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云南部分地区猪流行性腹泻病毒S基因克隆与序列分析 预览
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作者 周玉照 张小苗 +2 位作者 赵天智 普星星 张以芳 《上海畜牧兽医通讯》 2019年第1期10-12,共3页
为了解云南省不同地区猪流行性腹泻病毒( Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)S基因的核苷酸序列和氨基酸序列与疫苗毒株和早期分离株 S 基因的差异性,本实验分别从云南安宁、宣威、昆明、师宗、陆良、富民、临沧、曲靖8个地区采集... 为了解云南省不同地区猪流行性腹泻病毒( Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)S基因的核苷酸序列和氨基酸序列与疫苗毒株和早期分离株 S 基因的差异性,本实验分别从云南安宁、宣威、昆明、师宗、陆良、富民、临沧、曲靖8个地区采集疑似感染PEDV仔猪的小肠及粪便样品46份,采用RT-PCR方法进行PEDV S基因的扩增、测序分析。结果显示:云南安宁、宣威、临沧、富民的PEDV阳性率分别为83.33%、57.14%、100%、62.50%, 46份样品中有21份样品为PEDV阳性,阳性检出率高达45.65%;将云南安宁、宣威、临沧、富民检测到的 PEDV 的S基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列与 PEDV 标准株CV777、韩国DR13株及其致弱株、国内早期的甘肃株、上海株、2010年至2012年的各地分离株进行比较分析,发现这次从云南检测到的PEDV毒株均为同一株毒株,此毒株与浙江株、黑龙江株、河南株、广东株、北京株、湖北株和福建株相似,与疫苗毒株和早期分离株的S基因相比发生了明显的变化。 展开更多
关键词 PEDV S基因 氨基酸突变 同源性
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我国部分地区猪沙门菌的耐药性 被引量:5
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作者 朱顺 彭忠 +6 位作者 王帅 王豪男 张洪峰 常宇慧 郭龙 陈焕春 吴斌 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1283-1287,共5页
以2014-2015年从我国部分省市规模化养殖场中分离的55株沙门菌为对象,选取临床常用的12种抗菌药,用微量肉汤稀释法检测所分离的沙门菌的耐药性。结果显示:测试的12种药物中沙门菌对甲氧苄啶最敏感,耐药率只有1.82%,除此之外对其他11种... 以2014-2015年从我国部分省市规模化养殖场中分离的55株沙门菌为对象,选取临床常用的12种抗菌药,用微量肉汤稀释法检测所分离的沙门菌的耐药性。结果显示:测试的12种药物中沙门菌对甲氧苄啶最敏感,耐药率只有1.82%,除此之外对其他11种药物的耐药率均在50%以上,而且对其中的氨苄西林、氟苯尼考、多西环素和四环素等4大类共计7种药物的耐药率在80%以上;在多重耐药性分析方面,1株沙门菌对所有药物完全敏感,另外54株菌的药物耐受数量在5种到11种之间,其中耐受10种药物是所有沙门菌中最大的一类菌株,占总数的30.91%。根据菌株的耐药特点,设计了23对包含各类药物主要耐药基因的引物,用PCR法检测相应耐药菌株对该耐药基因的携带情况,一共检测出了15种耐药基因,其中检出率最高的几种基因分别是sul2基因(检出率78.43%)、sul1基因(检出率60.78%)和tet A基因(检出率72.55%)等。此外,对于耐受喹诺酮类药物的菌株还检测了其耐药决定区域基因gyrA和parC所编码氨基酸的突变情况。测序结果表明,gyrA基因所编码氨基酸序列的第83个位点和第87个位点发生了突变,分别由酪氨酸变成了丝氨酸或亮氨酸、苯丙氨酸,由天冬氨酸变成了天冬酰胺或酪氨酸,parC基因所编码氨基酸序列没有发现突变的情况。 展开更多
关键词 沙门菌 药敏试验 耐药基因 聚合酶链式反应 氨基酸突变
北京市4例输入性黄热病病例病毒全基因组特征分析 被引量:2
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作者 崔淑娟 潘阳 +9 位作者 梁志超 李洁 吕燕宁 孙玉兰 窦相峰 田丽丽 黎新宇 王全意 陈丽娟 庞星火 《国际病毒学杂志》 2016年第6期368-371,共4页
目的 通过对2016年北京市4例输入性黄热病病毒全基因组深度测序分析,以期对病毒进行溯源、分析疫苗有效性以及防控策略提供分子依据.方法 将荧光PCR检测为阳性的血液、尿液样本利用Ion Torrent PGM平台进行全基因组深度测序,通过MEGA 6.... 目的 通过对2016年北京市4例输入性黄热病病毒全基因组深度测序分析,以期对病毒进行溯源、分析疫苗有效性以及防控策略提供分子依据.方法 将荧光PCR检测为阳性的血液、尿液样本利用Ion Torrent PGM平台进行全基因组深度测序,通过MEGA 6.0软件中邻接法进行遗传进化分析,并采用Lasergene Protean软件进行E蛋白氨基酸变异分析及抗原性分析.结果 从首例病人的血液样本和其他3个病例的尿液样本中分别获得了黄热病病毒的全基因组序列.遗传进化树分析结果表明,4例黄热病病毒基因组与安哥拉71株(AY968064)高度同源,相似度分别达99.21%、98.11%、98.02%、98.39%.4例黄热病病毒E蛋白的氨基酸序列与安哥拉71株的序列分析相似度分别达99.6%、99.39%、99.01%、99.59%.4例黄热病病毒E蛋白抗原性与17D疫苗株(X03700)的E蛋白抗原性比较分析无明差异.结论 4例黄热病病毒都是安哥拉流行株类似株,目前使用的17D疫苗具有有效性. 展开更多
关键词 黄热病病毒 全基因组测序 遗传进化树分析 氨基酸突变
H3N2亚型流感病毒分离株全基因组序列特征分析及其临床意义 预览 被引量:2
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作者 韦栋 张博 +5 位作者 张东华 王铭杰 于德敏 周敏 时国朝 张欣欣 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1593-1601,共9页
目的分析H3N2亚型流感病毒流行株的全基因组序列及其与临床特征的相关性。方法检测2014年12月-2015年3月收集的呼吸道感染患者鼻拭子样本,对其中H3N2亚型流感病毒株PCR扩增后直接进行全基因组测序,分析其核酸序列特征及氨基酸变异情... 目的分析H3N2亚型流感病毒流行株的全基因组序列及其与临床特征的相关性。方法检测2014年12月-2015年3月收集的呼吸道感染患者鼻拭子样本,对其中H3N2亚型流感病毒株PCR扩增后直接进行全基因组测序,分析其核酸序列特征及氨基酸变异情况。结果与WHO推荐2014-2015流感疫苗株参考病毒株相比,来自不同患者的14个病毒株HA1蛋白抗原决定簇均发生不同程度突变,抗原决定簇结构改变较明显的病毒株其宿主具有更高的体温和更严重的临床表现。全部14个病毒株发生HA1蛋白E190D氨基酸突变。6个病毒株NA蛋白出现1个新增糖基化位点。1个病毒株存在导致金刚烷胺耐药的M2蛋白V27A突变。全部14个病毒株PB1-F2蛋白发生118T突变。结论M2蛋白耐药突变的出现和PB1-F2蛋白氨基酸突变提示分离获得的H3N2流感病毒株在进化过程中曾经结合H1N1亚型流感病毒基因片段。HA1蛋白抗原决定簇突变的增加可能引发患者更强的免疫反应。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 H3N2亚型 氨基酸突变 基因组
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重组人凝血因子Ⅷ结构改造的研究进展 被引量:1
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作者 江海燕 应跃斌 +1 位作者 王海彬 白骅 《药物生物技术》 CAS 2015年第1期69-73,共5页
血源凝血因子Ⅷ是血液凝固过程中关键因子,为治疗甲型血友病的特效药,但存在价格昂贵、给药频率高和潜在的病毒污染风险等缺点;且由于血液制品来源有限,凝血因子Ⅷ类药物在国内供不应求。随着基因工程技术的发展,药用重组人凝血因子Ⅷ... 血源凝血因子Ⅷ是血液凝固过程中关键因子,为治疗甲型血友病的特效药,但存在价格昂贵、给药频率高和潜在的病毒污染风险等缺点;且由于血液制品来源有限,凝血因子Ⅷ类药物在国内供不应求。随着基因工程技术的发展,药用重组人凝血因子Ⅷ得以实现,在此基础上大量针对重组人凝血因子Ⅷ的结构改造研究不断涌现,部分产品已投放市场。文章主要对哺乳动物细胞表达的各类改构重组人凝血因子Ⅷ的原理和研究进展进行综述。由于存在提高蛋白质稳定性及延长药物半衰期等优势,结构改造将是重组人凝血因子Ⅷ类药物未来的技术发展方向。 展开更多
关键词 重组人凝血因子Ⅷ 蛋白质改造 血友病 B结构域缺失 氨基酸突变 PEG修饰 Fc融合
利用串联质谱鉴定氨基酸突变的生物信息学算法 被引量:2
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作者 余庆 吴松锋 +2 位作者 马洁 朱云平 舒坤贤 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2014年第11期1113-1124,共12页
氨基酸突变能够改变蛋白的结构和功能,影响生物体的生命过程.基于串联质谱的鸟枪法蛋白质组学是目前大规模研究蛋白质组学的主要方法,但是现有的质谱数据鉴定流程为了提高鉴定结果的灵敏度往往会有意压缩数据库中的氨基酸突变信息.因此... 氨基酸突变能够改变蛋白的结构和功能,影响生物体的生命过程.基于串联质谱的鸟枪法蛋白质组学是目前大规模研究蛋白质组学的主要方法,但是现有的质谱数据鉴定流程为了提高鉴定结果的灵敏度往往会有意压缩数据库中的氨基酸突变信息.因此,如何挖掘数据中的氨基酸突变信息成为当前质谱数据鉴定的一个重要部分.当前应用于氨基酸突变鉴定的串联质谱鉴定方法大致可以分为3大类:基于序列数据库搜索的方法、基于序列标签搜索的算法以及基于图谱库搜索的算法.本文首先详细介绍了这3种氨基酸突变鉴定算法,并分析了各种方法的特点和不足,然后介绍了氨基酸突变鉴定的研究现状和发展方向.随着基于串联质谱的蛋白质组学的不断发展,蛋白序列中的氨基酸突变信息将被更好地解析出来,从而得以深入探讨由氨基酸突变引起的蛋白结构和功能改变,为揭示氨基酸突变的生物学意义奠定基础. 展开更多
关键词 氨基酸突变 串联质谱 鸟枪法蛋白质组学 氨基酸突变鉴定
一株特殊抗原性乙脑毒株的分子生物学特征研究 被引量:1
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作者 刘欣玉 俞永新 +2 位作者 贾丽丽 董关木 李玉华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第5期385-388,416共5页
目的对一株抗原性特殊的乙脑毒株进行生物学和分子生物学特征研究,以找出特殊抗原性的分子生物学基础。方法通过空斑减少交叉中和试验对乙脑病毒KT株的抗原性进行比较。提取KT株RNA,逆转录后扩增其E基因片段并测序,通过Blast与GenBan... 目的对一株抗原性特殊的乙脑毒株进行生物学和分子生物学特征研究,以找出特殊抗原性的分子生物学基础。方法通过空斑减少交叉中和试验对乙脑病毒KT株的抗原性进行比较。提取KT株RNA,逆转录后扩增其E基因片段并测序,通过Blast与GenBank中所有乙脑病毒基因进行核苷酸和氨基酸序列比对,利用Pdb Viewer对KT株关键位点突变后的空间构象进行预测比对。结果交叉中和试验显示,KT株免疫血清对其他株乙脑病毒的中和作用较低,而其他乙脑病毒免疫血清对KT株的中和作用也较低。对E基因序列进行比对,KT株属于基因Ⅲ型,氨基酸序列上只在E62位存在一个独特的位点突变:组氨酸(H)-精氨酸(R)。空间构象显示,该位点位于结构域Ⅰ与结构域Ⅱ的连接交界处,当发生由组氨酸(H)到精氨酸(R)突变时,其与周围氨基酸形成的氢键数量和长度发生改变,空间构象也随之发生改变。结论乙脑病毒KT株的抗原性与其他乙脑病毒株存在较大差异,E62位组氨酸(H)-精氨酸(R)的突变是导致其抗原性差异的主要原因。 展开更多
关键词 乙脑病毒 抗原性 氨基酸突变 空间构象
棉铃虫酯酶突变体的构建、表达及酶促动力学特性 预览
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作者 李永强 吴美玲 +2 位作者 马志卿 冯俊涛 张兴 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期16-24,共9页
在前期研究的基础上,基于定点突变技术在棉铃虫酯酶001F和001G的A127位和F238位分别人工构建由丙氨酸(A)变为天冬氨酸(D)、苯丙氨酸(F)变为亮氨酸(L)的单、双位点突变体,利用杆状病毒载体表达系统对其进行异源真核表达,采用酶... 在前期研究的基础上,基于定点突变技术在棉铃虫酯酶001F和001G的A127位和F238位分别人工构建由丙氨酸(A)变为天冬氨酸(D)、苯丙氨酸(F)变为亮氨酸(L)的单、双位点突变体,利用杆状病毒载体表达系统对其进行异源真核表达,采用酶标仪测定表达产物对α-乙酸萘酯和4-硝基苯基乙酸酯的酶促动力学参数.结果表明:酯酶A127位突变降低了酯酶的酶促水解活性,其对底物的亲和力明显减弱(反应常数Km值变大),速率常数kcat/Km值仅为突变前的1/20~1/90;F238位突变对酯酶的酶促水解作用影响相对较小,其kcat/Km值为突变前的1/2~1/7;双位点突变体(A127D/F238L)几乎全部失去了对底物的酶促水解活性,其亲和力明显下降(Km值升高至突变前的4~30倍), kcat/Km值为0.09~0.33μmol^-1. s^-1. L,仅为突变前的1/70~1/370.表明突变对酯酶活性有明显影响, A127位和F238位氨基酸残基是与酶催化功能相关的重要位点,这将为研究酯酶在棉铃虫代谢抗性中的作用提供一定的参考. 展开更多
关键词 酯酶 氨基酸突变 α-乙萘酯 4-硝基苯基乙 酶促动力学
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γ-氨基丁酸与其突变受体的相互作用 预览
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作者 温夏夏 南士滨 +1 位作者 任天瑞 姚建华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期2462-2469,共8页
采用同源建模技术构建了大鼠γ-氨基丁酸a型受体(GABAaR)模型及β97Tyr突变受体模型. 采用分子对接技术研究了γ-氨基丁酸(GABA)与突变前后受体的相互作用. 计算结果显示, 突变及未突变受体之间在氢键作用和对接能量方面存在显著差... 采用同源建模技术构建了大鼠γ-氨基丁酸a型受体(GABAaR)模型及β97Tyr突变受体模型. 采用分子对接技术研究了γ-氨基丁酸(GABA)与突变前后受体的相互作用. 计算结果显示, 突变及未突变受体之间在氢键作用和对接能量方面存在显著差异, 配体与突变受体的结合能力随突变残基中氟原子数目的增加而降低. 展开更多
关键词 γ-氨基a型受体 活性位点 氨基酸突变 同源建模 分子对接
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棉铃虫酯酶两个位点突变对三种杀虫剂代谢活性的影响
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作者 李永强 安凤秋 +2 位作者 苏立德 冯俊涛 张兴 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 271-276,共6页
为研究棉铃虫酯酶对有机磷和拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢活性,在前期对酯酶001F和001G酶活性研究的基础上,进一步采用荧光法和高效液相色谱法测定了酯酶及其突变体(A127位和F238位突变)对二甲基-4甲基伞形酮磷酸酯(dMUP)、二乙基-7... 为研究棉铃虫酯酶对有机磷和拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢活性,在前期对酯酶001F和001G酶活性研究的基础上,进一步采用荧光法和高效液相色谱法测定了酯酶及其突变体(A127位和F238位突变)对二甲基-4甲基伞形酮磷酸酯(dMUP)、二乙基-7羟基香豆素磷酸酯(dECP)及顺式氰戊菊酯(2.s,d5)的酶促代谢活性。酯酶001F和001G对有机磷的酶促反应常数(kcat值)在2.0×10^-3/min~5.2×10^-3/min之间,后者对顺式氰戊菊酯的代谢活性为10.19μmol·min-1·μmol-1;001F的突变提高了对有机磷的代谢活性,其中001FA127D和001F238L对dMUP的kcat值至少是突变前的2倍;001G的突变却降低了对dECP的代谢活性,但001GF238L对dMUP的活性有所提高。此外,突变体中001F舢。阳对顺式氰戊菊酯的活性与突变前接近,而001G心蹦。则降低到突变前的1/2,其它突变体未检测到活性。结果表明,酯酶001F和001G对杀虫剂有代谢活性,A127位和F238位的突变对酶活性有显著影响。 展开更多
关键词 酯酶 氨基酸突变 有机磷 顺式氰戊菊酯 代谢活性
氨基酸突变对GABAa受体结合能力的影响 预览
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作者 温夏夏 南士滨 +2 位作者 黄迎 任天瑞 姚建华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2708-2715,共8页
采用同源建模技术构建了大鼠γ-氨基丁酸a型受体(GABAaR)模型,并将氨基酸残基β157Tyr和胆β205Tyr突变为相应的突变受体模型.使用分子对接方法计算了γ-氨基丁酸(GABA)与突变前后受体的相互作用.对接计算结果显示,Tyr突变为Ph... 采用同源建模技术构建了大鼠γ-氨基丁酸a型受体(GABAaR)模型,并将氨基酸残基β157Tyr和胆β205Tyr突变为相应的突变受体模型.使用分子对接方法计算了γ-氨基丁酸(GABA)与突变前后受体的相互作用.对接计算结果显示,Tyr突变为Phe后,两种突变受体的对接能量大幅提高,GABA生物活性降低;当Phe的对位引入氟原子后,对接能量与未突变受体相比更低.另外,与胆β205Tyr突变相比,与配体距离较近的β157Tyr突变,对受体与配体作用的影响更大. 展开更多
关键词 γ-氨基a型受体 同源建模 氨基酸突变 活性位点 分子对接
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基于复杂网络的随机森林算法预测氨基酸突变对蛋白质稳定性的影响 预览 被引量:3
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作者 方正 李益洲 +3 位作者 肖嘉敏 李功兵 文志宁 李梦龙 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 554-558,共5页
利用机器学习方法对单个氨基酸突变引起的蛋白质稳定性变化进行精确地预测,对蛋白质的结构和功能方面的研究具有重要的价值,并且对设计新的蛋白质及蛋白质工程学具有一定的指导意义。通过对蛋白质网络拓扑特征的研究,发现网络拓扑特征... 利用机器学习方法对单个氨基酸突变引起的蛋白质稳定性变化进行精确地预测,对蛋白质的结构和功能方面的研究具有重要的价值,并且对设计新的蛋白质及蛋白质工程学具有一定的指导意义。通过对蛋白质网络拓扑特征的研究,发现网络拓扑特征对于蛋白质突变稳定性影响具有较高的准确率。基于蛋白质网络拓扑特征的随机森林算法,能较好的对蛋白质单点突变所造成的稳定性改变进行预测,总准确率达到86%,MCC值达到0.67,并优于文献报道的预测结果。 展开更多
关键词 氨基酸突变 蛋白质稳定性 随机森林 复杂网络
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肌萎缩性脊髓侧索硬化症相关蛋白SOD1的氨基酸突变对其聚集的影响 被引量:1
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作者 刘佳骏 孙茂民 +1 位作者 刘枫 王晓春 《苏州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2009年第3期411-414,共4页
目的探讨肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)发病过程中超氧化物歧化酶1(SOD1)氨基酸突变对其聚集的影响。方法收集全部已知SOD1氨基酸错义突变106个,运用AGGRESCAN、PASTA、TANGO3种生物信息学方法和工具,预测错义突变对蛋白质聚集倾向... 目的探讨肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)发病过程中超氧化物歧化酶1(SOD1)氨基酸突变对其聚集的影响。方法收集全部已知SOD1氨基酸错义突变106个,运用AGGRESCAN、PASTA、TANGO3种生物信息学方法和工具,预测错义突变对蛋白质聚集倾向的作用。结果3种生物信息学工具预测结果基本一致,共有39个对蛋白质聚集有促进作用的突变,占所有突变的37%。结论氨基酸突变导致蛋白质聚集并非是导致ALS发病的唯一途径,ALS发病机制是一个多因素的复杂过程。 展开更多
关键词 肌萎缩性脊髓侧索硬化症 超氧化物歧化酶1 氨基酸突变 蛋白质聚集 生物信息学分析
抗体重链可变区框架I区对抗体分泌的影响 预览 被引量:4
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作者 朱莉莉 李川 +3 位作者 李建东 孙丽娜 梁米芳 李德新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 172-177,共6页
抗体重链可变区框架I区(FR-I)对抗体在原核细胞中的分泌表达具有显著的影响,单个氨基酸的改变即可导致抗体分子分泌能力的丧失。为了探索抗体在哺乳动物细胞中的高效表达,我们对一株不能有效分泌的人源抗狂犬病病毒抗体pCMV-RV/VH... 抗体重链可变区框架I区(FR-I)对抗体在原核细胞中的分泌表达具有显著的影响,单个氨基酸的改变即可导致抗体分子分泌能力的丧失。为了探索抗体在哺乳动物细胞中的高效表达,我们对一株不能有效分泌的人源抗狂犬病病毒抗体pCMV-RV/VH的FR—I区氨基酸编码基因进行定点突变研究。实验显示,抗体重链可变区FR-I区H6位的氨基酸由Glu突变为Gin之后,抗体的分泌表达水平得到了显著的提高,并且与抗原特异性结合的能力也明显增强。通过免疫荧光法对抗体在细胞内的转运过程进行了初步的探讨,发现能够有效分泌的抗体与无分泌表达的抗体都能够在细胞内进行正常的转录和翻译,进入内质网并转运至高尔基体,而且胞内表达水平基本一致。我们认为分泌能力的不同可能是FR-I区影响抗体分子的折叠与装配所致,其中该区H6位氨基酸的性质能够显著影响抗体在哺乳动物细胞中的分泌。本研究以抗体重链可变区FR—I区氨基酸为焦点,对基因工程抗体在真核细胞中高效表达的影响因素进行了探索,为改进抗体规模化生产提供了依据。 展开更多
关键词 抗体可变区 氨基酸突变 真核表达
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台湾全面疫苗接种实施15年后,调查儿童中表面抗原变异的乙型肝炎病毒感染 预览
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作者 Hsu H.-Y. 翟惠虹 《世界核心医学期刊文摘:胃肠病学分册》 2005年第2期36-37,共2页
关键词 疫苗接种 抗原变异 决定簇 疫苗注射 接种者 感染免疫 重组疫苗 核苷序列 氨基酸突变 突变
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氨基酸突变及其对蛋白质二级结构的影响 预览
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作者 罗辽复 《轻工学报》 CAS 1988年第2期1-7,共7页
本文由分子进化数据从氨基酸的突变频率求出每一对氨基酸的相似指标,并讨论氨基酸突变对蛋白质二级结构的影响.
关键词 氨基酸突变 蛋白质二级结构
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无偿献血者隐匿性乙肝感染的分子生物学特征研究
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作者 欧山海 袁权 +5 位作者 倪宏英 陈清瑞 林永财 周海容 林雪琴 陈长荣 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期171-171,共1页
关键词 分子生物学特征 隐匿性 HBCAB 序列分析 中心血站 闽南地区 氨基酸突变 特异性 nested 亲水
枯草杆菌蛋白酶QK的活性与氨基酸突变位点的相关性 预览
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作者 杨媛媛 周立 +3 位作者 唐艺萍 刘秋晨 梁宁 王业富 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第13期89-93,共5页
目的:鉴定不同来源的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的枯草杆菌蛋白酶QK(subtilisin QK)的活性与编码其序列的氨基酸位点突变的相关性。方法:以筛选得到的15株菌株的总DNA为模板,细菌16SrRNA为通用引物,进行PCR扩增,将产物测序后... 目的:鉴定不同来源的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的枯草杆菌蛋白酶QK(subtilisin QK)的活性与编码其序列的氨基酸位点突变的相关性。方法:以筛选得到的15株菌株的总DNA为模板,细菌16SrRNA为通用引物,进行PCR扩增,将产物测序后输入NCBI比对,确定其均为枯草芽孢杆菌属。再扩增这15株菌株的QK基因,测序后与GenBank上已提交的QK基因所对应的蛋白序列进行比对,找出氨基酸差异位点。使用纤维蛋白平板法测定菌株所产枯草杆菌蛋白酶的活性,用BCA蛋白测定试剂盒测定发酵液的总蛋白含量,并计算得到单位酶活。结果:根据突变位点的不同把15株菌株分为A、B、C、D四组。A组的突变位点为S184T,单位酶活显著最高(p<0.05);B组的突变位点为Q90K,N193S,S236T,N365S,C组的突变位点为N193S,S236T,A289V,B、C两组之间单位酶活并无显著性差异(p>0.05),但B、C两组单位酶活显著小于A组(p<0.05);D组的突变位点为Q90K,N193S,S236T,A289V,单位酶活显著低于其他三组(p<0.05)。结论:枯草杆菌蛋白酶QK的单位酶活与氨基酸突变位点之间有相关性:S184T和N365S位点变化对单位酶活性有促进作用,A289V位点变化对单位酶活性有抑制作用。据此推测,这些位点位于枯草杆菌蛋白酶QK的活性中心。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌蛋白酶 QK基因 酶活 氨基酸突变位点
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植物抗氨基酸突变体研究进展 预览
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作者 孙海燕 杨靖 李友勇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第7期1-4,共4页
抗氨基酸突变体筛选是植物氨基酸品质改良的前提和基础。为进一步探讨抗氨基酸突变体的筛选方法及其有效利用,综述了植物抗氨基酸突变体研究现状、筛选方法及其取得的成就、存在的问题、应用前景,为植物的氨基酸品质改良提供参考。
关键词 植物 氨基酸突变 筛选
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调控蛋白PrfA的单个氨基酸突变对单核细胞增生李斯特菌毒力基因转录水平的影响 预览 被引量:3
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作者 罗勤 周青春 +1 位作者 冯莹颖 张晓莉 《自然科学进展》 北大核心 2008年第8期 941-945,共5页
PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子.为了深入研究PrfA结构和功能的关系,模拟一株自然界分离得到的PrfA组成型突变株P14A(血清型4b),将标准野生株EGD... PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子.为了深入研究PrfA结构和功能的关系,模拟一株自然界分离得到的PrfA组成型突变株P14A(血清型4b),将标准野生株EGDe(血清型1/2a)的PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸(简称PrfA*),分别构建野生型PrfA和突变型PrfA*表达融合载体,提取并纯化相应蛋白用于体外转录,直接检测依赖于PrfA的毒力基因plcA,hly和actA启动子的转录活性;同时,将携带pr似和PrfA*的载体分别电转化入PrfA*基因缺失菌株中,应用实时RT—PCR检测plcA,hly和actA体内转录水平.实验结果显示:突变型PrfA*蛋白明显增强了plcA,hly和actA启动子的体外转录活性;依赖于PrfA的毒力基因在携带突变型PrfA*蛋白的菌株中的体内转录水平远远高于携带野生型PrfA蛋白的菌株,说明PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸后增强了PrfA蛋白与其靶基因的结合能力,从而提高其表达水平. 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 PrfA蛋白 单个氨基酸突变 体外转录
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