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中性粒细胞趋化因子3可影响神经干细胞的存活和增殖 预览
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作者 孙耐 王大力 +5 位作者 张君 曹金明 仇福成 刘惠苗 李冬 顾平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第1期118-123,共6页
背景:课题组前期研究首次发现骨髓基质细胞可以分泌中性粒细胞趋化因子3,且在骨髓基质细胞调控神经干细胞分化为神经元的过程中中性粒细胞趋化因子3的表达上调1.5倍,提示中性粒细胞趋化因子3可能具有促进神经干细胞增殖与分化的作用。目... 背景:课题组前期研究首次发现骨髓基质细胞可以分泌中性粒细胞趋化因子3,且在骨髓基质细胞调控神经干细胞分化为神经元的过程中中性粒细胞趋化因子3的表达上调1.5倍,提示中性粒细胞趋化因子3可能具有促进神经干细胞增殖与分化的作用。目的:观察中性粒细胞趋化因子3对新生大鼠海马来源神经干细胞存活和增殖的影响。方法:体外分离培养新生SD大鼠海马神经干细胞,将培养3代的神经干细胞分为对照组和中性粒细胞趋化因子3组,通过MTS法检测细胞存活率,细胞生长曲线及活/死细胞染色观察细胞存活及增殖情况,通过免疫荧光染色法及Real-time PCR检测神经干细胞中Nestin的表达来观察神经干细胞增殖情况。结果与结论:①随着中性粒细胞趋化因子3质量浓度从1μg/L增加至20μg/L,神经干细胞存活率逐渐增加,当质量浓度为10μg/L时,神经干细胞存活率最高且细胞活力最好,再增至20μg/L时,神经干细胞存活率无显著增加;②中性粒细胞趋化因子3组Nestin染色阳性率明显高于对照组(P<0.05);③中性粒细胞趋化因子3组的Nestin mRNA表达量明显高于对照组(P<0.05);④结果表明,中性粒细胞趋化因子3对海马来源神经干细胞具有促进存活和增殖的作用。 展开更多
关键词 中性粒细胞趋化因子3 海马 神经干细胞 细胞存活 细胞增殖 巢蛋白
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依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内Nestin表达的影响
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作者 李璠 梁晓艳 +4 位作者 贾文姬 宋咏丽 袁云 李娟娟 吴春云 《解剖学研究》 CAS 2019年第3期161-166,共6页
目的观察Nestin在永久性脑缺血大鼠脑内的变化及依达拉奉干预的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)SD大鼠模型,应用抗Nestin和抗Nestin/GFAP抗体进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果缺血后脑组织有大量Nestin阳性表达,阳性... 目的观察Nestin在永久性脑缺血大鼠脑内的变化及依达拉奉干预的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)SD大鼠模型,应用抗Nestin和抗Nestin/GFAP抗体进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果缺血后脑组织有大量Nestin阳性表达,阳性细胞主要分布于缺血侧侧脑室的室管膜下区(SVZ)、梗死灶周围大脑皮质和纹状体。细胞呈星状多突起,形似星形胶质细胞,且脑缺血后的大部分Nestin阳性细胞与星形胶质细胞标记物GFAP有共表达。缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数和免疫阳性表达强度于脑缺血后3 d达到高峰;梗死灶周围大脑皮质和纹状体区阳性细胞数和阳性表达强度分别于缺血后3 d和1周达到高峰;部分细胞聚集于梗死灶边缘,形成一个明显的梗死灶边缘带。经依达拉奉干预后,Nestin阳性细胞计数和表达强度与盐水组比较均升高(P<0.05),尤其在缺血治疗后3 d和1周(P<0.01)。结论脑缺血后,SVZ以及梗塞灶周围大脑皮质和纹状体区域大鼠Nestin阳性细胞数量增多、表达增强;经依达拉奉干预治疗后,Nestin阳性细胞的表达进一步增强,提示依达拉奉治疗可能促进脑缺血后神经干细胞的增生和分化,促进损伤组织的修复,发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 脑缺血 依达拉奉 巢蛋白 大鼠
胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化 预览
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作者 刘振东 王瑞 +1 位作者 杨建东 王静成 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4605-4609,共5页
背景:骨髓间充质干细胞作为中胚层来源的多能干细胞,除了能够分化为间充质系细胞如成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞外,还具有神经分化潜能,具有广阔的应用前景。目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元... 背景:骨髓间充质干细胞作为中胚层来源的多能干细胞,除了能够分化为间充质系细胞如成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞外,还具有神经分化潜能,具有广阔的应用前景。目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的可行性。方法:选用健康SD大鼠,采用全骨髓贴壁法体外培养、纯化骨髓间充质干细胞,经流式细胞仪进行细胞表型鉴定。取生长状态良好的第4代骨髓间充质干细胞进行实验分组:对照组不加任何诱导剂;实验组培养液内加入胶质细胞源性营养因子,调整质量浓度分别为20,50,100μg/L,倒置相差显微镜连续观察细胞生长情况及形态变化。诱导6,12,24,48,72h,采用免疫组化法检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达。结果与结论:①原代提取获得的骨髓间充质干细胞形态均一性较好,流式细胞仪检测结果为CD44,CD90呈强阳性表达,CD34,CD45阳性表达率很低;②经胶质细胞源性营养因子诱导后,细胞胞体逐渐向胞核收缩,变形细胞逐渐增多,出现双极、多极和锥形等典型的神经元样细胞形态,细胞边缘出现突起,且与邻近细胞突起逐渐相互连接;③胶质细胞源性营养因子诱导6h后出现巢蛋白表达阳性,24h后达顶峰,50,100μg/L胶质细胞源性营养因子组巢蛋白表达显著高于20μg/L胶质细胞源性营养因子组。胶质细胞源性营养因子诱导12h后检测到神经元特异性烯醇化酶表达阳性,且表达强度随时间延长逐渐增加,48h后达顶峰,50,100μg/L胶质细胞源性营养因子组巢蛋白表达显著高于20μg/L胶质细胞源性营养因子组。对照组未见明显神经元样细胞的形态变化及特异性标志的阳性表达;④结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞可通过全骨髓贴壁法在体外进行原代提取分离及传代培养,经胶质细胞源性营养因子诱导后具有向神经元样细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 胶质细胞源性神经营养因子 细胞分化 神经细胞 巢蛋白 神经元特异性烯醇化酶 国家自然科学基金
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巢蛋白、微管相关蛋白与精神分裂症相关性研究
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作者 周文竹 徐洪常 +1 位作者 周翔 刘铭 《国际精神病学杂志》 2019年第5期790-792,共3页
目的探讨巢蛋白、微管相关蛋白与精神分裂症相关性。方法选择2018年3月~2019年3月我院收治的60例首发精神分裂症患者为病例组,同期于社区体检的健康自愿者随机60例为对照组。所有人员均行巢蛋白、微管相关蛋白检测,比较两组的检测结果... 目的探讨巢蛋白、微管相关蛋白与精神分裂症相关性。方法选择2018年3月~2019年3月我院收治的60例首发精神分裂症患者为病例组,同期于社区体检的健康自愿者随机60例为对照组。所有人员均行巢蛋白、微管相关蛋白检测,比较两组的检测结果。结果病例组巢蛋白和微管相关蛋白水平明显低于对照组,P<0.01;患者经6周治疗后,精神分裂症阳性与阴性症状量表(PANSS)评分较治疗前明显下降,P<0.01。治疗后巢蛋白、微管相关蛋白水平存在一定的升高,但对比治疗前,差异不显著,P>0.05。经Pearson相关性分析提示,巢蛋白、微管相关蛋白水平与精神分裂症的症状程度呈负相关。结论巢蛋白、微管相关蛋白可作为精神分裂症早期干预的一项重要生化指标。 展开更多
关键词 巢蛋白 微管相关蛋白 精神分裂症
EPO对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠海马nestin表达的影响 预览
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作者 李秀红 吴文萍 +3 位作者 何禹锋 陈秋和 谢华浩 陈燕 《现代医药卫生》 2019年第14期2089-2091,共3页
目的探讨外源性促红细胞生成素(EPO)对缺血缺氧性脑损伤(IHBD)新生大鼠海马nestin表达的影响。方法选择7d龄SD大鼠22只,将其随机分为4组:对照组(n=5)、假手术组(n=5)、IHBD组(n=6)和EPO组(n=6)。对IHBD组和EPO组动物实施左侧颈总动脉永... 目的探讨外源性促红细胞生成素(EPO)对缺血缺氧性脑损伤(IHBD)新生大鼠海马nestin表达的影响。方法选择7d龄SD大鼠22只,将其随机分为4组:对照组(n=5)、假手术组(n=5)、IHBD组(n=6)和EPO组(n=6)。对IHBD组和EPO组动物实施左侧颈总动脉永久性结扎术,并于术后2h将其放置在自制缺氧舱内,连续缺氧2h。假手术组仅在术中分离左侧颈总动脉而不予结扎和缺氧处理,对照组不予任何处理。EPO组于造模完成后即刻,24、48h按1000U/kg剂量腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO),其余各组注射等量生理盐水。利用苏木精-伊红(HE)染色观察海马神经元形态学变化,利用免疫组织化学方法检测海马nestin的阳性表达水平。结果与对照组和假手术组比较,IHBD组大鼠海马神经元出现不同程度的变性、坏死,nestin阳性表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与IHBD组比较,EPO组大鼠海马病理改变明显减轻,nestin阳性表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论早期给予rhEPO可促进IHBD新生大鼠海马nestin阳性表达,从而促进新生大鼠IHBD后的修复,其机制可能与促进脑内源性神经干细胞的增殖有关。 展开更多
关键词 促红细胞生成素 缺血缺氧 巢蛋白 大鼠 Sprague-Dawley
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Nestin在乳腺癌中的表达及其与他莫昔芬治疗疗效和预后的关系
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作者 黎胤谋 李靖 彭世军 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2019年第4期205-210,共6页
目的探讨神经巢蛋白(Nestin)在乳腺癌中的表达及其与他莫昔芬治疗疗效和预后的关系。方法收集2009年3月至2013年3月湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院乳腺外科收治的82例乳腺癌根治术后使用他莫昔芬治疗的乳腺癌患者,选取冻存于液氮... 目的探讨神经巢蛋白(Nestin)在乳腺癌中的表达及其与他莫昔芬治疗疗效和预后的关系。方法收集2009年3月至2013年3月湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院乳腺外科收治的82例乳腺癌根治术后使用他莫昔芬治疗的乳腺癌患者,选取冻存于液氮中配对的癌组织和癌旁组织。荧光实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组织化学检测乳腺癌组织中Nestin mRNA含量及Nestin表达情况,分析其与患者临床病理特征的关系。选取乳腺癌细胞株MCF-7,采用小干扰RNA(siRNA)沉默MCF-7细胞中的Nestin,观察其对他莫昔芬敏感性的影响。Western blotting检测Nestin与上皮-间质转化(EMT)的关系。结果RT-PCR结果提示乳腺癌组织中Nestin mRNA含量是癌旁组织的3.87倍(6.34±1.56∶1.64±0.52,t=26.140,P<0.001)。乳腺癌组织中Nestin阳性表达率为75.61%(62/82),显著高于癌旁组织的24.39%(20/82),差异有统计学意义(χ2=43.024,P<0.001)。Nestin的表达与乳腺癌患者淋巴管是否浸润(χ2=7.499,P=0.006)和淋巴结转移(χ2=6.770,P=0.034)有关,而与患者年龄(χ2=3.242,P=0.072)、肿瘤大小(χ2=2.358,P=0.308)、组织学分级(χ2=0.294,P=0.863)、导管浸润状态(χ2=0.180,P=0.671)及是否三阴性乳腺癌(χ2=0.142,P=0.706)无关。Cox比例风险模型分析结果提示,Nestin的表达(HR=1.982,P<0.001;HR=1.537,P<0.001)、淋巴管浸润(HR=2.502,P<0.001;HR=1.715,P<0.001)和淋巴结转移(HR=1.818,P<0.001;HR=1.446,P<0.001)是乳腺癌患者的无进展生存期和总生存期的独立预后风险因子。在乳腺癌细胞MCF-7中,Nestin敲除后MCF-7对他莫昔芬的IC50值从(48.05±2.22)μmol/L降到(35.59±2.92)μmol/L,差异有统计学意义(t=6.489,P=0.003)。Nestin沉默显著上调MCF-7细胞中的上皮钙黏着蛋白(7.21±1.15∶1.02±0.01,t=6.654,P=0.024),同时下调间质指标波形蛋白(0.17±0.08∶1.01±0.02,t=25.015,P<0.001)。结论Nestin在乳腺癌中过表达,与他莫昔芬疗效降低相关。Nestin可能是乳腺癌预后的一个新 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 他莫昔芬 巢蛋白 生物标记 肿瘤
表皮黑素细胞、真皮干细胞及毛囊干细胞等标志分子在获得性色素痣组织上的表达特点
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作者 黄斐然 王大光 +2 位作者 王重阳 朱丰 刘屹球 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1007-1013,共7页
目的检测获得性色素痣组织中表皮黑素细胞标志分子E钙黏素(E-cadherin)和盘状结构域受体1(DDR-1)、真皮干细胞标志分子神经生长因子受体-75(NGFRp-75)和巢蛋白(nestin)、毛囊干细胞标志分子CD34和角蛋白19(K19)的表达特点并探讨其临床... 目的检测获得性色素痣组织中表皮黑素细胞标志分子E钙黏素(E-cadherin)和盘状结构域受体1(DDR-1)、真皮干细胞标志分子神经生长因子受体-75(NGFRp-75)和巢蛋白(nestin)、毛囊干细胞标志分子CD34和角蛋白19(K19)的表达特点并探讨其临床意义。方法选择96例不同部位和不同发生年龄的皮内痣与交界痣标本,免疫组织化学方法检测标本中E-cadherin、DDR-1、NGFRp-75、nestin、CD34和K19的表达并分析其特点。结果不同年龄、不同部位的色素痣中均高表达表皮黑素细胞标志分子和真皮干细胞标志分子,不同发病年龄与不同身体部位间差异无统计学意义。毛囊干细胞标志分子:CD34在有毛区色素痣中有表达,在无毛区色素痣中呈阴性表达;K19在色素痣中呈阴性表达。NGFRp-75、nestin和CD34的阳性表达率较表皮来源的标志分子明显低。皮内痣组织切片上位置较浅的痣细胞E-cadherin、DDR-1和NGFRp-75表达较强,而位置较深的痣细胞表达较弱甚至缺如。结论获得性色素痣的痣细胞可能是多细胞来源,但可能最多的还是来源于表皮黑素细胞。 展开更多
关键词 色素痣 E钙黏素 盘状结构域受体-1 神经生长因子受体-75 巢蛋白 CD34 蛋白19 免疫组织化学
沙苑子总黄酮对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化潜能的影响 预览
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作者 沈骅睿 张旗 +4 位作者 王立胜 敖亮 胡晓梅 汪国友 李婷 《中国中医急症》 2019年第10期1726-1729,共4页
目的验证沙苑子总黄酮成分是否具有促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的作用。方法培养获得SD大鼠的BMSCs并鉴定。选择沙苑子总黄酮并同单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)比较,观察其刺激体外培养SD大鼠的BMSCs后,细胞形态学变化... 目的验证沙苑子总黄酮成分是否具有促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的作用。方法培养获得SD大鼠的BMSCs并鉴定。选择沙苑子总黄酮并同单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)比较,观察其刺激体外培养SD大鼠的BMSCs后,细胞形态学变化,免疫细胞化学检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,及Western blotting检测巢蛋白(Nestin)的表达。结果沙苑子总黄酮刺激后BMSCs的细胞形态出现有类似神经元细胞样改变;免疫细胞化学检测到沙苑子总黄酮刺激后的部分细胞有NSE的表达;Western blotting检测到沙苑子总黄酮刺激后的细胞样本有Nestin的表达。结论沙苑子总黄酮能促进体外培养BMSCs向神经细胞分化的作用。 展开更多
关键词 沙苑子总黄酮 骨髓间充质干细胞 神经元细胞 巢蛋白 神经元特异性烯醇化酶
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地卓西平马来酸盐腹腔注射对大脑中动脉闭塞大鼠神经功能的影响及其机制 预览 被引量:1
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作者 马英 刘星 +3 位作者 杨春壮 王子轩 雷瀛 王林林 《山东医药》 2018年第27期39-42,共4页
目的观察地卓西平马来酸盐(MK-801)腹腔注射对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠神经功能的影响,并探讨其可能机制。方法 108只大鼠随机分为药物组、模型组、对照组各36只。药物组、模型组均制备MCAO模型,对照组只做手术暴露颈部动脉,结扎C... 目的观察地卓西平马来酸盐(MK-801)腹腔注射对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠神经功能的影响,并探讨其可能机制。方法 108只大鼠随机分为药物组、模型组、对照组各36只。药物组、模型组均制备MCAO模型,对照组只做手术暴露颈部动脉,结扎CCA,但不予线栓。制模后大鼠清醒后腹腔注射MK-801(用0.9%生理盐水配置成浓度为0.06 mg/m L的溶液),1次/d,给药14 d;模型组和对照组腹腔注射等量生理盐水。采用神经功能评分评价大鼠神经功能,ELISA法检测大脑皮质神经生长因子(NGF),免疫组化法检测大脑皮质巢蛋白(NES)。结果药物组制模3、7、14 d神经功能评分分别为(2.25±1.06)、(2.08±0.90)、(1.75±0.62)分,模型组分别为(2.58±0.90)、(2.67±0.89)、(2.58±0.79)分,对照组分别为0、0、0分,药物组、模型组各时点分别与对照组比较,药物组14 d与模型组比较,P均〈0.05。药物组制模3、7、14 d大脑皮质NGF OD值分别为0.068±0.007、0.083±0.021、0.081±0.019,模型组分别为0.043±0.008、0.059±0.007、0.035±0.003,对照组分别为0.062±0.004、0.061±0.002、0.060±0.003,药物组制模3、7、14 d及模型组制模3、14 d分别与对照组比较,药物组各时点分别与模型组比较,P均〈0.05。药物组制模3、7、14 d的NES IOD值分别为0.601±0.123、0.692±0.139、0.719±0.093,模型组分别为0.553±0.116、0.507±0.090、0.526±0.106,对照组分别为0.291±0.050、0.321±0.113、0.341±0.090,药物组、模型组各时点分别与对照组比较,药物组各时点分别与模型组比较,P均〈0.05。结论MK-801可改善MCAO大鼠神经功能,其机制可能是通过增加大脑皮质内NGF、NES水平来实现。 展开更多
关键词 地卓西平马来酸盐 大脑中动脉闭塞 神经功能 神经生长因子 巢蛋白
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膀胱肿瘤患者尿液中NID2和HOXA9基因的甲基化水平研究 预览
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作者 郭帅 赵晓俊 +2 位作者 周政 浦金贤 江弢 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2018年第5期283-287,共5页
目的通过对膀胱肿瘤患者尿液中NID2和HOXA9基因的甲基化水平的研究,探索诊断原发性膀胱肿瘤的新方法。方法应用甲基化特异性PCR技术检测70例膀胱肿瘤患者(实验组)和60例泌尿系其他疾病患者(对照组)尿液中NID2和HOXA9基因的甲基化... 目的通过对膀胱肿瘤患者尿液中NID2和HOXA9基因的甲基化水平的研究,探索诊断原发性膀胱肿瘤的新方法。方法应用甲基化特异性PCR技术检测70例膀胱肿瘤患者(实验组)和60例泌尿系其他疾病患者(对照组)尿液中NID2和HOXA9基因的甲基化水平,并进行分析比较。结果膀胱肿瘤患者尿液标本NID2甲基化率检测的灵敏度为7d%,特异度为85%;HOXA9甲基化率检测的灵敏度为8d%,特异度为93%;双指标联合检测的灵敏度为89%,特异度为80%。实验组与对照组相比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。双基因甲基化联合检测受试者工作曲线下面积为0.92(0.87~0.97),其诊断价值优于单一基因甲基化检测。结论膀胱肿瘤患者尿液双基因甲基化联合检测可能成为诊断原发性膀胱肿瘤的一种有效方法。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 巢蛋白 同源盒 甲基化
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氧糖剥夺-再灌注星型胶质细胞内皮素-1过表达对神经干/祖细胞增殖的影响 预览
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作者 程骁 杨家杰 钟金淑子 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期116-121,共6页
目的探讨氧糖剥夺-再灌注(OGD-R)星型胶质细胞内皮素(ET)-1过表达对神经干/祖细胞(NSPCs)增殖的影响。方法构建阴性对照星型胶质细胞(C6-Mock)和ET-1过表达的星形胶质细胞(C6-ET-1)OGD-R模型,并构建星型胶质细胞与NSPCs Trans... 目的探讨氧糖剥夺-再灌注(OGD-R)星型胶质细胞内皮素(ET)-1过表达对神经干/祖细胞(NSPCs)增殖的影响。方法构建阴性对照星型胶质细胞(C6-Mock)和ET-1过表达的星形胶质细胞(C6-ET-1)OGD-R模型,并构建星型胶质细胞与NSPCs Transwell共培养体系。对星型胶质细胞及原代NSPCs进行形态观察及鉴定;将细胞分为以下4组进行共培养:C6-Mock+NSPCs组,OGD-R+C6-Mock+NSPCs组,C6-ET-1+NSPCs组,OGD-R+C6-ET-1+NSPCs组,共培养0、24、48、72 h,分析各组NSPCs神经球直径。结果 C6-Mock及C6-ET-1均呈现Ⅰ型星型胶质细胞的纤维状形态,神经胶质酸性纤维蛋白(GFAP)表达于这两种细胞的胞质中。原代NSPCs的巢蛋白(nestin)染色阳性。共培养后的48 h及72 h,OGD-R+C6-Mock+NSPCs组神经球的直径明显大于C6-Mock+NSPCs组的直径,OGD-R+C6-ET-1+NSPCs组神经球的直径明显大于C6-ET-1+NSPCs组的直径,同时OGD-R+C6-ET-1+NSPCs组神经球的直径明显大于OGD-R+C6-Mock+NSPCs组的直径,差异均有统计学意义(均为P〈0.05)。结论 OGD-R星型胶质细胞促进NSPCs的增殖,且ET-1过表达进一步促进了NSPCs的增殖。 展开更多
关键词 星型胶质细胞 神经干/祖细胞(NSPCs) 内皮素(ET)-1 氧糖剥夺-再灌注(OGD-R) 巢蛋白 增殖 Transwell共培养 神经球直径
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神经干细胞提取与培养方法的比较研究 预览 被引量:2
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作者 吴增 李媛 +2 位作者 靳晓飞 周晓红 高维娟 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第5期729-734,共6页
目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方... 目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果①胎龄14d胎鼠较新生24h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。②采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。③以1.0×109·L-1密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。④悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。⑤半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。⑥原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。⑦14d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×109·L-1的密度接种于25cm2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3d加液1~1.5mL,每6~7d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞提取 悬浮培养法:无血清培养基 细胞活性 巢蛋白
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巢蛋白在人胚胎肾中的表达与分布
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作者 董丽萍 伍赶球 《长沙医学院学报》 2018年第2期20-22,共3页
目的:通过研究不同时期人胚胎肾中巢蛋白的表达,探讨巢蛋白在肾发育过程中的作用。方法:取12例3~8个月人胚胎肾组织,常规石蜡切片,采用免疫组织化学法检测巢蛋白在胚胎肾中的表达及分布。结果:3~8个月人胚胎肾组织均有巢蛋白的表达。巢... 目的:通过研究不同时期人胚胎肾中巢蛋白的表达,探讨巢蛋白在肾发育过程中的作用。方法:取12例3~8个月人胚胎肾组织,常规石蜡切片,采用免疫组织化学法检测巢蛋白在胚胎肾中的表达及分布。结果:3~8个月人胚胎肾组织均有巢蛋白的表达。巢蛋白阳性细胞主要分布于肾小球、肾小囊壁层和肾间质内的微血管及毛细血管壁上,且其表达量随胎龄的增加而减少,而在近端小管、远端小管的上皮中未发现阳性细胞。结论:正常人胚肾中有巢蛋白的表达,随着胎龄的增加,巢蛋白表达量下降,提示巢蛋白可能参与胚胎肾的发育。 展开更多
关键词 胚胎 巢蛋白 免疫组织化学
脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖与Bcl-2的相关性研究 预览
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作者 董龙家 丁家秀 +2 位作者 史学形 谭伟 李青 《贵州医药》 CAS 2018年第3期259-262,共4页
目的 探讨脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖与抗凋亡因子Bcl-2基因表达的相关性。方法 成年健康Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)和脊髓损伤组(SCI组),采用动脉瘤夹压迫法建立脊髓损伤模型,根据BBB评分标准评价运动功能结果... 目的 探讨脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖与抗凋亡因子Bcl-2基因表达的相关性。方法 成年健康Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)和脊髓损伤组(SCI组),采用动脉瘤夹压迫法建立脊髓损伤模型,根据BBB评分标准评价运动功能结果。脊髓损伤组分别在术后1d、3d、7d、14d、21d不同时期,选取脊髓损伤组织切片并将其分组,分别行Nestin、Bcl-2免疫组化染色,统计分析脊髓损伤后不同时期损伤脊髓组织中Nestin及Bcl-2的表达情况,然后对Nestin及Bcl-2表达情况进行相关性分析。结果 30只实验Wistar大鼠均进入结果分析,sham组中有极少量Nestin的表达;SCI组在损伤后第1天见Nestin表达量较少,第3天时开始逐渐增加,第7天后能够见到Nestin表达量基本达到峰值,主要位于室管膜周围及灰质中,第14天时表达逐渐减少,第21天后Nestin阳性表达明显减少。SCI后各组均可见Bcl-2阳性表达的细胞,1d时表达就比较明显,脊髓灰、白质均有分布,3d时表达阳性细胞达到高峰,7d时阳性细胞开始减少,在损伤后14d、21d处于较低水平。统计学分析大鼠脊髓损伤后Nestin、Bcl-2阳性细胞表达数量,两者的表达具有正相关性。结论大鼠脊髓损伤后的一段时间内Bcl-2、内源性干细胞均有表达,并且Bcl-2的增殖可能促进内源性干细胞的反应性增殖。 展开更多
关键词 脊髓损伤 内源性神经干细胞 巢蛋白 细胞凋亡
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化瘀通络灸对血管性痴呆大鼠延迟回忆及海马神经新生的影响 被引量:1
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作者 樊吟秋 崔竟成 +1 位作者 杨骏 王频 《针刺研究》 CSCD 北大核心 2018年第3期133-139,共7页
目的:观察化瘀通络灸对血管性痴呆(VD)大鼠神经干细胞(NSCs)、内皮祖细胞(EPCs)移植后延迟回忆及海马巢蛋白(Nestin)、双皮质素(DCX)表达的影响,并探索其与脑内神经新生的关系。方法:Wistar大鼠采用Morris水迷宫筛选后随机... 目的:观察化瘀通络灸对血管性痴呆(VD)大鼠神经干细胞(NSCs)、内皮祖细胞(EPCs)移植后延迟回忆及海马巢蛋白(Nestin)、双皮质素(DCX)表达的影响,并探索其与脑内神经新生的关系。方法:Wistar大鼠采用Morris水迷宫筛选后随机分为假手术组、VD模型组、共植体艾灸组、共植体空白组。采用改良的缺血再灌注后结扎剪断法复制VD模型,NSCs、EPCs细胞培养后进行共植体构建,共植体艾灸组及共植体空白组大鼠于模型鉴定后3d进行共植体右侧侧脑室移植。共植体艾灸组于移植后3d进行化瘀通络灸治疗,取“百会”“大椎”“神庭”悬灸20min,每天1次,7次为1个疗程,共3个疗程,每疗程结束后休息1d。运用Morris水迷宫测试各组大鼠延迟回忆成绩,免疫荧光双标激光共聚焦检测大鼠右侧海马Nestin、DCX的表达。结果:Morris水迷宫结果显示,治疗前VD模型组、共植体空白组、共植体艾灸组逃避潜伏期均较假手术组延长,120s内穿越原平台次数减少(P〈0.008)。治疗后除VD模型组大鼠逃避潜伏期较治疗前无明显变化外(P〉0.05),假手术组、共植体艾灸组、共植体空白组大鼠逃避潜伏期均较治疗前缩短(P〈0.05);且共植体艾灸组大鼠120s内穿越原平台次数较治疗前增多(P〈0.05)。与假手术组相比,造模后大鼠逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少(P〈0.008);共植体艾灸组大鼠逃避潜伏期较VD模型组缩短,穿越原平台次数较VD模型组增多(P〈0.008);与共植体空白组相比,共植体艾灸组逃避潜伏期缩短(P〈0.008)。免疫荧光结果显示,共植体艾灸组治疗1、3个疗程后海马区Nestin的阳性表达多于共植体空白组(P〈0.05);Nestin、DCX分别在治疗1、2个疗程后表达最多(P〈0.05)。结论:化瘀通络灸可提高VD大鼠NSCs、EPCs移植后的延迟回忆,并通过上调海马区Nestin、DCX的表达,促进脑� 展开更多
关键词 艾灸 血管性痴呆 海马 延迟回忆 巢蛋白 双皮质素
Lingo-1介导Rho-ROCK通路调控神经干细胞的分化 预览 被引量:1
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作者 彭志明 赵晓阳 +1 位作者 朱凯 万勇 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第29期4669-4674,共6页
背景:Lingo-1在神经元轴突再生、髓鞘形成等过程中具有重要作用,但其是否参与对神经干细胞分化的调控以及具体机制尚无定论。目的:观察干预神经干细胞Lingo-1表达水平对其分化方向的影响,并探索其可能机制。方法:从新生大鼠脑组织分离... 背景:Lingo-1在神经元轴突再生、髓鞘形成等过程中具有重要作用,但其是否参与对神经干细胞分化的调控以及具体机制尚无定论。目的:观察干预神经干细胞Lingo-1表达水平对其分化方向的影响,并探索其可能机制。方法:从新生大鼠脑组织分离培养神经干细胞,经神经干细胞标志物检测鉴定后分别使用Lingo-1 shRNA慢病毒载体及阴性对照病毒转染神经干细胞,再用成神经元诱导分化培养基培养7 d,随后运用免疫荧光、免疫印迹技术检测神经元相关标志物表达,并检测RhoA、ROCK1蛋白表达水平。结果与结论:①从新生大鼠脑组织所分离培养的神经干细胞呈浮球状生长,高表达神经干细胞特异性标志物Nestin、Sox2与Pax6,符合神经干细胞特征;②慢病毒载体转染可在mRNA及蛋白质水平实现对神经干细胞Lingo-1的干扰,经诱导培养7 d后Lingo-1敲低的神经干细胞分化为神经元的比例显著增加,且伴随着RhoA、ROCK1蛋白表达水平的下降;③结果表明,Lingo-1参与对神经干细胞分化方向的调控,抑制Lingo-1可促进其向神经元方向分化,该过程可能与调控Rho-ROCK通路有关。 展开更多
关键词 神经干细胞 巢蛋白 β-微管蛋白 微管相关蛋白2 Rho/ROCK通路 Lingo-1蛋白 细胞分化 干细胞 国家自然科学基金 神经干细胞 细胞分化 神经元 组织工程
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Nestin表达及高危型HPV感染与宫颈病变相关性的研究 预览
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作者 王小敏 王小燕 +2 位作者 朱春萍 冯春宇 余志英 《赣南医学院学报》 2018年第10期1002-1005,1029共5页
目的: 研究不同宫颈病变中巢蛋白(Nestin) 的表达与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的关系及临床意义。 方法: 选取2015年5月-2017年12月宫颈病变患者300例,以病理诊断为金标准,分为慢性宫颈炎45例,CINⅠ74例,CINⅡ65例,CIN... 目的: 研究不同宫颈病变中巢蛋白(Nestin) 的表达与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的关系及临床意义。 方法: 选取2015年5月-2017年12月宫颈病变患者300例,以病理诊断为金标准,分为慢性宫颈炎45例,CINⅠ74例,CINⅡ65例,CINⅢ68例,宫颈癌48例,采用PCR-反向点杂交法检测HPV基因型别, 同时对其中150例(20例慢性宫颈炎,25例CINⅠ, 27例CINⅡ,30例CINⅢ,宫颈癌48例)用免疫组化法检测Nestin蛋白表达情况,分析Nestin蛋白表达与HR-HPV之间的关系及其与宫颈病变的相关性。 结果: ①慢性宫颈炎组HR-HPV阳性率33.33%,明显低于CINⅠ71.62%、CINⅡ80.00%、CINⅢ92.65%、宫颈癌95.83%,差异有统计学意义( P <0.01)。HR-HPV阳性率随着慢性宫颈炎、CINⅠ-Ⅱ、CINⅢ宫颈癌的病理组织学诊断升级而升高,差异有统计学意义( P 〈0.05)。②Nestin蛋白阳性表达率在慢性宫颈炎、CINⅠ-Ⅲ及宫颈癌各组分别为25.00%、28.00%、51.85%、63.33%%及83.33%,呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义( P <0.01)。③除慢性宫颈炎组外,CINⅠ-Ⅲ及宫颈癌各组Nestin表达与HR-HPV感染具有相关性( P 〈0.05)。 结论: 宫颈癌及癌前病变中Nestin表达及HR-HPV感染具有相关性,提示两者联合检测对评估宫颈病变预后及早期防治宫颈癌具有重要意义。 展开更多
关键词 巢蛋白 人乳头瘤病毒 宫颈炎 宫颈上皮内瘤变 宫颈癌
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促红细胞生成素在缺氧缺血性脑病大鼠模型中的神经保护作用 预览 被引量:5
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作者 段淼 曹云涛 王旭芹 《中国比较医学杂志》 北大核心 2018年第1期28-32,共5页
目的制作新生大鼠缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)模型,研究重组人促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的脑保护作用和新生大鼠HIE肠道菌群多样性的变化,为临床应用EPO治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供实验依据... 目的制作新生大鼠缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)模型,研究重组人促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的脑保护作用和新生大鼠HIE肠道菌群多样性的变化,为临床应用EPO治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供实验依据。方法选择7日龄SD大鼠制作HIE模型,随机分为HIE模型组、EPO实验组、对照组,免疫组织化学法观察巢蛋白(nestin)的表达变化,同时取各组大鼠粪便,用16s rRNA测序的方法观察肠道菌群的变化。结果各组大鼠同一时间点nestin的表达水平差异有显著性(P〈0.05),对照组最低,EPO实验组最高,HIE模型组其次。HIE模型组的香农-威纳指数(Shannon-Wiener index)较对照组呈降低趋势。结论外源性给予EPO可以促进HIE新生大鼠模型的神经细胞生长,具有一定的保护作用,同时大鼠的肠道菌群多样性有所改变。 展开更多
关键词 缺氧缺血性脑病 大鼠 促红细胞生成素 巢蛋白 肠道菌群
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乳腺癌中Nestin与CD133的表达与上皮间质转化的关系 预览
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作者 黄思念 程美红 +2 位作者 谭云山 姚俊霞 靖红艳 《海南医学》 CAS 2017年第19期3099-3102,共4页
目的探讨乳腺癌中巢蛋白(Nestin)与CD133的表达与上皮间质转化(EMT)的关系。方法收集复旦大学附属中山医院青浦分院2010年1月至2013年6月67例乳腺癌病理标本,使用免疫组织化学染色,观察Nestin、CD133与E-cadherin在乳腺癌中的表达... 目的探讨乳腺癌中巢蛋白(Nestin)与CD133的表达与上皮间质转化(EMT)的关系。方法收集复旦大学附属中山医院青浦分院2010年1月至2013年6月67例乳腺癌病理标本,使用免疫组织化学染色,观察Nestin、CD133与E-cadherin在乳腺癌中的表达。结果 Nestin的总体阳性率为73.13%(49/67),CD133的总体阳性率为40.30%(27/67)。Nestin在三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌中的阳性率分别为90.48%(19/21)和65.22%(30/46),差异无统计学意义(P〉0.05),而CD133的分别为71.43%(15/21)和26.09%(12/46),差异有统计学意义(P〈0.01)。Nestin和CD133在E-cadherin阴性组中的阳性率为95.83%(23/24)和58.33%(14/24),高于在E-cadherin阳性组中的60.47%(26/43)和30.23%(13/43),差异均有显著统计学意义(P〈0.01)。结论 Nestin能够用以特异性检测乳腺癌干细胞的表达,CD133能够用以特异性检测三阴性乳腺癌中干细胞的表达,乳腺癌组织表达干细胞标记可能与肿瘤细胞发生EMT有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 三阴性乳腺癌 巢蛋白 CD133 上皮间质转化
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Correlation between receptor-interacting protein 140 expression and directed differentiation of human embryonic stem cells into neural stem cells 预览
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作者 Zhu-ran Zhao Wei-dong Yu +7 位作者 Cheng Shi Rong Liang Xi Chen Xiao Feng Xue Zhang Qing Mu Huan Shen Jing-zhu Guo 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第1期118-124,共7页
Overexpression of receptor-interacting protein 140(RIP140) promotes neuronal differentiation of N2 a cells via extracellular regulated kinase 1/2(ERK1/2) signaling.However,involvement of RIP140 in human neural differe... Overexpression of receptor-interacting protein 140(RIP140) promotes neuronal differentiation of N2 a cells via extracellular regulated kinase 1/2(ERK1/2) signaling.However,involvement of RIP140 in human neural differentiation remains unclear.We found both RIP140 and ERK1/2 expression increased during neural differentiation of H1 human embryonic stem cells.Moreover,RIP140 negatively correlated with stem cell markers Oct4 and Sox2 during early stages of neural differentiation,and positively correlated with the neural stem cell marker Nestin during later stages.Thus,ERK1/2 signaling may provide the molecular mechanism by which RIP140 takes part in neural differentiation to eventually affect the number of neurons produced. 展开更多
关键词 神经干细胞 定向分化 相互作用 人胚胎干细胞 巢蛋白 细胞外信号调节激酶 受体 人类胚胎干细胞
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