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未成熟树突状细胞与成熟树突状细胞的细胞骨架调控相关基因表达的差异分析
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作者 蒙富雪 董蓉 +8 位作者 吴翠芳 谭诚 胡祖权 刘丽娜 邱伟 王赟 周静 吴宁 曾柱 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第7期3252-3261,共10页
分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)向成熟的树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)分化的过程中,细胞骨架的调控相关基因及信号通路的表达变化,为进一步理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs... 分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)向成熟的树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)分化的过程中,细胞骨架的调控相关基因及信号通路的表达变化,为进一步理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性、迁移能力和免疫学相关功能的改变。利用CEO数据库获得经CD14^+单核细胞(monocytos,monos)诱导而成的im DCs和m DCs的m RNA的表达数据(芯片编号:GSE15076),通过R语言软件对原始数据进行处理,筛选差异表达基因(Log|FC|≥2,p〈0.05),利用STRING online-工具对差异表达基因进一步筛选(可信度≥0.4);Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络图(protein-protein interaction network,PPI),通过Cluster ONE对筛选后的差异表达基因进行聚类分析,筛选功能相关性密切的差异表达基因,并利用DAVID在线分析进一步进行GO分析和KEGG信号通路分析。m DCs相对于im DCs差异表达的基因共3 351个,上调基因1 801个,下调基因1 550个,其中C-C趋化因子受体活性、G-蛋白偶联的嘌呤核苷酸受体活性和异源三聚体G蛋白复合物等与细胞骨架调控密切相关。主要涉及的信号通路包括趋化因子/趋化因子受体信号通路、Rap1信号通路、Jak-STAT信号通路和PI3K-Akt信号通路等,其中的相关基因与细胞骨架的调控关系密切。这对进一步深入理解DCs的生物物理学特性、迁移能力和免疫学功能有一定的帮助。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 成熟树突状细胞 细胞骨架 生物信息学 基因芯片分析
单核细胞与未成熟树突状细胞粘附相关差异表达基因筛选及相互作用分析
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作者 王玉林 胡祖权 +2 位作者 叶远浓 唐福州 曾柱 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第5期2228-2235,共8页
本研究目的是分析单核细胞(monocytes,mon)与未成熟树突状细胞(immature DCs,im DCs)两个不同发育阶段间差异表达基因的功能及其编码蛋白的相互作用,筛选出粘附相关的关键基因,并进行生物信息学分析。我们从NCBI(美国国立生物技术... 本研究目的是分析单核细胞(monocytes,mon)与未成熟树突状细胞(immature DCs,im DCs)两个不同发育阶段间差异表达基因的功能及其编码蛋白的相互作用,筛选出粘附相关的关键基因,并进行生物信息学分析。我们从NCBI(美国国立生物技术信息中心)公共数据平台GEO(Gene Expression Omnibus)下载基因芯片数据GSE15076,使用perl语言将探针id转换成gene symbol。利用R Bioconducto软件(RGui 3.3.1)解析原始数据并筛选差异基因。进一步利用STRING online工具筛选核心差异基因(可信度≥0.4),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图。对STRING online工具筛选核心差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyotoencyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。im DCs相对于mon表达的差异基因,过滤条件为Log FC〉2和adj.p.val〈0.01。通过分析,我们共找到1 223个差异基因,其中567个上调基因,656个下调基因,通过进一步筛选,在网络中的上调基因有399个,下调基因458个,主要涉及m TOR信号通路、细胞代谢、细胞粘附等功能。其中上调基因中CDH1,CD274等差异基因与细胞粘附密切相关,而下调基因中SELL、IL-6、TNF等差异基因与细胞粘附改变密切相关。因此,在单核细胞发育分化到未成熟树突细胞阶段,粘附相关基因的表达变化,对进一步深入理解im DCs独特的生物物理学特性和免疫学功能来说具有重要意义。为进一步研究DCs细胞粘附功能的分子机制提供指导。 展开更多
关键词 单核细胞 未成熟树突状细胞 基因芯片分析 生物信息学 细胞粘附
循环微小RNA-199a-3p下调可能早期预警肝移植后急性排斥反应
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作者 陈丽红 朱珠 +3 位作者 张丽娜 何武兵 曾金华 刘景丰 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期412-415,共4页
目的筛选外周血中能够早期预警肝移植术后急性排斥反应的微小RNA(miRNA,miR)。方法雄性Lewis大鼠40只、BN大鼠80只,分别按体重采用随机数字法分组并采用改良二袖套法构建肝原位移植大鼠模型。免疫耐受组(IT组)采用BN大鼠作为供体... 目的筛选外周血中能够早期预警肝移植术后急性排斥反应的微小RNA(miRNA,miR)。方法雄性Lewis大鼠40只、BN大鼠80只,分别按体重采用随机数字法分组并采用改良二袖套法构建肝原位移植大鼠模型。免疫耐受组(IT组)采用BN大鼠作为供体,另一BN大鼠为受体;急性免疫排斥组(AR组)采用Lewis大鼠作为供体,BN大鼠为受体;未成熟树突状细胞(imDCs)免疫干预组[转化生长因子-β1(TGF-β1) imDCs组]术法同AR组,受体术前5 d腹腔注射2×10^6个过表达TGF-β1的imDC。术后7 d采下腔静脉血进行miRNA基因芯片检测,筛选组间符合差异倍数[FC(abs)]〉2.0的差异性表达miRNA。结果TGF-β1 imDCs组与IT组比较,miR-199a-3p、miR-331-3p和miR-203a-3p显著下调[miR-199a-3p:FC(abs)=27.997,P=0.017;miR-331-3p:FC(abs)=5.403,P=0.034;miR-203a-3p:FC(abs)=24.593,P=0.022];AR组与TGF-β1 imDCs组比较,miR-199a-3p、miR-331-3p和miR-203a-3p显著下调[miR-199a-3p:FC(abs)=459.128,P=0.000;miR-331-3p:FC(abs)=9.877,P=0.031;miR-203a-3p:FC(abs)=26.894,P=0.020]。以miR-199a-3p的表达差异最为显著[FC(abs)=459.128]。结论肝移植术后大鼠外周静脉血miR-199a-3p的下调可能早期预警急性排斥反应的发生。 展开更多
关键词 肝移植 微小RNA 急性排斥 未成熟树突状细胞
响应面优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞的工艺
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作者 段训威 肖桂清 +4 位作者 赵艳兰 王礼兴 郑晨娜 董乐 吴文林 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期896-902,共7页
目的优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿... 目的优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿瘤坏死因子α(rmTNF-α)和诱导时间为考察因素,未成熟树突状细胞(imDC)和成熟树突状细胞(mDC)获得量为考察指标,采用Box-Behnken设计试验,响应面法分析并验证试验结果,并结合光学显微镜、电子显微镜、流式细胞术分析BMDC形态、表面标志物等指标。结果响应面优化诱导imDC最佳诱导工艺rmGM-CSF为46 ng/mL、rmIL-4为24 ng/mL,诱导时间为6 d;imDC获取量为(4.58±0.28)×10^6个,相对偏差为4.00%。诱导mDC最佳工艺LPS为1.4μg/m L、rmTNF-α为30 ng/m L,诱导时间为1 d;m DC获取量为(4.21±0.15)×10^6个,相对偏差为3.80%。体外诱导5~7 d,可获得足量的具有典型树突状的DC,流式细胞术检测发现imDC较高表达CD11c(68.62%±2.3%),低表达CD86(37.95%±1.8%);mDC高表达CD11c(82.05%±1.6%)和CD86(90.34%±1.4%)。结论单因素实验与响应面优化联合优化多细胞因子体外快速、高效诱导扩增DC,为进一步研究提供了工具。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 成熟树突状细胞 BOX-BEHNKEN设计 响应面法
单核细胞与未成熟树突细胞的细胞骨架相关的核心差异基因表达的生物信息学分析
5
作者 谭诚 胡祖权 +4 位作者 龙金华 邱伟 刘丽娜 贾义 曾柱 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期121-129,共9页
为进一步深入理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性和免疫学功能的差异。从CEO数据库获得CD14+单核细胞(monocytes,mon)及其诱导而成的未成熟DCs(immature DCs,imDCs)的mRNA表达数据(芯片编号:... 为进一步深入理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性和免疫学功能的差异。从CEO数据库获得CD14+单核细胞(monocytes,mon)及其诱导而成的未成熟DCs(immature DCs,imDCs)的mRNA表达数据(芯片编号:GSE15076),利用R语言软件(RGui3.2.3)解析原始数据并筛选差异基因。进一步利用STRINGonline工具筛选核心差异基因(可信度≥0.4),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图。对STRING online工具筛选核心差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)分析。实时荧光定量PCR技术检测mon及imDCs部分核心差异基因CCNB1、CDK5、IL-6和TNF在基因水平上的表达情况。imDCs相对于mon表达的差异的基因共3371个(imDCs与mon对比,表达变化倍数≥2,p值〈0.05),其中上调基因为2396个,下调基因为975个,通过进一步筛选后获得上调基因655个,下调基因110个,主要涉及mTOR信号通路、细胞代谢、细胞粘附等功能。其中上调基因中CDK5、CCNB1等差异基因与细胞骨架改变密切相关,而下调基因中IL-6、TNF、CXCR4等差异基因与细胞骨架改变密切相关,这对进一步深入理解imDCs独特的生物物理学特性和免疫学功能来说具有重要意义。 展开更多
关键词 单核细胞 未成熟树突状细胞 基因芯片分析 生物信息学 细胞骨架
BD926对骨髓源性未成熟树突状细胞增殖及吞噬作用的影响 预览
6
作者 苏志伟 杨苗 +5 位作者 杨凯 徐灿 彭旭 段佳毅 冷潇 王衍堂 《成都医学院学报》 CAS 2017年第4期420-424,共5页
目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)增殖及吞噬作用的影响。方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡... 目的 研究苯并噻唑类衍生物BD926对小鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)增殖及吞噬作用的影响。方法 分离小鼠骨髓源性单核细胞诱导imDCs,借助PE/Annexin V凋亡检测试剂盒、CFSE细胞增殖试剂盒以及FITC-葡聚糖,应用流式细胞术检测BD926对imDCs在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)刺激下的细胞存活、细胞增殖以及吞噬作用的影响。结果 与PBS组相比,25、5、1μM的BD926处理imDCs后,其细胞增殖水平降低,差异有统计学意义(P〈0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,细胞存活差异无统计学意义(P〉0.05);高、中、低3个剂量组BD926处理后,imDCs与PBS组相比,吞噬作用差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 BD926在体外可明显抑制GM-CSF刺激的imDCs增殖作用,对imDCs的细胞存活和吞噬作用则无明显影响。 展开更多
关键词 苯并噻唑类衍生物 未成熟树突状细胞 细胞增殖 吞噬作用 凋亡
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未成熟树突状细胞快速分离与体外诱导培养及其鉴定研究 预览 被引量:5
7
作者 朱娜 王海桃 +3 位作者 李昌 李海僖 郭焱 金宁一 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期1043-1047,共5页
目的:以人外周血来源的单核细胞为前体细胞,建立体外快速分离和诱导培养未成熟树突状细胞(Immature dendritic cell,iDC)的方法。方法:采用Ficoll密度梯度离心方法和MACS磁珠分选系统,收集高纯度CD14~+单核细胞;用rhGM-CSF、rhIL-... 目的:以人外周血来源的单核细胞为前体细胞,建立体外快速分离和诱导培养未成熟树突状细胞(Immature dendritic cell,iDC)的方法。方法:采用Ficoll密度梯度离心方法和MACS磁珠分选系统,收集高纯度CD14~+单核细胞;用rhGM-CSF、rhIL-4联合诱导培养CD14~+单核细胞,第4天获得未成熟树突状细胞(iDC),应用流式细胞术检测细胞表面标记(CCR5)和抗原吞噬能力,普通光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部结构特征。结果:CD14免疫磁珠技术获得CD14~+单核细胞纯度达94%以上,诱导分化第4天的iDC具有CCR5特征性标志和吞噬能力,普通光学显微镜及电镜观察到iDC出现树突状细胞典型特征。结论:体外快速诱导培养是获得大量具有典型特征的iDC的有效方法,并可应用于进一步实验研究。 展开更多
关键词 单核细胞 未成熟树突状细胞 诱导培养 鉴定
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HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞实验研究 预览
8
作者 朱娜 刘雪丽 +6 位作者 仇妮 张洁婷 吴诗品 李体远 郭焱 李昌 金宁一 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1441-1446,共6页
目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的HIV-1假病毒;通过HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞(immatural dendritic cell,iDC)实验探讨病毒与细胞的相互作用。方法:利用慢病毒包装系统构... 目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的HIV-1假病毒;通过HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞(immatural dendritic cell,iDC)实验探讨病毒与细胞的相互作用。方法:利用慢病毒包装系统构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒,通过RT-PCR扩增HIV-1假病毒中的EGFP基因;HIV-1假病毒感染iDC,对HIV-1假病毒感染iDC后的基因组整合和转录水平进行检测,观察被感染iDC中EGFP基因的表达。结果:构建的HIV-1假病毒通过RT-PCR结果显示扩增得到EGFP基因;HIV-1假病毒感染iDC后,在基因组整合和转录水平检测中都扩增得到了EGFP基因,荧光显微镜观察被HIV-1假病毒感染的iDC,观察到iDC表达绿色荧光蛋白。结论:成功构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒;HIV-1假病毒可以感染iDC,并将其遗传物质整合到iDC基因组中,并经过转录和翻译使iDC表达EGFP。 展开更多
关键词 HIV-1假病毒 未成熟树突状细胞 感染实验
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过表达STAT3对小鼠未成熟树突状细胞分化的影响 被引量:1
9
作者 徐向东 杨华安 +3 位作者 胡溯 杨钰兴 张杨 沈洪君 《免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期482-487,共6页
目的 研究过表达信号转导与转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)对未成熟树突细胞(immature dendritic cells,im DC)抗分化能力的影响。方法 分离获取imDC细胞,分别加入TNF-α培养、空载病... 目的 研究过表达信号转导与转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)对未成熟树突细胞(immature dendritic cells,im DC)抗分化能力的影响。方法 分离获取imDC细胞,分别加入TNF-α培养、空载病毒感染后加入TNF-α培养、p LVX-IRES-Zs Green1-STAT3慢病毒感染后加入TNF-α培养。流式细胞术鉴定细胞表面分子标志物CD86/MHCⅡ的表达变化,Western blot检测细胞免疫耐受因子IL-10、IDO、NF-κB的表达变化;扫描电镜观察细胞超微结构变化,Transwell实验检测细胞迁移能力。同种异体混合淋巴细胞反应检测对T淋巴细胞的刺激能力。结果 与正常分化的imDC细胞相比,过表达STAT3的imDC细胞在TNF-α刺激后表面标志分子CD86/MHCⅡ低表达,NF-κB、IDO、IL-10蛋白的表达增强,细胞形态与未分化时相似,其迁移能力较强、T淋巴细胞刺激能力明显减弱。结论 经感染重组STAT3病毒的im DC细胞在TNF-α刺激下,仍能保持未分化状态。 展开更多
关键词 信号转导与转录活化因子3 未成熟树突状细胞 免疫耐受
未成熟树突状细胞诱导辅助型T细胞偏移抑制大鼠高危角膜移植排斥反应的研究 预览 被引量:1
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作者 王启明 赵心悦 +1 位作者 王智 宋蔚 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第10期919-922,共4页
目的 探讨未成熟树突状细胞(immatuere dendritic cell,im DC)诱导辅助型T细胞偏移在大鼠高危角膜移植排斥反应的的抑制作用及其机制。方法 本研究im DC来源于小骨骨髓,受体选择SD大鼠48只,供体选择Wistar大鼠30只,采取碱烧伤的方式... 目的 探讨未成熟树突状细胞(immatuere dendritic cell,im DC)诱导辅助型T细胞偏移在大鼠高危角膜移植排斥反应的的抑制作用及其机制。方法 本研究im DC来源于小骨骨髓,受体选择SD大鼠48只,供体选择Wistar大鼠30只,采取碱烧伤的方式建立同种异体高危角膜移植模型。随机将受体SD大鼠分为成熟树突状细胞(matuere dendritic cell,m DC)组、im DC组及对照组,每组均为16只。m DC组和im DC组:术前7 d将体外培养的供体骨髓来源的m DC或im DC经尾静脉注射,且细胞悬浮于0.1 m L的体外培养液中;对照组:术前7 d将0.1 m L体外培养液经尾静脉注射。术后每天对大鼠角膜植皮进行裂隙灯检查,对各组大鼠角膜植皮存活情况进行准确评估;分别于术后3 d、7 d、14 d每组各将入组的4只大鼠处死并取角膜植皮组织进行HE染色,对各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞表面的Scurfin蛋白表达进行Western blot检测分析。结果 im DC组角膜植片存活时间为(18.67±2.46)d,均较m DC组(6.78±0.56)d、对照组(9.28±1.24)d明显延长,差异均有统计学意义(均为P〈0.05);im DC组角膜新生血管评分为(4.54±1.02)分,低于m DC组(8.67±2.11)分、对照组(14.87±3.24)分,差异均有统计学意义(均为P〈0.05);im DC组术后3 d、7 d、14 d Scurfin蛋白表达水平分别为2.16±0.74、2.35±0.83、2.28±0.76,均高于m DC组(1.42±0.17、1.56±0.42、1.48±0.12)及对照组(1.39±0.21、1.42±0.26、1.69±0.28),差异均有统计学意义(均为P〈0.05)。结论 im DC可抑制角膜移植免疫排斥反应发生,而诱导CD4+CD25+调节性T细胞的产生,进而促进免疫耐受的形成。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 调节性T细胞 角膜移植 免疫反应
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γδT细胞体外抑制未成熟树突状细胞向破骨细胞转分化 预览 被引量:1
11
作者 陈清娇 曾志勇 +1 位作者 邱东飚 陈君敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期778-784,共7页
目的:探讨γδT细胞对人外周血来源未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,im DC)转分化为破骨细胞(Osteoclasts,OC)过程的影响。方法:(1)采用唑来膦酸(Zoledronate,Zol)及重组人白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)体外... 目的:探讨γδT细胞对人外周血来源未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,im DC)转分化为破骨细胞(Osteoclasts,OC)过程的影响。方法:(1)采用唑来膦酸(Zoledronate,Zol)及重组人白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)体外激活扩增外周血γδT细胞,并采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)及重组人白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)诱导PBMNC(Peripheral blood mononuclear cell,PBMNC)分化为im DC,后者在细胞核因子кB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear factorкB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colonystimulating factor,M-CSF)作用下继续培养转分化为OC,采用流式细胞术分别检测γδT细胞扩增前后纯度及PBMNC经由imDC转分化为OC过程中的细胞表型变化;(2)免疫磁珠分选法收集培养至第7天的γδT细胞,建立γδT细胞及im DC共培养(γδT细胞数量∶im DC数量=10∶1)体系,采用耐酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和甲苯胺蓝染色分析γδT细胞对im DC转分化为OC过程的影响;并收集各培养组培养上清,采用酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)浓度。结果:(1)Zol及重组人IL-2可在体外培养条件下扩增MM患者外周血γδT细胞,扩增产率与健康志愿者无统计学差异(68.87%±20.94%vs 69.33%±16.84%,P〉0.05);(2)外周血诱导分化的im DC在RANKL和M-CSF作用下可转分化为OC;(3)γδT细胞与im DC间接接触共培养条件下,TRAP+多核细胞数和牙本质骨吸收面积均显著低于对照组(分别为5.67±0.58个vs 28.33±2.08个;4.97%±4.3%vs 28.47%±12.8%);(4)在γδT细胞与im DC间接共培养条件下,TNF-α分泌水平显著增高。结论:激活的γδT细胞在体外培养条件下可能抑制im DC转分化为OC过程,γδT细胞免疫治疗有望成为骨髓瘤骨� 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 未成熟树突状细胞 破骨细胞 骨髓瘤骨病
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恒河猴骨髓来源未成熟树突状细胞的培养及鉴定 预览 被引量:1
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作者 支良 陈鹏 +4 位作者 李朝战 李昌亮 关兴 褚朋 阿永俊 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第9期1243-1248,共6页
目的建立一种体外诱导恒河猴骨髓CD34+细胞分化为树突状细胞(DC)的方法,并对其细胞形态及表面标志进行鉴定。方法用免疫磁珠分选系统(MACS)分选恒河猴骨髓细胞,收集高纯度的CD34+造血干细胞;加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子... 目的建立一种体外诱导恒河猴骨髓CD34+细胞分化为树突状细胞(DC)的方法,并对其细胞形态及表面标志进行鉴定。方法用免疫磁珠分选系统(MACS)分选恒河猴骨髓细胞,收集高纯度的CD34+造血干细胞;加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),诱导其分化为骨髓来源的树突状细胞,并采用电镜观察细胞形态。用树突状细胞表面标志CD1a及成熟树突状细胞(mDC)表面标志CD83流式抗体染色后分析。结果细胞因子诱导6d后成功培养出表面呈绒毛状和树枝状突起的典型DC样细胞,流式细胞术分析结果显示92.35%的细胞为DC,27.61%的细胞为m DC。结论用此方法可在体外培养出高纯度且典型的恒河猴骨髓源性未成熟树突状细胞(im DC),为进一步研究其生物学特性及功能奠定了基础。 展开更多
关键词 恒河猴 未成熟树突状细胞 免疫耐受
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肝癌细胞对人未成熟树突状细胞基因表达谱的影响 预览
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作者 杨晖 胡祖权 +4 位作者 董蓉 薛慧 龙金华 李龙 曾柱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1071-1077,共7页
目的:检测肝癌细胞微环境对人未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)基因表达谱的影响。方法:采用免疫磁珠阴性选择从人外周血分离CD14+单核细胞,在体外经粒-巨噬细胞采落刺激因子和白介素4诱导培养分化为im DCs,与Bel... 目的:检测肝癌细胞微环境对人未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)基因表达谱的影响。方法:采用免疫磁珠阴性选择从人外周血分离CD14+单核细胞,在体外经粒-巨噬细胞采落刺激因子和白介素4诱导培养分化为im DCs,与Bel 7402肝癌细胞在Transwell中共培养48 h后,抽提imDCs的总RNA,利用人树突状细胞基因芯片检测其基因表达谱的变化。结果:与肝癌细胞共培养后,共有1 531个基因的表达发生改变(与对照组相比,变化表达倍数≥2),其中上调598个,下调933个,这些基因主要涉及信号转导、免疫应答、细胞黏附等功能。结论:肝癌细胞微环境能够影响imDCs多个基因的表达,这些基因的功能与imDCs的分化、成熟和功能有关,为进一步深入研究肝癌细胞对DCs免疫功能影响的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 肝癌微环境 基因芯片 表达谱
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小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体的表达及活性检测 预览
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作者 孙超 袁媛 +5 位作者 郑鹏飞 高星 赵元琳 李乐 常婷 李柱一 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2015年第1期4-8,共5页
目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经... 目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)10ng/mL和白细胞介素4(IL-4)10ng/mL刺激培养,经脂多糖(LPS)1ng/mL诱导24h后,高倍显微镜及扫描电镜观察细胞形态;流式细胞术(FCM)检测细胞表面相关分子表达,对iDC表型进行鉴定;构建原核表达载体m97-116-scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)18℃诱导表达18h,镍(Ni)柱纯化,SDSPAGE和Western blot检测融合单链抗体m97-116-scFv205表达及纯化;FCM检测其与iDC的亲和力。结果形态学观察提示培养细胞为DC,FCM结果显示培养细胞符合iDC表型;SDS-PAGE和Western blot在上清中检测到m97-116-scFv205可溶性表达;亲和力检测显示m97-116-scFv205与iDC具有较高亲和力。结论成功构建并表达m97-116-scFv205融合单链抗体,该抗体与iDC具有较高的亲和力,为下一步靶向iDC诱导AChR特异性免疫耐受治疗重症肌无力奠定了良好的实验基础。 展开更多
关键词 重症肌无力 未成熟树突状细胞 融合单链抗体 CD205
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CD1a与肿瘤相关性研究进展 被引量:3
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作者 刘菲 王相海 +1 位作者 林存智 朱新红 《中国医师进修杂志》 2014年第28期69-71,共3页
CD1分子是不同于主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ类分子与MHC-Ⅱ类分子的第三类抗原递呈分子,主要在抗原递呈细胞(APC)表面表达,它在脂质和糖脂抗原的递呈中起重要作用[1].CD1分子的抗原结合沟含有3个特异性片段[2],并可区分T细胞和NK... CD1分子是不同于主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ类分子与MHC-Ⅱ类分子的第三类抗原递呈分子,主要在抗原递呈细胞(APC)表面表达,它在脂质和糖脂抗原的递呈中起重要作用[1].CD1分子的抗原结合沟含有3个特异性片段[2],并可区分T细胞和NKT细胞群[2-3].因此,CD1分子通过递呈自身和外来抗原来调节免疫耐受和自身免疫反应之间的平衡.以氨基酸序列的相似性为基础,CD1蛋白被分为三组:第一组包括CD1a,CD1b和CD1c;第二组包括CD1d;第三组包括CD1e.人们普遍认为第一组CD1分子可以将脂质抗原递呈给αβT细胞群和γ δ T细胞群[2],第二组CD1分子则将抗原递呈给NKT细胞[1-4];前者在未成熟树突状细胞(DC)表面表达,后者则在APC和一些上皮细胞表面表达[5].目前,已经有一些研究提出CD1a可能介导肿瘤源性的脂质和糖脂抗原向肿瘤特异性的T细胞递呈,从而促进这些溶细胞性细胞的抗瘤免疫反应的进行[3,6]. 展开更多
关键词 肿瘤相关性 CD1A 抗原递呈分子 主要组织相容性复合体 细胞表面表达 CD1分子 MHC-Ⅱ类分子 未成熟树突状细胞
CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用 预览 被引量:4
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作者 周琨 高晓唯 +4 位作者 蔡岩 李文静 胡裕坤 田丽丽 付燕 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第1期17-21,共5页
目的研究趋化因子受体7(chemokinereceptor7,CCR7)基因重组腺病毒体外转染供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immaturedendriticcells,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的作用。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体... 目的研究趋化因子受体7(chemokinereceptor7,CCR7)基因重组腺病毒体外转染供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immaturedendriticcells,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的作用。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立高危角膜移植模型。将sD大鼠分为空白对照组、未修饰imDC组、imDC+腺病毒空载体组(imDC+Ad组)和imDC+CCR7腺病毒组(imDCs+Ad.CCR7组),每组15只;各组受体术前7d和术后3d经尾静脉注入PBS液0.1mL、供体来源的未修饰imDC10×10^6个(0.1mL)、空载体腺病毒转染后的imDC10×10^6个(0.1mL)和携带CCR7腺病毒转染后的imDC10X10^6个(0.1mL);术后受体大鼠每天裂隙灯下观察角膜植片存活情况并对角膜植片的混浊、水肿及新生血管程度进行评分;术后14d每组随机处死5只大鼠取角膜行HE切片观察。结果角膜植片存活时间:空白对照组(10.44±1.88)d,im-DC组(16.00±2.18)d。imDC4-Ad组(15.11±2.03)d,imDC+Ad.CCR7组(23.67±2.83)d,4组间比较差异有统计学意义(F=53.005,P=0.000);与空白对照组相比,imDC组、imDC-4-Ad组、imDC4-Ad-CCR7组角膜植片存活时间均明显延长(均为P〈0.01):imDC4-Ad-CCR7组较imDC组与imDC-4-Ad组均明显延长(均为P〈0.01)。角膜植片HE染色切片显示,imDC+Ad-CCR7组的植片轻度水肿、基质层板层纤维排列有序,未修饰imDC组和imDC+Ad组呈不同程度的水肿,基质层板层纤维排列轻度紊乱、有少量炎性细胞;空白对照组植片高度水肿、角膜基质板层纤维紊乱并出现大量炎性细胞和新生血管。结论静脉注入CCR7采因修饰的imDC可以明显延长大鼠高危角膜移植后角膜植片存活时间.抑制角膜移植免疫排斥反应。 展开更多
关键词 趋化因子受体7 未成熟树突状细胞 角膜移植 免疫耐受
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未成熟树突状细胞在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用 预览 被引量:7
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作者 付燕 杜安杰 +3 位作者 高晓唯 李文静 李霞 赵旭东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第2期130-134,共5页
目的研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模... 目的研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组、成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC)组,每组20只;对照组:术前7d经尾静脉注射PBS液0.1mL;imDC组:术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC1×106个;mDC组:术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的mDC1×106个。术后每天裂隙灯观察各组角膜植片存活情况并评分;于术后3d、7d、14d每组随机处死4只大鼠,取角膜植片行HE染色,Westernblot分析检测各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞表面特异性标志转录因子Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达。结果 imDC组角膜植片存活时间为(19.6±1.1)d,较对照组的(9.5±0.9)d和mDC组的(7.0±1.6)d明显延长,差异均有统计学意义(均为P〈0.01);Westernblot检测结果显示,术后3d、7d、14dimDC组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达(相对吸光度值分别为2.21±0.76、2.31±0.68、2.24±0.18)明显高于对照组(相对吸光度值分别为1.41±0.12、1.47±0.25、1.68±0.09)和mDC组(相对吸光度值分别为1.43±0.14、1.58±0.41、1.46±0.13),差异均有统计学意义(均为P〈0.05)。结论应用体外培养的供体来源的imDC可以抑制大鼠同种异体高危角膜移植免疫排斥反应,而诱导CD4+CD25+调节性T细胞的产生是其降低大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的机制之一。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 角膜移植 免疫耐受 调节性T细胞
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乳凝集素通过ERK、p38MAPK通路调节未成熟树突状细胞分泌IL-12和IL-10的研究 预览 被引量:2
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作者 李灿 沈珏 +2 位作者 施君 雷一慧 何振娟 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期902-906,共5页
目的探讨乳凝集素通过ERK、p38 MAPK信号通路对未成熟树突状细胞(iDcs)分泌白介素(IL)-12和IL-10的影响。方法脐带血中分离得到单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(50ng/mL)和重组人白介素-4(10ng/mL),同时按照... 目的探讨乳凝集素通过ERK、p38 MAPK信号通路对未成熟树突状细胞(iDcs)分泌白介素(IL)-12和IL-10的影响。方法脐带血中分离得到单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(50ng/mL)和重组人白介素-4(10ng/mL),同时按照不同组合加入乳凝集素(10ug/mL)和信号通路阻滞剂,诱导分化为iDCs。分组如下:①对照组;②乳凝集素组;③ERK通路阻滞组;④ERK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑤p38MAPK通路阻滞组;⑥p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑦JNK通路阻滞组;⑧JNK通路阻滞剂+乳凝集素组。采用western blotting检测ERK、JNK、p38MAPK蛋白磷酸化水平,ELISA法检测iDCs分泌IL-12和IL-10的变化。结果与对照组比较,乳凝集素组ERK蛋白磷酸化水平升高(P〈O.05),p38MAPK蛋白磷酸化水平降低(P〈O.05),JNK蛋白磷酸化水平无明显差异(P〉0.05),IL-12和IL-10的分泌量显著降低(P〈0.05),IL-12/IL-10比值显著升高(P〈O.05)。ERK通路阻滞组和ERK通路阻滞剂+乳凝集素组中ERK蛋白磷酸化水平几乎为零;ERK阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL一10的分泌量显著高于乳凝集素组(P〈O.05),IL-12/IL-10比值显著低于乳凝集素组(P〈O.05)。)38MAPK通路阻滞组和p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组中p38MAPK蛋白磷酸化水平几乎为零;p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL-10的分泌量显著低于乳凝集素组(P〈0.05),IL-12/IL-lO比值显著高于乳凝集素组(P〈0.05)。结论乳凝集素可能通过激活ERK通路的活化及抑制p38MAPK通路的活化调节iDCs分泌II-10和IL-12。 展开更多
关键词 乳凝集素 ERK p38 MAPK 未成熟树突状细胞 细胞因子 IL-12 IL-10
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大鼠髓系来源的树突状细胞的体外诱导及功能鉴定 预览 被引量:1
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作者 汪泳 程云生 +2 位作者 周晓俊 秦磊 钱海鑫 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第2期133-137,共5页
目的探讨建立合适的大鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(imDC)的培养方法,并对其生物学特性进行评价。方法分别以不同剂量的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)4诱导分化获得大鼠骨髓源性树突状细胞(DC),比较收获率... 目的探讨建立合适的大鼠骨髓源性未成熟树突状细胞(imDC)的培养方法,并对其生物学特性进行评价。方法分别以不同剂量的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)4诱导分化获得大鼠骨髓源性树突状细胞(DC),比较收获率及特异性标记蛋白(OX62)阳性的DC数量,获得最佳细胞因子浓度。并用流式细胞仪分析DC表型,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激同种T细胞增殖能力,ELISA法测定MLR上清IL-12、γ-免疫反应性纤维结合素(IFN-γ)水平。结果GM—CSF5ng/ml可诱导出更高的收获率及OX62的阳性率。GM—CSF5ng/ml培养7d的DC,表达中等水平的主要组织相容性(抗原)复合物Ⅱ类(MHCII)和低水平的CD86;其分泌少量IL-12;刺激同种T细胞增殖能力极低。脂多糖(LPS)刺激后MHCⅡ、CD86表达明显增加;分泌IL-12和IFN-γ增加;刺激同种T细胞增殖能力增强。结论GM—CSF5 ng/ml为诱导大鼠骨髓源性imDC的最佳剂量,培养7—9d可以获得足够数量和纯度的imDC。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓 未成熟树突状细胞 诱导
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重组腺病毒介导恒河猴CD40L胞外段基因在恒河猴未成熟树突状细胞中的表达和鉴定
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作者 姚敏学 张黎 +1 位作者 支良 胡明道 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期305-310,共6页
为了鉴定表达恒河猴CD40L胞外段基因的重组腺病毒载体在恒河猴未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)中的稳定表达。应用磁珠法分选健康恒河猴骨髓血中CD34+阳性细胞,IL-4及GMCSF诱导分化为imDC,并通过流式细胞术鉴定... 为了鉴定表达恒河猴CD40L胞外段基因的重组腺病毒载体在恒河猴未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)中的稳定表达。应用磁珠法分选健康恒河猴骨髓血中CD34+阳性细胞,IL-4及GMCSF诱导分化为imDC,并通过流式细胞术鉴定纯度及成熟度。使用HEK293细胞包装腺病毒载体pAd—CMV-sCD40L,并感染恒河猴imDC。采用PCR以及WesternBlot技术鉴定CD40L在imDC中的表达。结果显示恒河猴CD40L胞外段基因可以在恒河猴imDC中稳定的表达。 展开更多
关键词 CD40L 稳定表达 腺病毒载体 未成熟树突状细胞
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