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原因不明复发性自然流产患者外周血pDC、miR-6165水平变化及其调控机制 预览
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作者 郑象昭 尹训强 +9 位作者 王东梅 张云虹 张振 魏然 朱肖肖 郭强 周宪宾 褚楚 赵霖 李霞 《山东医药》 CAS 2019年第2期18-22,共5页
目的观察原因不明复发性自然流产(URSA)患者外周血中浆细胞样树突状细胞(pDC)、微小RNA-6165(miR-6165)水平变化,并探讨二者间的调控机制。方法选取正常早孕妇女(正常妊娠组)和URSA患者(URSA组)各30例,空腹抽取静脉血,分离单个核细胞(PB... 目的观察原因不明复发性自然流产(URSA)患者外周血中浆细胞样树突状细胞(pDC)、微小RNA-6165(miR-6165)水平变化,并探讨二者间的调控机制。方法选取正常早孕妇女(正常妊娠组)和URSA患者(URSA组)各30例,空腹抽取静脉血,分离单个核细胞(PBMC),流式细胞术测定pDC细胞比例,qPCR法检测miR-6165表达水平;采用Target Scan生物信息软件,以Target Scan 7.1程序预测miR-6165与信号传导及转录激活因子3(STAT3)mRNA的3′非翻译区(3′UTR)是否存在潜在结合位点;将293T细胞分为干预组和对照组,分别同时转染miR-6165(空白对照NC)与野生型或突变型STAT3 mRNA 3′UTR荧光素酶报告基因pmirGLO载体,采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶报告基因活性。将293T细胞分为3组,过表达组、抑表达组利用Lipofectamine 2000转染miR-6165 mimics及inhibitor,空白对照组转染阴性对照引物;转染24h后收集细胞,分别采用qPCR、Western blotting法检测各组细胞STAT3 mRNA、STAT3总蛋白及磷酸化水平(p-STAT3)。结果与正常妊娠组比较,URSA组PBMC中pDC比例降低而miR-6165表达水平升高(P均<0.05)。Target Scan 7.1程序预测显示,miR-6165与STAT3 mRNA的3′UTR之间具有潜在的碱基互补结合位点;荧光素酶报告基因系统检测显示,与对照组比较,干预组能降低野生型STAT3 mRNA 3′UTR荧光素酶报告基因活性(P<0.05),但对突变型STAT3 mRNA 3′UTR荧光素酶报告基因活性无明显影响(P>0.05)。与空白对照组比较,过表达组STAT3 mRNA、STAT3与p-STAT3蛋白表达均降低(P均<0.05),而抑表达组STAT3 mRNA、STAT3与p-STAT3蛋白表达均升高(P均<0.05)。结论URSA患者外周血PBMC中pDC比例降低,而miR-6165表达水平升高;miR-6165与STAT3结合并抑制STAT3表达和功能,抑制pDC亚群分化,打破母胎免疫耐受状态进而导致URSA。 展开更多
关键词 原因不明复发性自然流产 微小核糖核酸6165 信号传导及转录激活因子3 浆细胞样树突状细胞
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