼠的IgG抗体ELISA法效价1:64000以上,满足血清学检测要求。银川地区野生长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体阳性(6.O%),而呼和浩特和驯养的则未检出;但呼和浩特地区的野生长爪沙鼠有淋巴脉络丛脑膜炎病毒抗体检出(13.3%),而银川和驯养长爪沙鼠则没有。仙台病毒抗体的检出率为呼和浩特地区的最低(40.0%),宁夏和驯养动物相等(53.3%)。结论两地区野生长爪沙鼠和人工驯养长爪沙鼠病毒抗体的检出种类和检出率有所不同,在制定北京市地方标准时要综合考虑。 展开更多
关键词 长爪沙鼠 汉坦病毒 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 仙台病毒 鼠痘病毒 小鼠肝炎病毒
在线阅读 下载PDF
长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用 预览 被引量:3
8
作者 王吉 卫礼 +5 位作者 付瑞 李晓波 冯育芳 王淑菁 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 2013年第2期58-63,共6页
目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特... 目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHVRT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHVRNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1pg/μL,可检测病毒最小滴度为10^-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT.PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 反转录聚合酶链式反应 长爪沙鼠 小鼠
在线阅读 下载PDF
小鼠肝炎病毒核酸快速检测方法的建立和应用 被引量:5
9
作者 熊炜 蒋静 +5 位作者 张强 刘俊平 魏晓锋 黄忠荣 李健 胡建华 《实验动物科学》 2013年第4期1-5,共5页
为满足口岸对入境噬齿类动物快速检疫的需要,建立小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV)快速核酸检测方法.方法 使用引物和TaqMan荧光探针设计软件,针对MHV保守基因设计引物和探针,建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR方法检测噬齿类... 为满足口岸对入境噬齿类动物快速检疫的需要,建立小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV)快速核酸检测方法.方法 使用引物和TaqMan荧光探针设计软件,针对MHV保守基因设计引物和探针,建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR方法检测噬齿类动物临床样本中MHV的方法.结果 本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV方法具有良好的特异性和敏感性,通过将建立的方法应用于MHV阳性鼠临床样品的检测,证实两种MHV核酸检测方法具有良好的稳定性.结论 本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV的方法,适用于动物粪便、尿液等易于获得样本的检测. 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 RT-PCR REAL-TIME RT-PCR
长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与初步应用 预览 被引量:3
10
作者 卫礼 王吉 +4 位作者 付瑞 李晓波 王淑菁 岳秉飞 贺争鸣 《实验动物与比较医学》 CAS 2013年第3期204-209,共6页
目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA检测方法。方法培养DBT细胞,接种MHV-V1、MHV-V3、MHV-JHM病毒,制备DBT正常抗原和MHV-V1、MHV-V3、MHV-JHM三价特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定... 目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA检测方法。方法培养DBT细胞,接种MHV-V1、MHV-V3、MHV-JHM病毒,制备DBT正常抗原和MHV-V1、MHV-V3、MHV-JHM三价特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4gg/ml、5gg/ml和1:5000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为7.9%和6.8%,批间平均变异系数分别为12.7%和11.2%;检测灵敏度为1:1280;与小鼠仙台病毒(sV)、小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。可用于沙鼠MHV抗体的检测。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 ELISA(MHV) 长爪沙鼠
在线阅读 下载PDF
五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究 预览
11
作者 王吉 卫礼 +3 位作者 付瑞 李晓波 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 2012年第12期4-7,共4页
目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、... 目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P〈0.05),最高为16倍,差异极显著(P〈0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P〈0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。 展开更多
关键词 ELISA检测试剂盒 比较研究 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 小鼠肝炎病毒 仙台病毒 病毒 小鼠细小病毒
在线阅读 下载PDF
小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
12
作者 周洁 赵莉 +1 位作者 胡建华 高诚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期841-843,共3页
目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋... 目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系。并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定。结果:共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为κ型。经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应。结论:成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 重组N蛋白 单克隆抗体
小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立 预览 被引量:4
13
作者 胡晓燕 佟巍 +2 位作者 刘先菊 张丽芳 刘云波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期96-100,共5页
本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金... 本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金颗粒、5.05μg为最低稳定抗体量(稳定0.5 mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640μg/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800μg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 min快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 小鼠肝炎病毒抗体 胶体金 胶体金免疫层析法
在线阅读 下载PDF
Construction and Genetic Analysis of Murine Hepatitis Virus Strain A59 Nsp16 Temperature Sensitive Mutant and the Revertant Virus 预览
14
作者 Guo-hui Chang Bao-jun Luo +5 位作者 Pin Lu Lei Lin Xiao-yan Wu Jing Li Yi Hu Qing-yu Zhu 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2011年第1期 19-29,共11页
Coronaviruses (CoVs ) 通常与被联系呼吸并且伤寒感染并且长作为家畜和同伴动物的重要病原体被认出了。鼠标肝炎病毒(MHV ) 是为 Coronavirus 复制和致病的一个广泛地学习的模型系统。在这研究,我们创造了 MHV-A59 温度敏感(ts ) 用 r... Coronaviruses (CoVs ) 通常与被联系呼吸并且伤寒感染并且长作为家畜和同伴动物的重要病原体被认出了。鼠标肝炎病毒(MHV ) 是为 Coronavirus 复制和致病的一个广泛地学习的模型系统。在这研究,我们创造了 MHV-A59 温度敏感(ts ) 用 recombinant 牛痘颠倒遗传系统的变异的 Wu-ts18 (cd ) 。在 17C1-1 房间的病毒复制试金证明构造 Wu-ts18 (cd ) 的匾显型和复制描述与报导 ts 异种 Wu-ts18 难区分。然后我们有教养在非容许的温度的 ts 异种 Wu-ts18 (cd ) 39.5 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 温度敏感 突变体 遗传分析 逆转 模型系统 重组痘苗病毒 反向遗传学
在线阅读 下载PDF
小鼠肝炎病毒N蛋白基因在杆状病毒中的表达 预览 被引量:2
15
作者 周洁 宋宇 +2 位作者 姜浩 胡建华 高诚 《实验动物与比较医学》 CAS 2010年第5期 313-317,共5页
目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠肝炎病毒N基因. 方法 根据GenBank发表的小鼠肝炎病毒A59株N基因序列(AY700211),设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出N基因的ORF,将目的 片段克隆入pFastBacHTa中,构建重组转移载体p... 目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠肝炎病毒N基因. 方法 根据GenBank发表的小鼠肝炎病毒A59株N基因序列(AY700211),设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出N基因的ORF,将目的 片段克隆入pFastBacHTa中,构建重组转移载体pFastBHa-N.将重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组穿梭载体Bacmid-N.通过脂质体将其转染昆虫细胞Sf9. 结果 获得了重组杆状病毒rBN,并通过Westernblot和IFA分析表明证实N蛋白在昆虫细胞中获得正确表达,且表达产物具有抗原性. 结论 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠肝炎病毒N蛋白,为进一步进行建立诊断学方法的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 N基因 杆状病毒表达
在线阅读 下载PDF
ELISA方法检测抗体中两种显色系统的比较研究 预览 被引量:1
16
作者 王吉 卫礼 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《实验动物与比较医学》 CAS 2010年第5期 368-371,共4页
目的 用TMB(3,3,5,5-四甲基联苯胺)替代OPD(邻苯二胺)作为ELISA实验中的显色剂,以减少OPD对实验操作人员的危害及对环境的污染. 方法 依据国家标准ELISA法进行操作,对小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA法的OPD和TMB两种显色系统的稳定... 目的 用TMB(3,3,5,5-四甲基联苯胺)替代OPD(邻苯二胺)作为ELISA实验中的显色剂,以减少OPD对实验操作人员的危害及对环境的污染. 方法 依据国家标准ELISA法进行操作,对小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA法的OPD和TMB两种显色系统的稳定性、特异性、敏感性及重复性进行比较. 结果 TMB系统较OPD系统:TMB比OPD稳定,相对偏差(15.3%)小于OPD(17.7%);TMB系统特异抗原孔P/N值高于OPD特异抗原孔P/N值,差异显著(P〈0.05);酶的使用浓度TMB是OPD的0.25倍,检测灵敏度是OPD的2倍;使用TMB,正常抗原和特异抗原孔批内和批间变异系数分别为3.9%、4.7%和13.0%、11.3%:而OPD分别为2.7%、4.5%和11.2%、9.5%. 结论 TMB较OPD稳定性、重复性好,敏感性、特异性强,可以替代OPD作为MHV抗体ELISA法的显色剂. 展开更多
关键词 ELISA 小鼠肝炎病毒 TMB OPD
在线阅读 下载PDF
小鼠肝炎病毒逆转录环介导等温扩增检测技术的建立 预览 被引量:6
17
作者 袁文 刘忠华 +2 位作者 张钰 刘香梅 黄韧 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2009年第5期 354-359,I0007,I0008,共8页
目的建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用。方法针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MH... 目的建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用。方法针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MHV基因组RNA为模板,进行RT-LAMP反应。扩增产物通过浊度、SYBR green I荧光染料显色及电泳三种方法观察结果。同时,用限制性内切酶AluI对扩增产物进行酶切鉴定。进行RT-LAMP特异性和敏感性试验。最后用建立的RT-LAMP方法检测55份小鼠临床样本。结果RT-LAMP技术简单快速,等温条件下(65℃)一个小时内即可完成反应。酶切结果证明RT-LAMP产物正确。该技术具有很高的特异性和敏感性,可检测到的MHV RNA最低浓度为0.1 pg/μL,比逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)灵敏10倍。临床样本检测结果显示,与RT-PCR比较RT-LAMP方法的敏感性和特异性分别为100%和83.3%。结论RT-LAMP技术是一种快速、简便诊断方法,该方法检测特异性强、敏感性高,可以成为快速准确检测MHV的有效手段。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 逆转录环介导等温扩增 逆转录聚合酶链式反应
在线阅读 下载PDF
小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立 预览 被引量:1
18
作者 周艳 胡建华 +1 位作者 高诚 周洁 《中国比较医学杂志》 2008年第11期 39-43,共5页
目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方... 目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。结果确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1∶200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1∶3000。S/P≥0.386则为阳性,S/P〈0.308为阴性,两者之间为可疑。经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好。与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%。用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性。结论本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 重组N蛋白 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析 预览 被引量:1
19
作者 周艳 胡建华 +1 位作者 高诚 王宗耀 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期 265-269,共5页
目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS... 目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-NS,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达。对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的NP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 N基因 克隆 原核表达
在线阅读 下载PDF
减毒沙门氏菌介导的小鼠肝炎病毒S1基因DNA疫苗的免疫特性分析 预览
20
作者 焦红梅 焦新安 +4 位作者 殷月兰 潘志明 孟松树 王禹 蒋金金 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 131-135,共5页
根据GenBank公开序列白行设计一对引物,通过RT-PCR扩增出小鼠肝炎病毒的全长S1基因,并将其插入真核表达质粒pVAX1中,构建出重组真核表达质粒pVAX1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测出S1蛋白的体外表达。将重组质... 根据GenBank公开序列白行设计一对引物,通过RT-PCR扩增出小鼠肝炎病毒的全长S1基因,并将其插入真核表达质粒pVAX1中,构建出重组真核表达质粒pVAX1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测出S1蛋白的体外表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建出运送DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)。分别以5×10^8CFU、1×10^9CFU、2×10^9CFU剂量的重组菌口服接种6周龄BALB/c小鼠,试验结果表明,重组菌对小鼠具有良好的安全性。以1×10^9CFU剂量的重组菌口服免疫小鼠,抗体检测结果显示,在二免后两周和三免后两周,重组菌免疫组的血清抗体水平与SL7207(pVAX1)空载体免疫组间分别存在显著性差异(P〈0.05)和极显著性差异(P〈0.01)。在三免后两周重组菌免疫组出现了较高水平的肠黏膜抗体。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 S1基因 减毒沙门氏菌 安全性 免疫特性
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈