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硒化牡蛎多糖制备及其抗氧化和抗肿瘤活性研究 预览
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作者 丁佳玉 曲敏 +1 位作者 佟长青 李伟 《农产品加工》 2019年第3期10-14,17共6页
亚硒酸钠和牡蛎多糖合成硒化牡蛎多糖(SeOPS),纤维素DE-52分离纯化,红外光谱结构表征。DPPH·,ABTS+和·OH清除作用及铁还原力测定SeOPS抗氧化活性。MTT法检测SeOPS抑制肿瘤细胞增殖能力,采用流式细胞术检测SeOPS对细胞周期和... 亚硒酸钠和牡蛎多糖合成硒化牡蛎多糖(SeOPS),纤维素DE-52分离纯化,红外光谱结构表征。DPPH·,ABTS+和·OH清除作用及铁还原力测定SeOPS抗氧化活性。MTT法检测SeOPS抑制肿瘤细胞增殖能力,采用流式细胞术检测SeOPS对细胞周期和凋亡的影响。结果表明,SeOPS具有清除DPPH·和ABTS+作用,IC50值分别为7.102mg/mL和2.243mg/mL。·OH及铁还原力清除效果与牡蛎多糖(OPS)无显著差别。SeOPS阻滞人宫颈癌(Hela)细胞G0/G1期及肝癌(HepG2)S期的发育,诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 牡蛎多糖 硒化 人宫颈癌细胞 肝癌细胞 流式细胞术
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小分子干扰RNA抑制黏着斑激酶基因对子宫内膜癌细胞生物学特征的影响 预览
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作者 贾冬丽 方丽丽 +1 位作者 司晓辉 王远菊 《安徽医药》 CAS 2019年第1期79-83,214共6页
目的探讨小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因对子宫内膜癌细胞生物学特征的影响。方法培养人子宫内膜癌HEC-1A细胞,分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定... 目的探讨小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因对子宫内膜癌细胞生物学特征的影响。方法培养人子宫内膜癌HEC-1A细胞,分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量PCR检测各组细胞中FAK基因表达,细胞增殖能力、迁移和侵袭能力检测分别采用MTT法和Transwell法,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中FAK、磷酸肌醇3激酶(phosphoinositol 3 kinase,PI3K)、磷酸化-Akt(phosphorylate-Akt,p-Akt)、磷酸化-哺乳动物雷帕霉素(phosphorylation-mammalian rapamycin,p-mTOR)蛋白表达。结果siRNA-FAK组细胞中FAKmRNA和蛋白相对表达量分别为(1.31±0.15)、(0.26±0.08),均低于siRNA-阴性对照组[(2.06±0.18)、(0.62±0.11)]和空白对照组[(2.11±0.20)、(0.64±0.13)],差异有统计学意义(P<0.05);siRNA-FAK组24h、48h、72h、96h时细胞吸光度A值均低于siRNA-阴性对照组和空白对照组,均差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-阴性对照组和空白对照组比较,siRNA-FAK组迁移细胞数和侵袭细胞数均降低,siRNA-FAK组细胞中FAK、PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达相对表达量均降低,而Akt和mTOR蛋白相对表达量均升高,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默FAK基因表达可抑制HEC-1A细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号有关。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 黏着斑激酶1 黏着斑激酶2 RNA 小分子干扰 流式细胞术 印迹法 蛋白质 细胞运动 肿瘤侵润
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细胞凋亡主要检测方法及其应用 预览
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作者 何玉婷 杨雯 +1 位作者 王改琴 张旭东 《医学综述》 2019年第4期774-778,783共6页
细胞凋亡是在一定的生理或病理条件下,受基因调控的细胞生理性主动死亡的过程,其在维持生物体内环境稳态、组织器官的正常形态、胚胎的正常发育以及生物体的正常生理活动和功能等方面起着不可或缺的作用。凋亡机制的异常会使细胞失去控... 细胞凋亡是在一定的生理或病理条件下,受基因调控的细胞生理性主动死亡的过程,其在维持生物体内环境稳态、组织器官的正常形态、胚胎的正常发育以及生物体的正常生理活动和功能等方面起着不可或缺的作用。凋亡机制的异常会使细胞失去控制,与包括肿瘤在内的许多疾病的发生发展密切相关,准确地对细胞凋亡进行检测是开展凋亡研究的必需步骤。近年来,随着对凋亡研究的深入,在细胞凋亡的识别、确认及机制等方面的研究进展显著,用于检测细胞凋亡的新方法不断涌现,原先使用的技术方法也日趋成熟,在形态学观察的基础上,生物化学、分子生物学和免疫学等方面的技术均已广泛应用于细胞凋亡的检测。 展开更多
关键词 细胞凋亡 检测方法 流式细胞术
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微小残留病阳性急性B淋巴细胞白血病患者106例免疫表型分析
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作者 周剑峰 楚玉兰 +6 位作者 钟云峰 谢春如 王超 常娟 贾晓冬 陈建春 李焱 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2019年第1期43-46,共4页
目的分析微小残留病阳性急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者免疫表型特征及其意义。方法回顾性分析2014年6月至2016年1月天津金域医学检验所血液病诊断中心106例微小残留病阳性B-ALL患者流式细胞术检测的白血病相关免疫表型(LAIP),利用CD10... 目的分析微小残留病阳性急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者免疫表型特征及其意义。方法回顾性分析2014年6月至2016年1月天津金域医学检验所血液病诊断中心106例微小残留病阳性B-ALL患者流式细胞术检测的白血病相关免疫表型(LAIP),利用CD10、CD13/CD33、CD19、CD38、CD58、CD45等LAIP抗体进行B-ALL微小残留分析。结果所有患者CD19均阳性;27例(25.4%)CD34阴性或者弱阳性;23例(21.7%)CD10阴性或者弱阳性,24例(22.6%)CD10强阳性,共47例(44.3%)CD10表达减低或增强;98例(92.5%)CD58强阳性;64例(60.4%)CD13/CD33阳性或弱阳性;33例(31.1%)CD38阴性或弱阳性;21例(19.8%)CD45阴性。15例(14.1%)6种LAIP同时阳性,30例(28.3%)5种LAIP同时阳性,42例(39.6%)4种LAIP同时阳性,13例(12.3%)3种LAIP同时阳性,5例(4.7%)2种LAIP同时阳性,1例(0.9%)1种LAIP阳性。结论CD58、CD13/CD33、CD10、CD38、CD34抗原组合可以很好地区分肿瘤性原始/幼稚B淋巴细胞和正常B祖细胞,对于B-ALL微小残留病的判断有较高的准确性。 展开更多
关键词 白血病 B细胞 肿瘤 残余 流式细胞术 免疫表型
内源性库欣综合征患者外周血糖皮质激素受体敏感性的检测
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作者 肖珍 余叶蓉 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期119-122,共4页
目的检测内源性库欣综合征患者体内糖皮质激素受体(GR)的数量与结合力的改变,为库欣综合征患者术后糖皮质激素合理替代治疗剂量提供参考。方法按入院顺序依次纳入在四川大学华西医院内分泌代谢科住院并诊断为内源性库欣综合征的患者,并... 目的检测内源性库欣综合征患者体内糖皮质激素受体(GR)的数量与结合力的改变,为库欣综合征患者术后糖皮质激素合理替代治疗剂量提供参考。方法按入院顺序依次纳入在四川大学华西医院内分泌代谢科住院并诊断为内源性库欣综合征的患者,并选择年龄及性别与患者匹配的健康志愿者作为对照组。采用流式细胞术检测两组受试者单个核细胞(PBMC)GR的数量和结合力,比较两组受试者差异,并分析库欣综合征患者血尿皮质醇水平与其GR数量及结合力的相关性。结果共纳入库欣综合征患者17例和健康志愿者17例。库欣综合征患者GR数量和结合力分别为11.9±3.1、6.6±2.6;正常对照组GR数量和结合力分别为20.6±3.3、9.9±3.2。库欣综合征患者GR数量和结合力低于正常组(P<0.05);库欣综合征患者血、尿皮质醇水平与其GR数量或结合力无相关关系。结论库欣综合征患者GR敏感性明显降低,建议手术切除肿瘤后患者采用生理剂量1.6倍的糖皮质激素替代治疗,以克服患者的糖皮质激素抵抗,维持糖皮质激素的生理功能。 展开更多
关键词 库欣综合征 糖皮质激素受体 流式细胞术
利用流式细胞法鉴定马铃薯倍性方法的优化 预览
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作者 王婷婷 张光海 +1 位作者 蔡汶玻 郭华春 《中国马铃薯》 2019年第1期1-7,共7页
为了建立适于马铃薯倍性鉴定的流式细胞法试验体系,以二倍体马铃薯‘E’和四倍体马铃薯‘青薯9号’为材料,分别利用LB01,Galbraith's和Tris·MgCl2 3种细胞核分离缓冲液制备马铃薯组培苗幼叶单细胞核悬浮液,比较离心和不离心及... 为了建立适于马铃薯倍性鉴定的流式细胞法试验体系,以二倍体马铃薯‘E’和四倍体马铃薯‘青薯9号’为材料,分别利用LB01,Galbraith's和Tris·MgCl2 3种细胞核分离缓冲液制备马铃薯组培苗幼叶单细胞核悬浮液,比较离心和不离心及不同核酸染料碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)对流式细胞仪检测结果的影响。结果表明,3种核分离缓冲液对制备马铃薯组培苗幼叶单细胞核悬浮液存在差异,其中核分离缓冲液LB01的效果最好;不离心的效果和离心相比,离心的悬浮液中目的细胞少于不离心的;染料DAPI与PI相比,染色效果无明显差异。从而初步建立起一套利用流式细胞术鉴定马铃薯倍性的方法,该方法样品需求量小,且制备简单,测量快速,准确度高,背景碎片和杂峰较少,主峰清晰,是鉴定马铃薯染色体倍性的理想方法。 展开更多
关键词 马铃薯 核分离缓冲液 流式细胞术 倍性鉴定
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流式细胞术检测循环血骨髓瘤细胞的研究进展 预览
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作者 王显凤 陈文明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期377-381,共5页
多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞在骨髓内恶性增殖和广泛浸润的一种血液系统肿瘤,目前尚不能治愈。循环骨髓瘤细胞(CMCs)具有独特的免疫表型、细胞遗传学及生物学功能,这些特征与多发性骨髓瘤患者的预后相关。近年来应用流式细胞术检测CMC... 多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞在骨髓内恶性增殖和广泛浸润的一种血液系统肿瘤,目前尚不能治愈。循环骨髓瘤细胞(CMCs)具有独特的免疫表型、细胞遗传学及生物学功能,这些特征与多发性骨髓瘤患者的预后相关。近年来应用流式细胞术检测CMCs已得到广泛应用,二代流式(NGF)检测敏感性高达10^-6,提高了CMCs的检出率。本文拟就CMCs的免疫表型、检测方法及预后意义的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 循环骨髓瘤细胞 流式细胞术
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扶正祛邪方对肺癌患者外周血免疫指标的影响及与预后的相关性
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作者 刘素彤 李雁 《吉林中医药》 2019年第2期219-222,共4页
目的观察扶正祛邪方对肺癌患者免疫功能的影响,分析肺癌患者外周血免疫功能分布特点及与预后的相关性。方法收集就诊于我科的肺癌患者116例作为中医组,健康体检者105例作为健康组,中医组予扶正祛邪方口服,疗程6个月;采用流式细胞术检测... 目的观察扶正祛邪方对肺癌患者免疫功能的影响,分析肺癌患者外周血免疫功能分布特点及与预后的相关性。方法收集就诊于我科的肺癌患者116例作为中医组,健康体检者105例作为健康组,中医组予扶正祛邪方口服,疗程6个月;采用流式细胞术检测2组入组时及中药组治疗6个月后晨空腹外周免疫功能水平并进行相关分析。结果中医组治疗前CD4~+、CD4~+/CD8~+、NK低于健康组,CD3~+、CD8~+水平高于健康组(P<0.05);与治疗前相比,中医组治疗后CD3~+、CD8~+水平降低、NK水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),与健康人水平相比,免疫功能有向健康人水平改善的趋势;单因素生存分析提示早期患者和CD4~+≥38.73%的肺癌患者可获得更长的无进展生存期,多因素生存分析提示分期为影响肺癌患者预后的独立影响因素。结论患者外周血T淋巴细胞亚群水平较正常人相比存在异常,扶正祛邪方能够改善肺癌患者的免疫功能,其对肺癌患者预后及疗效观察具有一定意义。 展开更多
关键词 肺癌 免疫功能 T淋巴细胞亚群 NK细胞 流式细胞术
流式细胞术对多发性骨髓瘤患者微小残留病的检测
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作者 景卉 《医学理论与实践》 2019年第5期630-632,共3页
目的:应用流式细胞术(FCM)检测多发性骨髓瘤(MM)患者微小残留病(MRD)水平,探讨MRD与预后的关系。方法:统计2013—2016年我院血液肿瘤科接受化疗达完全缓解(CR)的MM患者39例,分析其临床特征及MRD水平。结果:多因素分析显示,乳酸脱氢酶≥2... 目的:应用流式细胞术(FCM)检测多发性骨髓瘤(MM)患者微小残留病(MRD)水平,探讨MRD与预后的关系。方法:统计2013—2016年我院血液肿瘤科接受化疗达完全缓解(CR)的MM患者39例,分析其临床特征及MRD水平。结果:多因素分析显示,乳酸脱氢酶≥230U/L(P=0.002)、β2微球蛋白≥3.5mg/L(P=0.002)、血肌酐≥177mmol/L(P=0.047)是影响MM患者预后的独立危险因素。MM患者达到CR后首次监测MRD水平,14例MRD阳性患者(MRD≥0.01%)与25例MRD阴性患者(MRD<0.01%)间复发率存在显著差异(P=0.008)。对MRD阳性组患者进行危险分层发现,较高的MRD水平(MRD≥0.1%)具有更高的复发风险(P=0.036)。动态监测MRD水平结果显示,持续MRD阳性患者与持续MRD阴性患者间的无复发生存期存在显著差异(P=0.035)。结论:FCM监测MRD水平对判断MM患者预后有重要意义。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 微小残留病 流式细胞术
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白血病患儿微小残留病的检测与应用进展 预览
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作者 孙雨 刘建平 王向文 《内蒙古医学杂志》 2019年第1期43-45,共3页
近年来,随着一些新的化疗药物的出现,儿童白血病的治疗效果逐渐显著,患者的完全缓解率可达50%~80%。尽管如此,由白血病中的微小残留病(MRD)引起的复发仍然面临巨大的考验,并且体内残留的白血病细胞是白血病复发的根本原因。回顾性和前... 近年来,随着一些新的化疗药物的出现,儿童白血病的治疗效果逐渐显著,患者的完全缓解率可达50%~80%。尽管如此,由白血病中的微小残留病(MRD)引起的复发仍然面临巨大的考验,并且体内残留的白血病细胞是白血病复发的根本原因。回顾性和前瞻性分析均已证实ALL和AML患者的MRD水平与治疗效果相关并能预测复发风险。目前MRD的检测技术已非常完善,可覆盖98%以上的ALL和大部分AML。如今,检测MRD的两种主要技术是流式细胞术(FCM)和聚合酶链式反应(PCR)。这两种技术在预测疾病复发和评估预后方面具有重要作用,并为儿童白血病的临床干预治疗提供了基础。 展开更多
关键词 急性白血病 微小残留病 流式细胞术
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Survivin shRNA对食管癌细胞c-myc、核因子-κB基因表达的影响
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作者 封敏 玛依热·吐尔洪 +2 位作者 董娟娟 木萨·艾尔肯 李秀梅 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期72-76,共5页
目的探讨Survivin对c-myc、核因子(NF)-κB基因的调控作用。方法 shRNA干扰沉默食管癌ECA109细胞系中Survivin基因表达,观察c-myc、NF-κB基因的表达变化,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果1.食管癌ECA109细胞系中,Survivin shRNA干... 目的探讨Survivin对c-myc、核因子(NF)-κB基因的调控作用。方法 shRNA干扰沉默食管癌ECA109细胞系中Survivin基因表达,观察c-myc、NF-κB基因的表达变化,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果1.食管癌ECA109细胞系中,Survivin shRNA干扰下调Survivin表达后,c-myc mRNA及蛋白的表达水平明显降低;2.Survivin表达后,NF-κB mRNA及NF-κB总蛋白无明显变化,但其蛋白活化表达水平明显降低,NF-κB上游调控核因子κB抑制物激酶(IKK)α、IKKβmRNA表达下调;3.Survivin表达下调导致G2期延长,G2期细胞比例增加,细胞增殖阻滞。结论 Survivin在转录及蛋白水平对c-myc具有正向调控作用,Survivin表达下调抑制了IKKα、IKKβmRNA的表达及NF-κB的磷酸化。 展开更多
关键词 SURVIVIN SHRNA C-MYC 核因子-ΚB 核因子κB抑制物激酶α 核因子κB抑制物激酶β 免疫印迹法 流式细胞术
流式细胞术检测NK细胞的细胞毒作用的两种方法比较 预览
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作者 蔡思齐 邓志辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期325-330,共6页
目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死... 目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死亡率。结果:各实验组中CFSE/7-AAD法检出的靶细胞死亡率均高于Calcein-AM释放法,在低效靶比、弱细胞毒作用条件下,差异具有统计学意义。细胞毒作用较弱时,Calcein-AM释放法平均荧强度变化不显著、结果误差较大;而CFSE/7-AAD法则能更加敏感地检出靶细胞的死亡率。结论:CFSE/7-AAD法能够特异、灵敏地检出NK细胞的细胞毒活性,所获得的结果更为可靠。 展开更多
关键词 流式细胞术 细胞毒作用 NK细胞 钙黄绿素乙酰甲酯 羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯 7-氨基-放线菌素D
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826例0岁至学龄前健康儿童外周血淋巴细胞亚群分布的调查分析
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作者 詹文丽 杨笑涵 +6 位作者 郭浩 钟志成 杜倩怡 张畅斌 黄滨梅 刘鸿 骆明勇 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期180-183,共4页
目的调查分析0岁至学龄前健康儿童外周血淋巴细胞亚群的分布。方法 826例0岁至学龄前汉族儿童分为新生儿组、婴儿组、幼儿组、学龄前组,使用流式细胞术检测各组外周血淋巴细胞亚群。结果 CD3~+细胞、CD3~+CD4~+细胞、CD3~-CD19~+细胞和C... 目的调查分析0岁至学龄前健康儿童外周血淋巴细胞亚群的分布。方法 826例0岁至学龄前汉族儿童分为新生儿组、婴儿组、幼儿组、学龄前组,使用流式细胞术检测各组外周血淋巴细胞亚群。结果 CD3~+细胞、CD3~+CD4~+细胞、CD3~-CD19~+细胞和CD4~+/CD8~+在0岁至学龄前儿童不同性别之间的差异具有统计学意义(P<0.05),CD3~-CD19~+细胞以女童较低,其他3个指标以女童较高;CD3~+、CD3~+CD4~+及CD4~+/CD8~+均以新生儿组最高,其中CD3~+CD4~+及CD4~+/CD8~+含量随年龄增长逐渐降低,至学龄前最低(P<0.05);CD3~-CD19~+和CD3~-CD16~+CD56~+细胞含量以新生儿组最低,随年龄增长而增高,CD3~-CD16~+CD56~+细胞以学龄前组最高,而CD3~-CD19~+细胞含量在幼儿期达峰值后降低(P<0.05);CD3~+CD8~+细胞含量以学龄前组最高(P<0.05)。不同年龄组男童的淋巴细胞亚群分布的变化趋势与不同年龄组儿童的规律一致;在女童中,CD3~+CD4~+及CD4~+/CD8~+含量也是以新生儿组最高(P<0.05)。结论淋巴细胞亚群在不同年龄、性别健康儿童之间的分布不同,建议按年龄、性别分别建立参考值。 展开更多
关键词 淋巴细胞亚群 流式细胞术 儿童
FOXO3A基因敲除小鼠繁殖鉴定及骨髓造血干细胞表型初步分析 预览
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作者 王玉全 李程程 +4 位作者 苏路路 管博文 卢延华 孟爱民 樊飞跃 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期41-46,共6页
目的繁育和鉴定FOXO3A基因敲除小鼠,选育的FOXO3A基因敲除杂合型小鼠用于保种,纯合型小鼠用于实验。初步分析FOXO3A基因敲除对小鼠造血细胞表型的影响,为后续FOXO3A基因对造血细胞损伤的调节研究奠定基础。方法杂合型雌鼠与野生型雄鼠交... 目的繁育和鉴定FOXO3A基因敲除小鼠,选育的FOXO3A基因敲除杂合型小鼠用于保种,纯合型小鼠用于实验。初步分析FOXO3A基因敲除对小鼠造血细胞表型的影响,为后续FOXO3A基因对造血细胞损伤的调节研究奠定基础。方法杂合型雌鼠与野生型雄鼠交配,选育出杂合型雌鼠和杂合型雄鼠,采用一雄一雌或一雄两雌同笼合养方式进行繁育获得纯合型小鼠;繁育的幼鼠剪趾标号,剪尾提取基因组DNA,采用PCR方法进行基因型鉴定,鉴定获得100bp/186bp两条条带的为杂合型小鼠(FOXO3A+/-),鉴定获得186bp条带的为纯合型小鼠(FOXO3A-/-),鉴定获得100bp条带的为野生型小鼠(FOXO3A+/+,WT);采用流式细胞术对鉴定出的野生型和纯合型小鼠进行骨髓细胞分型分析。结果FOXO3A基因敲除小鼠已成功繁殖鉴定,子代基因敲除纯合型小鼠与杂合型小鼠长势正常,与野生型FVB/N小鼠相比外观、生长发育未见明显差异;已得到一定数量的纯合型小鼠用于后续实验;骨髓细胞计数结果显示,FOXO3A基因敲除纯合型小鼠骨髓有核细胞计数与野生型小鼠相比[(6.167±1.424)vs.(10±1.732)],未见明显差异(P=0.1625);流式分析结果显示:FOXO3A基因敲除小鼠骨髓中造血祖细胞(lin-scal-1-ckit+,HPC)比例明显升高(P<0.05),造血干细胞(lin-scal-1+ckit+,HSC)比例没有明显差异;造血干细胞和造血祖细胞数目未发现有明显差异(P>0.05)。结论经基因型鉴定已成功获得FOXO3A基因敲除小鼠。初步探讨FOXO3A基因敲除对小鼠骨髓细胞计数及分型未见明显影响,FOXO3A基因敲除对小鼠造血细胞的影响需要进一步的实验加以证明。 展开更多
关键词 FOXO3A 基因敲除小鼠 PCR 流式细胞术
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流式细胞术测定苎麻基因组大小
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作者 何鑫玺 钟启 +1 位作者 钟英丽 揭雨成 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期99-103,共5页
苎麻属于荨麻科苎麻属,是目前非常重要的纺织原料,有着广泛的开发前景。为了更好地研究苎麻基因组信息,拟通过流式细胞术测定苎麻基因组大小。本研究以水稻(Oryza sativa)日本晴为内标,湘苎3号为待测样品,分别分离水稻和苎麻叶片细胞的... 苎麻属于荨麻科苎麻属,是目前非常重要的纺织原料,有着广泛的开发前景。为了更好地研究苎麻基因组信息,拟通过流式细胞术测定苎麻基因组大小。本研究以水稻(Oryza sativa)日本晴为内标,湘苎3号为待测样品,分别分离水稻和苎麻叶片细胞的细胞核,PI染色,用流式细胞仪对水稻和苎麻样品的PI发射荧光强度进行测定。通过比较水稻和苎麻样品的荧光强度的倍数关系,计算得到苎麻基因组大小,并采用外标法和内标法同时进行测定和计算。以水稻日本晴为外标,苎麻3号为待测样品,测得苎麻基因组大小为332.5 Mb,而用内标法得到的苎麻基因组大小为300.5 Mb,相比之下内标法测定的变异系数更低,更为准确。苎麻基因组大小的测定为苎麻基因组文库的建立及其基因组相关研究提供了理论指导。 展开更多
关键词 苎麻(Boehmeria nivea) 基因组大小 流式细胞术 水稻
过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立 预览
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作者 文丽梅 卢帅 +5 位作者 吕国栋 李亚芬 郑璇 田春艳 赵军 王建华 《安徽医药》 CAS 2019年第1期37-41,共5页
目的研究过氧化氢(H2O2)构建体外人肝癌细胞BEL7402氧化应激模型的最佳作用浓度及时间。方法采用噻唑蓝(MTT)染色法检测以10、100和1000μmol/L的H2O2处理0、2、4、6、8、10、12和24h后BEL7402细胞的存活率;采用双氢罗丹明123(DHR123)... 目的研究过氧化氢(H2O2)构建体外人肝癌细胞BEL7402氧化应激模型的最佳作用浓度及时间。方法采用噻唑蓝(MTT)染色法检测以10、100和1000μmol/L的H2O2处理0、2、4、6、8、10、12和24h后BEL7402细胞的存活率;采用双氢罗丹明123(DHR123)探针法、单细胞凝胶电泳技术和分光光度法检测以100μmol/LH2O2处理BEL7402细胞4h后线粒体活性氧(ROS)含量、DNA损伤、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果100μmol/LH2O2处理BEL7402细胞4h后,其存活率为(43.44±5.74)%,与10μmol/LH2O2处理组(92.77±5.51)%相比,细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);ROS含量结果显示100μmol/LH2O2处理BEL7402细胞40min时其体内的ROS含量达到峰值,之后呈下降趋势;与健康对照组比较,100μmol/LH2O2组OTM值升高(P<0.05),MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.01),SOD和GSH-Px活性均下降(P<0.05或P<0.01)。结论100μmol/LH2O2、预处理4h,可成功构建BEL7402细胞体外氧化应激模型,可为通过氧化应激机制抗肝病新药的研发奠定基础。 展开更多
关键词 过氧化氢 人肝癌细胞 氧化性应激 细胞培养技 DNA损伤 流式细胞术 彗星试验
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异甘草酸镁注射液联合紫杉醇诱导乳腺癌细胞株凋亡及其机制 预览
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作者 徐君南 李美静 +2 位作者 李晓睿 高志超 孙涛 《安徽医药》 CAS 2019年第1期41-45,共5页
目的探讨异甘草酸镁注射液、紫杉醇以及两药联合诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡作用及分子机制。方法将不同浓度的异甘草酸镁注射液单药以及联合紫杉醇干预乳腺癌细胞MCF-7,采用细胞增殖毒性(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测细胞增殖情况;Ann... 目的探讨异甘草酸镁注射液、紫杉醇以及两药联合诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡作用及分子机制。方法将不同浓度的异甘草酸镁注射液单药以及联合紫杉醇干预乳腺癌细胞MCF-7,采用细胞增殖毒性(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白磷酸化B淋巴细胞瘤-2基因(phosphate-B-cell lymphoma-2,pBcl-2)、半胱天冬酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3以及缺口蛋白(Notch)通路Notch2的表达情况。结果异甘草酸镁注射液处理48h对乳腺癌细胞MCF-7的体外增殖具有抑制作用,并在100mmol/L达到最大值27%;两药联合组对MCF-7细胞增殖的抑制作用较单药组明显增强尤其在100μmol/L(60.89%比26.98%,t=-0.017,P<0.05);两药联合处理MCF-7细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均与空白对照组、异甘草酸镁注射液组和紫杉醇组差异有统计学意义(F=209.839,P<0.001;F=40.742,P<0.001);凋亡相关蛋白pBcl-2在空白对照组、异甘草酸镁注射液组、紫杉醇组和联合组差异有统计学意义,F=11.064,P<0.001,联合组的pBcl-2蛋白表达均高于其他三组(1.94,0.79,0.83和1.01,均P<0.001)。与空白对照组相比,异甘草酸镁联合紫杉醇可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Notch2表达(3.17比2.01,P=0.027;1.17比0.67,P=0.018),联合组与单药紫杉醇的Casepase-3和Notch2表达差异无统计学意义(3.17比2.46,P=0.160;1.17比0.82,P=0.121)。结论异甘草酸镁注射液与紫杉醇能协同诱导乳腺癌细胞MCF-7的细胞凋亡,其机制可能与部分促进紫杉醇通过Notch通路上调MCF-7细胞pBcl-2、Caspase-3凋亡蛋白表达有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 细胞凋亡 流式细胞术 印迹法 蛋白质 异甘草酸镁注射液 紫杉醇
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基于细胞膜损伤的蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的作用机制 预览
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作者 宁亚维 杨坤 +4 位作者 何建卓 张岩 李强 王志新 贾英民 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期38-44,共7页
研究蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及其对细胞膜的损伤机制。首先采用二倍稀释法考察了蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,用平板计数法绘制了时间-杀菌曲线;通过DiSC3(5)探针标记荧光分光光度法考察了蔗糖月桂酸... 研究蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及其对细胞膜的损伤机制。首先采用二倍稀释法考察了蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,用平板计数法绘制了时间-杀菌曲线;通过DiSC3(5)探针标记荧光分光光度法考察了蔗糖月桂酸酯对菌体细胞膜电势差的影响,使用荧光显微镜结合流式细胞术研究了菌体细胞膜渗透性的影响,使用紫外分光光度法考察了大分子物质的泄漏情况,使用PBFI钾离子探针测定了胞内钾离子泄漏量,最后通过透射电子显微镜观察了蔗糖月桂酸酯处理前后菌体的超微结构。结果表明:蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为0.312 5 mg/mL;经蔗糖月桂酸酯作用的金黄色葡萄球菌与对照组相比,DiSC3(5)探针的荧光强度呈现剂量依赖性增大;PI探针对菌体的沾染率增加,MIC处理30 min菌体PI沾染率达到84.7%;260 nm波长处的吸光度随作用时间的延长逐渐增大,但增大量较小;蔗糖月桂酸酯会导致金黄色葡萄球菌细胞钾离子泄漏,且泄漏量与添加的蔗糖月桂酸酯质量浓度呈正相关;经MIC蔗糖月桂酸酯作用1 h后,金黄色葡萄球菌体表面变粗糙,边缘模糊。结论:蔗糖月桂酸酯可以通过破坏细胞膜渗透性消散细胞膜电势,从而导致胞内物质发生轻微泄漏,最终达到抑菌作用,本研究可为多功能性糖酯抑菌产品的开发提供理论依据。 展开更多
关键词 蔗糖月桂酸酯 金黄色葡萄球菌 细胞 流式细胞术 透射电子显微镜
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天麻素通过蛋白激酶B/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制H9c2心肌细胞凋亡
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作者 张玲 杨萍 +4 位作者 姜永良 普俞维 谢立秋 孙林 陆地 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-48,共9页
目的采用血清剥夺/复灌的大鼠H9c2心肌细胞模拟心肌缺血/再灌注损伤(I/R),从细胞层面探讨天麻素(gastrodin)抗H9c2心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞随机分为对照组、血清剥夺(0.5~6 h)处理组、血清剥夺/复灌(2/4 h... 目的采用血清剥夺/复灌的大鼠H9c2心肌细胞模拟心肌缺血/再灌注损伤(I/R),从细胞层面探讨天麻素(gastrodin)抗H9c2心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞随机分为对照组、血清剥夺(0.5~6 h)处理组、血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组、天麻素(10、20和40μmol/L)处理组、天麻素(20μmol/L)+渥曼青霉素(wortmannin)(1μmol/L)处理组、wortmannin (1μmol/L)处理组。采用免疫印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt以及凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡;通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达变化;采用免疫荧光双标记法检测细胞内p-Akt蛋白水平表达的变化。结果血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理诱导细胞凋亡水平增加;加入不同浓度天麻素处理,与血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组比较,凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值上调(P<0.05),基因转录水平检测的Caspase-3和Bax表达量降低,Bcl-2表达量上调((P<0.05),流式细胞术凋亡检测结果也同样显示,天麻素能抑制血清剥夺/复灌(2/4 h)诱导的细胞凋亡(P<0.05);同时,血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理能抑制Akt/p38MAPK信号通路;加入不同浓度的天麻素(10、20和40μmol/L)处理后,p-Akt的表达水平增多,p-p38MAPK蛋白表达减少(P <0.05)。加入Akt的特异性抑制剂wortmannin(1μmol/L)处理后,天麻素对上述因子的调控作用被反转(P<0.05)。结论在H9c2心肌细胞中,天麻素通过激活Akt/p38MAPK信号通路,抑制血清剥夺/复灌诱导的细胞凋亡,从而发挥抗心肌I/R损伤的保护作用。 展开更多
关键词 天麻素 心肌缺血/再灌注损伤 P38丝裂原活化蛋白激酶 免疫印迹法 免疫荧光双标记法 流式细胞术 大鼠
丁香酚诱导癌相关成纤维细胞的凋亡及其机制的研究 预览
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作者 徐江昊 何建霄 +2 位作者 文渚媛 秦志海(指导) 陶宁 《中小学信息技术教育》 2019年第1期27-29,共3页
目的:研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞的凋亡及其机制。背景:根据美国癌症研究协会2017年发布的年度癌症进展报告,我们发现癌症已经成为一个严重的全球性问题,癌症患者的数量正在增加。然而,传统的癌症治疗方法面临许多挑战,因此我们的... 目的:研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞的凋亡及其机制。背景:根据美国癌症研究协会2017年发布的年度癌症进展报告,我们发现癌症已经成为一个严重的全球性问题,癌症患者的数量正在增加。然而,传统的癌症治疗方法面临许多挑战,因此我们的实验试图研究有效的方法来解决癌症问题。方法:采用MTT法检测丁香酚对细胞活性的影响,采用Western blot法检测丁香酚对相关凋亡蛋白的影响,采用流式细胞术检测丁香酚是否促进了与癌相关成纤维细胞的凋亡。结果:丁香酚对癌相关成纤维细胞(CAF)有抑制作用。 展开更多
关键词 成纤维细胞 丁香 凋亡 诱导 癌症患者 全球性问题 流式细胞术 癌症治疗
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