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盐霉素对大鼠微血管内皮细胞血管生成的抑制 预览
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作者 王薇 王俊壹 +4 位作者 薛兴功 宋玮 段秋莉 肖荣 张普 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2019年第4期290-293,共4页
目的探讨盐霉素是否可通过抑制大鼠微血管内皮细胞的增殖、迁移、侵袭抑制血管生成。方法取6~8周雄性Wistar大鼠心脏,应用植块法原代培养大鼠微血管内皮细胞,取第三代细胞进行实验。给予不同浓度的盐霉素刺激大鼠微血管内皮细胞,采用MT... 目的探讨盐霉素是否可通过抑制大鼠微血管内皮细胞的增殖、迁移、侵袭抑制血管生成。方法取6~8周雄性Wistar大鼠心脏,应用植块法原代培养大鼠微血管内皮细胞,取第三代细胞进行实验。给予不同浓度的盐霉素刺激大鼠微血管内皮细胞,采用MTT方法检测盐霉素对大鼠微血管内皮细胞增值能力的影响。采用细胞损伤划痕实验检测盐霉素对大鼠微血管内皮细胞迁移能力的影响,应用Transwell实验方法检测盐霉素对大鼠微血管内皮细胞侵袭能力的影响。采用体外毛细血管管腔样结构形成方法观察盐霉素对毛细血管管腔样结构官腔形成能力的影响,验证盐霉素对大鼠微血管内皮细胞血管生成能力的影响。采用t检验比较对照组与各实验组之间吸光度值、划痕距离差、Transwell细胞数以及体外毛细血管管腔样结构形成条数的差异。结果MTT检测细胞增殖能力显示,对照组吸光度值(0.968±0.038)相比SAL在1μM(0.849±0.031)时已高,且差异具有统计学意义(t=4.11,P=0.0367),即可明显抑制细胞增殖,且呈浓度依赖性。细胞划痕损伤修复能力检测结果显示,与对照组划痕距离[(249.78±6.72)μm]相比,VEGF组划痕距离[(289.67±8.59)μm]更大,促进了划痕修复,差异具有统计学意义(t=4.76,P=0.0165),SAL组划痕距离[(98.59±4.78)μm]减小,抑制了划痕修复,差异具有统计学意义(t=30.6,P=0.0007)。Transwell实验结果显示,与对照组细胞数(128.67±4.89)个相比,VEGF组细胞数[(158.23±5.26)个]增加,促进了细胞侵袭,差异具有统计学意义(t=5.65,P=0.0089),SAL组细胞数[(98.59±4.78)个]减少,抑制了细胞侵袭,差异具有统计学意义(t=25.65,P<0.001)。体外毛细血管管腔样结构形成实验结果显示,与对照组[(31.29±1.68)条]比较,VEGF组形成[(45.76±2.56)条]更多,促进了血管新生,差异具有统计学意义(t=3.90,P=0.0176),SAL组形成[(14.38±1.23)条]减少,抑制了血管新生,差异具 展开更多
关键词 盐霉素 微血管内皮细胞 迁移 侵袭 血管生成
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葛根素对局灶性脑缺血大鼠半暗带微血管内皮细胞的保护作用及其机制
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作者 薛强 陈红 +5 位作者 周佳丽 蒋红艳 郑小红 杨延音 邓庆华 徐晓玉 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期151-158,共8页
目的:研究葛根素对局灶性脑缺血大鼠半暗带微血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:线栓法制作永久局灶性脑缺血大鼠模型,用神经行为学缺损评分法、组织形态学方法、免疫学技术方法,评价葛根素对模型大鼠神经功能改善作用、对半暗带脑... 目的:研究葛根素对局灶性脑缺血大鼠半暗带微血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:线栓法制作永久局灶性脑缺血大鼠模型,用神经行为学缺损评分法、组织形态学方法、免疫学技术方法,评价葛根素对模型大鼠神经功能改善作用、对半暗带脑组织保护作用和抗半暗带微血管内皮细胞凋亡机制。结果:在模型大鼠缺血半暗带区域,葛根素100,50和25 mg·kg^-1剂量均能显著促进微血管Bcl-2蛋白表达,抑制Bax,Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达;显著降低微血管内皮细胞凋亡率;减轻半暗带脑组织病理损害程度。同时减少脑梗死面积百分比,改善大鼠的神经功能。结论:葛根素可抗半暗带微血管内皮细胞凋亡,减轻局灶性脑缺血对大鼠的神经损害。 展开更多
关键词 葛根素 大鼠 局灶性脑缺血 缺血半暗带 微血管内皮细胞 凋亡
MVECs抗炎症感染作用及应用前景 预览
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作者 武果桃 牛国庆 《养猪》 2019年第2期94-96,共3页
炎症是动物机体对外界刺激产生的重要防御反应。微血管内皮细胞具有重要的生理学功能,参与机体多种平衡调节、细胞功能及炎症反应,维持局部内环境的稳态,在抑制炎症发生等病理性过程中具有重要的作用,中药通过对MVECs的保护作用,为兽医... 炎症是动物机体对外界刺激产生的重要防御反应。微血管内皮细胞具有重要的生理学功能,参与机体多种平衡调节、细胞功能及炎症反应,维持局部内环境的稳态,在抑制炎症发生等病理性过程中具有重要的作用,中药通过对MVECs的保护作用,为兽医临床使用和研究中药防治细菌性疾病提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 炎症 嗜中性粒细胞 中药 调控
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在不同培养条件下微血管内皮细胞对骨髓造血干细胞增殖影响的比较
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作者 林凡莉 钱怡 +5 位作者 杨敏 汪姝玥 陈小青 程艳 熊皓 黄纯兰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期594-599,共6页
目的:探讨在体外不同培养条件下微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MEC)对骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)增殖的作用。方法:将来源于C57BL/6小鼠肺组织的MEC与来源于GFP小鼠骨髓的HSC用于非接触共培养、2... 目的:探讨在体外不同培养条件下微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MEC)对骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)增殖的作用。方法:将来源于C57BL/6小鼠肺组织的MEC与来源于GFP小鼠骨髓的HSC用于非接触共培养、2D接触共培养,并设置对照组HSC单独培养及MEC单独培养。采用细胞计数和CCK-8实验比较各组悬浮细胞在1、3、5和7d的增殖情况。结果:MEC呈贴壁生长。HSC共培养组及单独培养组细胞在体外培养过程中悬浮细胞计数均有所增加;2D接触培养组与非接触共培养组中悬浮细胞比对照组中悬浮细胞更早进入对数生长期;2D接触培养组悬浮细胞增殖多于非接触共培养组及HSC单独培养组(P<0.05);非接触共培养组悬浮细胞增殖多于HSC单独培养组(P<0.05)。结论:体外培养HSC能使HSC增殖;MEC能促进HSC增殖;MEC还可以通过与HSC非接触共培养促进HSC增殖,这一效应与MEC分泌的细胞因子促HSC增殖作用有关;MEC与HSC直接接触培养对HSC的增殖作用比非接触共培养更强,这一效应与细胞-细胞接触对HSC增殖的调控有关。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 造血干细胞 非接触共培养 接触共培养 细胞增殖
TLR4沉默对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞损伤的干预作用及机制 预览
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作者 林雪波 《新医学》 2019年第3期197-201,共5页
目的探讨Toll样受体-4(TLR4)沉默对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞损伤的干预作用及机制。方法利用siRNA沉默MS-1细胞中TLR4的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TLR4mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖,比色法测定一氧化氮水平,ELIS... 目的探讨Toll样受体-4(TLR4)沉默对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞损伤的干预作用及机制。方法利用siRNA沉默MS-1细胞中TLR4的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TLR4mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖,比色法测定一氧化氮水平,ELISA检测内皮素-1水平,羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛水平,蛋白免疫印迹法检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)和核转录因子(NF)-κBp65蛋白的表达。将高糖处理的细胞分为高糖组及siRNA处理组(再分为siRNA-TLR4组及NC-TLR4组)进行上述指标的比较。结果与高糖组比较,siRNA-TLR4组TLR4mRNA的相对表达水平降低,细胞的增殖能力受抑制(P均<0.05)。此外,与高糖组比较,siRNA-TLR4组一氧化氮水平、SOD活力升高,内皮素-1、丙二醛水平下降(P均<0.05)。与高糖组比较,siRNATLR4组TLR4、MyD88和NF-κBp65蛋白减少(P均<0.05)。结论沉默TLR4在MS-1细胞中的表达水平,减弱TLR4/NF-κB信号通路传递的炎症水平,间接降低氧化应激水平,从而改善高糖诱导的胰岛微血管内皮细胞损伤。 展开更多
关键词 TOLL样受体-4 高糖 胰岛 微血管内皮细胞
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淫羊藿苷对骨微血管内皮细胞自噬及外泌体产生的影响
6
作者 张庆宇 高福强 +3 位作者 程立明 刘立华 孙伟 李子荣 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期568-577,共10页
目的评估淫羊藿苷对低浓度糖皮质激素诱导的骨微血管内皮细胞(bone microvascular endothelial cells,BMECs)自噬和外泌体分泌的影响。方法从行全髋关节置换术切取的股骨头中分离BMECs,用一系列低浓度梯度氢化可的松(0、0.03、0.06、0.1... 目的评估淫羊藿苷对低浓度糖皮质激素诱导的骨微血管内皮细胞(bone microvascular endothelial cells,BMECs)自噬和外泌体分泌的影响。方法从行全髋关节置换术切取的股骨头中分离BMECs,用一系列低浓度梯度氢化可的松(0、0.03、0.06、0.10 mg/mL)干预(设为A、B、C、D组),在此基础上再用5×10-5 mol/L淫羊藿苷干预(设为A1、B1、C1、D1组),24 h后采用Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)及死骨片1(p62)的表达。从经淫羊藿苷处理(干预组)和未经淫羊藿苷处理(未干预组)的BMECs中提取外泌体,纳米颗粒跟踪分析技术检测其直径和浓度,BCA法检测外泌体总蛋白质含量,Western blot检测外泌体CD9、CD81、TGF-β1和VEGFA蛋白的表达。进一步将BMECs分为3组,实验组和对照组分别分离经或未经淫羊藿苷处理的BMECs分泌的外泌体,与BMECs共培养;空白对照组为单纯BMECs。氢化可的松处理后,采用Western blot检测LC3B和p62表达,划痕实验检测细胞迁移能力,并观察血管生成能力。结果随氢化可的松浓度升高,各组LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量逐渐增加,p62蛋白相对表达量减少,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);相同激素浓度下,淫羊藿苷干预后,LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量减少,p62蛋白相对表达量增加(P<0.01)。干预组外泌体浓度显著高于未干预组(t=-10.191,P=0.001);两组外泌体直径和总蛋白质含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。未干预组和干预组CD9和CD81蛋白均高度表达;干预组VEGFA/CD9和TGF-β1/CD9蛋白相对表达量比值均显著高于未干预组(P<0.01)。外泌体共培养后,空白对照组、对照组和实验组中p62蛋白相对表达量呈递增趋势,LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量呈递减趋势,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。氢化可的松处理12、24 h时,对照组和实验组划痕闭合率明显高于空白对照组(P<0.05),实验 展开更多
关键词 股骨头 微血管内皮细胞 糖皮质激素 淫羊藿苷 外泌体 自噬
猪小肠微血管内皮细胞的分离培养与纯化 预览
7
作者 施晓杰 马维超 +4 位作者 邓昱晨 邓伟 张倩 冯波 穆祥 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期36-38,43,I0003共5页
旨在建立简单高效的获取猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)的方法。将SPF新生仔猪麻醉处死后取空肠,经酶消化后用免疫磁珠分选获得纯化的PIMVECs,并对纯化后的细胞进行免疫荧光鉴定,采用WST-1法分析传代PIMVECs的增殖情况。分离纯化的PIMV... 旨在建立简单高效的获取猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)的方法。将SPF新生仔猪麻醉处死后取空肠,经酶消化后用免疫磁珠分选获得纯化的PIMVECs,并对纯化后的细胞进行免疫荧光鉴定,采用WST-1法分析传代PIMVECs的增殖情况。分离纯化的PIMVECs呈短梭形或多角形,单层贴壁生长,汇合后呈铺路石样,血管内皮细胞特异性标志物VIII因子相关抗原表达阳性,且复苏后传代细胞增殖情况良好。采用免疫磁珠分选法可以快速直接获得纯化的猪小肠微血管内皮细胞,且细胞活性良好。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 猪小肠 体外分离 免疫磁珠
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基于主成分分析方法的“孙络—微血管”病变数学模型构建及通络干预研究 预览 被引量:1
8
作者 常丽萍 李禄金 +3 位作者 魏聪 贾振华 郑青山 吴以岭 《疑难病杂志》 CAS 2018年第7期649-653,666共6页
目的探讨微血管内皮细胞(EC)在"孙络—微血管"病变急性心肌梗死、心肌梗死后心律失常、心肌梗死后心力衰竭、缺血性脑卒中、糖尿病肾病等重大疾病中的效应规律和关键作用靶点,并构建数学模型。方法利用主成分分析方法对国家973计划... 目的探讨微血管内皮细胞(EC)在"孙络—微血管"病变急性心肌梗死、心肌梗死后心律失常、心肌梗死后心力衰竭、缺血性脑卒中、糖尿病肾病等重大疾病中的效应规律和关键作用靶点,并构建数学模型。方法利用主成分分析方法对国家973计划项目"基于心脑血管病变的脉络学说理论研究"各子课题单位中"孙络—微血管"病变相关研究数据,构建数学模型进行数学分析。结果"孙络—微血管"病变涉及到微血管(微循环)、血液成分、神经体液、脏器组织等4类指标群存在显著相关性;通络干预微血管(微循环)优势明显;心脑(糖)肾重大疾病均是以微血管内皮细胞为核心,共同组成了复杂的相互作用关系网络,通络药物干预使其趋于正常,其中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)等多个指标是关键共性靶点。结论"孙络—微血管"病变是以微血管内皮细胞为核心和启动因素、神经体液和血液成分共同参与、组织细胞功能结构损伤、多维时空动态演变的复杂网络病变规律,通络干预使该复杂网络中相互关联的节点趋于正常,提示心脑(糖)肾可异病同治。 展开更多
关键词 “孙络—微血管”病变 数学模型构建 多维时空动态演变 复杂网络 微血管内皮细胞 异病同治
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木犀草素对高糖诱导的心肌微血管内皮细胞损伤的影响及机制
9
作者 王雷 付爱萍 +2 位作者 孙书红 王曼 谢芳元 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第7期1243-1247,1233共6页
目的:探讨木犀草素对高糖诱导的心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)损伤的影响及其可能调控机制。方法:消化法分离大鼠CMECs,将原代CMECs随机分为4组:低糖组、低糖+木犀草素组、高糖组和高糖... 目的:探讨木犀草素对高糖诱导的心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)损伤的影响及其可能调控机制。方法:消化法分离大鼠CMECs,将原代CMECs随机分为4组:低糖组、低糖+木犀草素组、高糖组和高糖+木犀草素组。低糖+木犀草素组和高糖+木犀草素组分别加入30μmmol/L的木犀草素孵育24h,低糖组和高糖组分别加入同等体积的DMSO孵育24h。CCK-8实验检测CMECs增殖;Tunel法检测CMECs凋亡;Transwell检测CMECs的迁移能力;Westem blot检测PKC-βⅡ的表达。结果:与低糖组和低糖+木犀草素组相比,高糖组CMECs增殖能力显著降低(0.341±0.018,P〈0.05),CMECs凋亡显著增加(P〈0.05),CMECs迁移能力显著降低(116±12.2,P〈0.05),PKC-βⅡ的表达显著增加(P〈0.05);与高糖组相比,高糖+木犀草素组CMECs增殖能力显著增加(0.550±0.023,P〈0.05),CMECs凋亡显著减少(P〈0.05),CMECs迁移能力显著增加(169±7.3,P〈0.05),PKC-βⅡ的表达显著降低(P〈0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制PKC—βⅡ激活减少高糖诱导的心肌微血管内皮细胞损伤。 展开更多
关键词 木犀草素 微血管内皮细胞 蛋白激酶C 凋亡
微血管内皮细胞对小鼠造血干细胞增殖的影响 预览 被引量:1
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作者 钱怡 杨敏 +3 位作者 林凡莉 汪姝玥 李晓明 黄纯兰 《重庆医学》 2018年第18期2408-2412,2417共6页
目的探索微血管内皮细胞(MECs)对造血干细胞(HSCs)增殖的影响,以建立一种促进HSCs增殖的方法。方法选取C57BL/6小鼠和C57系GFP小鼠,处死获取肺叶组织。(1)MECs的分离、培养和鉴定:肺组织经Ⅰ型胶原酶消化获得的细胞在含20%胎牛... 目的探索微血管内皮细胞(MECs)对造血干细胞(HSCs)增殖的影响,以建立一种促进HSCs增殖的方法。方法选取C57BL/6小鼠和C57系GFP小鼠,处死获取肺叶组织。(1)MECs的分离、培养和鉴定:肺组织经Ⅰ型胶原酶消化获得的细胞在含20%胎牛血清(FBS)、2ng/mL血管内皮生长因子(VEGF)、100U/mL肝素、0.1mg/mL青霉素及链霉素的DMEM-F12培养基培养,第8天进行CD31荧光鉴定,"铺路石"细胞用于共培养并以流式细胞仪(FCM)检测八因子相关抗原(vWF)、CD31、CD34、CD45表达率。(2)GFP小鼠HSCs的分离、鉴定:密度梯度离心法和MACs-CD117+磁珠法分选HSCs,FCM检测纯度及CD117CD34共表达率。(3)MECs促HSCs增殖:设立对照组(HSCs)、共培养组(MECs+HSCs),培养7d,观察HSCs生长情况并计数、计算扩增倍数;第7天,收集共培养组HSCs,FCM检测CD117CD34共表达率。结果(1)肺MECs:第3天形成细胞簇,第6天成"血管样"改变,第14天为"铺路石"外观。培养第8天CD31阳性率为54.5%。vWF、CD31、CD34、CD45阳性率分别为81.39%、45.80%、57.48%、0.17%。(2)平均每只小鼠骨髓经MACs分选后可获约4.7×10^5个CD117^+细胞,纯度为99.51%。(3)随着培养时间的延长,两组HSCs计数均有所增加,但共培养组HSCs扩增倍数大于对照组(P〈0.05)。第1~7天共培养组与对照组细胞数相对变化倍数分别为1.21、1.35、1.50、1.72、1.71、1.75和1.78(P〈0.05),第4天变化最明显。共培养7d后HSCs的CD117CD34共表达率为92.06%。结论 MECs对HSCs增殖有促进作用,共培养第4天促进作用最明显,并且MECs可以促进HSCs CD34的表达。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 造血干细胞 增殖
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热休克蛋白A12B对缺血/再灌注损伤心肌微血管内皮完整性的保护作用 预览
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作者 李楠 孔秋月 +1 位作者 戴乐杨 丁正年 《实用老年医学》 CAS 2018年第7期613-615,共3页
目的探讨热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)对心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后微血管无复流现象、血管通透性及其微血管内皮结构完整性的影响。方法实验选用同窝、8~10周龄雄性HSPA12B转基因鼠(HS... 目的探讨热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)对心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后微血管无复流现象、血管通透性及其微血管内皮结构完整性的影响。方法实验选用同窝、8~10周龄雄性HSPA12B转基因鼠(HSPA12B Transgenic,Tg)和野生型鼠(wild type,WT)。所有小鼠均接受手术,即结扎冠状动脉左前降支诱导心肌缺血(45 min),松开结扎为I/R开始。I/R 30 min后,采用番茄血凝素免疫荧光标记检测心肌微血管血流灌注情况,伊文斯兰染料检测心肌微血管渗透性。I/R 4 h后取小鼠心脏组织,电子显微镜观察心肌微血管内皮细胞超微结构变化。结果 I/R损伤后,与WT鼠相比,Tg鼠心肌无复流面积显著减少,血管通透性明显降低,微血管内皮细胞损伤减少且细胞间连接更加完整。结论高表达HSPA12B显著减轻心肌I/R诱导的心肌微血管内皮细胞结构和功能损伤,从而保护心肌I/R损害,提示HSPA12B可能为治疗心肌I/R损伤的新靶点。 展开更多
关键词 热休克蛋白A12B 心肌缺血/再灌注损伤 微血管内皮细胞
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天然水蛭素对人微血管再生作用的初步研究 被引量:1
12
作者 林冠宇 林博杰 +2 位作者 朱江英 潘新元 殷国前 《中国修复重建外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期1586-1591,共6页
目的研究天然水蛭素对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMVECs)增殖的影响及其诱导血管再生的机制。方法取HMVECs接种至Matrigel基质胶培养24h,体外建立三维培养模型,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。然... 目的研究天然水蛭素对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMVECs)增殖的影响及其诱导血管再生的机制。方法取HMVECs接种至Matrigel基质胶培养24h,体外建立三维培养模型,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。然后将细胞三维培养模型随机分为不同浓度天然水蛭素培养组(1、4、7ATU/mL组)以及单纯含10%FBS的DMEM培养基培养组(对照组)。各组细胞三维培养模型加入对应培养基后,培养24、48、72h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit8,CCK-8)检测细胞增殖情况;培养24h行成管实验并采用免疫荧光染色法测定细胞VEGF及Notch1表达水平。结果细胞三维培养观察示,HMVECs于基质胶上贴附良好,24h时完全形成管腔样结构。CCK-8检测示,各时间点1、4ATU/mL组A值均高于对照组(P<0.05),其中4ATU/mL组最高;而7ATU/mL组A值显著低于对照组以及1、4ATU/mL组(P<0.05)。细胞成管实验示,1、4ATU/mL组成管数量较对照组及7ATU/mL组明显增多,且4ATU/mL组多于1ATU/mL组,差异有统计学意义(P<0.05);7ATU/mL组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色示,与对照组比较,1、4ATU/mL组Notch1表达量增高,7ATU/mL组降低;其中4、7ATU/mL组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。1、4、7ATU/mL组VEGF表达量均较对照组增高,4ATU/mL组高于1、7ATU/mL组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论低、中浓度天然水蛭素可促进HMVECs增殖使血管再生,高浓度天然水蛭素则对HMVECs增殖及血管再生起抑制作用;其作用机制可能与VEGF-Notch信号通路有关。 展开更多
关键词 水蛭素 微血管内皮细胞 三维培养 NOTCH信号通路 血管再生
原代大鼠脑微血管内皮细胞的培养及鉴定 预览
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作者 马华根 唐元瑜 纪立金 《解剖学杂志》 CSCD 2018年第3期276-279,共4页
目的:建立一种纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞的分离培养方法。方法:取7-10日龄SD大鼠脑组织,经匀浆,牛血清白蛋白密度梯度离心,Ⅱ型胶原酶消化获得脑微血管段后,置于CO2培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、第Ⅷ因... 目的:建立一种纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞的分离培养方法。方法:取7-10日龄SD大鼠脑组织,经匀浆,牛血清白蛋白密度梯度离心,Ⅱ型胶原酶消化获得脑微血管段后,置于CO2培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞。结果在倒置显微镜下,体外培养24-48h后,细胞从贴壁的脑微血管段周围爬出,单个细胞为短梭形或多角形,呈团簇状单层贴壁生长,待细胞密集融合后,则成典型的“铺路石样”涡旋状排列;Ⅷ因子免疫细胞化学染色检测,相关抗原表达为阳性,细胞胞质显棕黄色,阳性细胞率达99%以上。结论:该方法能够成功分离培养出原代大鼠脑微血管内皮细胞。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 原代培养 Ⅷ因子相关抗原 大鼠
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祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞自噬及血管新生的影响 预览
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作者 马培泽 杨春 +2 位作者 杨雯晴 姜月华 吕娟 《中西医结合心脑血管病杂志》 2018年第24期3618-3622,共5页
目的观察祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管新生的影响。方法制备祛风生脉颗粒高剂量(Q-G组)、中剂量(Q-Z组)、低剂量(Q-D组)大鼠含药血清,分别与大鼠缺血CMECs共孵育,同时制备空白血清,分别与大鼠缺血CMECs(M... 目的观察祛风生脉颗粒对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管新生的影响。方法制备祛风生脉颗粒高剂量(Q-G组)、中剂量(Q-Z组)、低剂量(Q-D组)大鼠含药血清,分别与大鼠缺血CMECs共孵育,同时制备空白血清,分别与大鼠缺血CMECs(MX组)和正常大鼠CMECs(ZC组)共孵育。电镜观察各组细胞自噬小体及超微结构变化,Western-blot分析微管蛋白轻链3(LC3)–Ⅱ/Ⅰ比值及P62蛋白表达;划痕法观察细胞迁移能力,倒置相差显微镜下计数管腔形成数。结果与ZC组相比,MX组电镜下观察到自噬小体,但未见到自噬溶酶体,LC3–Ⅱ/Ⅰ比值及P62蛋白表达均升高(P <0.05),细胞迁移数和管腔形成数均较ZC组降低(P <0.05);与MX组相比,Q-D组和Q-Z组电镜下观察到自噬小体增多,同时观察到较多的自噬溶酶体,LC3–Ⅱ/Ⅰ比值升高,P62蛋白表达降低(P <0.05),细胞迁移数和管腔形成数均较MX组增多(P <0.05);与Q-D组和Q-Z组相比,Q-G组电镜下观察到自噬溶酶体数目进一步增多;与MX组相比,Q-G组LC3–Ⅱ/Ⅰ比值显著升高,P62蛋白表达明显降低(P <0.01),细胞迁移数和成管数较MX组均显著增多(P <0.01)。结论祛风生脉颗粒能改善缺血CMECs迁移和成管能力,从而促进缺血心肌血管新生,其作用与药物剂量呈正相关,机制可能与增强缺血CMECs自噬有关。 展开更多
关键词 缺血心肌 祛风生脉颗粒 自噬 微血管内皮细胞 血管新生 溶酶体
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基于血管生物学的神阙穴特异性解析 被引量:4
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作者 姜劲峰 徐旺芳 +1 位作者 俞兴根 吴晓静 《中国针灸》 CSCD 北大核心 2017年第12期1304-1308,共5页
从血管生物学的角度分析神阙穴的结构特异性。首先,从神阙穴的结构解剖、组织解剖、分子解剖3个层面进行分析。结构解剖:神阙穴具有明确的血管结构,是唯一可以直接作用于血管内膜的腧穴;神阙穴具有的血管联系和丰富微循环,是神阙治疗... 从血管生物学的角度分析神阙穴的结构特异性。首先,从神阙穴的结构解剖、组织解剖、分子解剖3个层面进行分析。结构解剖:神阙穴具有明确的血管结构,是唯一可以直接作用于血管内膜的腧穴;神阙穴具有的血管联系和丰富微循环,是神阙治疗效应特异性的基础。组织解剖:内皮细胞和微血管内皮细胞是神阙穴治疗效应启动环节特异性的组织基础。分子解剖:瞬时感受器电位香草酸家族(TRPV)通道、内皮细胞分泌的神经肽在神阙穴位结构功能中的作用。然后,根据神阙穴位的血管生物学特异性分析神阙隔盐灸“回阳救逆”的机制在于有效针对微血管内皮细胞功能障碍以及重复温热刺激方式获取最大化灸量。最后指出,神阙穴的血管生物学结构特征为以神阙作为治疗部位实现直接针对内皮细胞的治疗提供了可能。 展开更多
关键词 神阙 内皮细胞 微血管内皮细胞 瞬时感受器电位香草酸家族(TRPV)
扩张型心肌病心脏移植受者心脏病理学观察及微血管内皮细胞的表达及分布 预览 被引量:1
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作者 武迎 陈东 +6 位作者 方微 商建峰 付稳 滕飞 崔亚艳 于玮 朱庆 《心肺血管病杂志》 2017年第12期970-973,共4页
目的:观察扩张型心肌病(DCM)心脏移植受者心脏病理学特点及微血管内皮细胞的表达及分布,初步探讨内皮细胞与心肌纤维化的作用。方法:以2012年1月至2017年6月期间,本院收治的10例因DCM终末期行心脏移植患者的受者心脏作为研究对象。... 目的:观察扩张型心肌病(DCM)心脏移植受者心脏病理学特点及微血管内皮细胞的表达及分布,初步探讨内皮细胞与心肌纤维化的作用。方法:以2012年1月至2017年6月期间,本院收治的10例因DCM终末期行心脏移植患者的受者心脏作为研究对象。对照组采用来自法医鉴定中心的非疾病死亡的正常成年人尸检心脏标本6例。采用H&E染色、Masson三色组织化学染色观察DCM病理学改变,采用免疫组织化学方法检测CD34和α-SMA,观察微血管内皮细胞在DCM患者心肌组织中的表达。结果:(1)光镜下,终末期DCM的主要病理改变是心肌细胞退行性变,心肌间质纤维化;(2)通过透射电镜观察发现终,末期DCM主要改变是心肌退行性变,心肌肌原纤维Z线排列不规则,部分心肌细胞核肥大,心肌肌原纤维灶性溶解,心肌间质水肿,线粒体增多,线粒体肿胀空泡化,可见髓鞘样结构,心肌间质毛细血管内皮细胞胞质肿胀,细胞连接消失,吞饮小泡减少;(3)两组心肌组织中均有微血管内皮细胞分布,DCM中CD34表达明显低于对照组,α-SMA的表达明显高于对照组。结论:DCM中血管内皮细胞的超微结构变化,可能导致其功能改变,内皮细胞可能通过内皮间质细胞转化参与了DCM中心肌纤维化。 展开更多
关键词 扩张型心肌病 心肌纤维化 微血管内皮细胞 内皮间质细胞转化 结构
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短暂高糖环境暴露对人真皮微血管内皮细胞生物学行为的影响 被引量:1
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作者 乔亮 杨惠忠 +3 位作者 李学川 黄晓琴 原博 周增丁 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期77-82,共6页
目的观察短暂高糖环境暴露对体外培养人真皮微血管内皮细胞生物学行为的影响。方法本研究所有检测指标对应的细胞分组及处理如下:将第4代人真皮微血管内皮细胞按随机数字表法分成3组,每组12孔。对照组细胞采用含5mmol/LD-葡萄糖的完... 目的观察短暂高糖环境暴露对体外培养人真皮微血管内皮细胞生物学行为的影响。方法本研究所有检测指标对应的细胞分组及处理如下:将第4代人真皮微血管内皮细胞按随机数字表法分成3组,每组12孔。对照组细胞采用含5mmol/LD-葡萄糖的完全培养液培养7d;短暂高糖组细胞在含30mmol/LD-葡萄糖的完全培养液中培养2d,再改用含5mmol/LD-葡萄糖的完全培养液继续培养5d;长时高糖组细胞采用含30mmol/LD-葡萄糖的完全培养液培养7d。(1)采用倒置光学显微镜观察对照组和长时高糖组培养7d以及短暂高糖组培养2、7d细胞形态学变化。(2)培养0、2、4、7d,采用细胞存活率分析计数器检测细胞增殖率。(3)培养2d后进行划痕实验,划痕后继续培养,于划痕后0、24、48、72、96、120h测量划痕面积,计算后5个时相点细胞迁移率。(4)培养0、2、4、7d,采用细胞分析仪检测细胞凋亡率。(5)培养7d后再在基质胶上培养24h,采用倒置光学显微镜观察血管样结构形成情况,并计算血管样结构长度、分叉点数量。(6)培养2、4、7d,采用实时荧光定量RT.PCR法检测血管化相关基因基质金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP-3)mRNA表达。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验。结果(1)对照组细胞培养7d,细胞呈卵圆形,铺路石样排列。短暂高糖组细胞培养2d,形态变细长,排列丧失铺路石样;培养7d仍保持细长,丧失铺路石样排列。长时高糖组细胞培养7d,形态变细长,排列丧失铺路石样。(2)培养0d,3组细胞增殖率差异无统计学意义(F=0.23,P〉0.05)。培养2d,短暂高糖组和长时高糖组细胞增殖率相近(P〉0.05),且均低于对照组(P值均小于0.01);培养4、7d,短暂高糖组和对照组细胞增殖率相近(P值均大于0.05),� 展开更多
关键词 糖尿病 细胞增殖 细胞运动 细胞凋亡 微血管内皮细胞 新生血管 难愈性创面
香鳞毛蕨对脂多糖诱导的人真皮微血管内皮细胞增殖及mRNA表达的影响 预览
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作者 李亚俊 陈微淙 +2 位作者 彭冰 薛妍 李萍 《医学研究杂志》 2017年第12期28-31,共4页
目的 研究香鳞毛蕨醇提物对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMEC)炎性反应的影响。方法 分别用0、0.4、2和10μg/ml的LPS作用于人真皮微血管内皮细... 目的 研究香鳞毛蕨醇提物对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMEC)炎性反应的影响。方法 分别用0、0.4、2和10μg/ml的LPS作用于人真皮微血管内皮细胞,孵育24h建立微血管内皮细胞炎性模型。实验分为HDMEC空白对照组、LPS模型组和LPS+香鳞毛蕨药物组,分别进行药物处理,观察不同剂量香鳞毛蕨醇提物处理对各组HDMEC细胞增殖和炎症相关基因mRNA表达的影响。结果 香鳞毛蕨醇提物可以抑制2μg/ml LPS刺激下的微血管内皮细胞的增殖(P〈0.05),并降低脂多糖所诱升的血管内皮生长因子VEGF以及炎症相关基因NF-κB、VCAM-1的表达水平(P〈0.01)。结论 香鳞毛蕨醇提物可能通过抑制炎症相关基因的表达来抑制微血管内皮细胞的炎性增殖。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 脂多糖 香鳞毛蕨 炎症 基因表达
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缺氧诱导下人微血管内皮细胞的活化与腺苷水平的关系 预览 被引量:2
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作者 艾李倩玉 黄婵娟 +2 位作者 陈琛 林森 叶剑 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期26-31,共6页
背景目前普遍认为视网膜局部缺氧状态是诱导视网膜新生血管形成的主要原因之一,其发病机制研究是国内外的研究热点。研究证实缺氧刺激下多种转录因子活性增加可促进微血管内皮细胞活化,导致新生血管形成,其中除血管内皮生长因子外,... 背景目前普遍认为视网膜局部缺氧状态是诱导视网膜新生血管形成的主要原因之一,其发病机制研究是国内外的研究热点。研究证实缺氧刺激下多种转录因子活性增加可促进微血管内皮细胞活化,导致新生血管形成,其中除血管内皮生长因子外,腺苷促血管生成作用也逐渐受到关注。目的研究缺氧诱导下微血管内皮细胞的活化过程与腺苷水平之间的关系,探讨腺苷微环境对血管生成的促进作用。方法对人微血管内皮细胞株(HMEC-1)进行体外培养,将培养的细胞分为常氧组和缺氧组,常氧组细胞置于5%CO2的细胞培养箱内培养,缺氧组细胞置于体积分数1%O1、94%N1和5%CO1的细胞培养箱内培养。采用CCK8法和EDU法检测各组细胞增生的吸光度(A值)和增生比例;采用Transwell小室法检测各组迁移细胞数与侵袭细胞数;采用Western blot法检测细胞中CD39和CD73蛋白的相对表达水平,采用免疫荧光法检测细胞中CD39和CD73的表达;采用高效液相仪检测各组细胞中的腺苷浓度。结果常氧组和缺氧组培养后12h细胞增生值(A值)分别为0.715±0.067和0.821±0.056,培养后24hA值分别为0.946±0.028和0.998±0.028,缺氧组12h组和24h组细胞增生值均高于常氧组,差异有统计学意义(t12h=3.805、t24h=3.222,均P〈0.01);缺氧组细胞培养后24h细胞增生比例明显高于常氧组,差异均有统计学意义(t=-6.868,P〈O.01)。常氧组和缺氧组细胞培养24h迁移细胞数分别为185.3±10.594和300.7±22.853,侵袭细胞数分别为74.2±10.741和107.5±7.007,缺氧组迁移和侵袭细胞数均明显多于常氧组,差异均有统计学意义(t=-12.124、-6.367,均P〈0.01)。缺氧组细胞培养后12h和24h细胞中CD39和CD73蛋白的相对表达水平明显高于常氧组,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。缺氧组细胞培 展开更多
关键词 新生血管 视网膜 微血管内皮细胞 血管生成 腺苷
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siRNA沉默AT2受体通过Ang(1-9)-ACE2-AT2通路抑制心脏微血管内皮细胞NO的生成 预览
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作者 张岩 李永勤 +5 位作者 王聪霞 张春艳 胡艳超 寇惠娟 马维冬 刘晓唤 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第8期757-763,共7页
目的研究重组人血管紧张素转化酶2(rh ACE2)作用于心脏微血管内皮细胞后对NO产生的影响,采用siRNA沉默AT2受体研究Ang(1-9)-ACE2-AT2通路在这一过程中的作用。方法体外培养人心脏微血管内皮细胞(CMVEC),分为对照组、AngⅡ组、Ang... 目的研究重组人血管紧张素转化酶2(rh ACE2)作用于心脏微血管内皮细胞后对NO产生的影响,采用siRNA沉默AT2受体研究Ang(1-9)-ACE2-AT2通路在这一过程中的作用。方法体外培养人心脏微血管内皮细胞(CMVEC),分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+rh ACE2组、AT2受体抑制剂组和阴性对照siRNA组。Griess试剂法测定细胞培养上清液中NO的含量,RT-PCR检测HUVEC中eNOS mRNA的表达,检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性。Western blot检测磷酸化eNOS的表达。观察rh ACE2对AngⅡ作用后CMVEC生成NO、eNOS mRNA、eNOS蛋白表达的影响,同时观察加用AT2受体抑制剂PD123319干预后,rh ACE2对磷酸化eNOS蛋白表达的影响。观察siRNA干扰CMVEC中AT2受体蛋白后对eNOS活性、NO的影响。结果 AngⅡ组NO的含量[(3.495±0.362)nmol/L]明显低于对照组[(11.513±0.392)nmol/L,P〈0.05];AngⅡ+rhACE2组细胞培养液中NO的含量和磷酸化eNOS表达水平均明显高于AngⅡ组(P〈0.05),而eNOS mRNA和非磷酸化eNOS蛋白表达水平与AngⅡ组相比无统计学差异(P〉0.05)。经AT2通路抑制剂PD123319干预后的AT2受体抑制剂组磷酸化eNOS表达水平明显低于AngⅡ+rhACE2 30 min组(P〈0.05)。Western blot检测结果显示转染AT2siRNA组转染48 h AT2受体蛋白表达降低(P〈0.05);与AT2受体抑制剂组和阴性对照siRNA组相比,转染AT2 siRNA组的eNOS活性和NO含量均显著降低。结论 rh ACE2作用于人心脏微血管内皮细胞后,eNOS活性增强,NO生成增加,Ang(1-9)-ACE2-AT2信号通路参与这一过程。 展开更多
关键词 siRNA AT2受体 重组人血管紧张素转化酶2 Ang(1-9)-ACE2-AT2通路 微血管内皮细胞
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