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曝气灌溉条件下土壤N2O排放特征及影响因子分析 预览
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作者 雷宏军 刘欢 +2 位作者 臧明 潘红卫 陈德立 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2115-2122,共8页
为了明确曝气灌溉下土壤N2O排放特征及主要影响因子,实验设置了2个灌水量(70%和90%田间持水量)和2个增氧水平(5,40mg/L),采用静态箱法和q PCR技术对土壤N2O通量及土壤关键功能基因进行测定,研究不同灌水量和增氧水平对土壤充水孔隙度、... 为了明确曝气灌溉下土壤N2O排放特征及主要影响因子,实验设置了2个灌水量(70%和90%田间持水量)和2个增氧水平(5,40mg/L),采用静态箱法和q PCR技术对土壤N2O通量及土壤关键功能基因进行测定,研究不同灌水量和增氧水平对土壤充水孔隙度、溶解氧、氧化还原电位(Eh)、矿质氮及氨氧化古菌(AOA)、氨氧化细菌(AOB)和反硝化基因(narG和nosZ)的影响.结果表明:培养过程中,各处理N2O排放通量均呈现先增加后降低的趋势,于灌溉后1d达到峰值;曝气量和灌水量的增加可显著增加土壤N2O的排放通量和排放峰值.灌溉造成土壤含水量增加的同时,降低了土壤溶解氧和Eh;曝气可提高土壤溶解氧和Eh,改善土壤通气性(P<0.05),而对土壤充水孔隙度无显著影响.土壤充水孔隙度、Eh、NO3^--N含量是曝气灌溉下驱动土壤N2O排放的主要理化因子.曝气显著增加了AOA的基因拷贝数,且N2O排放与AOA的基因拷贝数呈显著正相关关系(P<0.05).研究结果为进一步明确曝气灌溉对土壤N2O排放的影响机制和曝气灌溉模式下农田N2O排放管理提供支撑. 展开更多
关键词 曝气灌溉 N2O排放 溶解氧 氧化还原电位 基因 拷贝数 影响因子
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血浆游离线粒体DNA拷贝数与脓毒症患者序贯器官衰竭评估评分的关联研究
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作者 杨毅 姚鑫儿 +2 位作者 杨静娟 郎夏冰 吴彬彬 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期366-369,共4页
目的探讨脓毒症患者血浆游离线粒体DNA ( mitochondrial DNA, mtDNA )拷贝数与序贯器官衰竭评估(sequential organ faliure assessment, SOFA )评分的关系方法收集2013年10月至2014年5月就诊于浙江大学医学院附属第一医院重症监护室(int... 目的探讨脓毒症患者血浆游离线粒体DNA ( mitochondrial DNA, mtDNA )拷贝数与序贯器官衰竭评估(sequential organ faliure assessment, SOFA )评分的关系方法收集2013年10月至2014年5月就诊于浙江大学医学院附属第一医院重症监护室(intensive care unit, ICU )的脓毒症患者440例作为研究对象.提取440例脓毒症患者血浆DNA,应用实时荧光定量PCR标准曲线法检测经核DNA校正的mtDNA拷贝数.采用SPSS 23.0统计软件分析数据,利用多因素Logistic回归分析血浆游离mtDNA拷贝数与SOFA评分的关系.结果利用受试者工作者特征(receiver operating characteristic, ROC )曲线分析,以 SOFA 评分 5.5 分为分界点,分为高 SOFA评分组和低SOFA评分组.高SOFA评分组患者血浆游离mtDNA拷贝数显著低于低SOFA评分组[185.65 ( 75.67-514.75 ) vs 632.09 ( 220.11-1 303.53 ), P<0.01].多因素 Logistic 回归分析发现,低血浆游离mtDNA拷贝数是SOFA评分增高的独立预测因子(OR=4.16, 95%C7:2.73~6.35,P<0.01 ).结论高SOFA评分的脓毒症患者血浆游离mtDNA拷贝数较低,低游离血浆mtDNA拷贝数可能提示更严重的多脏器损害. 展开更多
关键词 脓毒症 线粒体DNA 拷贝数 SOFA评分 器官功能障碍
狂犬病病毒G蛋白在水稻中的表达及遗传稳定性鉴定
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作者 申雪静 张二芹 +8 位作者 许倩茹 刘林科 万博 刘运超 孙亚宁 赵东 牛香香 邓瑞广 张改平 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期204-211,共8页
狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录... 狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录号:ABI53869.1)序列插入到中间载体pMP3上,成功构建中间载体pMP3-G,然后将中间载体pMP3-G和植物载体pCAMBIA1300通过双酶切、连接,成功地构建了植物表达载体pCAMBIA1300-G。挑选空白未转基因水稻(Oryza sativa)种子TP309消毒,在愈伤诱导培养基上31℃光照3 d,使其长出愈伤组织,用已经转入狂犬病G基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105去侵染愈伤组织,并与愈伤组织共培养3 d,将狂犬病G基因导入水稻愈伤组织中。愈伤组织再经过潮霉素抗性筛选、分化、出芽、生根,获得313株植株,取313株植株的叶片通过十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)法提取叶片基因组DNA,对其进行PCR扩增,经核酸胶进行初步鉴定,有79株为阳性,经过炼苗、种植共获得50株阳性表达植株。分别随机挑选50株阳性植株的种子,切半,标记,将不含胚乳的一半研磨,用提取液提取蛋白后通过抗原检测试纸条和Western blot检测,结果表明,G蛋白在转基因水稻种子中成功表达,且具有良好的反应原性。从50株阳性表达植株中挑选出高表达、反应原性最好的4个株系,将这4个株系T1代中与检测阳性结果相对应的含有胚乳的另一半种子进行组织培养种植,在植株移栽大田前后,再次用CTAB法提取T1代植株叶片基因组DNA,并以水稻的内源基因水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)为内参基因,通过相对荧光定量PCR(relative fluorescence quantitative PCR)方法筛选阳性植株中的纯合植株,通过绝对荧光定量PCR(absolute real-time PCR)计算纯合植株的拷贝数,结果显示,132株植株中35株为� 展开更多
关键词 狂犬病病毒 G基因 转基因水稻 荧光定量 纯合子 拷贝数
脊髓性肌萎缩症患儿SMN1和SMN2基因拷贝数与临床表型的相关性分析 预览
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作者 章印红 张云茜 +9 位作者 朱宝生 贺静 王蕾 唐新华 郭晶晶 靳婵婵 陈红 张杰 章锦曼 李利 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期239-243,共5页
目的 对脊髓性肌萎缩症(SMA)患儿的运动神经元存活基因1(SMN1)和SMN2拷贝数与临床表型之间的关系进行分析,提高对SMA患儿的早期诊断和临床干预水平。方法 选取45例SMA患儿,应用多重连接依赖性探针扩增技术对SMN1和SMN2基因拷贝数进行检... 目的 对脊髓性肌萎缩症(SMA)患儿的运动神经元存活基因1(SMN1)和SMN2拷贝数与临床表型之间的关系进行分析,提高对SMA患儿的早期诊断和临床干预水平。方法 选取45例SMA患儿,应用多重连接依赖性探针扩增技术对SMN1和SMN2基因拷贝数进行检测,分析SMN基因拷贝数同临床表型之间的关系。结果 45例SMA患儿中,SMN1第7和8外显子纯合缺失者为42例,占93%(42/45);仅有第7外显子缺失者为3例,占7%(3/45)。SMA不同临床分型和SMN1基因第7、8外显子缺失类型间无相关性(P>0.05);SMA患儿和健康儿童的SMN2基因拷贝数分布差异有统计学意义(P<0.05),前者以2和3拷贝者居多,后者以1和2拷贝者居多;不同SMA临床分型间SMN2拷贝数分布差异有统计学意义(P<0.05),SMN2基因为2拷贝者发病年龄明显小于3和4拷贝者。Ⅰ型SMA患儿中SMN2拷贝数以2或3拷贝者居多,Ⅱ型以3拷贝者居多,Ⅲ型以3或4拷贝者居多。随着SMN2拷贝数增加,患儿发病年龄越大,保有的运动功能和临床结局越好,SMN2基因拷贝数同临床结局间的关系存在显著性差异(P<0.05)。结论 SMN2基因通过剂量补偿效应减轻SMA疾病严重程度,SMN2拷贝数同SMA临床表型具有相关性,可将其作为预测疾病严重程度的依据之一。 展开更多
关键词 脊髓性肌萎缩症 运动神经元存活基因 拷贝数 临床表型 儿童
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中国北方汉族人群LPA KIV-2拷贝数变异与Lp(a)及冠心病的关系 预览
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作者 郑晔 滕世超 姜晓峰 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第24期3053-3057,共5页
目的探讨中国北方汉族人群载脂蛋白(a)基因(LPA)KIV-2拷贝数变异与血清脂蛋白(a)[Lp(a)]及冠心病(CHD)的关系。方法选择2016年10月至2018年3月在哈尔滨医科大学附属第四医院急诊内科和心内科就诊的275例患者,其中通过临床症状和影像学... 目的探讨中国北方汉族人群载脂蛋白(a)基因(LPA)KIV-2拷贝数变异与血清脂蛋白(a)[Lp(a)]及冠心病(CHD)的关系。方法选择2016年10月至2018年3月在哈尔滨医科大学附属第四医院急诊内科和心内科就诊的275例患者,其中通过临床症状和影像学方法明确诊断为CHD的84例患者设为CHD组,冠状动脉狭窄程度<50%的191例冠状动脉粥样硬化患者设为对照组,提取全血DNA后,用荧光定量PCR(qPCR)检测LPA KIV-2拷贝数,并检测所有患者的Lp(a)水平。结果Lp(a)与拷贝数呈负相关关系(r=-0.33,P<0.01),并且在年龄分层下,每个年龄段下随着LPA KIV-2拷贝数增加,血清Lp(a)水平都随之降低(P<0.05)。通过逐步Logistic回归分析,得出年龄、性别、LPA KIV-2拷贝数、Lp(a)、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)对CHD有影响。结论中国北方汉族人群LPA KIV-2拷贝数与Lp(a)水平呈负相关关系,血清Lp(a)水平和LPA KIV-2拷贝数为CHD发病的危险因素。 展开更多
关键词 脂蛋白(a) LPAKIV-2 拷贝数 冠心病 荧光定量PCR
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Copy number variation related disease genes
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作者 Chaima Aouiche Xuequn Shang Bolin Chen 《中国电气与电子工程前沿:英文版》 CSCD 2018年第2期99-112,共14页
关键词 疾病基因 拷贝数 PROTEOMICS 基因变化 复杂疾病 挑战性 据集 孟德尔
Validation of the diagnostic potential of mtDNA copy number derived from whole genome sequencing
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作者 Rachel Brockhage Jesse Slone +3 位作者 Zeqian Ma Madhuri R.Hegde C.AlexANDer Valencia Taosheng Huang 《遗传学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第6期333-335,共3页
关键词 MTDNA 拷贝数 诊断 染色体 定序 病理学
mtDNA拷贝数调控MDSCs-IPCs合成及胰岛素释放 预览
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作者 任宇 梁红宇 +1 位作者 楠吉桑漠 刘晓玲 《中国继续医学教育》 2018年第35期145-147,共3页
目的研究并探讨mtDNA拷贝数调控MDSCs-IPCs合成及释放胰岛素的机理。方法收集‘大鼠’MDSCs,将EtBr处理前后的细胞诱导为胰岛素分泌细胞(IPCs),分别为对照组和诱导组。分析0h、3 h、6 h、12 h、24 h、2 d、3 d、7 d、12 d各时间点mtDNA... 目的研究并探讨mtDNA拷贝数调控MDSCs-IPCs合成及释放胰岛素的机理。方法收集‘大鼠’MDSCs,将EtBr处理前后的细胞诱导为胰岛素分泌细胞(IPCs),分别为对照组和诱导组。分析0h、3 h、6 h、12 h、24 h、2 d、3 d、7 d、12 d各时间点mtDNA拷贝数变化情况、诱导成IPCs的数量以及检测GSK-3β、sFRP、TCF/LEF及insulin、C-peptide的表达及甲基化差异情况。结果诱导组的mtDNA拷贝数少于对照组,诱导组和对照组分化成IPCs的数量占各自样品细胞数量的(87.65±1.50)%和(37.93±1.85)%,诱导组的GSK-3β、TCF/LEF表达率小于对照组,sFRP、insulin、C-peptide表达率大于对照组,各项结果对比,差异均具有统计意义(P <0.05)。结论 mtDNA拷贝数增加能提高MDSCs-IPCs转化率、增加胰岛素释放。 展开更多
关键词 MTDNA 拷贝数 调控 MDSCs-IPCs合成 胰岛素 临床研究
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双重数字PCR在转基因水稻检测中的应用
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作者 朱鹏宇 张亮亮 +3 位作者 杜智欣 王晨光 朱水芳 付伟 《植物检疫》 北大核心 2018年第4期52-56,共5页
本研究基于微滴式数字PCR(droplet Digital PCR,dd PCR)技术,针对转基因水稻Bt汕优63外源基因建立了双重数字PCR检测方法。该方法在常见的转基因品系中具有很好的特异性,转基因样品绝对定量检测范围为0.5%~100%,定量检测限可达0.5%... 本研究基于微滴式数字PCR(droplet Digital PCR,dd PCR)技术,针对转基因水稻Bt汕优63外源基因建立了双重数字PCR检测方法。该方法在常见的转基因品系中具有很好的特异性,转基因样品绝对定量检测范围为0.5%~100%,定量检测限可达0.5%、定性检出限可达0.05%。与目前的标准检测技术相比,双重数字PCR具有更低的定量检出限,可以更好的满足实际检测的需要。 展开更多
关键词 微滴字PCR 转基因水稻 定量检测 拷贝数
线粒体DNA变异与肿瘤的相关性研究进展 预览
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作者 刘畅 白月琴 赵晓珍 《中国肿瘤临床》 CSCD 北大核心 2018年第6期306-310,共5页
肿瘤的发生发展是一个较为复杂的生物学过程,其中线粒体在肿瘤细胞代谢过程中扮演重要角色。线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)变异包括点突变、缺失、插入以及拷贝数变异等,这些变异可能参与肿瘤细胞的增殖、生长、侵袭和转移。本... 肿瘤的发生发展是一个较为复杂的生物学过程,其中线粒体在肿瘤细胞代谢过程中扮演重要角色。线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)变异包括点突变、缺失、插入以及拷贝数变异等,这些变异可能参与肿瘤细胞的增殖、生长、侵袭和转移。本文就mtDNA突变、拷贝数改变、mtDNA与核基因(nuclear DNA,nDNA)的比值,以及mtDNA变异与肿瘤发生发展的相关性研究及临床进展进行综述,旨在为深入认识mtDNA变异与肿瘤发生发展的关系并为临床治疗提供更多的参考依据。 展开更多
关键词 线料体tDNA 突变 拷贝数 核基因 肿瘤
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人博卡病毒微滴数字PCR定量方法的建立 预览
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作者 邓幼平 刘颖娟 +3 位作者 王笑臣 刘佳明 杨占秋 赵东赤 《中南民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期32-36,共5页
为准确、快速地从临床鼻咽拭子样本中筛选出人博卡病毒(HBoV)感染的阳性样本,以HBoV-sh9基因的保守区序列为检测靶标合成引物和探针,建立了微滴数字PCR(ddPCR)检测HBoV的方法.结果表明:HBoV ddPCR方法具有较高的特异性,在(0.5~6.8)×... 为准确、快速地从临床鼻咽拭子样本中筛选出人博卡病毒(HBoV)感染的阳性样本,以HBoV-sh9基因的保守区序列为检测靶标合成引物和探针,建立了微滴数字PCR(ddPCR)检测HBoV的方法.结果表明:HBoV ddPCR方法具有较高的特异性,在(0.5~6.8)×10 3 copies/μL HBoV DNA浓度范围内,具有良好的线性和精确度,定量限低至0.5 copies/μL.182份临床样本检测结果显示:HBoV感染的阳性率为8.24%.此建立的HBoV ddPCR方法在定量限、准确性和重复性上较常规PCR优势明显,不受样品基质和扩增效率的影响. 展开更多
关键词 微滴字聚合酶链式反应 人博卡病毒 拷贝数 阳性率
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Clinical significance of germline copy number variation in susceptibility of human diseases
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作者 Liwen Hu Xinyue Yao +6 位作者 Hairong Huang Zhong Guo Xi Cheng Yang Xu Yi Shen Biao Xu Demin Li 《遗传学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第1期3-12,共10页
Germline 拷贝数字变化(CNV ) 被认为是人的基因多型性的一种重要形式。以前的研究由先进技术在人的染色体识别了 CNV 的数量,例如比较 genomic 杂交,单个核苷酸 genotyping,并且高产量的定序。CNV 被推测从多重机制被发源,例如 non... Germline 拷贝数字变化(CNV ) 被认为是人的基因多型性的一种重要形式。以前的研究由先进技术在人的染色体识别了 CNV 的数量,例如比较 genomic 杂交,单个核苷酸 genotyping,并且高产量的定序。CNV 被推测从多重机制被发源,例如 nonallelic 相应再结合(NAHR ) 和 nonhomologous 加入结束(NHEJ ) 。CNV 比单个核苷酸多型性(SNP ) 盖住大得多的染色体规模,并且可以借助于基因剂量,基因熔化,基因混乱,和远程的规定改变基因表示层次在人的致病的效果,因此影响的单个显型和玩的关键角色。与普通复杂疾病连接 CNV 的研究的数字在最近的年里戏剧性地增加了。这里,我们提供 germline CNV 的当前的理解的全面评论,并且与危险性总结 germline CNV 的协会到在最近的年里被识别的许多人的疾病。我们也建议应该在未来研究被探讨的潜在的问题。 展开更多
关键词 复杂疾病 危险性 拷贝数 基因剂量 临床 染色体 核苷酸 多型性
Rare germline copy number variants in colorectal cancer predisposition characterized by exome sequencing analysis
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作者 Sebastia Franch-Exposito Clara Esteban-Jurado +25 位作者 Pilar Garre Isabel Quintanilla Saray Duran-Sanchon Marcos Diaz-Gay Laia Bonjoch Miriam Cuatrecasas Esther Samper Jenifer Munoz Teresa Ocana Sabela Carballal Maria Lopez-Ceron Antoni Castells Maria Vila-Casadesus Sophia Derdak Steven Laurie Sergi Beltran Jaime carvajal Luis Bujanda Clara Ruiz-Ponte Jordi Camps Meritxell Gironella Juan Jose Lozano Francesc Balaguer Joaquin Cubiella Trinidad Caldes Sergi Castellvi-Bel 《遗传学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第1期41-45,共5页
关键词 拷贝数 变体 癌症 定序 描绘 世界范围 基因变化 DNA
香猪ADAMTS-1基因克隆及遗传效应分析
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作者 赵永霞 许瑶 +1 位作者 喻昌燕 谢健 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第3期1145-1151,共7页
为了研究繁殖候选基因ADAMTS-1对香猪繁殖性状的调控机理,本研究以高产、低产两个香猪群体为实验材料,克隆ADAMTS-1基因全长,分析其存在的多态性位点,并对第七外显子5996位进行产仔数的遗传效应分析,同时检测两个香猪群体中该基因... 为了研究繁殖候选基因ADAMTS-1对香猪繁殖性状的调控机理,本研究以高产、低产两个香猪群体为实验材料,克隆ADAMTS-1基因全长,分析其存在的多态性位点,并对第七外显子5996位进行产仔数的遗传效应分析,同时检测两个香猪群体中该基因的拷贝数变异。结果表明,ADAMTS-1基因包含8个内含子和9个外显子区域。该基因第七外显子5996位存在多态性,香猪品种中以B等位基因为主,基因型频率BB〉AB,未检测到纯合AA基因型的个体,而西方猪种中以AA或AB型为主。高产和低产两个香猪群体中的ADAMTS-1基因的拷贝数都是复制型为主,但存在拷贝数的差异,高产香猪群体中的拷贝数增加较多,多为3个或3个以上拷贝,而低产群体中多为双拷贝,低产群体中的拷贝数明显低于高产群体。结果提示,ADAMTS-1基因的拷贝数变异以及第7外显子5996位的多态性可能是影响香猪繁殖力的重要因素之一。 展开更多
关键词 香猪 ADAMTS-1 繁殖 遗传效应 拷贝数
副溶血性弧菌微滴数字PCR定量方法的建立 预览
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作者 方佩佩 赵丽青 +5 位作者 马云 王昌军 唐静 李正义 贾俊涛 姜英辉 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2018年第19期252-257,共6页
目的:采用微滴式数字PCR技术(Droplet digital PCR,ddPCR),建立副溶血性弧菌快速定量检测。方法:以副溶血性弧菌TLH基因为靶基因,验证确定ddPCR方法的特异性及定量检测的线性范围,以常检出副溶血性弧菌的海产品鳕鱼为样品进行阳性添... 目的:采用微滴式数字PCR技术(Droplet digital PCR,ddPCR),建立副溶血性弧菌快速定量检测。方法:以副溶血性弧菌TLH基因为靶基因,验证确定ddPCR方法的特异性及定量检测的线性范围,以常检出副溶血性弧菌的海产品鳕鱼为样品进行阳性添加,确定方法的可行性。结果:本试验中采用ddPCR检测得到副溶血性弧菌特异性好,有效基因组DNA浓度范围为2-19440拷贝/20μL,分析得菌悬液浓度为50-4.86×10^5CFU/mL,与3M测试片所得菌悬液浓度无显著性差异(p〉 0.05),与荧光PCR相比,可以进行更低浓度检测且能准确定量。结论:副溶血性弧菌ddPCR定量检测技术特异性良好、灵敏度高、结果准确,具有实际应用价值。 展开更多
关键词 微滴式字PCR(ddPCR) 副溶血性弧菌 定量检测 拷贝数
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脊尾白虾不同发育期mtDNA拷贝数变化特征分析 预览
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作者 张培 徐莞媛 +5 位作者 李志辉 高焕 张庆起 赖晓芳 陈建华 阎斌伦 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期173-179,共7页
为了解脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)在不同发育期线粒体基因组(mtDNA)拷贝数的变化特征,本研究共采集其8个时期(受精卵期、溞状幼体Ⅰ期、溞状幼体Ⅱ期、溞状幼体Ⅲ期、溞状幼体Ⅳ期、溞状幼体Ⅴ期、仔虾期和成虾期)的DNA样品,利用... 为了解脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)在不同发育期线粒体基因组(mtDNA)拷贝数的变化特征,本研究共采集其8个时期(受精卵期、溞状幼体Ⅰ期、溞状幼体Ⅱ期、溞状幼体Ⅲ期、溞状幼体Ⅳ期、溞状幼体Ⅴ期、仔虾期和成虾期)的DNA样品,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术,对上述各发育期单个细胞中的mtDNA拷贝数进行了测定。检测结果显示,脊尾白虾受精卵期、溞状幼体Ⅰ期、溞状幼体Ⅱ期、溞状幼体Ⅲ期、溞状幼体Ⅳ期、溞状幼体Ⅴ期、仔虾期和成虾期的mtDNA拷贝数的均值分别为2366、2648、2644、2873、3559、9948、6452和8872。进一步统计分析结果显示,mtDNA拷贝数与发育时间存在正相关性,相关系数为0.83。研究表明,随着脊尾白虾不断生长,其单个细胞中mtDNA拷贝数总体呈上升趋势。 展开更多
关键词 脊尾白虾 TaqMan探针法 线粒体基因组 不同发育期 拷贝数
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PCB153对人肾上皮细胞中LINE-1表达及转座的影响
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作者 李佳慈 景亚青 +3 位作者 茹雅维 鞠明艳 李克秋 李光 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2018年第3期241-245,共5页
[目的] 探究2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)对人肾上皮细胞系(293T)细胞中长散在重复序列-1(LINE-1)基因表达和转座的影响。[方法] 293T细胞每2 d传代一次,传代后立即使用5 μmol/L PCB153进行染毒。染毒后的细胞置于3... [目的] 探究2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)对人肾上皮细胞系(293T)细胞中长散在重复序列-1(LINE-1)基因表达和转座的影响。[方法] 293T细胞每2 d传代一次,传代后立即使用5 μmol/L PCB153进行染毒。染毒后的细胞置于37℃、体积分数5% CO2培养箱中继续培养,连续染毒10 d。同时设置二甲基亚砜(DMSO)对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测LINE-1开放阅读框1(ORF-1)和开放阅读框2(ORF-2)基因的mRNA表达水平及拷贝数,LINE-1拷贝数增加反映其发生转座。Western blot检测LINE-1 ORF-1和ORF-2蛋白表达水平。[结果] 与对照组比较,从第4天开始PCB153染毒组细胞中LINE-1 ORF-1 mRNA表达水平增加(P 〈 0.05),从第6天开始PCB153染毒组细胞中LINE-1 ORF-2 mRNA表达水平增加(P 〈 0.05)。染毒第10天时,与对照组(LINE-1 ORF-1:2.74±0.51;LINE-1 ORF-2:0.57±0.10)相比,PCB153染毒组的LINE-1 ORF-1蛋白表达水平(4.39±0.85)和LINE-1 ORF-2蛋白表达水平(0.78±0.10)均明显增加(P 〈 0.05)。染毒第10天时,PCB153染毒组与对照组的LINE-1 ORF-1拷贝数分别为1.43±0.64和0.83±0.37,LINE-1 ORF-2拷贝数分别为1.11±0.52和0.81±0.12,差异均具有统计学意义(P 〈 0.05)。[结论] PCB153暴露可增加LINE-1的表达和拷贝数,诱导其转座。 展开更多
关键词 PCB153 人肾上皮细胞 LINE-1 基因表达 拷贝数 转座
抗草甘膦转基因玉米外源基因ddPCR拷贝数分析 预览 被引量:1
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作者 余桂容 张维 +3 位作者 杜文平 宋军 陈谦 徐利远 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1707-1712,共6页
【目的】本研究是从前期获得的100余份转基因抗除草剂草甘膦玉米品系中,挑选T抗-1等14个转基因玉米品系进行拷贝数检测。【方法】采用一种新型的拷贝数分析方法——微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,简称dd PCR),设计特异引物对... 【目的】本研究是从前期获得的100余份转基因抗除草剂草甘膦玉米品系中,挑选T抗-1等14个转基因玉米品系进行拷贝数检测。【方法】采用一种新型的拷贝数分析方法——微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,简称dd PCR),设计特异引物对外源抗草甘膦基因2m G2-epsps进行绝对定量分析。【结果】供试的14份转基因材料中10份是单拷贝品系。同时,通过引物探针特异性试验、叶片基因组DNA的PCR抑制和浓度检测、转基因玉米的外源基因2m G2-epsps的实时PCR检测和基因组DNA的酶切等系列研究,建立稳定的转基因玉米拷贝数分析的dd PCR检测体系。【结论】微滴数字PCR技术为这批转基因玉米的下一步转基因生物安全评价提供了重要参数,同时建立了转基因玉米(genetically modified maize)外源基因拷贝数dd PCR分析方法。 展开更多
关键词 转基因玉米 草甘膦抗性 外源基因 拷贝数 微滴字PCR(ddPCR)
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利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数 预览 被引量:1
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作者 王犇 张春 +3 位作者 李向龙 张中保 邹华文 吴忠义 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期70-76,共7页
基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。... 基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。对该方法与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法在分析结果的准确性方面进行了比较,从试验数据可以看出,2种检测方法的结果比较一致,单拷贝检测结果高度一致;但是dd PCR试验操作更加简便,试验结果可重复性强,试验数据更加准确可靠。研究表明,dd PCR方法是一种更加便捷、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,基于其在准确性和灵敏度方面的显著优势,将会在转基因作物的外源基因拷贝数分析中得到广泛的应用。 展开更多
关键词 微滴式字PCR 转基因玉米 外源基因 拷贝数 绝对定量
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利用多重荧光定量PCR检测转基因水稻外源基因拷贝数
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作者 魏毅东 毛小辉 +6 位作者 何炜 王进兰 连玲 许秀宝 林悦龙 谢华安 张建福 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2072-2078,共7页
转基因植物中外源基因的拷贝数影响遗传稳定性和基因表达水平,因此鉴定和筛选单拷贝纯合的植株对于子代材料的功能分析是十分必须的。为了快速、准确的对含有潮霉素抗性基因-潮霉素磷酸转移酶II(hygromycin phosphotransferase II,hpt... 转基因植物中外源基因的拷贝数影响遗传稳定性和基因表达水平,因此鉴定和筛选单拷贝纯合的植株对于子代材料的功能分析是十分必须的。为了快速、准确的对含有潮霉素抗性基因-潮霉素磷酸转移酶II(hygromycin phosphotransferase II,hpt II)的转基因水稻材料进行拷贝数鉴定,本研究选用了稳定的组成型基因水稻转录剪切因子U2af(Oryza sativa splicing factor U2af,OsSFu2a)作为内参基因,构建基于Taqman的多重荧光定量PCR(Multiplex qRT-PCR)的拷贝数鉴定体系。通过不同引物组合进行扩增效率比较,确定了hptII-1和OsSFu2a-2为最佳引物组合。利用该体系对10个转基因克隆进行了拷贝数鉴定,结果其中7个克隆为单拷贝植株,3个克隆为双拷贝植株。随后,通过Southern blot和转基因子代分离比统计,验证了此方法的可靠性;并通过与传统的单重荧光定量PCR(Singlex qRT-PCR)法进行比较,结果表明多重荧光定量PCR法大大提高了检测的准确性和稳定性。因此,该方法能够帮助科研人员快速,准确,高通量的鉴定水稻外源基因拷贝数与纯合体植株。 展开更多
关键词 转基因水稻 拷贝数 多重荧光定量PCR
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