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转OsDREB3基因大豆外源基因拷贝数的确定及标准分子的构建 预览
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作者 孙喆 刘营 +2 位作者 张明辉 李璐 高学军 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期61-67,共7页
为建立抗逆转OsDREB3基因大豆快速稳定的品系特异性检测方法,本试验通过实时Real-time PCR方法,以大豆凝集素基因(lectin)作为内源参照基因,确定了外源基因OsDREB3在转OsDREB3基因大豆基因组中的拷贝数为单拷贝,为建立快速、有效的品... 为建立抗逆转OsDREB3基因大豆快速稳定的品系特异性检测方法,本试验通过实时Real-time PCR方法,以大豆凝集素基因(lectin)作为内源参照基因,确定了外源基因OsDREB3在转OsDREB3基因大豆基因组中的拷贝数为单拷贝,为建立快速、有效的品系特异性检测方法奠定基础.同时,在原有构建的含4种转基因大豆品系特异性序列的标准分子载体上又增加了转OsDREB3基因大豆品系特异性序列,新构建了含有5种转基因大豆品系特异性序列的标准分子及大豆内参照基因(lectin),已完全满足对现有国内覆盖面最大的5种转基因大豆同时、快速筛查检测工作的需要. 展开更多
关键词 转OsDREB3基因大豆 外源基因 拷贝数 标准分子
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转基因水稻华恢1号检测用质粒标准分子研制 预览 被引量:2
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作者 李亮 王晶 +2 位作者 臧超 隋志伟 赵正宜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期96-101,共6页
质粒标准分子作为阳性标准品已广泛用于转基因作物及产品的核酸定量检测。但是目前多数质粒标准分子只用于研究,未能成为国家级标准物质。因此,按照国家一级标准物质技术规范,研制了用于检测转基因水稻华恢1号的质粒标准分子,内容... 质粒标准分子作为阳性标准品已广泛用于转基因作物及产品的核酸定量检测。但是目前多数质粒标准分子只用于研究,未能成为国家级标准物质。因此,按照国家一级标准物质技术规范,研制了用于检测转基因水稻华恢1号的质粒标准分子,内容包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、可替代性研究、均匀性检验、稳定性考察、定值与不确定度评估。结果表明,该质粒分子标准物质半年内稳定,可替代基因组作为华恢1号定量的阳性标准。 展开更多
关键词 华恢1号 转基因水稻 实时荧光定量PCR 标准分子
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转cry1Ab基因棉花质粒标准分子的构建与分析 预览
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作者 金荣愉 崔海峰 +1 位作者 俞晓平 叶子弘 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期277-285,共9页
为缓解转基因检测用标准品严重缺乏的现状,本研究构建了含转基因棉花cry1Ab基因序列及棉花fsACP(fiber-specific acyl carrier protein)内标基因序列的质粒标准分子,经PCR、酶切、测序等方法的验证,证明了所构建质粒的正确性。利用荧... 为缓解转基因检测用标准品严重缺乏的现状,本研究构建了含转基因棉花cry1Ab基因序列及棉花fsACP(fiber-specific acyl carrier protein)内标基因序列的质粒标准分子,经PCR、酶切、测序等方法的验证,证明了所构建质粒的正确性。利用荧光定量PCR技术系统地分析了所建质粒的重复性、特异性、均匀性、均一性和不同温度下处理不同时间的质粒标准分子的稳定性。结果表明,所构建质粒的重复性、特异性、均匀性及均一性良好,质粒溶液在低温条件(70℃、20℃和4℃)下可稳定储存6个月,且具有稳定的质粒量值,不宜高温(20℃和40℃)保存。本研究为质粒标准分子的制备、性状分析及保存环境等相关研究提供了试验依据。 展开更多
关键词 转cry1Ab基因棉花 质粒 标准分子 稳定性 均匀性
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不同插入片段长度对质粒储存稳定性的比较研究 预览 被引量:4
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作者 金荣愉 安欣欣 +2 位作者 崔海峰 俞晓平 叶子弘 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1359-1368,共10页
为比较不同长度的插入片段对质粒标准分子储存稳定性的影响,本研究在pEASY-T3质粒载体的基础上,构建了插入片段长度分别为186bp(含Cry1A6)、273bp(含Cry1Ab和s/s)、880bp(含Cry1Ab、SPSCACP、35S、NOS和/V嘲的质粒标准分子(... 为比较不同长度的插入片段对质粒标准分子储存稳定性的影响,本研究在pEASY-T3质粒载体的基础上,构建了插入片段长度分别为186bp(含Cry1A6)、273bp(含Cry1Ab和s/s)、880bp(含Cry1Ab、SPSCACP、35S、NOS和/V嘲的质粒标准分子(以下简称186、273和880)。利用荧光定量PCR技术分析3个质粒标准分子中不同基因片段在不同存储温度(-70、-20和4℃)和不同存储时间(1、3、7、14、21、28d和3、6、12个月)时的稳定性差异。结果表明:Cry1Ab的Cq(quantificationcycle)值在质粒186和273中在所有3个温度条件下6个月内均保持稳定,而在12个月时,Cq值快速上升,显著高于其他时期(P〈0.05);而在质粒880中的Cry1A6的Cq值在各温度下稳定3个月就快速升高,显著高于其他时期(P〈0.05)。SPS的Cq值在质粒273中在3个温度下能稳定保持6个月,SPS,fsACP、35S、NOS和NPT11片段的Cq值在质粒880中仅能稳定保持3个月。研究结果表明:含较短插入片段的质粒标准分子的稳定性高于含较长插入片段的质粒标准分子,且同一质粒标准分子中不同片段间的稳定性也存在差异。研究为质粒标准分子储存稳定性(保质期)的研究提供科学依据,同时为质粒标准分子候选物的选择提供实验参考。 展开更多
关键词 质粒 标准分子 稳定性 片段长度
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转基因油菜RT73品系特异性检测标准分子协同实验验证 预览
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作者 李想 褚庆华 +4 位作者 高琴 吕蓉 潘良文 李俊毅 张其刚 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2011年第6期 33-40,共8页
对构建的适于转基因油菜RT73品系特异性检测标准分子pEASY-RT73在普通PCR和实时荧光PCR检测中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对8家实验室结果的统计分析表明,标准分子pEASY—RT73对转基因油菜RT73品系特异性检测及油菜内源基因... 对构建的适于转基因油菜RT73品系特异性检测标准分子pEASY-RT73在普通PCR和实时荧光PCR检测中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对8家实验室结果的统计分析表明,标准分子pEASY—RT73对转基因油菜RT73品系特异性检测及油菜内源基因HMG和P肼’检测具有高特异性。在普通PCR扩增中,标准分子对朋P和RT73品系特异性序列的检测下限均为20拷贝,对HMG基因的检测下限为50拷贝;在实时荧光PCR扩增中,HMG和RT73品系特异性序列的检测下限均为10拷贝,PEP检测下限为50拷贝。虽然各实验室所用仪器和试剂有较大差异,但对检测结果影响不大。因此,标准分子pEASY—RT73可稳定的作为新型标准物质用于转基因油菜RT73品系特异性普通PCR和实时荧光PCR检测。 展开更多
关键词 RT73 标准分子 品系特异性 普通PCR 实时荧光PCR
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转豇豆胰蛋白酶CPTI基因棉花检测用标准分子的制备 被引量:3
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作者 王旭静 董雷 +2 位作者 苗猛猛 唐巧玲 王志兴 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期85-91,共7页
利用PCR的方法克隆豇豆胰蛋白酶基因CPTI、基因表达调控元件35S启动子、NOS终止子以及棉花内标基因Sad1,连接到克隆载体上,构建成质粒标准分子pGB。PCR检测过程中,质粒标准分子和转基因棉花中能扩增出4个目的条带,而非转基因棉花中不能... 利用PCR的方法克隆豇豆胰蛋白酶基因CPTI、基因表达调控元件35S启动子、NOS终止子以及棉花内标基因Sad1,连接到克隆载体上,构建成质粒标准分子pGB。PCR检测过程中,质粒标准分子和转基因棉花中能扩增出4个目的条带,而非转基因棉花中不能扩增出相应的条带,证明构建好的质粒标准分子能用于转基因棉花的定性检测。荧光定量PCR绘制4个目的基因片段的标准曲线,各标准曲线的相关系数均达到0.985以上,说明建立的PCR具有很好的Ct值-初始浓度相关性,达到定量分析的需求,而且荧光定量PCR反应具有很好的重复性和稳定性,可用于实际样品的定量检测。 展开更多
关键词 标准分子 转基因棉花 定性检测 定量检测
以实时荧光定量PCR技术检测转基因玉米MON88017 预览 被引量:8
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作者 袁磊 孙红炜 +3 位作者 李凡 李宁 赵蕾 路兴波 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期 2117-2121,共5页
根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的... 根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的标准曲线。检测了5个已知MON88017含量(0.01%、0.05%、0.10%、0.50%和1.00%)的混合样品中的转基因含量,结果表明检测底限可以达到19~30个阳性拷贝。该研究建立的实时荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强。 展开更多
关键词 转基因生物 实时荧光定量PCR MON88017 标准分子
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标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用 预览 被引量:2
8
作者 陆姣 杨蓉 +4 位作者 黄昆仑 赵薇维 罗云波 元延芳 许文涛 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期136-140,共5页
根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子(整合了内标基因序列与左侧翼序列)梯度范围为10^... 根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子(整合了内标基因序列与左侧翼序列)梯度范围为10^1~10^5,定量范围为0.01%~100%;建立了玉米内源基因与侧翼序列的标准曲线,变异系数CV值、标准偏差SD以及相关系数R2均可接受;检测5个已知转基因含量(0.1%、0.5%、1%、2%、5%)的混合样品中的转基因含量,结果分别为0.12%、0.56%、1.04%、1.61%、4.66%,实验误差小于25%,结果可信。 展开更多
关键词 品系特异性 实时荧光PCR 转基因玉米 标准分子
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适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子构建及其适用性鉴定 预览 被引量:3
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作者 李俊毅 李想 +5 位作者 褚庆华 吕蓉 张舒亚 潘良文 黄新 朱水芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期76-83,共8页
针对目前转基因产品检测标准物质缺乏的难题,构建适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73,其包含转基因油菜RT73品系3'端侧翼序列,油菜内标准基因HMG和PEP片段。对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证,... 针对目前转基因产品检测标准物质缺乏的难题,构建适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73,其包含转基因油菜RT73品系3'端侧翼序列,油菜内标准基因HMG和PEP片段。对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证,结果表明,标准分子pEASY-RT73高度特异于转基因油菜RT73品系。以标准分子为标准品的普通PCR扩增中,3个目标片段的检测下限(LOD)均为10拷贝。实时荧光PCR检测的LOD均为25拷贝,定量下限(LOQ)均为50拷贝。以标准分子为标准品构建的标准曲线反应效率介于0.96-1.02间,相关系数均大于0.999。分别以PEP和HMG为内标准基因对5个盲样的测试结果显示,测量值与设定值间偏差(Bias)介于-14.13%-14.29%间,SD小于0.20,RSD小于18.0%。因此,标准分子pEASY-RT73可很好地替代植物来源阳性标准品用于转基因油菜RT73及其来源产品品系特异性检测。 展开更多
关键词 PCR RT73 标准分子 品系特异性检测 实时荧光PCR
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小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌检测标准分子构建 被引量:3
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作者 李小焦 王中康 +6 位作者 章桂明 陈枝楠 殷幼平 程颖慧 王颖 向才玉 缪建锟 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1541-1547,共7页
以小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌为研究对象,采用分子克隆技术,分别构建了该两种真菌分子检测的标准分子。前者包括线粒体2297 bp的DNA序列以及rDNA710 bp的ITS序列,后者包括线粒体2.3kb的DNA序列以及rDNA710 bp的ITS序列。分别... 以小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌为研究对象,采用分子克隆技术,分别构建了该两种真菌分子检测的标准分子。前者包括线粒体2297 bp的DNA序列以及rDNA710 bp的ITS序列,后者包括线粒体2.3kb的DNA序列以及rDNA710 bp的ITS序列。分别对该两个标准分子进行了性能评估试验,测试结果显示所构建的标准分子具有良好的特异性、均匀性和稳定性,能够满足小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌分子检测需求。 展开更多
关键词 克隆 分子检测 标准分子
四种转基因玉米新型质粒标准分子协同实验验证 预览 被引量:13
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作者 沈愷琳 李想 +2 位作者 王姝 张大兵 杨立桃 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第5期 90-95,共6页
构建了分别适于转基因玉米GA21、TC1507、T25和Bt11品系特异性双重PCR检测标准分子,并对其在定性PCR检测体系中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对7家实验室返回结果的统计分析表明,标准分子pBt11、pTC、pT25和pGA分别对转基因玉米... 构建了分别适于转基因玉米GA21、TC1507、T25和Bt11品系特异性双重PCR检测标准分子,并对其在定性PCR检测体系中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对7家实验室返回结果的统计分析表明,标准分子pBt11、pTC、pT25和pGA分别对转基因玉米Bt11、TC1507、T25和GA21品系具有高特异性。4个标准分子在zSSⅡb和对应品系特异性序列单一PCR检测体系中检测下限均为50拷贝。因此,4个标准分子均可作为新型标准物质用于相应转基因玉米品系特异性定性检测。 展开更多
关键词 标准分子 品系特异性 协同实验 转基因玉米
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3种动物源性成分阳性标准分子的构建与应用 预览
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作者 郑世超 郭颖慧 +2 位作者 董海龙 翟清燕 霍胜楠 《食品研究与开发》 北大核心 2018年第3期168-174,共7页
为了准确、快速地进行食品中猪、牛、鸭成分的定性和定量检测,设计了这3 种动物源性成分特异性的引物 和探针,构建了 &种检测用阳性标准分子,并分别进行了实时熒光PCR检测.这 &种阳性标准分子相对检测灵敏度、 特异性高,稳定性好,能... 为了准确、快速地进行食品中猪、牛、鸭成分的定性和定量检测,设计了这3 种动物源性成分特异性的引物 和探针,构建了 &种检测用阳性标准分子,并分别进行了实时熒光PCR检测.这 &种阳性标准分子相对检测灵敏度、 特异性高,稳定性好,能够满足日常检测工作的要求. 展开更多
关键词 实时熒光PCR 阳性标准分子 灵敏度 特异性 稳定性
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用于检测转基因作物中调控元件的质粒标准分子的构建 预览
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作者 邢宇俊 陆丹丹 +4 位作者 吴季荣 徐剑宏 王园园 梁杰 史建荣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1392-1400,共9页
为解决转基因农产品检测中阳性标准物质匮乏的问题,利用重叠PCR技术将检测过程中常用的调控元件CaMV35S启动子、FMV35S启动子、PAT29启动子、Ubiquitin启动子、NOS启动子、35S终止子、NOS终止子和E9终止子依次连接获得融合片段,再利用... 为解决转基因农产品检测中阳性标准物质匮乏的问题,利用重叠PCR技术将检测过程中常用的调控元件CaMV35S启动子、FMV35S启动子、PAT29启动子、Ubiquitin启动子、NOS启动子、35S终止子、NOS终止子和E9终止子依次连接获得融合片段,再利用分子克隆技术将融合片段转化到载体pMD-19T中,获得含有调控元件的标准质粒pMD-RG。PCR和测序结果验证了标准分子构建的正确性,并且标准质粒的均匀性和稳定性比较好,符合标准物质候选物的要求,可代替阳性标准物质用于转基因成分的检测和研究。该质粒可用于大多数已经批准的转基因作物的检测和监管工作中。 展开更多
关键词 转基因作物 质粒标准分子 调控元件
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基于分子克隆方法制备标准分子量片段混合物
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作者 马温华 陈曼 +4 位作者 裴雪 王邦义 王超群 赵兴春 王乐 《中国法医学杂志》 CSCD 2017年第3期245-248,共4页
目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯... 目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 法医物证学 分子克隆 荧光接头 标准分子量片段 毛细管电泳
转基因油菜Ms8质粒分子的制备 预览 被引量:1
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作者 余笑波 沙跃兵 +3 位作者 张江东 赵雷 陈怡 隋志伟 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期694-700,共7页
随着转基因产品的大规模商业化和我国大规模进口油菜籽,有效管控存在的风险显得非常必要和有意义,试验研究了质粒标准分子pMs8的研制过程,包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、均匀性检验、稳定性考察、定值。结果表明,该质... 随着转基因产品的大规模商业化和我国大规模进口油菜籽,有效管控存在的风险显得非常必要和有意义,试验研究了质粒标准分子pMs8的研制过程,包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、均匀性检验、稳定性考察、定值。结果表明,该质粒分子标准物质的内源基因和外源基因的均匀性良好,没有扩增出所选的其他特异性基因,短期稳定性在14d(处理温度大于25℃)发生显著变化,长期稳定性大于6个月,两种方法对外源基因拷贝数的定值结果相近,因此,pMs8是有准确量值的质粒标准分子。可替代性研究结果表明,其可替代基因组作为转基因油菜Ms8定量的阳性标准。 展开更多
关键词 转基因油菜 数字PCR 质粒标准分子 MS8
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蚊寨卡病毒核酸检测体系的建立与初步应用 被引量:3
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作者 谢甜 罗陆婷 +7 位作者 尹庆庆 丁琳 潘怡承 滕萍英 谢郁 刘转转 陈晓光 周晓红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期811-817,824共8页
目的建立敏感、特异的主要适用于蚊媒携带寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的核酸检测体系,构建新型质粒标准分子,并初步应用于广州地区白纹伊蚊野生种群ZIKV感染检测。方法从GenBank获取ZIKV全长序列,以MAGE6.0分析比对锚定保守区域作为靶... 目的建立敏感、特异的主要适用于蚊媒携带寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的核酸检测体系,构建新型质粒标准分子,并初步应用于广州地区白纹伊蚊野生种群ZIKV感染检测。方法从GenBank获取ZIKV全长序列,以MAGE6.0分析比对锚定保守区域作为靶标片段,结合Beacon Designer 7.5、Primer premier 6等设计引物及探针,采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增ZIKV RNA,获得检测靶标片段RZ-1,运用Overlapping PCR在RZ-1中间插入50bp内含子(mRZ-1),克隆获得ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1。构建并优化ZIKV巢式逆转录PCR(Nested RT-PCR)和荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测体系,用pBmRZ-1及不同来源的ZIKV标本对检测体系进行敏感性和特异性测试,并用于广州白纹伊蚊野生种群ZIKV检测。结果成功构建ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1及Nested RT-PCR和qRT-PCR检测体系。以pBmRZ-1测试最低检测极限(Limit of detection,LOD)Nested RT-PCR为5copies,qRT-PCR为1copy,qRT-PCR标准曲线拟合线性方程为Y=-3.387LOG(x)+41.43,相关系数R2=0.996,扩增效率为97.4%。该检测体系特异、敏感,能检出蚊虫和细胞感染的ZIKV,411份广州地区白纹伊蚊野生种群标本ZIKV检测阴性。结论成功构建了特异、敏感的ZIKV核酸检测体系,可用于蚊ZIKV检测,亦可用于细胞、血清标本的ZIKV检测。新型质粒标准分子pBmRZ-1能甄别标本中可能存在的来源于阳性参照的核酸污染。广州市白纹伊蚊野生种群未检出ZIKV。 展开更多
关键词 寨卡病毒 核酸检测 新型质粒标准分子 白纹伊蚊
检疫性疫霉DNA条形码标准分子构建 被引量:1
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作者 高瑞芳 汪莹 +3 位作者 程颖慧 王颖 国立耘 章桂明 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期317-325,共9页
质粒标准分子是指含有外源基因和内源标准基因特异性片段的重组质粒分子。DNA条形码技术是通过对标准目的基因的DNA序列进行分析从而进行物种鉴定的技术。构建基于DNA条形码的质粒标准分子是DNA条形码技术应用于检测实践的要求。本研究... 质粒标准分子是指含有外源基因和内源标准基因特异性片段的重组质粒分子。DNA条形码技术是通过对标准目的基因的DNA序列进行分析从而进行物种鉴定的技术。构建基于DNA条形码的质粒标准分子是DNA条形码技术应用于检测实践的要求。本研究将这两种检测鉴定技术相结合应用于检疫性疫霉的检测,构建了11种检疫性疫霉的DNA条形码标准分子,进行了测序验证、均匀性、稳定性和特异性验证。结果表明,构建的质粒标准分子准确度、均匀性、稳定性和特异性均良好,对实际口岸检验检疫工作具有实践应用价值。 展开更多
关键词 检疫性疫霉 质粒标准分子 DNA条形码
适于转基因水稻RJ5检测的质粒DNA标准物质的研制
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作者 李竹青 杨立桃 王灿华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2447-2455,共9页
标准物质对于实时荧光定量PCR进行转基因作物及其产品的定量分析尤为重要,但我国转基因生物的标准物质研制还处于初级阶段,因此研制新型的标准物质对解决转基因标准物质匮乏有着重要的意义。本研究针对转基因水稻RJ5构建了质粒标准分子p... 标准物质对于实时荧光定量PCR进行转基因作物及其产品的定量分析尤为重要,但我国转基因生物的标准物质研制还处于初级阶段,因此研制新型的标准物质对解决转基因标准物质匮乏有着重要的意义。本研究针对转基因水稻RJ5构建了质粒标准分子pRJ5,并对其进行定量适应性鉴定、均匀性测试、稳定性考察,并利用数字PCR方法测定其量值。结果表明,以质粒分子pRJ5为标准物质构建的标准曲线具有良好的反应效率和线性相关性及良好的重复性和重演性。在定量PCR体系检测极限(LOD)低至5 copies/μL,定量极限(LOQ)约为10 copies/μL。均匀性测试的数据表明,质粒标准分子在管间和管内无明显差异,具有良好的均匀性。稳定性测试的结果表明,该质粒标准分子至少可以稳定地保存半年以上。数字PCR(3D-d PCR)的量值测定准确度良好。实际样品的定量分析偏差范围在1.31%至2.44%,相对标准偏差值在0.98%至10.05%。以上结果说明了质粒标准分子pRJ5适合作为标准物质对转基因水稻RJ5进行定量检测。 展开更多
关键词 转基因水稻 质粒标准分子 荧光定量PCR 数字PCR 量值测定
耐除草剂转基因大豆质粒标准分子的构建
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作者 仇有文 张明辉 +3 位作者 于艳波 甄贞 王傲雪 高学军 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期49-54,共6页
以A2704-12、A5547-127、MON89788和GTS-40-3-2等4种商品化耐除草剂转基因大豆为材料,构建质粒标准分子用于解决转基因作物检测时标准物质缺乏现状。采用双酶切技术,将扩增的大豆内参基因和耐除草剂转基因大豆转化体特异性片段克隆至pMD... 以A2704-12、A5547-127、MON89788和GTS-40-3-2等4种商品化耐除草剂转基因大豆为材料,构建质粒标准分子用于解决转基因作物检测时标准物质缺乏现状。采用双酶切技术,将扩增的大豆内参基因和耐除草剂转基因大豆转化体特异性片段克隆至pMD18-T载体上。结果显示,质粒标准分子定性PCR特异性序列片段的LOD均为20copies/μL,定量检测体系Bias最大值≤9.89%,CV最大值≤5.96%,SD最大值≤0.06,实验得到的所有偏差值均在允许范围之内,构建的质粒标准分子适用于4种耐除草剂转基因大豆特异性检测。 展开更多
关键词 大豆 转基因大豆 质粒标准分子 实时荧光定量PCR
转基因玉米筛选检测阳性标准分子的构建和应用
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作者 姚涓 潘志文 +2 位作者 陈伟庭 高洁儿 姜大刚 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期45-50,58共7页
为了满足转基因玉米成分检测中阳性对照不易获得及不易长久保存的缺陷,通过分析公共数据库资源,建立了包含玉米内标准基因z SSIIb及遗传转化中常用的Ca MV35S启动子、nos启动子、Ca MV35S终止子、nos终止子的的标准分子。灵敏度检测发现... 为了满足转基因玉米成分检测中阳性对照不易获得及不易长久保存的缺陷,通过分析公共数据库资源,建立了包含玉米内标准基因z SSIIb及遗传转化中常用的Ca MV35S启动子、nos启动子、Ca MV35S终止子、nos终止子的的标准分子。灵敏度检测发现,在检测体系中含有1 000个分子时,可以非常清楚扩增到所有5个片段的目的条带。随机挑选我国批准进口的7种转基因玉米,对标准分子进行验证,结果表明,在相应的阳性样品和标准分子中都能扩增到特异的目的条带,构建的标准分子可以满足作为转基因玉米筛选检测中阳性对照的要求。 展开更多
关键词 转基因玉米 阳性标准分子 检测技术
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