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NLRP3对FFA诱导Kupffer细胞释放促炎性因子IL-1β的影响 预览
1
作者 罗生才 何堃 龚建平 《现代医药卫生》 2019年第1期21-24,27共5页
目的观察敲除小鼠Nod样受体蛋白3(NLRP3)基因对游离脂肪酸(FFA)激活Kupffer细胞(KCs)中NLRP3炎性小体及促炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响,探讨FFA导致促炎性因子IL-1β分泌的机制。方法选取野生型C57BL/6小鼠及NLRP3-/-小鼠... 目的观察敲除小鼠Nod样受体蛋白3(NLRP3)基因对游离脂肪酸(FFA)激活Kupffer细胞(KCs)中NLRP3炎性小体及促炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响,探讨FFA导致促炎性因子IL-1β分泌的机制。方法选取野生型C57BL/6小鼠及NLRP3-/-小鼠,采用梯度离心联合选择性贴壁法分离各组小鼠KCs,将分离培养48h的KCs以3×10^6的密度接种于激光共聚焦培养皿及培养瓶中,并将KCs随机分为2组(对照组和FFA组)。对照组不给予任何刺激,FFA组给予棕榈酸(PA)刺激细胞,水平为0.32mM,处理时间为8h。采用光镜及透射电镜分别观察KCs的形态变化,逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测NLRP3炎性小体、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)及天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)的mRNA表达变化,采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)技术检测NLRP3炎性小体、ASC及Caspase-1的蛋白表达水平,采用免疫荧光技术检测NLRP3及Caspase-1在KCs中的表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平。结果光镜下见FFA组与对照组KCs形态上无显著差异,透射电镜下可见FFA刺激后KCs细胞质中吞噬了大量脂滴。野生型小鼠KCs中FFA组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而NLRP3-/-小鼠KCs中对照组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达量与FFA组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。野生型小鼠FFA组KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平较对照组显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05);而敲除小鼠NLRP3基因可显著抑制IL-1β与IL-18水平的增高,2组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论FFA可激活野生型小鼠KCs中NLRP3炎性小体,促进KCs分泌促炎性因子IL-1β;敲除小鼠NLRP3基因后可显著抑制FFA诱导KCs中NLRP3炎性小体的激活及促炎性因子IL-1β的分泌;NLRP3可作为KCs相关炎性疾� 展开更多
关键词 库普弗细胞 游离脂肪酸 NLRP3炎性小体 促炎性因子
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DMN诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布 预览
2
作者 李学文 苏万玲 +4 位作者 刘旭 肖玉佳 郑美龙 曹志伟 张静 《中国医学创新》 CAS 2019年第13期31-34,共4页
目的:探讨二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布及其意义。方法:选取40 只Wistar 雄性大鼠连续4 周腹腔注射10 g/L DMN 制备肝纤维化模型。采用随机数字表法分为模型组(n=20)与正常组(n=20),两组均应用DMN ... 目的:探讨二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布及其意义。方法:选取40 只Wistar 雄性大鼠连续4 周腹腔注射10 g/L DMN 制备肝纤维化模型。采用随机数字表法分为模型组(n=20)与正常组(n=20),两组均应用DMN 进行肝纤维化造模。采用Reiman 法测定大鼠第4 周和第7 周ALT、AST 水平,免疫组化法测定两组大鼠库普弗细胞与肝星状细胞标志物ED1 与α-SMA 分布情况,收集并分析两组肝/体质量比、肝组织病理变化、胶原纤维面密度。结果:模型组第4 周和第7 周ALT、AST、面密度水平均高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组第4 周和第7 周总蛋白(TP)、肝/体质量比水平均低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组第4 周与第7 周肝/体质量组内比较,差异均无统计学意义(P=0.11);模型组第4 周和第7 周光镜下可见ED1、α-SMA 阳性细胞数量较多,主要分布于增生的纤维组织及纤维间隔弥漫部位。结论:DMN 可导致大鼠肝功能障碍及弥漫肝硬化。大鼠肝纤维化模型的库普弗细胞可激活、活化肝星状细胞。 展开更多
关键词 二甲基亚硝胺 库普弗细胞 肝星状细胞 肝纤维化 大鼠
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肝脏缺血激活PI3K/p-Akt2信号通路并促进库普弗细胞向M1型巨噬细胞转化
3
作者 华东旭 王明明 +3 位作者 马国华 张少鹏 吴枭 汪瀚 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1177-1182,共6页
目的:研究肝脏库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)在肝脏缺血及再灌注过程中的转化转归及其在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法:制作小鼠肝脏不同缺血时间的模型,用流式细胞术分析缺血后KCs数量,体外培养中用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分... 目的:研究肝脏库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)在肝脏缺血及再灌注过程中的转化转归及其在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法:制作小鼠肝脏不同缺血时间的模型,用流式细胞术分析缺血后KCs数量,体外培养中用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析炎性细胞因子的表达及巨噬细胞表面标记物的表达水平,免疫印迹(Western blot)技术分析磷脂酰肌醇3-激酶/磷酸化蛋白激酶B-2(PI3K/p-Akt2)信号通路的表达情况。使用qPCR技术分析Akt2抑制剂对KCs炎性细胞因子的表达及其表面标记物表达的影响,另外小鼠肝脏缺血后再灌注6 h,通过肝脏切片HE染色及血清丙氨酸氨基转移酶(alanine amino-transferase,ALT)水平等指标分析肝脏损伤情况。结果:肝脏缺血后KCs数量减少,而存活细胞在体外培养中,脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)刺激后促炎性细胞因子的表达明显高于对照组(P <0.05),且M1型巨噬细胞的表面标记物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平也高于对照组(P <0.05),其细胞内的PI3K/p-Akt2通路被激活,促进KCs向M1型巨噬细胞转化,而Akt2抑制剂可阻断细胞转化过程,减轻肝脏缺血再灌注损伤。结论:小鼠肝脏缺血能激活KCs内PI3K/p-Akt2信号通路,从而在炎性刺激下促进其向M1型巨噬细胞转化,并加重肝脏缺血再灌注损伤。 展开更多
关键词 库普弗细胞 肝脏 缺血再灌注损伤 巨噬细胞 转化
盐酸右美托咪定对脂多糖诱导的库普弗细胞炎性反应的影响
4
作者 林慧 伍东焕 +1 位作者 林冠文 欧阳碧山 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期667-670,共4页
目的研究盐酸右美托咪定(Dex)对脂多糖(LPS)诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响。方法用雄性SD大鼠分离和培养肝库普弗细胞,将细胞随机分为6组:正常组、模型组、联合组、对照组和低、高2个剂量实验组。正常组常规培养,模型组细胞... 目的研究盐酸右美托咪定(Dex)对脂多糖(LPS)诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响。方法用雄性SD大鼠分离和培养肝库普弗细胞,将细胞随机分为6组:正常组、模型组、联合组、对照组和低、高2个剂量实验组。正常组常规培养,模型组细胞用1μg·m L-1LPS刺激3 h,低、高2个剂量实验组以模型细胞加0. 01,1μmol·L-1Dex培养24 h;联合组以模型细胞加1μmol·L-1Dex和100μmol·L-1育亨宾(α2肾上腺素能受体拮抗药)培养24 h;对照组以模型细胞加100μmol·L-1育亨宾培养24 h。用MTT法测定库普弗细胞存活率,用酶联免疫吸附法法测定库普弗细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果处置后,正常组、模型组、低与高2个剂量实验组、联合组和对照组的库普弗细胞存活率分别是(100. 00±0. 00)%,(56. 35±4. 21)%,(64. 78±4. 37)%,(83. 84±5. 16)%,(57. 03±4. 09)%和(54. 58±3. 95)%;这6组的TNF-α分别是(1. 19±0. 16),(57. 36±7. 23),(48. 27±5. 58),(7. 64±0. 92),(56. 98±7. 05)和(58. 03±7. 34) ng·m L-1;这6组的IL-6分别是(47. 38±6. 05),(289. 49±27. 83),(231. 17±22. 58),(85. 35±8. 23),(287. 96±26. 45)和(291. 43±28. 04) pg·m L-1。模型组正常组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P <0. 05);低、高2个剂量实验组与模型组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P <0. 05);联合组和对照组与低、高2个剂量实验组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 Dex能剂量依赖性地降低LPS诱导的库普弗细胞活性,抑制库普弗细胞引发的氧化应激损伤和炎性反应,其作用可能与激动α2肾上腺能受体有关,育亨宾对Dex疗效有拮抗作用。 展开更多
关键词 盐酸右美托咪定 脂多糖 库普弗细胞 氧化应激 炎性反应
二甲双胍对糖尿病小鼠肝库普弗细胞炎症反应的抑制作用和吞噬功能的改善作用 预览
5
作者 王睿斌 赵艳杰 +1 位作者 宋清坤 盛敏佳 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期39-44,218共7页
目的:观察二甲双胍对糖尿病小鼠肝库普弗细胞(KCs)炎症反应的抑制作用,探讨其对肝KCs吞噬功能的改善作用,阐明二甲双胍对糖尿病小鼠肝KCs的保护机制。方法:16只C57BLKS/Jdb/db小鼠分为糖尿病组和糖尿病加二甲双胍组,16只C57BLKS/Jdb/m... 目的:观察二甲双胍对糖尿病小鼠肝库普弗细胞(KCs)炎症反应的抑制作用,探讨其对肝KCs吞噬功能的改善作用,阐明二甲双胍对糖尿病小鼠肝KCs的保护机制。方法:16只C57BLKS/Jdb/db小鼠分为糖尿病组和糖尿病加二甲双胍组,16只C57BLKS/Jdb/m小鼠分为非糖尿病组和非糖尿病加二甲双胍组,每组8只。分别取各组小鼠肝KCs体外培养,透射电镜观察KCs超微结构,ELISA法定量测定KCs中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(INF-γ)水平,Western blotting法检测KCs中细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达水平,Transwell小室法检测KCs的中性粒细胞趋化功能,倒置显微镜下观察KCs吞噬能力。结果:糖尿病小鼠KCs中线粒体和粗面内质网(RER)的数量减少,RER扩张,线粒体肿胀及脂滴增多。与非糖尿病组比较,糖尿病组小鼠KCs中IL-6、TNF-α、INF-γ水平和ICAM-1表达水平明显升高(P<0.05),KCs的中性粒细胞趋化能力增强(P<0.05),吞噬能力减弱(P<0.05)。与糖尿病组比较,糖尿病加二甲双胍组小鼠KCs中IL-6、TNF-α、INF-γ水平和ICAM-1表达水平明显降低(P<0.05),KCs的中性粒细胞趋化能力减弱(P<0.05),吞噬能力增强(P<0.05)。结论:二甲双胍可以抑制糖尿病小鼠肝KCs的炎症反应并改善其吞噬功能,对肝KCs起到保护作用。 展开更多
关键词 二甲双胍 糖尿病 实验性 库普弗细胞 炎症反应
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盐酸右美托咪定对脂多糖诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响 预览
6
作者 林慧 伍东 +1 位作者 欧阳碧山 钟有清 《广西医科大学学报》 CAS 2019年第8期1242-1245,共4页
目的:探究α2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定(Dex)对脂多糖(LPS)诱导的库普弗细胞(KCs)的保护机制。方法:分离和培养KCs,实验分为正常对照组(C组)、LPS损伤组(L组)及LPS+Dex组(L+D组)。L+D组中用Dex预处理24 h,LPS组不予药物预处理。... 目的:探究α2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定(Dex)对脂多糖(LPS)诱导的库普弗细胞(KCs)的保护机制。方法:分离和培养KCs,实验分为正常对照组(C组)、LPS损伤组(L组)及LPS+Dex组(L+D组)。L+D组中用Dex预处理24 h,LPS组不予药物预处理。LPS作用24 h建立细胞氧化应激损伤模型,应用MTT比色法检测LPS诱导的KCs存活率;测定细胞上清液中丙二醛(MDA)、白介素(IL)-6、IL-12和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western blotting法检测超氧化物歧化酶(SOD)和核因子2相关因子2(NRf2)的蛋白表达水平。结果:L+D组KCs存活率及SOD和NRf2表达水平均显著高于L组,KCs上清液中MDA、IL-6和TNF-α水平显著低于L组(均P<0.05)。结论:Dex可通过上调NRf2表达、减轻氧化应激反应和炎症反应而保护LPS诱导的KCs。 展开更多
关键词 盐酸右美托咪定 氧化应激 炎性反应 库普弗细胞
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肝脏巨噬细胞在组织稳态和肝脏疾病中的功能探讨
7
作者 刘梦琪 臧奕 李佳 《药学进展》 CAS 2018年第10期723-736,共14页
巨噬细胞在肝脏中扮演关键角色,对于维持组织稳态和确保机体对肝损伤的迅速应答至关重要。对肝脏巨噬细胞的异质亚群划分,有利于更加全面深入地理解其功能。库普弗细胞是一种驻留在肝脏中的、可自我维持的巨噬细胞群体,区别于单核细胞... 巨噬细胞在肝脏中扮演关键角色,对于维持组织稳态和确保机体对肝损伤的迅速应答至关重要。对肝脏巨噬细胞的异质亚群划分,有利于更加全面深入地理解其功能。库普弗细胞是一种驻留在肝脏中的、可自我维持的巨噬细胞群体,区别于单核细胞衍生的巨噬细胞,后者仅在损伤发生时迅速聚集至肝脏。特定的环境信号决定肝脏巨噬细胞的进一步极化表型和功能。不同亚群的肝脏巨噬细胞既可以促进肝脏在损伤或感染后组织完整性的恢复,也会导致如肝炎、纤维化、癌症等疾病病程的加剧。重点介绍近年来有关肝脏巨噬细胞的起源、分类和功能的新发现,并探讨它们在肝脏生理和病理状态下的不同功能,以期为肝脏巨噬细胞的深入研究提供理论基础。 展开更多
关键词 肝脏巨噬细胞 组织稳态 肝脏疾病 库普弗细胞 单核细胞衍生的巨噬细胞
红景天苷抑制库普弗细胞的HMGB1产生保护热射病小鼠肝损伤
8
作者 张晓亮 罗雪 +5 位作者 杨学森 李萍 夏振娜 何根林 唐禾 吴春玲 《中国热带医学》 CAS 2018年第8期747-753,共7页
目的肝损伤是重症中暑的常见并发症,是导致患者死亡的直接原因。本研究拟探讨红景天苷（salidroside,Sal）对热射病小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能机制。方法动物实验部分,将40只ICR（institute of cancer research）小鼠随机分为空... 目的肝损伤是重症中暑的常见并发症,是导致患者死亡的直接原因。本研究拟探讨红景天苷（salidroside,Sal）对热射病小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能机制。方法动物实验部分,将40只ICR（institute of cancer research）小鼠随机分为空白对照组、Sal对照组、热射病组、Sal干预组。苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）染色后观察小鼠肝脏损伤的程度。检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）的改变。体外实验部分,分离和培养库普弗细胞（Kupffer cells,KCs）,以不同终浓度（80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L）的Sal预处理KCs 24 h,43℃±0.5℃热应激2 h。MTT[3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]比色法检测细胞存活率。采用相应的试剂盒测定各组细胞上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、丙二醛（malonaldehyde,MDA）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）和高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1,HMGB1）释放量。采用实时聚合酶链反应（real-time polymerasechain reaction,real-time PCR）评估HMGB1的m RNA表达。应用细胞核/细胞质提取试剂盒提取细胞核和细胞质蛋白,Western印迹法观察HMGB1从细胞核向细胞质转移的变化。结果本实验条件下,动物实验部分,与空白对照组、Sal对照组相比,热射病小鼠肝脏病理损伤主要表现为肝细胞肿胀、透明或水样变性,伴随肝功能指标ALT和AST的明显升高;与热射病组相比,Sal干预能够缓解其肝细胞肿胀、透明或水样变性等病理改变并降低热射病小鼠血清ALT和AST水平。细胞实验部分,热刺激可诱导KCs上清液中LDH、MDA以及TNF-α释放,而随着Sal剂量的增加,可显著抑制热应激诱导的LDH、MDA以及TNF-α释放,提高细胞的存活率。且Sal显著抑制热应激诱导的HMGB1表� 展开更多
关键词 热射病 红景天苷 库普弗细胞 肝损伤 高迁移率族蛋白1(HMGB1)
复方鳖甲软肝片防治大鼠肝纤维化作用及机制 预览 被引量：1
9
作者 杨宇 赵月涵 +4 位作者 庄海 郑志强 江苔 李龙宽 陈应强 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第12期1380-1385,共6页
目的:探讨复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化的干预作用及机制。方法:SD成年大鼠随机分为空白对照组(A组)、复方鳖甲软肝片治疗组(B组)、复方鳖甲软肝片干预组(C组)和模型对照组(D组),B、C、D组大鼠采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,B组于造模... 目的:探讨复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化的干预作用及机制。方法:SD成年大鼠随机分为空白对照组(A组)、复方鳖甲软肝片治疗组(B组)、复方鳖甲软肝片干预组(C组)和模型对照组(D组),B、C、D组大鼠采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,B组于造模第6周给予复方鳖甲软肝片,C组在造模的同时给予复方鳖甲软肝片;于造模第6、12周检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)等肝功能指标,造模第12周处死大鼠检测肝脏指数,ELISA检测大鼠血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原等肝纤维化指标;提取各组大鼠肝脏Kupffer细胞,免疫荧光染色检测CD14表达,观察Kupffer细胞活化情况;实时荧光定量PCR及Western Blot分别检测Kupffer细胞中TGF-βmRNA及蛋白表达水平。结果:经复方鳖甲软肝片干预或治疗后,B、C组大鼠肝脏指数、肝纤维化指标、肝功能指标均优于D组,差异具有统计学意义(P<0.05); D组Kupffer细胞中CD14呈阳性,B、C组CD14呈阴性; B、C组大鼠kupffer细胞中TGF-β蛋白及mRNA水平显著低于D组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:复方鳖甲软肝片具有抑制肝Kupffer细胞活化的作用,并可能通过抑制其分泌TGF-β而发挥抗肝纤维化的作用。 展开更多
关键词 复方鳖甲软肝片 肝纤维化 库普弗细胞 转化生长因子-Β 大鼠 Sprague-Dawley
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梯度热打击对大鼠肝库普弗细胞吞噬功能的影响 预览 被引量：1
10
作者 刘亚楠 徐秋林 +5 位作者 刘志锋 彭娜 潘志国 童华生 文强 苏磊 《解放军医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期511-514,共4页
目的研究梯度热打击对体外培养大鼠肝库普弗细胞吞噬功能及分泌功能的影响。方法设置培养库普弗细胞的热打击温度梯度（37、39、41、43℃）,使用PI及Hochest33342染色细胞检测热打击后细胞受损情况,采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞... 目的研究梯度热打击对体外培养大鼠肝库普弗细胞吞噬功能及分泌功能的影响。方法设置培养库普弗细胞的热打击温度梯度（37、39、41、43℃）,使用PI及Hochest33342染色细胞检测热打击后细胞受损情况,采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测库普弗细胞对溶菌酶吞噬能力的改变。结果与正常对照组相比,热打击各组均出现不同程度的细胞损伤,且随热打击程度加深而加重（P〈0.05）。细胞增殖实验显示,与正常对照组相比,热打击后6h,41℃和43℃组增殖率明显下降（P〈0.01）,12h时仅43℃组增殖率明显下降（P〈0.001）,至24h,各热打击组与正常对照组差异无统计学意义。流式细胞术显示,1h热打击结束后,与正常对照组相比,各热打击组细胞均呈现吞噬功能的下降,以43℃组最为明显（P〈0.05）。结论热打击可导致大鼠肝库普弗细胞吞噬功能受到抑制,可能与热打击对细胞的直接细胞毒作用有关。热打击对于肝库普弗细胞影响的进一步研究将有助于了解热射病的发病机制。 展开更多
关键词 热打击 库普弗细胞 吞噬作用 细胞增殖 细胞毒性 免疫
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维生素D介导的免疫调节在肝纤维化中的作用机制 预览 被引量：3
11
作者 赵明远 武希润 《中国药物与临床》 CAS 2017年第6期837-840,共4页
1,25-（OH）2D3是一种脂溶性类固醇激素,其生理作用远远超出了人体钙磷代谢及骨钙盐沉积的调节。越来越多的证据显示,1,25-（OH）2D3的非经典生理作用主要是调节免疫功能、激素分泌、细胞的增殖和分化。在肝硬化患者及肝硬化动物模型,... 1,25-（OH）2D3是一种脂溶性类固醇激素,其生理作用远远超出了人体钙磷代谢及骨钙盐沉积的调节。越来越多的证据显示,1,25-（OH）2D3的非经典生理作用主要是调节免疫功能、激素分泌、细胞的增殖和分化。在肝硬化患者及肝硬化动物模型,均提示25（OH）D3水平明显减低,在人类肝实质细胞与非实质细胞[主要是库普弗细胞、肝星状细胞（HSC）]等有核细胞内,均含有大量的维生素D受体（VDR）。 展开更多
关键词 肝纤维化 肝硬化动物模型 免疫调节 库普弗细胞 肝实质细胞 肝星状细胞 钙磷代谢 类固醇激素 作用机制 免疫功能
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库普弗细胞在小鼠日本血吸虫肝病发展过程中的表型变化 被引量：1
12
作者 孙悦 郑葵阳 +3 位作者 何兴 雷南行 颜超 汤仁仙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期224-229,共6页
目的 研究库普弗细胞（Kupffer cell）在小鼠日本血吸虫（Schistosoma japonicum）肝病发展过程中的表型变化。 方法 将20只6周龄的BALB/c雄性小鼠经腹部皮肤感染16条日本血吸虫尾蚴，在感染后0、21、32、42、52 d分别处死小鼠，取肝脏... 目的 研究库普弗细胞（Kupffer cell）在小鼠日本血吸虫（Schistosoma japonicum）肝病发展过程中的表型变化。 方法 将20只6周龄的BALB/c雄性小鼠经腹部皮肤感染16条日本血吸虫尾蚴，在感染后0、21、32、42、52 d分别处死小鼠，取肝脏组织，HE染色和Masson三色染色观察肝脏病理变化，实时定量PCR（qPCR）检测肝脏Th1型细胞因子γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、α肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、Th2型细胞因子白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、IL-13、IL-10）以及库普弗细胞的M1型巨噬细胞分化标志物诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthetase，iNOS）、白细胞分化抗原16（cluster of differentiation 16，CD16）、IL-6和M2型巨噬细胞分化标志物精氨酸酶-1（arginase 1，Arg-1）、CD206、IL-10的表达。体外培养库普弗细胞系，分别给予0、5、25、50 ng/ml IFN-γ或IL-4刺激12 h，或者给予25 ng/ml IFN-γ或IL-4分别刺激0、12、24、36 h后，qPCR检测库普弗细胞M1型、M2型巨噬细胞分化标志物。 结果 HE染色和Masson三色染色结果显示，小鼠感染后32 d肝组织中开始有虫卵沉积，42 d有明显的肉芽肿和纤维化病变。qPCR结果显示，与感染后0 d相比，IFN-γ在32 d表达水平最高，相对表达量为29.243 ± 3.245，52 d时迅速下降，为8.923 ± 3.002。IL-4在42 d最高，为25.521 ± 4.957。IL-13在52 d最高，为50.793 ± 9.631（均P 〈 0.05）。iNOS在42 d表达水平上升，相对表达量为2.950 ± 0.321，在52 d下降，为1.783 ± 0.319。Arg-1在52 d最高，为2.003 ± 0.152（均P 〈 0.05）。0、5、25、50 ng/mlIFN-γ刺激库普弗细胞12 h后，iNOS、IL-6和CD16的相对表达量分别为54.690～68.577、1.887～2.427、2.417～2.787（均P 〈 0.05）。25 ng/ml IFN-γ刺激0、12、24、36 h后，iNOS、IL-6和CD16的相对表达量分别为34.810～109.210、10.327～15.143、1.887～3.317（均P 〈 0.05），而Ar 展开更多
关键词 血吸虫病 肉芽肿 纤维化 库普弗细胞
胍丁胺对严重创伤所致肝损伤的保护作用 被引量：1
13
作者 何川 侯凤艳 +4 位作者 王婷 杨霞 范霞 梁华平 龚建平 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期319-323,共5页
目的观察胍丁胺对肝脏库普弗细胞分泌炎性因子的影响，探讨其对严重创伤所致肝损伤的保护作用及其机制。方法将42只雄性BALB／c小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、胍丁胺干预组，每组14只。采用双后肢骨折联合眼眶放血3... 目的观察胍丁胺对肝脏库普弗细胞分泌炎性因子的影响，探讨其对严重创伤所致肝损伤的保护作用及其机制。方法将42只雄性BALB／c小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、胍丁胺干预组，每组14只。采用双后肢骨折联合眼眶放血35％的方法制备小鼠创伤失血模型；Sham组仅麻醉小鼠不进行其他处理。胍丁胺干预组于制模后1h液体复苏时腹腔注射胍丁胺200mg／kg；模型组给予等量生理盐水。各组于制模后12h、24h分别处死7只小鼠取血和肝脏，并分离肝脏库普弗细胞。用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及乳酸脱氢酶（LDH）水平；苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织病理学变化；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清、肝组织及肝脏库普弗细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量；用实时荧光定量反转录一聚合酶链反应（RT-qPCR）检测库普弗细胞中TNF-α和IL-6的mRNA表达。结果①Sham组小鼠肝组织结构正常；模型组小鼠翩模后24h可见中性粒细胞浸润，肝细胞肿胀、充血、坏死，且肝功能指标明显异常；而胍丁胺能明显改善上述病理学变化，改善肝功能。②制模后12h3组血清和肝组织TNF—α、IL-6水平均无明显差异，24h模型组较12h时升高，且均显著高于Sham组[血清TNF-α（ng／L）：80．8±4．7比34．7±4．7，IL-6（ng／L）：104．0±9．0比55．4±3．3；肝组织TNF-α（ng／mg）：405．2±19．6比57．2±10．0，IL-6（ng／mg）：58．4±7．7比14．3±2．1，均P〈0.01]；胍丁胺能有效降低创伤小鼠血清和肝组织TNF—α、IL-6水平[血清TNF-α（ng／L）：58．2±3．1比80．8±4．7，IL-6（ng／L）：74．1±6．6比104．0±9．0；肝组织TNF-α（ng／mg）：248．7±22．5比405．2±19．6，IL-6（ng／mg）：22．5±3．1比58．4±7� 展开更多
关键词 胍丁胺 创伤 肝脏 库普弗细胞 炎性因子
体内抑制库普弗细胞对D-氨基半乳糖所致大鼠肝损伤的影响 预览 被引量：1
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作者 刘明颖 杨加彩 王英杰 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2016年第9期1002-1004,共3页
目的 观察体内抑制库普弗细胞对D-氨基半乳糖（D-Gal）所致大鼠肝损伤的影响,为急性肝衰竭（acute liver failure,ALF）的防治研究提供实验依据。方法 80只SD实验大鼠随机分为造模对照组和抑制库普弗细胞组,均以D-Gal 10 mg/kg腹腔注射... 目的 观察体内抑制库普弗细胞对D-氨基半乳糖（D-Gal）所致大鼠肝损伤的影响,为急性肝衰竭（acute liver failure,ALF）的防治研究提供实验依据。方法 80只SD实验大鼠随机分为造模对照组和抑制库普弗细胞组,均以D-Gal 10 mg/kg腹腔注射诱导制成ALF模型,抑制库普弗细胞组24 h后经尾静脉按10 mg/kg注入氯化钆。72 h后分别检测造模对照组和抑制库普弗细胞组大鼠的肝功能、炎性因子,1周后切取肝脏组织行光镜及流式细胞凋亡检测。结果 抑制库普弗细胞组大鼠血清ALT、AST和TBIL及血清免疫学指标IL-6、IL-1β、TNF-α明显低于造模对照组（P〈0.05）;抑制库普弗细胞组大鼠肝脏病变及肝细胞坏死程度显著低于造模对照组;抑制库普弗细胞组存活率显著高于造模对照组（P〈0.05）。结论 体内抑制库普弗细胞可明显减轻D-Gal所致大鼠的肝损伤,避免或抑制库普弗细胞激活可成为ALF治疗的策略之一。 展开更多
关键词 库普弗细胞 急性肝衰竭 D-氨基半乳糖
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盐酸右美托咪定对H_2O_2诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响 预览 被引量：6
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作者 沈金美 李李 +1 位作者 蒋丽丽 傅敢 《中南大学学报：医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期477-481,共5页
目的：观察α_2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定能否抑制过氧化氢（H_2O_2）诱导的库普弗细胞（Kupffer cells,KCs）氧化应激和炎性反应。方法：分离和培养KCs,分别用盐酸右美托咪定或育亨宾处理24 h后,以H_2O_2作用30 min建立细胞氧... 目的：观察α_2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定能否抑制过氧化氢（H_2O_2）诱导的库普弗细胞（Kupffer cells,KCs）氧化应激和炎性反应。方法：分离和培养KCs,分别用盐酸右美托咪定或育亨宾处理24 h后,以H_2O_2作用30 min建立细胞氧化损伤模型,应用MTF比色法检测H_2O_2诱导的损伤细胞的存活率;用相应的试剂盒测定各组细胞上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、丙二醛（malonaldehyde,MDA）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放量。结果：盐酸右美托咪定显著抑制H_2O_2诱导的KCs的损伤,提高细胞的存活率,抑制上清液中LDH,MDA,TNF-α释放,这种作用可以被α_2受体拮抗剂育亨宾完全拮抗,而育亨宾本身对细胞的氧化损伤和炎性反应没有影响。结论：盐酸右美托咪定可以减轻H_2O_2诱导的KCs的氧化应激和炎性反应,其可能是通过α_2肾上腺能受体发挥作用。 展开更多
关键词 盐酸右美托咪定 氧化应激 炎性反应 库普弗细胞
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库普弗细胞极化改变在慢性肝脏疾病中的作用 预览 被引量：1
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作者 罗雯静 华静 《国际消化病杂志》 CAS 2015年第4期277-279,282共4页
巨噬细胞是机体免疫防御机制中的重要成分,在天然免疫和适应性免疫中具有重要的调节作用。近年来研究发现,巨噬细胞具有很强的可塑性和异质性,特定的微环境控制着它们的分化和在组织内的分布。巨噬细胞可针对不同的刺激信号作出应答,分... 巨噬细胞是机体免疫防御机制中的重要成分,在天然免疫和适应性免疫中具有重要的调节作用。近年来研究发现,巨噬细胞具有很强的可塑性和异质性,特定的微环境控制着它们的分化和在组织内的分布。巨噬细胞可针对不同的刺激信号作出应答,分化成具有不同功能的表型细胞即极化。肝脏内的巨噬细胞即库普弗细胞（KC）在各种慢性肝脏疾病的发生、发展中经历表型和功能的改变,呈现出不同的极化类型。了解KC在慢性肝脏疾病中的可塑性、多样性特点将对阐明疾病进展机制、设计靶向性治疗措施起到积极的作用。 展开更多
关键词 巨噬细胞 库普弗细胞 极化 慢性肝脏疾病
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铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制研究 预览 被引量：5
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作者 江远 张玲 +2 位作者 钟肖英 吴文如 何金洋 《实用肝脏病杂志》 2015年第2期173-177,共5页
目的探讨铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制。方法随机将39只SD大鼠分为模型组和空白对照组,采用二甲基亚硝胺（DMN,10μL·kg-1）腹腔注射,制作大鼠肝纤维化模型。造模大鼠在注射DMN 1 w后,再将模型大鼠随机分为模型组（15只）和去... 目的探讨铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制。方法随机将39只SD大鼠分为模型组和空白对照组,采用二甲基亚硝胺（DMN,10μL·kg-1）腹腔注射,制作大鼠肝纤维化模型。造模大鼠在注射DMN 1 w后,再将模型大鼠随机分为模型组（15只）和去铁铵组（12只）。两组大鼠分别自第3 w开始腹腔注射生理盐水或100 mg·kg-1去铁铵,3次/w,2 w后处死动物。取肝组织分别行HE染色、Masson染色、普鲁士蓝染色;采用免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;采用火焰原子吸收光谱法（FAAS）测定大鼠肝组织铁浓度（HIC）;采用ELISA法检测大鼠血清铁蛋白、转铁蛋白;使用全自动生化分析仪检测肝功能、血清铁水平;采用PCR法检测肝组织转化生长因子（TGF）-β1 m RNA水平。结果肝组织病理学检查显示,伴随着胶原纤维的沉积、肝细胞变性坏死和肝星状细胞（HSC）大量活化,模型组大鼠铁负载显著增加;铁沿纤维间隔分布,主要沉积于库普弗细胞（KC）和HSC;模型组肝组织铁浓度为（0.778±0.098）mg/g,空白对照组为（0.436±0.043）mg/g,两组差别有统计学意义（LSD-t=5.15,P〈0.01）;去铁铵组为（0.595±0.146）mg/g,显著低于模型组（LSD-t=-2.76,P〈0.05）;模型组血清铁蛋白和转铁蛋白分别为（47.657±27.851）ng/m L和（0.322±0.099）mg/m L,空白对照组分别为（24.166±27.626）ng/m L和（0.653±0.170）mg/m L,去铁铵组分别为（10.261±12.466）ng/m L和（0.584±0.180）mg/m L,说明模型组铁蛋白明显增加,血清转铁蛋白明显减少,与空白对照组比较,差异均有统计学意义（LSD-t=2.21和-4.78,P〈0.05和P〈0.01）;去铁铵能明显降低血清铁蛋白水平,增加血清转铁蛋白水平,与模型组比较差异有统计学意义（LSD-t=-3.52和3.77,P〈0.05和P=0.01）;模型组肝组织TGF-β1m RNA水平为（11.896±0.63）,空白对照组为（2.292±0.222）,两组差别有统计学意义（LSD-t 展开更多
关键词 肝纤维化 铁 去铁铵 肝星状细胞 库普弗细胞 大鼠
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酒精性脂肪肝中库普弗细胞表型变化的探讨 预览 被引量：3
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作者 程希 胡超杰 +2 位作者 李晚霞 黄成 李俊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期149-153,共5页
目的：通过建立小鼠酒精性脂肪肝（ AFL）的模型,并采用肝脏原位灌流,分离出形态良好、具有生物学活性的库普弗细胞（ KCs ）,研究其在 AFL 中的作用。方法采用Lieber-DeCarli液体饮食加一次急性酒精灌胃,建立小鼠AFL模型。造模周期为16... 目的：通过建立小鼠酒精性脂肪肝（ AFL）的模型,并采用肝脏原位灌流,分离出形态良好、具有生物学活性的库普弗细胞（ KCs ）,研究其在 AFL 中的作用。方法采用Lieber-DeCarli液体饮食加一次急性酒精灌胃,建立小鼠AFL模型。造模周期为16 d,于第16天灌胃9 h后处死小鼠,取小鼠肝脏、血清及KCs。检测各组血清谷丙转氨酶/谷草转氨酶（ ALT/AST）、肝匀浆、血清中总胆固醇/三酰甘油（ TG/TC）水平变化和肝脏病理切片HE、油红染色。选取原位灌流的方法分离KCs,采用流式细胞术分析KCs表型及组成的改变。荧光实时定量PCR（ qRT-PCR）检测组织及提取细胞中各细胞因子水平。结果 ALT/AST、TG/TC等反应肝损伤的指标模型组显著高于对照组,HE及油红染色结果与之一致,表明小鼠AFL模型建立成功。肝脏原位灌流每只小鼠细胞得率约1．5×106~2．0×106个。以小鼠巨噬细胞表面标记分子F4/80及白细胞共同抗原CD45双标设门,流式细胞术分析F4/80和 CD45双阳性细胞,在模型中肝脏固有CD68＋细胞显著降低,并出现大量的浸润单核细胞。 qRT-PCR结果显示,在肝组织及原代KCs中细胞因子,肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白（MCP-1）水平显著升高。结论小鼠AFL模型建立成功,肝脏原位灌流法细胞得率较高, AFL 的发病可能与 KCs 构成、表型改变,与细胞因子升高介导外周单核细胞浸润有关。 展开更多
关键词 酒精性脂肪肝 原位灌流 库普弗细胞 细胞因子
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Toll样受体信号通路的3条途径在大鼠肝再生中抑制库普弗细胞免疫反应 预览
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作者 何玉贵 常翠芳 +6 位作者 耿直 许果果 和婷婷 梅金鑫 周晓春 杨亚娟 徐存拴 《河南师范大学学报：自然科学版》 CAS 北大核心 2014年第4期100-105,共6页
为从基因转录水平了解大鼠肝再生中Toll样受体信号通路调节库普弗细胞免疫反应的途径和方式,首先建立大鼠2/3肝切除（partial hepatectomy,PH）模型,从中分离库普弗细胞进行基因微阵列分析.发现Toll样受体信号通路的23个基因及其调节免... 为从基因转录水平了解大鼠肝再生中Toll样受体信号通路调节库普弗细胞免疫反应的途径和方式,首先建立大鼠2/3肝切除（partial hepatectomy,PH）模型,从中分离库普弗细胞进行基因微阵列分析.发现Toll样受体信号通路的23个基因及其调节免疫反应的62个基因与大鼠肝再生相关.基因协同作用（Ep（t）值）和同类提取法分析表明,大鼠肝再生进展阶段,Toll样受体信号通路通过TLR/NF-κB,TLR/MAPK,TLR/IRF等3条途径和TLR4,MAL,UNC93B1,AP1S2,IRF1等5个关键基因抑制库普弗细胞免疫反应. 展开更多
关键词 大鼠肝再生 TOLL样受体信号通路 库普弗细胞 免疫反应 基因表达谱 关键基因
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人脐带源间充质干细胞静脉移植治疗大鼠肝纤维化 预览 被引量：2
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作者 张英杰 李玉云 +1 位作者 郝晓娜 郝艳梅 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第28期4485-4490,共6页
背景：近来国内外研究证明，来自其他组织的干细胞能够归巢到肝脏，并可能参与肝组织的再生，这为发展干细胞治疗肝脏疾病提供了新的希望。目的：探究人脐带源间充质干细胞的分离、培养方法，观察脐带间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化模... 背景：近来国内外研究证明，来自其他组织的干细胞能够归巢到肝脏，并可能参与肝组织的再生，这为发展干细胞治疗肝脏疾病提供了新的希望。目的：探究人脐带源间充质干细胞的分离、培养方法，观察脐带间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化模型的修复作用，为脐带间充质干细胞的临床应用提供可靠的理论依据。方法：自然贴壁法分离、纯化人脐带间充质干细胞并进行体外培养和扩增，用皮下多点注射CCl4制备肝纤维化大鼠模型。将22只模型大鼠随机分为模型损伤组（n=11）和细胞移植组（n=11）。细胞移植组在模型制备成功后的第1，2，3周经尾静脉给予1＆#215;106脐带间充质干细胞治疗，4周后将大鼠处死，收集各组大鼠血液检测肝功能；摘取肝脏行苏木精-伊红染色，观察病理变化；免疫组化法观察库普弗细胞的数量及分布；免疫组化法观察治疗组脐带间充质干细胞的定位情况。结果与结论：脐带间充质干细胞经尾静脉移植入肝硬化大鼠后，大鼠的肝功能均明显改善，与对照组比较，差异有显著性意义（P＜0.05）；肝组织苏木精-伊红染色提示，肝纤维化程度明显改善；免疫组化法观察库普弗细胞的数量提示，库普弗细胞数量明显减少；免疫组化方法利用抗BrdU抗体在治疗组大鼠肝脏观察到BrdU标记的脐带间充质干细胞。说明脐带间充质干细胞移植可以改善大鼠外周血液的血生化特性和肝的组织学结构。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 移植 脐带 间充质干细胞 肝纤维化 细胞移植 大鼠 肝功能 库普弗细胞 病理变化
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