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副鸡禽杆菌外膜囊泡的生物学活性分析 认领
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作者 梅晨 孙爱华 +2 位作者 李淑芳 龚玉梅 王宏俊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期1-4,9,共5页
为研究副鸡禽杆菌(Apg)外膜囊泡(OMVs)的生物活性,提取了A型副鸡禽杆菌的外膜囊泡。纯化后的OMVs用透射电镜观察其形态结构;将OMVs加入到鸡巨噬细胞(HD-11)培养液中,检测一氧化氮(NO)产生量的变化;用荧光定量PCR(qPCR)检测HD-11各炎症... 为研究副鸡禽杆菌(Apg)外膜囊泡(OMVs)的生物活性,提取了A型副鸡禽杆菌的外膜囊泡。纯化后的OMVs用透射电镜观察其形态结构;将OMVs加入到鸡巨噬细胞(HD-11)培养液中,检测一氧化氮(NO)产生量的变化;用荧光定量PCR(qPCR)检测HD-11各炎症相关因子的表达量变化情况;将OMVs经肌肉注射接种SPF鸡,检测鸡血清IgG抗体产生情况,并用3种血清型的副鸡禽杆菌强毒菌株攻击免疫鸡,测定其免疫保护率。结果显示,电镜下的副鸡禽杆菌OMVs呈球形,直径在20~300 nm;OMVs可极显著提高HD-11中NO产量;qPCR结果显示,OMVs作用可显著上调鸡巨噬细胞IL-2、IL-6、 IL-1β、IL-10、iNOs等炎症相关因子的表达。免疫鸡可以产生特异性的IgG抗体。用A型副鸡禽杆菌攻毒,免疫保护率为70%,对异种血清型交叉保护性较弱,仅有10%~30%。本研究为深入研究副鸡禽杆菌外膜囊泡的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 副鸡禽杆菌 外膜囊泡 活性分析
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叶螨乙酰胆碱酯酶在pColdⅡ中的表达及活性分析 认领
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作者 韦显星 李博 +5 位作者 张翼鹏 丁超 杨金 彭博 李梦怡 卜春亚 《北京农学院学报》 2020年第4期9-14,共6页
【目的】为了获得较高活性的螨AChE重组蛋白。【方法】将叶螨ace基因全长和去疏水区两种形式分别在pColdⅡ与pET-30a载体中表达,比较它们的表达效果。【结果】AChE在两种载体中成功表达,得到了较高纯度的AChE。与载体pET-30a比,AChE蛋白... 【目的】为了获得较高活性的螨AChE重组蛋白。【方法】将叶螨ace基因全长和去疏水区两种形式分别在pColdⅡ与pET-30a载体中表达,比较它们的表达效果。【结果】AChE在两种载体中成功表达,得到了较高纯度的AChE。与载体pET-30a比,AChE蛋白在pColdⅡ表达载体中的表达量、酶活性以及对毒扁豆碱的敏感性都更高,去掉羧基端疏水区有助于提高AChE的活性。【结论】此研究建立高活性AChE的表达系统,获得了大量活性较高的AChE重组蛋白,为AChE抑制剂的筛选提供试验基础。 展开更多
关键词 朱砂叶螨 乙酰胆碱酯酶 pColdⅡ pET-30a 纯化 活性分析
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葵花籽粕ACE抑制肽分离纯化及其性质研究 认领
3
作者 张孟凡 敬思群 +1 位作者 郑力 纵伟 《粮食与油脂》 北大核心 2020年第4期44-48,共5页
以葵花籽粕血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽为原料,采用DA201-C大孔吸附树脂对其进行分离纯化,并对纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽稳定性和活性进行了分析。结果表明:葵花籽粕ACE抑制肽最优纯化工艺为乙醇浓度70%、上样p H 5、上样流速2 BV/h... 以葵花籽粕血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽为原料,采用DA201-C大孔吸附树脂对其进行分离纯化,并对纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽稳定性和活性进行了分析。结果表明:葵花籽粕ACE抑制肽最优纯化工艺为乙醇浓度70%、上样p H 5、上样流速2 BV/h、洗脱流速2 BV/h,在此条件下,得率为93.26%,纯化后的葵花籽粕ACE抑制肽的抑制率为92.23%±0.48%。葵花籽粕ACE抑制肽对热和金属离子均具有良好的稳定性,模拟体内消化实验显示其活性不受胃肠酶的影响。 展开更多
关键词 葵花籽粕 血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽 分离纯化 抑制率 活性分析
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蜡样芽孢杆菌胶原蛋白酶基因的异源表达与活性分析 认领 被引量:1
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作者 刘丽莉 杨陈柳 +2 位作者 尤晓颜 李玉 梁严予 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期69-75,共7页
研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的... 研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21。通过SDS-PAGE测定异源表达的重组蛋白酶ColM13的分子质量,并测定不同诱导时间和诱导浓度对ColM13酶活性的影响,最终确定重组蛋白酶ColM13的酶活最适条件:6‰异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,100 mmol/L),37℃诱导6 h,优化后酶活力最高为64.99 U/mL,较优化前提高4.24倍。通过水解圈试验、紫外光谱和扫描电子显微镜等方式验证,表明工程菌构建成功,这为我国畜禽骨骼资源的深度开发和综合利用提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌MBL13-U 胶原蛋白酶 大肠杆菌 异源表达 活性分析
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野艾蒿总黄酮对HepG2细胞脂质代谢中AMPK蛋白相关信号转导通路的作用研究 认领
5
作者 李洋 周成江 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1396-1403,共8页
目的:通过研究野艾蒿总黄酮对腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)相关信号转导通路的影响,从而探明其调节HepG2细胞脂质代谢过程中存在的作用机制。方法:以HepG2细胞作为研究对象建立脂质堆积模型,将实验细胞分为对照组和药物组,Western blot检... 目的:通过研究野艾蒿总黄酮对腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)相关信号转导通路的影响,从而探明其调节HepG2细胞脂质代谢过程中存在的作用机制。方法:以HepG2细胞作为研究对象建立脂质堆积模型,将实验细胞分为对照组和药物组,Western blot检测经药物作用后该模型中乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)磷酸化表达情况以及AMPK上游钙调蛋白依赖性激酶(Ca2+ dependent protein kinase kinase,CaMKK)活性改变对药物激活AMPK的影响;超高效液相色谱法检测野艾蒿总黄酮激活AMPK对HepG2细胞内AMP/ATP水平的影响。结果:(1)油红染色结果显示,野艾蒿总黄酮能够通过AMPK来促进HepG2细胞脂质代谢。(2)Western blot结果显示,药物组与对照组相比,ACC的磷酸化表达均具有显著性差异(P<0.05)且表达水平升高,但该过程可以被AMPK抑制剂所阻断。(3)野艾蒿总黄酮在CaMKK特异性抑制剂作用下仍能够上调HepG2细胞中AMPK的磷酸化表达。(4)超高效液相色谱结果显示药物组与对照组相比,一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量及AMP/ATP含量比值均未发生显著变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:野艾蒿总黄酮能够依靠药物-AMPK-ACC这一调脂通路来影响HepG2细胞脂质代谢,但其激活AMPK途径与CaMKK活性和AMP/ATP含量比值变化无关。 展开更多
关键词 野艾蒿 总黄酮 腺苷酸蛋白活化激酶 活性分析 乙酰辅酶A羧化酶 钙调蛋白依赖性激酶 AMP/ATP
猪环鸟苷酸-腺苷酸合成酶cGAS基因的原核表达及其表达产物的生物活性分析 认领
6
作者 龙朝琳 何小兵 +4 位作者 陈国华 贾怀杰 王国蒨 房永祥 景志忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1324-1330,共7页
为获得具有生物学活性的环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)蛋白与第二信使分子2′3′-cGAMP,构建了猪源cGAMP合成酶pcGAS基因的原核表达载体pET-28a-SUMO-pcGAS,将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),并通过优化诱导条件... 为获得具有生物学活性的环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)蛋白与第二信使分子2′3′-cGAMP,构建了猪源cGAMP合成酶pcGAS基因的原核表达载体pET-28a-SUMO-pcGAS,将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),并通过优化诱导条件实现了可溶性表达;利用镍柱亲和层析对表达的重组蛋白产物进行初步纯化,随后切除SUMO标签蛋白,再用亲和层析进一步纯化,获得了纯度较高的重组蛋白pcGAS;将获得的重组蛋白pcGAS通过体外酶促反应生物合成了2′3′-cGAMP,且合成产物能够诱导启动细胞Ⅰ型IFNs的产生。结果表明,pcGAS重组蛋白和2′3′-cGAMP均具有生物活性,这为后续抗病毒、抗肿瘤药物以及免疫增强剂的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 cGAS 2′3′-cGAMP 原核表达 纯化 活性分析
牡丹籽油的提取方法及其抗氧化活性分析 认领
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作者 王聪慧 《现代农村科技》 2019年第9期98-98,83共2页
牡丹籽油是以牡丹籽仁为原料,经过一定的加工工艺制成的金黄色透明植物油脂。牡丹籽出油率为20%~28%。本文简要阐述了物理和化学方法提取牡丹籽油的方法,并对牡丹籽油的主要成分及其活性进行了简要分析,为广大农林和食品业从业者提供参考。
关键词 牡丹籽油 提取 活性分析
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黄鳝白细胞介素1β基因在大肠杆菌中的重组表达及活性分析 认领
8
作者 杨龙 臧彧伟 +1 位作者 郑淑婷 李伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期42-46,共5页
白细胞介素1β(IL-1β)在免疫调节和炎症反应中起着重要作用。为了解黄鳝IL-1β基因的功能,以黄鳝肝脏cDNA为模板,PCR扩增IL-1β基因后将其亚克隆至pET28a表达载体中。将序列测定验证过的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌... 白细胞介素1β(IL-1β)在免疫调节和炎症反应中起着重要作用。为了解黄鳝IL-1β基因的功能,以黄鳝肝脏cDNA为模板,PCR扩增IL-1β基因后将其亚克隆至pET28a表达载体中。将序列测定验证过的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌进行IPTG诱导后Ni 2+亲和柱分离纯化获得重组蛋白rIL-1β;用SDS-PAGE电泳和Western Blot检测rIL-1β。按2μg/kg剂量对黄鳝进行腹腔注射rIL-1β,用荧光定量PCR分析注射rIL-1β对肝脏IL-1β、NF-κB、AKR和Nrf2等基因表达的影响。结果表明:成功构建了黄鳝IL-1β基因的原核表达载体并实现了重组蛋白的分离纯化;重组的rIL-1β蛋白具有较好的生物活性,腹腔注射rIL-1β显著提高了肝脏IL-1β和NF-κB基因的表达水平,却对AKR和Nrf2基因的表达有明显的抑制作用。研究为进一步深入探索鱼类IL-1β基因在免疫系统中的功能提供了参考资料。 展开更多
关键词 白细胞介素1Β 黄鳝 活性分析 重组表达
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嗜热四膜虫胱硫醚γ-裂解酶Cgl1的表达、定位及功能分析 认领
9
作者 韩挺 许静 王伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期286-295,共10页
含硫氨基酸在不同的生物体中具有重要调节功能,转硫途径相关酶促进半胱氨酸的生成和硫化氢产生。本研究从嗜热四膜虫中鉴定一种胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase 1,CGL1,TTHERM00052400)基因。CGL1在营养生长期高水平表达,而在饥... 含硫氨基酸在不同的生物体中具有重要调节功能,转硫途径相关酶促进半胱氨酸的生成和硫化氢产生。本研究从嗜热四膜虫中鉴定一种胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase 1,CGL1,TTHERM00052400)基因。CGL1在营养生长期高水平表达,而在饥饿阶段和有性生殖期,维持在较低的表达水平。通过密码子优化,人工合成CGL1基因,构建重组表达质粒pGEX-CGL1,转化大肠杆菌BL21(DE3)。E.coli/pGEX-CGL1表达重组蛋白质GST-Cgl1,并通过亲和层析获得纯化。GST-Cgl1裂解胱硫醚产生半胱氨酸,也具有裂解半胱氨酸和同型半胱氨酸产生H2S的活性。进一步构建重组质粒pNEO4-3HA-CGL1和pSMC1hpNEO-CGL1,转化四膜虫细胞,获得带有HA标签和干扰CGL1的突变体细胞株。免疫荧光定位表明,HA-Cgl1生长期定位在亲本大核,饥饿期定位在细胞质,有性生殖前期定位在亲本大核,而在后期定位在胞质中。CGL1干扰的突变体细胞株在有性生殖过程中不能形成合子核,发育中的小核异常降解,产生仅有大核的异常单细胞。结果表明,嗜热四膜虫含有进化中保守的胱硫醚γ-裂解酶Cgl1。Cgl1具有产生和裂解半胱氨酸的活性。Cgl1定位在细胞质和细胞核中,参与了有性生殖过程细胞核的发育。 展开更多
关键词 嗜热四膜虫 胱硫醚γ-裂解酶 活性分析 细胞定位
牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析 认领
10
作者 王京红 于晓甜 +2 位作者 唐铭泽 杨洪鸣 唐金宝 《药物生物技术》 CAS 2019年第1期1-4,共4页
该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EKLC)。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D4K-EKLC并转化至E.coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的... 该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EKLC)。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D4K-EKLC并转化至E.coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的复性效率。复性后的目的蛋白经金属离子亲和层析纯化,并以EKLC自切方式移除重组EKLC的N-端6×His-D4K序列得到具有天然N-端氨基酸序列的EKLC,酶活性测定结果显示该研究所制备的重组EKLC高于商品化牛肠激酶。重组EKLC在大肠杆菌中非融合表达成功,为实现EKLC的经济、高效制备研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 重组牛肠激酶轻链 大肠杆菌 非融合蛋白 表达 包涵体 活性分析
重组突变巴曲酶酶动力学及活性分析研究 认领
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作者 李娜 兰海英 +2 位作者 康乐 陈宏超 徐梅 《蛇志》 2019年第1期10-12,31共4页
目的对重组突变巴曲酶进行酶动力学初步研究,并建立一种蛇毒类凝血酶活性测定方法。方法使用可控温(37℃)紫外分光光度计,采用酶动力学测定法,测定重组突变巴曲酶的米氏常数,优化活性测定方法的反应时间和线性范围,验证此方法精密度,并... 目的对重组突变巴曲酶进行酶动力学初步研究,并建立一种蛇毒类凝血酶活性测定方法。方法使用可控温(37℃)紫外分光光度计,采用酶动力学测定法,测定重组突变巴曲酶的米氏常数,优化活性测定方法的反应时间和线性范围,验证此方法精密度,并用发色底物法与血浆凝集法同时测定不同蛇种来源的类凝血酶活性。结果重组突变巴曲酶的米氏常数(37℃)Km值为256.28μmol/L、Vm值为0.005077μmol/min。该法呈现相应的剂量关系曲线,反应时间优选为0~20min,线性范围优选为1~16.8nmol/L,拟合度R2≥0.99,方法精密度的变异系数≤5.0%。两种不同方法测定不同蛇种来源类凝血酶的活性单位比例范围为3.3~3.7(发色底物法/血浆凝集法),比例关系一致。结论建立的蛇毒类凝血酶活性测定方法拟合度优,精密度高,可测定不同来源的类凝血酶活性,并可替代传统血浆凝集活性测定法。 展开更多
关键词 蛇毒类凝血酶 巴曲酶 酶动力学 活性分析 发色底物法 血浆凝集法
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牛分枝杆菌Mtb8.4在枯草芽孢杆菌中的表达与免疫活性分析 认领
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作者 李海涛 刘艳环 +3 位作者 朱言柱 谷晨晨 闫喜军 苗利光 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期136-138,250共4页
Mtb8.4是从分枝杆菌H37Rv株培养滤液中分离纯化出的一种低分子质量蛋白抗原,具有细胞免疫活性,能诱导Th1型细胞免疫反应,同时能够产生对感染细胞有强烈溶解能力的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),分泌高水平的γ干扰素(IFN-γ)。
关键词 牛分枝杆菌 免疫活性 枯草芽孢杆菌 活性分析 细胞毒性T淋巴细胞 细胞免疫反应 IFN-γ 蛋白抗原
花香引诱剂和主要寄主植物对棉铃虫的诱卵活性分析 认领
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作者 郝学政 《河南农业》 2018年第31期33-34,共2页
利用仿生学方法干预害虫产卵格局,是新型防控技术的研究热点。寻找合适的产卵资源对昆虫种群繁衍非常重要。尤其是蛾类昆虫,幼虫在农田的数量和分布基本取决于成虫的产卵选择行为。棉铃虫是蛾类昆虫,其幼虫为害作物收获部分,雌性成虫产... 利用仿生学方法干预害虫产卵格局,是新型防控技术的研究热点。寻找合适的产卵资源对昆虫种群繁衍非常重要。尤其是蛾类昆虫,幼虫在农田的数量和分布基本取决于成虫的产卵选择行为。棉铃虫是蛾类昆虫,其幼虫为害作物收获部分,雌性成虫产卵量较大。棉铃虫夜间产卵与采蜜活动交织在一起,在寄主植物少数开花时,雌虫优先选择开花植株或附近产卵,在开花的非寄主上产卵量比不开花的寄主上还多。因此,推测苯乙醛、乙酸苯甲酯这些传统上被认为是典型的取食信息的花香气味,也对棉铃虫雌成虫具有产卵引诱的功能,但和棉铃虫自然寄主相比究竟有多强,有待试验验证。 展开更多
关键词 寄主植物 棉铃虫 引诱剂 活性分析 花香 蛾类昆虫 产卵量 不开花
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长白山特殊生境药用植物根际拮抗菌的分离及其代谢产物活性分析 认领
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作者 周东月 尹逊哲 +2 位作者 姜爽 于秀明 郭焱 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期2090-2092,共3页
目的从长白山特殊生境土壤中分离筛选出具有抗Staphylococcus aureaus与Escherichia coli两种临床常见指示菌效果明显的菌株。方法通过对菌株的初步分离,纯培养,革兰染色,抑菌实验,摇瓶发酵,形态特征等进行综合实验分析,优选具有较好抑... 目的从长白山特殊生境土壤中分离筛选出具有抗Staphylococcus aureaus与Escherichia coli两种临床常见指示菌效果明显的菌株。方法通过对菌株的初步分离,纯培养,革兰染色,抑菌实验,摇瓶发酵,形态特征等进行综合实验分析,优选具有较好抑菌作用的菌株。结果通过筛选,最终从16株形态典型的菌株中成功分离出2株具有明显抑菌效果的菌株,命名为D-x和D-f;菌株D-x与D-f发酵液上清及浸膏对两种靶标菌均具有明显的抑菌活性; D-x上清液对S.aureaus及E.coli的平均抑菌圈直径分别为13.8 mm和9.8 mm,浸膏对S.aureaus及E.coli的平均抑菌圈直径分别为10.5mm,7.2mm; D-f上清液对S.aureaus及E.coli平均抑菌圈直径分别达到12.5mm,10.8mm,浸膏对S.aureaus及E.coli平均抑菌圈直径分别达到9.6 mm,9.5 mm。结论通过筛选,菌株D-x与菌株D-f均具有较好抑菌活性,是两株值得开发的抗菌菌株。 展开更多
关键词 拮抗菌 分离筛选 抗菌性能 活性分析
基于原代小脑颗粒细胞的A型肉毒毒素活性分析法的建立 认领
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作者 王建新 李崭 +3 位作者 何志利 黄洁 李涛 王慧 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期57-59,共3页
目的分离、培养sD大鼠原代小脑颗粒细胞,用于评价A型肉毒毒素活性。方法将出生后6—8d的sD大鼠小脑颗粒细胞培养5~7d后用A型肉毒毒素处理,采用免疫荧光法进行检测并评价毒素的活性,Western印迹法分析毒素活性与剂量关系。结果与结... 目的分离、培养sD大鼠原代小脑颗粒细胞,用于评价A型肉毒毒素活性。方法将出生后6—8d的sD大鼠小脑颗粒细胞培养5~7d后用A型肉毒毒素处理,采用免疫荧光法进行检测并评价毒素的活性,Western印迹法分析毒素活性与剂量关系。结果与结论成功培养了大鼠小脑颗粒细胞,并在原代神经细胞水平建立了A型肉毒毒素活性分析法,测定了毒素活性剂量关系,为进一步解析肉毒毒素作用的生化机制提供了技术手段。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 原代小脑颗粒细胞 活性分析
西农萨能奶山PPA4Rγ基因启动子结构与功能分析 认领
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作者 张雪莹 罗军 +4 位作者 陈筱影 田慧彬 赫秋亚 张天颖 史怀平 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1203-1212,共10页
过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPART)是核受体家族成员,作为配体激活型转录因子,在调控脂肪酸代谢和脂滴形成等方面发挥重要作用。为分析PPARy基因启动子结构及功能,完善奶山羊(Cap... 过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPART)是核受体家族成员,作为配体激活型转录因子,在调控脂肪酸代谢和脂滴形成等方面发挥重要作用。为分析PPARy基因启动子结构及功能,完善奶山羊(Capra hircus)乳脂代谢调控网络,本研究以西农萨能奶山羊全血DNA为模板,通过PCR技术扩增PPARγ基因5’侧翼序列,并克隆得到7个长度不同的缺失片段,分别连接pGL3-basic载体构建重组体,利用双荧光素酶报告系统检测各重组质粒活性,结合生物信息学分析确定其转录核心区域;并通过启动子定点突变和过表达CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein alpha,C/EBPα)研究转录因子C/EBPa对PPARγ基因的转录调控。结果表明,克隆得到的艘ARy基因启动子序列全长为2328bp(包含转录起始位点上游2181bp,GenBank登录号:MG770492.1),启动子上无典型的真核生物元件TATA框,但存在C/EBPα、肝X受体(1iver X receptor,LXR)、胆固醇调节元件结合蛋白(sterol-regulatory element binding protein,SREBP)及特异性蛋白l(specificity protein1,SPl)等多个转录因子结合位点;缺失片段分析结果表明,PPARγ7基因启动子核心区域位于转录起始位点上游194~108bp,且启动子上存在负调控元件;转录因子C/EBPa通过结合位于启动子上游119bp处的C/EBPa结合元件而调控PPARγ基因的转录。本研究为后续开展PPARγ调控羊奶脂肪酸代谢的机理研究提供了资料。 展开更多
关键词 西农萨能奶山羊 过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ) 启动子 基因克隆 活性分析
一种新型具有GPx和SOD的含硒抗氧化肽制备 认领
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作者 张越 栾鑫超 +3 位作者 侯殿雅 于丽莉 徐亚维 楚海娇 《现代农业研究》 2018年第4期19-20,共2页
本研究人工设计合成了具有SOD和GPx氨基酸一级序列的小肽,将目的蛋白中活性部位的化学修饰位点设计成Cys,同时将其它位点的Cys变成不影响结构的其他氨基酸获得人工合成的76个氨基酸的抗氧化肽序列,尝试利用E.coli的营养缺陷型表达系统进... 本研究人工设计合成了具有SOD和GPx氨基酸一级序列的小肽,将目的蛋白中活性部位的化学修饰位点设计成Cys,同时将其它位点的Cys变成不影响结构的其他氨基酸获得人工合成的76个氨基酸的抗氧化肽序列,尝试利用E.coli的营养缺陷型表达系统进行76肽模拟物的表达,并对表达的肽活性进行鉴定,预期为抗氧化模拟物的研究提供一些理论参数。 展开更多
关键词 双酶蛋白制备 蛋白表达 活性分析
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苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11蛋白C端点突变对其杀虫活性的影响 认领 被引量:1
18
作者 雒国兴 刘荣梅 +3 位作者 李海涛 张金波 高继国 张杰 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期79-85,共7页
为研究Vip3Aa11羧基端对其杀虫活性和敏感性的影响,本研究利用定点突变技术构建了Vip3Aa11的3个突变体S543N、D547E和T681V。经SDS-PAGE分析证实3个突变体蛋白均能在大肠杆菌中表达分子量约88 k D的目的蛋白,生物活性测定显示,与Vip3Aa1... 为研究Vip3Aa11羧基端对其杀虫活性和敏感性的影响,本研究利用定点突变技术构建了Vip3Aa11的3个突变体S543N、D547E和T681V。经SDS-PAGE分析证实3个突变体蛋白均能在大肠杆菌中表达分子量约88 k D的目的蛋白,生物活性测定显示,与Vip3Aa11相比,突变体S543N对甜菜夜蛾Helicoverpa armigera的杀虫活性提高了5倍。突变体D547E对甜菜夜蛾杀虫活性显著降低。突变体S543N、D547E和T681V对棉铃虫Spodoptera exigua的杀虫活性无明显变化。说明Vip3Aa11 C端部分氨基酸的定点突变对其杀虫活性有影响,且对不同害虫的杀虫活性变化趋势不同。本研究比较了Vip3Aa11蛋白与突变蛋白之间杀虫活性的差异,为研究Vip3Aa类蛋白的结构和机理奠定基础。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 营养期杀虫蛋白 定点突变 活性分析
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PPRV受体信号转导淋巴细胞激活分子V区功能蛋白的表达及活性分析 认领
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作者 王耀杰 吴锦艳 +4 位作者 陈妍 王光祥 尚佑军 赵兴绪 张勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1295-1299,共5页
信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)感染宿主的主要细胞受体,其N端V结构域的表达活化可以启动PPRV的入侵感染。本试验选用Slam/V结构域作为功能靶标进行表达,并分析其活性。分离山羊外周血淋巴细胞,提取其... 信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)感染宿主的主要细胞受体,其N端V结构域的表达活化可以启动PPRV的入侵感染。本试验选用Slam/V结构域作为功能靶标进行表达,并分析其活性。分离山羊外周血淋巴细胞,提取其基因组RNA,应用RT—PCR方法扩增山羊SLAM/V基因,构建原核表达载体pGEX-6P-1/Slam/V。将获得的重组质粒pGEX-6P-1/Slam/V转化BL21(DE3)感受态细胞,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和验证。结果显示,IPTG诱导浓度为0.1mmol/L、37℃,诱导14h时,靶标蛋白表达量最高,融合蛋白相对分子质量约为39800,且主要以包涵体形式存在。经山羊抗人SLAM蛋白多克隆抗体识别鉴定,证实其具有良好的免疫反应活性。本试验为建立稳定表达山羊SLAM/V功能区的阳性细胞克隆及PPRV侵染路径研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 信号转导淋巴细胞激活分子 表达 活性分析
菠萝蜜中糖分积累特征及相关代谢酶活性分析 认领
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作者 高敏 《中国果业信息》 2017年第3期73-74,共2页
据《果树学报》2017年第2期《菠萝蜜果实中糖分积累特征及相关代谢酶活性分析》(作者胡丽松等)报道.为探究菠萝蜜果实中的糖分组成及含量积累特征。以菠萝蜜品种“马来西亚1号”为材料.利用高效液相色谱法分析不同发育时期果肉中蔗... 据《果树学报》2017年第2期《菠萝蜜果实中糖分积累特征及相关代谢酶活性分析》(作者胡丽松等)报道.为探究菠萝蜜果实中的糖分组成及含量积累特征。以菠萝蜜品种“马来西亚1号”为材料.利用高效液相色谱法分析不同发育时期果肉中蔗糖、果糖和葡萄糖含量.应用分光光度计法检测淀粉含量及相关代谢酶活性。结果显示,菠萝蜜成熟果实中蔗糖含量最高.超过总糖含量的70%,主要在果实采后成熟期积累。 展开更多
关键词 代谢酶活性 积累特征 糖分组成 活性分析 菠萝蜜 高效液相色谱法 分光光度计法 成熟果实
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