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含线粒体促凋亡蛋白基因人膀胱移行上皮特异性表达载体的构建及表达 被引量:1
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作者 廖贵益 曾甫清 +3 位作者 岳相辉 汪良 卢银平 朱朝辉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期 1170-1171,共2页
目的 构建含线粒体促凋亡蛋白基因(Smac)、人尿路斑块蛋白Ⅰb(Up Ⅰb)启动子调控的真核表达载体,检测其在膀胱癌细胞的表达。方法 MluI+XbaI分别双酶切含SmaC的真核表达质粒pcDNA3.1-Smac和UpⅠb启动子片段,T4DNA连接酶环化目... 目的 构建含线粒体促凋亡蛋白基因(Smac)、人尿路斑块蛋白Ⅰb(Up Ⅰb)启动子调控的真核表达载体,检测其在膀胱癌细胞的表达。方法 MluI+XbaI分别双酶切含SmaC的真核表达质粒pcDNA3.1-Smac和UpⅠb启动子片段,T4DNA连接酶环化目的片段构建新质粒,酶切凝胶电泳和测序鉴定。新质粒转染12孔BIU-87细胞,逆转录,聚合酶链反应(RT-PCR)检测6孔的Smac mRAN表达,免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素(SP)法检测另6孔的Smac蛋白表达。结果 pcDNA3.1-Smac中人巨细胞病毒启动子(CMV)和T7噬菌体启动子(T7)被成功替换为upⅠb启动子,构建新质粒pcDNA3-UpⅠb promoter-Smac;转染后BIU-87细胞Smac mRNA表达增强2.1倍、71%癌细胞中Smae蛋白表达增强(P<0.05)。结论 UpⅠb启动子调控含Smae的真核表达载体构建成功,且能在膀胱癌细胞中有效表达。 展开更多
关键词 线粒体促凋亡蛋白 尿路斑块蛋白 启动子 真核表达载体
重组pcDNA3-Uplb promoter-Smac质粒转染靶向膀胱癌的促凋亡效应 预览 被引量:1
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作者 廖贵益 曾甫清 +1 位作者 岳相辉 陆鹏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第17期 966-969,共4页
目的:探讨转染新构建的UpIb启动子调控携Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter—Smac对膀胱癌细胞的促凋亡效用一方法:用脂质体将质粒转染到膀胱癌BIU-87细胞系中,2dh后用RT—PCR检测Smac的表达,以低剂量丝裂霉素C诱导凋亡... 目的:探讨转染新构建的UpIb启动子调控携Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter—Smac对膀胱癌细胞的促凋亡效用一方法:用脂质体将质粒转染到膀胱癌BIU-87细胞系中,2dh后用RT—PCR检测Smac的表达,以低剂量丝裂霉素C诱导凋亡,利用倒置光学显微镜、Wrighs—Gimesa染色、DNA凝胶电泳技术、TUNEL-荧光标记技术、流式细胞术检测凋亡。结果:丝裂霉素C处理的各组在倒置光学显微镜和Wrighs—Gimesa染色油镜下可见到典型的凋亡形态学改变,DNA凝胶电泳呈特征性的梯形条带jTUNEL-荧光标记技术及流式细胞术检测转染pcDNA3-UpIb promoter—Smac组凋亡率显著高于单用丝裂霉素C组。结论:转染pcDNA3-Up Ibpromoter—Smac能够通过提高Smac的表达而有效促进丝裂霉素C诱导的膀胱癌细胞凋亡,提示该质粒配合凋亡诱导药物可能成为膀胱癌新的靶向基因治疗手段. 展开更多
关键词 SMAC基因 尿路斑块蛋白 膀胱肿瘤 细胞凋亡
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尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性 预览 被引量:1
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作者 廖贵益 曾甫清 +2 位作者 岳相辉 杜岳锋 汪良 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第4期 258-261,共4页
目的:研究尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性.方法:采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测膀胱癌细胞株BIU-87和其他多种非膀胱癌细胞株在转染含尿路斑块蛋白Ib启动子和Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter-Sma... 目的:研究尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达的膀胱癌特异性及活性.方法:采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测膀胱癌细胞株BIU-87和其他多种非膀胱癌细胞株在转染含尿路斑块蛋白Ib启动子和Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac前后Smac mRNA和蛋白质的表达变化.结果:BIU-87在转染后Smac mRNA的表达比转染前增强约2.1倍,Smac蛋白表达阳性细胞率也由转染前的约25.6%增加为转染后的约70.5%;非膀胱癌细胞株转染前后SmacmRNA及蛋白的表达没有显著性变化.结论:尿路斑块蛋白Ib启动子启动Smac表达具有膀胱癌靶向性及相当启动活性,为膀胱癌的靶向基因治疗研究奠定了基础. 展开更多
关键词 尿路斑块蛋白 线粒体促凋亡蛋白 膀胱癌 膀胱肿瘤
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中国人尿路斑块蛋白Ib组织特异性及其启动子的克隆与鉴定 预览
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作者 曾甫清 廖贵益 +2 位作者 岳相辉 卢银平 董继华 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第6期 522-524,共3页
目的:研究中国人尿路斑块蛋白Ib的组织特异性并克隆与鉴定其启动子.方法:RT-PCR检测32例膀胱癌、16例正常膀胱粘膜、15例正常小肠粘膜、16例正常食道粘膜、19例正常肾实质、20例正常肝实质、8例正常皮肤及8例正常心肌标本中尿路斑块蛋... 目的:研究中国人尿路斑块蛋白Ib的组织特异性并克隆与鉴定其启动子.方法:RT-PCR检测32例膀胱癌、16例正常膀胱粘膜、15例正常小肠粘膜、16例正常食道粘膜、19例正常肾实质、20例正常肝实质、8例正常皮肤及8例正常心肌标本中尿路斑块蛋白Ib的表达.以人正常膀胱粘膜为材料提取基因组DNA,克隆尿路斑块蛋白Ib启动子片段,并凝胶电泳和测序鉴定.结果:所有正常膀胱粘膜标本、16例分化Ⅰ级膀胱癌中有15例(93.8%)、9例分化Ⅱ级膀胱癌中有7例(77.8%)、7例分化Ⅲ级膀胱癌中有4例(57.1%)检测到尿路斑块蛋白Ib表达,而正常食道粘膜、小肠粘膜、肾实质、肝实质、皮肤、心肌标本均未检测到尿路斑块蛋白Ib表达.中国人尿路斑块蛋白Ib234bp的启动子被克隆并完成鉴定.结论:中国人尿路斑块蛋白Ib具有高度尿路移行上皮特异性,加上其启动子短小,尿路斑块蛋白Ib启动子非常适合膀胱癌的靶向基因治疗研究.我们成功克隆出中国人尿路斑块蛋白Ib启动子片段,为后续研究奠定了基础. 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 尿路斑块蛋白 克隆 基因表达
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携Smac基因人尿路斑块蛋白Ib启动子调控的真核表达载体的构建 预览
5
作者 廖贵益 曾甫清 +2 位作者 岳相辉 汪良 卢银平 《华中医学杂志》 2006年第1期 21-22,F0004,共3页
目的 构建携带Smac基因、人尿路斑块蛋白Ib(Uroplakin Ib,UpIb)启动子(promoter)调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体。方法 切除含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1-Smac内部的人巨细胞病毒和T7启动子序列,替换为在膀胱移行上... 目的 构建携带Smac基因、人尿路斑块蛋白Ib(Uroplakin Ib,UpIb)启动子(promoter)调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体。方法 切除含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1-Smac内部的人巨细胞病毒和T7启动子序列,替换为在膀胱移行上皮特异表达的UpIb的启动子。构建的质粒经双酶切凝胶电泳及测序鉴定。结果 成功构建携带Smac基因人UpUIb启动子凋控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体pcDNA3-UpIb promoter-Smac质粒。结论 新构建的载体为膀胱癌的靶向基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 尿路斑块蛋白Ib SMAC基因 启动子 真核表达载体
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