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果蝇裸露角蛋白2对大鼠牙囊细胞成骨向分化的调控机制研究 预览
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作者 陈婵婵 凌均棨 +1 位作者 丁桂聪 廖志清 《口腔颌面修复学杂志》 2018年第4期246-252,共7页
目的:研究体外果蝇裸露角蛋白2(naked cuticle homolog 2,Nkd2)对大鼠牙囊细胞(rat dental follicle cells,rDFCs)成骨向分化的调控机制。方法:体外培养rDFCs,鉴定其组织来源并进行成骨向分化诱导,茜素红染色验证其成骨向分化能力... 目的:研究体外果蝇裸露角蛋白2(naked cuticle homolog 2,Nkd2)对大鼠牙囊细胞(rat dental follicle cells,rDFCs)成骨向分化的调控机制。方法:体外培养rDFCs,鉴定其组织来源并进行成骨向分化诱导,茜素红染色验证其成骨向分化能力,激光共聚焦检测检测Nkd2在中rDFCs的表达;采用小RNA干扰技术,干扰rDFCs中的Nkd2表达后进行成骨向分化诱导,western blot检测小RNA干扰对rDFCs表达成骨向分化因子Runx2、Col-1和OCN的影响;免疫荧光染色检测β-catenin在rDFCs中的分布变化,western blot检测小RNA干扰对rDFCs表达蓬乱蛋白1(Dishevelled-1,Dvl-1)的表达变化和Wnt/β-catenin信号通路激活剂Wnt3a与阻断剂FH535处理rDFCs后Nkd2的表达改变。结果:获得体外培养的rDFCs,并成功诱导其成骨向分化,茜素红染色显示矿化结节形成。Nkd2在rDFCs中的表达主要分布于胞浆和胞核周围。Nkd2小RNA干扰后的rDFCs中Runx2、Col-1蛋白表达明显下调,Dvl-1的表达下调。同时,Wnt3a处理组rDFCs中Nkd2蛋白表达量升高,而FH535处理组的表达量下降。结论:Nkd2通过Dvl-1调控Wnt/β-catenin信号通路促进rDFCs的成骨向分化;Nkd2是Wnt/β-catenin信号通路的靶基因,对Wnt/β-catenin信号通路起正反馈调节作用。 展开更多
关键词 Nkd2 牙囊细胞 成骨向分化 WNT/Β-CATENIN信号通路
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牙囊细胞成骨分化的研究进展 预览
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作者 杨爽 胡伟平 《口腔医学》 CAS 2018年第10期930-933,946共5页
牙源性干细胞对口腔领域的新型细胞疗法的发展具有重要意义,引起广泛的关注。在牙体组织发育或再生过程中,牙源性干细胞也非常适合研究细胞过程。牙囊中的多能未分化细胞是牙源性干细胞的一种,这些细胞已被用于分化为成牙骨质细胞和成... 牙源性干细胞对口腔领域的新型细胞疗法的发展具有重要意义,引起广泛的关注。在牙体组织发育或再生过程中,牙源性干细胞也非常适合研究细胞过程。牙囊中的多能未分化细胞是牙源性干细胞的一种,这些细胞已被用于分化为成牙骨质细胞和成骨细胞的细胞过程的研究,对于牙周组织具有重要意义。该文关于信号通路、转录因子、细胞外基质蛋白对牙囊细胞成骨分化的研究作一综述。 展开更多
关键词 牙囊细胞 成骨分化 转录因子 信号转导 牙周组织
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裸露角质蛋白同源物2正向调控大鼠牙囊细胞的成骨向分化研究 被引量:1
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作者 侯玉峦 凌均棨 +2 位作者 陈婵婵 权晶晶 杜宇 《中华口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期432-438,共7页
目的检测裸露角质蛋白同源物2(nakedcuticlehomo/og2,Nkd2)在大鼠牙根形成和牙囊细胞成骨向分化过程中的表达变化,为探讨Nkd2在牙囊细胞成骨向分化中的具体分子机制提供实验基础。方法免疫组化法检测Nkd2在SD大鼠出生后1、3、5、7... 目的检测裸露角质蛋白同源物2(nakedcuticlehomo/og2,Nkd2)在大鼠牙根形成和牙囊细胞成骨向分化过程中的表达变化,为探讨Nkd2在牙囊细胞成骨向分化中的具体分子机制提供实验基础。方法免疫组化法检测Nkd2在SD大鼠出生后1、3、5、7、9、11及13d下颌第一磨牙牙胚近基底侧牙囊组织中的表达。茜素红染色和十六烷基吡啶观察分析大鼠牙囊细胞(dentalfolliclecellsofrat,rDVC)矿化诱导l、2、3周钙化结节形成情况。蛋白质印迹法分析rDFC矿化诱导1、2、3周Nkd2蛋白表达变化及其与成骨因子碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)、Runt相关转录因子2(Runt.relatedtranscriptionfactor-2,RUNX2)和骨钙蛋白的关系。小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)沉默rDFC中Nkd2(siRNA干扰组,Si组),经矿化诱导1周,蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR(quantitativereal—timePCR,qPCR)检测Si组、阴性对照组(阴性对照RNA组,negativecontrolRNAgroup,Nc组)和空白对照组(mockcontrolgroup,Mock组)Nkd2及其mRNA与ALP、RUNX2和骨钙蛋白的表达变化。结果免疫组化结果显示,大鼠牙根形成中Nkd2在下颌第一磨牙牙胚基底侧牙囊组织中的表达呈现时间差异。随rDFC成骨诱导时间增加,茜素红染色矿化结节逐渐增多,十六烷基吡啶吸光度值逐渐增高(0、1、2、和3周吸光度值分别为0.017±0.005、0.702±0.044、1.812±0.531及2.767±0.253)。蛋白质印迹法结果显示,矿化诱导早期矿化组Nkd2(1.60±0.23)较对照组(1)表达显著上调(P〈0.05),Nkd2表达趋势与成骨相关因子表达趋势一致。siRNA干扰rDFC矿化诱导1周后si组较Nc、Mock组Nkd2和成骨因子在蛋白和mRNA水平显著降低(P〈O.05),Nc与Mock组Nkd2和成骨因子表达差异无统计学意义(P〉0.05)。Si、Nc和Mock组蛋白相对表达量分别为Nkd2:0.42±0.10、1.12±0.07、1� 展开更多
关键词 牙囊 裸露角质蛋白同源物2 牙囊细胞 成骨向分化
重组pEGFP-N1-IGF-Ⅰ基因表达质粒促进SD大鼠牙囊细胞增殖及早期成骨分化效应的实验研究
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作者 李亚明 田常生 +2 位作者 胡波 曹礼 宋锦璘 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期92-97,共6页
目的:通过胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合表达,构建重组质粒pEGFP-N1-IGF-Ⅰ。体外实验分析脂质体介导pEGFP-N1-IGF-Ⅰ转染SD大... 目的:通过胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合表达,构建重组质粒pEGFP-N1-IGF-Ⅰ。体外实验分析脂质体介导pEGFP-N1-IGF-Ⅰ转染SD大鼠牙囊细胞(rat dental follicle cells,rDFCs)对其增殖及早期成骨分化效应的影响。方法:体外分离培养rDFCs并分为空白组、pEGFPN1-IGF-Ⅰ组、pEGFP-N1+脂质体组和pEGFP-N1-IGF-Ⅰ+脂质体组。采用荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,MTT法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测法检测ALP活性,PCR检测Ⅰ型胶原(collagen type 1,Col1)表达情况。结果:荧光显微镜观察结果表明pEGFP-N1-IGF-Ⅰ成功转染入rDFCs。转染后48 h,脂质体处理组(pEGFP-N1+脂质体组和pEGFP-N1-IGF-Ⅰ+脂质体组)转染效率较非脂质体处理组(空白组和pEGFP-N1-IGF-Ⅰ组)高。MTT结果表明,pEGFP-N1-IGF-Ⅰ能增强rDFCs细胞活性,而脂质体毒性对细胞活性具有抑制作用。ALP活性检测结果显示pEGFP-N1-IGF-Ⅰ能增强rDFCs的ALP活性。PCR结果证明pEGFP-N1-IGF-Ⅰ能增加Col1α1及Col1α2的相对表达量。结论:pEGFP-N1-IGF-I能促进rDFCs增殖和早期成骨分化效应,为IGF-Ⅰ基因在牙周组织修复再生中的应用提供了实验依据。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-Ⅰ 牙囊细胞 增殖 早期成骨分化
复合干细胞膜片移植修复后的牙周组织与正常牙周组织对正畸力反应的差异性研究 预览 被引量:4
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作者 吴琼 金作林 +2 位作者 李欣 王丽颖 刘佳 《口腔疾病防治》 2016年第7期395-401,共7页
目的比较在正畸力作用下经牙囊细胞(dental follicle cells,DFCs)与牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSCs)复合细胞膜片诱导再生的牙周组织与正常牙周组织中牙齿移动速率的差异,探讨对再生组织实施正畸牙移动的可行... 目的比较在正畸力作用下经牙囊细胞(dental follicle cells,DFCs)与牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cell,PDLSCs)复合细胞膜片诱导再生的牙周组织与正常牙周组织中牙齿移动速率的差异,探讨对再生组织实施正畸牙移动的可行性。方法选择6只成年雄性比格犬,拔除上下颌双侧第一前磨牙。左上及右下象限为实验组,于拔牙窝远中制造4 mm×4 mm×4 mm骨缺损,移植DFCs/PDLSCs复合细胞膜片修复牙周组织缺损,诱导其重建;左下及右上象限为对照组。移植术后12周,安装正畸加力装置,以尖牙为支抗近中牵引第二前磨牙,力值150 g,牵引4周后测量实验组、对照组第二前磨牙近中移动速率,进行统计学分析。结果 DFCs/PDLSCs复合细胞膜片修复牙周组织缺损形成典型的"牙槽骨—牙周膜—牙骨质"样结构,具有良好的组织学特点,实验组与对照组第二前磨牙近中移动速率差异无统计学意义(P〉0.05)。结论经复合干细胞膜片修复后的牙周组织对于正畸力刺激有良好反应,正畸牙齿移动速率与正常组织无明显差异。 展开更多
关键词 细胞 细胞膜片 牙周组织再生 牙囊细胞 正畸
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双向差速法纯化大鼠牙囊细胞 预览 被引量:1
6
作者 王丽萍 李伯琦 +2 位作者 铁晓敏 王琪 刘奕杉 《口腔疾病防治》 2016年第3期142-145,共4页
目的利用牙囊细胞和成釉细胞贴壁速度及酶消化分离速度不同的特点,建立一种简便、快速纯化大鼠牙囊细胞的方法。方法取新生5~6 d SD大鼠下颌第一磨牙牙胚,在体视显微镜下剥离牙囊及成釉器,剪碎后酶消化并混合培养,再利用差速贴壁法和差... 目的利用牙囊细胞和成釉细胞贴壁速度及酶消化分离速度不同的特点,建立一种简便、快速纯化大鼠牙囊细胞的方法。方法取新生5~6 d SD大鼠下颌第一磨牙牙胚,在体视显微镜下剥离牙囊及成釉器,剪碎后酶消化并混合培养,再利用差速贴壁法和差速传代法纯化牙囊细胞。结果原代细胞为牙囊细胞和成釉器细胞混合生长,差速传代培养到第2~3代可获得纯化的牙囊细胞。倒置显微镜下观察牙囊细胞呈梭形或三角形,免疫组织化学染色显示抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性。结论双向差速法是一种高效、简便的纯化牙囊细胞的方法。 展开更多
关键词 牙囊细胞 纯化 差速贴壁 差速传代 免疫组织化学
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外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞成骨分化的影响 预览
7
作者 刘燕 杨玉娥 凌均棨 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2016年第8期455-459,共5页
目的:研究外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞(DFCs)成骨/成牙骨质向分化的影响。方法:酶消化组织块法获取大鼠DFCs,用ALP活性检测法分别观察5、10、25、50、100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 9 d后对其ALP活性影响的浓度效应,以及10... 目的:研究外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞(DFCs)成骨/成牙骨质向分化的影响。方法:酶消化组织块法获取大鼠DFCs,用ALP活性检测法分别观察5、10、25、50、100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 9 d后对其ALP活性影响的浓度效应,以及100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 3、6、9、13 d后对其ALP活性影响的时间效应;用Western blot法检测100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 2、4 d后,对细胞中成骨/成牙骨质向分化相关蛋白RUNX2、OCN、Ⅰ-胶原蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的影响。结果:100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 3、6、9、13 d后,各时间细胞ALP活性均较对照组有所升高,其中以6、9 d时升高最明显(P〈0.05);实验组细胞的ALP活性随重组Wnt3a蛋白作用时间延长而逐渐增加,各时间点两两相比,除9 d与13 d相比无统计学差异(P〉0.05)外,其他各时间点均有统计学差异(P〈0.05)。Western blot检测结果显示,100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 2、4 d后,均可使细胞中RUNX2、OCN、Ⅰ-型胶原蛋白、β-catenin的表达水平增加(P〈0.05)。结论:重组Wnt3a蛋白可能通过Wnt/β-catenin信号途径促进大鼠DFSc成骨/成牙骨质向分化。 展开更多
关键词 牙囊细胞 WNT3A Β-连环蛋白 成骨/成牙骨质分化
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骨形态发生蛋白9体外诱导牙囊细胞的成骨分化 预览 被引量:2
8
作者 吴艳 黄兰 《中国组织工程研究》 北大核心 2015年第14期2255-2260,共6页
背景:有研究表明骨形态发生蛋白9能促进多种干细胞的成骨分化,但其是否具有诱导牙囊细胞成骨向分化的能力尚不清楚。目的:探讨骨形态发生蛋白9对大鼠牙囊细胞成骨分化的诱导作用。方法:以纯化的第3代大鼠牙囊细胞为研究对象,感染... 背景:有研究表明骨形态发生蛋白9能促进多种干细胞的成骨分化,但其是否具有诱导牙囊细胞成骨向分化的能力尚不清楚。目的:探讨骨形态发生蛋白9对大鼠牙囊细胞成骨分化的诱导作用。方法:以纯化的第3代大鼠牙囊细胞为研究对象,感染骨形态发生蛋白9腺病毒后,检测牙囊细胞中碱性磷酸酶活性、钙盐沉积以及矿化相关因子基因和蛋白的表达变化。结果与结论:感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞碱性磷酸酶活性持续增强,钙盐沉积明显增强。Real time PCR检测结果显示感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞中矿化相关因子碱性磷酸酶、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥蛋白和核心结合因子mRNA表达增强。Western blot检测结果显示感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞中骨桥蛋白的表达增强。以上结果表明骨形态发生蛋白9可诱导牙囊细胞向成骨方向分化。 展开更多
关键词 细胞 分化 牙齿干细胞 牙囊细胞 骨形态发生蛋白9 成骨分化 国家自然科学基金
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牙乳头/牙囊细胞交互作用对细胞多能性的作用 预览
9
作者 刘路 彭正军 +1 位作者 韦曦 许喆桢 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2015年第2期63-67,共5页
目的:研究细胞交互作用对细胞多能性的调控作用。方法:建立牙乳头(DPCs)和牙囊细胞(DFCs)体外共培养模型,二者单独培养的细胞为对照组。采用细胞计数、β-gal染色检测细胞生长和衰老情况;免疫荧光染色检测共培养条件下多能性相关... 目的:研究细胞交互作用对细胞多能性的调控作用。方法:建立牙乳头(DPCs)和牙囊细胞(DFCs)体外共培养模型,二者单独培养的细胞为对照组。采用细胞计数、β-gal染色检测细胞生长和衰老情况;免疫荧光染色检测共培养条件下多能性相关因子Oct-4、Sox2和c-Myc的表达变化;通过ALP活性测试检测矿化诱导后的DPCs和DFCs的矿化能力。结果:共培养组的DPCs和DFCs的细胞数明显高于对照组(P〈0.05);培养至第7代时,共培养组的DPCs、DFCs中与衰老相关的SA-b-gal表达较对照组明显减弱(P〈0.05);Oct-4、Sox2和c-Myc在共培养组DPCs和DFCs中的表达明显强于对照组;共培养组的DPCs和DFCs经矿化诱导14、21 d后,其ALP活性均显著高于对照组(P〈0.05)。结论:DPCs和DFCs可通过体外交互作用抑制细胞衰老、促进细胞的多能性相关因子的表达、提高细胞的矿化能力。 展开更多
关键词 牙乳头细胞 牙囊细胞 微环境 多能性
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牙周组织工程研究进展:问题与应用 预览 被引量:2
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作者 路博闻 徐璐璐 +1 位作者 张洋 韩光 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第24期3900-3905,共6页
背景:组织工程技术的出现为实现牙周组织完全再生提供了全新的思路和方法.目的:就近年来牙周组织工程种子细胞、生长因子和支架材料三大基本要素的最新研究及相关进展进行简要综述.方法:由第一作者检索PubMed数据库关于牙周组织工程... 背景:组织工程技术的出现为实现牙周组织完全再生提供了全新的思路和方法.目的:就近年来牙周组织工程种子细胞、生长因子和支架材料三大基本要素的最新研究及相关进展进行简要综述.方法:由第一作者检索PubMed数据库关于牙周组织工程研究方面的文章,检索词为“periodontal tissue englneenng”,限定文献语言种类为English;同时检索CBM数据库2009年1月至2013年12月相关牙周组织工程方面的文献,检索词为“牙周组织工程”.排除重复性研究,最终纳入30篇文献进行综述.结果与结论:研究证实牙周膜干细胞在牙周组织再生领域是具有良好的应用前景,骨髓基质干细胞是修复牙周组织缺损的一种较为理想的种子细胞,牙囊细胞具有多向分化潜能,可以形成牙周组织.多种生物活性分子已被证实有较强的牙周组织修复功能,与牙周组织工程相关的主要生长因子有血小板衍化生长因子、骨形态发生蛋白、转化生长因子β、胰岛素样生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、釉基质衍生物等.目前应用于牙周组织工程的支架材料主要分为天然生物材料和人工合成材料.如何选择最佳的种子细胞、细胞因子以及支架材料的复合物,其研究还需进一步完善. 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 牙周 牙周膜干细胞 骨髓基质干细胞 牙囊细胞 血小板衍化生长因子 骨形态发生蛋白 碱性成纤维细胞生长因子 胶原 壳聚糖 聚乳酸-聚羟基乙酸 国家自然科学基金
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牙囊和上皮根鞘细胞成无细胞牙骨质的机制 预览
11
作者 陈杰 郭维华 田卫东 《国际口腔医学杂志》 CAS 2014年第3期314-319,共6页
无细胞牙骨质是锚定牙周纤维和牙根的重要组织结构,牙囊细胞(DFC)通过自身分化和上皮根鞘(ERS)通过上皮-间质转化(EMT)形成的成牙骨质细胞参与无细胞牙骨质形成。牙囊细胞体外移植后可形成纤维样和牙骨质样组织,而牙乳头和上皮... 无细胞牙骨质是锚定牙周纤维和牙根的重要组织结构,牙囊细胞(DFC)通过自身分化和上皮根鞘(ERS)通过上皮-间质转化(EMT)形成的成牙骨质细胞参与无细胞牙骨质形成。牙囊细胞体外移植后可形成纤维样和牙骨质样组织,而牙乳头和上皮根鞘可以诱导牙囊细胞从基因及其蛋白质水平高表达碱性磷酸酶、骨涎蛋白等无细胞牙骨质相关标志物。其中钙离子、骨形态发生蛋白、Wnt/β-连环蛋白通路等目前被认为是介导牙囊细胞成牙骨质分化的信号转导通路。目前发现,调控无机磷酸盐胞内外浓度的转运蛋白对无细胞牙骨质形成调节的敏感性更高。ERS亦可通过EMT形成间质细胞来参与牙周组织的发生。钙结合蛋白D28k、末端较小的同源异形盒-2等在无细胞牙骨质、ERS以及牙囊细胞表达差异都说明了ERS具有成牙骨质细胞特性。在此过程中,TGFβ激活下游蜗牛蛋白后,通过磷脂酰肌醇-3-激酶和蛋白激酶B信号转导通路来介导ERS的无细胞牙骨质分化过程。 展开更多
关键词 牙根发生 细胞牙骨质 牙囊细胞 上皮根鞘 分化
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釉基质蛋白对人牙囊和牙周膜细胞黏附增殖的影响 预览
12
作者 何鲲 程祥荣 张曦木 《国际口腔医学杂志》 CAS 2014年第5期536-540,共5页
目的 比较釉基质蛋白(EMP)对人牙囊细胞(hDFC)和人牙周膜细胞(hPDLC)在钛片表面黏附和增殖能力的影响。方法 分离培养hDFC和hPDLC,双喷砂加酸蚀处理钛片表面。实验分为4组:hDFC+EMP诱导组、hDFC组、hPDLC+EMP诱导组、hPDLC组... 目的 比较釉基质蛋白(EMP)对人牙囊细胞(hDFC)和人牙周膜细胞(hPDLC)在钛片表面黏附和增殖能力的影响。方法 分离培养hDFC和hPDLC,双喷砂加酸蚀处理钛片表面。实验分为4组:hDFC+EMP诱导组、hDFC组、hPDLC+EMP诱导组、hPDLC组。采用噻唑蓝(MTT)法和细胞免疫荧光染色法,定量分析细胞在钛片表面的黏附和增殖情况,扫描电子显微镜观察细胞在钛片表面1~7 d的生长情况。结果 1~7 d各组间MTT值的差异无统计学意义(P〉0.05);加有EMP诱导的2组细胞较2组单纯细胞培养组的形状系数(Sf)值更高(P〈0.05),hDFC组和hPDLC两组间Sf值差异无统计学意义(P〉0.05),hDFC+EMP诱导组较hPDLC+EMP诱导组Sf值高(P〈0.05)。结论 EMP能促进hPDLC和hDFC在钛片表面的黏附,且对hDFC的促进作用更强;但对接种在钛片表面的hPDLC和hDFC短期增殖没有影响。 展开更多
关键词 釉基质蛋白 牙囊细胞 牙周膜细胞 黏附 增殖
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骨形成蛋白-2和地塞米松对牙囊细胞的联合生物学效应
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作者 常秀梅 张克荣 +1 位作者 齐香薇 王书文 《临床口腔医学杂志》 2014年第7期398-400,共3页
目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和地塞米松(Dex)联合作用对牙囊细胞(DFCs)增殖和分化的影响。方法:利用四唑盐比色法(MTT),细胞总蛋白考马斯亮蓝测定法,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒分别测定不同浓度的rhBMP和Dex单独... 目的:探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和地塞米松(Dex)联合作用对牙囊细胞(DFCs)增殖和分化的影响。方法:利用四唑盐比色法(MTT),细胞总蛋白考马斯亮蓝测定法,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒分别测定不同浓度的rhBMP和Dex单独和联合作用后DFCs的增殖和分化情况。结果:rhBMP对DFC的增殖和ALP的表达均有促进作用,低浓度Dex促进ALP的表达,但高浓度的Dex对DFC有增殖抑制作用,rhBMP和Dex联合作用后DFCs的增殖和ALP活性较单独作用有更明显的升高。结论:rhBMP和Dex联合作用对于促进DFCs的增殖和向成骨细胞分化有协同作用。 展开更多
关键词 牙囊细胞 骨形成蛋白 地塞米松 增殖 分化
颅骨锁骨发育不全患者牙囊细胞的体外生物学特征 预览 被引量:1
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作者 戈杰 张娟 +2 位作者 郭松松 傅瑜 江宏兵 《口腔生物医学》 2014年第4期169-173,共5页
目的:在成功分离培养正常同龄人牙囊细胞(dental follicle cells,DFCs)与颅骨锁骨发育不全(cleidocranial dysplasia, CCD)患者牙囊细胞(DFCs-CCD)的基础上,研究其一般体外生物学特征,包括增殖、克隆、成骨及破骨能力。方法... 目的:在成功分离培养正常同龄人牙囊细胞(dental follicle cells,DFCs)与颅骨锁骨发育不全(cleidocranial dysplasia, CCD)患者牙囊细胞(DFCs-CCD)的基础上,研究其一般体外生物学特征,包括增殖、克隆、成骨及破骨能力。方法:采用 BrdU细胞增殖实验与倍增法研究两种来源 DFCs 增殖能力;用结晶紫染液染色培养12 d 的两种 DFCs,分析其克隆形成能力;并用成骨诱导液诱导两种 DFCs 成骨,用 Western blot 和茜素红染色法分析成骨能力,用实时定量 PCR 方法研究其破骨基因表达差异。结果:DFCs-CCD 的 BrdU 阳性率高于 DFCs,同时 DFCs 的群体倍增时间为(1.834±0.093)d,而 DFCs-CCD 的则为(1.394±0.028)d,差异具有统计学意义(P <0.05);DFCs-CCD 的克隆集落多于 DFCs,但 Runt 相关转录因子2(Runt-related transcrip-tion factor 2,Runx2)、成骨细胞特异性转录因子 Osterix、骨钙素(osteocalcin,Ocn)等成骨相关蛋白表达水平低,而其茜素红染色所示钙化结节同样较少;同时,DFCs-CCD 高表达核因子-κB 受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)等破骨相关基因(P <0.05),而核因子-κB 受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)水平无统计学差异(P >0.05)。结论:相比 DFCs,DFCs-CCD 具有更强的增殖、克隆能力和更弱的成骨能力,而破骨基因表达紊乱。 展开更多
关键词 颅骨锁骨发育不全 牙囊细胞 增殖 成骨 破骨
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LIM矿化蛋白1在成骨分化前后人牙囊细胞中的表达 被引量:2
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作者 常秀梅 张克荣 +1 位作者 王书文 齐香微 《临床口腔医学杂志》 2014年第6期336-339,共4页
目的:研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法:组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免... 目的:研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法:组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免疫细胞化学检测骨涎蛋白的表达;Von Kossa染色检测矿化结节的形成。矿化诱导前后,采用RT-PCR技术检测LIM矿化蛋白-1。结果:培养4周,实验组矿化结节形成,骨涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达, Von Kossa染色阳性;对照组未形成矿化结节,骨涎蛋白表达弱阳性,Von Kossa染色阴性。 RT-PCR结果显示LIM矿化蛋白-1在实验组强阳性表达,对照组弱表达。结论:LIM矿化蛋白-1与胚胎期人牙囊细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白-1可能在胚胎期牙囊细胞的分化、矿化中发挥一定作用。 展开更多
关键词 牙囊细胞 分化 矿化 LIM矿化蛋白-1
构建一种新型牙周膜牙囊复合细胞膜片的研究 被引量:3
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作者 王丽颖 金作林 +4 位作者 宋扬 刘佳 金岩 刘文佳 吴凡 《临床口腔医学杂志》 2013年第4期195-199,共5页
目的:拟构建一种牙周膜牙囊复合细胞膜片,并比较其与单一膜片的性能差异,以期寻找一种更加优越的牙周缺损修复材料。方法:将第三代牙周膜干细胞及牙囊干细胞直接混合共同培养,将牙周膜牙囊混合细胞、牙周膜干细胞及牙囊干细胞分别... 目的:拟构建一种牙周膜牙囊复合细胞膜片,并比较其与单一膜片的性能差异,以期寻找一种更加优越的牙周缺损修复材料。方法:将第三代牙周膜干细胞及牙囊干细胞直接混合共同培养,将牙周膜牙囊混合细胞、牙周膜干细胞及牙囊干细胞分别制备成细胞膜片,应用HE染色,扫描电镜比较三种膜片形态学差异,应用茜素红染色,RT—PCR比较三种膜片成骨能力差异。结果:扫描电镜结果显示,牙囊牙周膜混合细胞膜片分泌更多的细胞外基质。HE染色结果也显示牙囊牙周膜混合细胞膜片细胞层数更多,基质分泌量更大。同时,牙囊牙周膜混合细胞膜片AIJP、Runx2、OCN表达显著高于单一细胞膜片。成骨诱导21天后,茜素红染色结果显示,与单一细胞膜片相比,牙囊牙周膜混合细胞膜片染色更深。结论:牙周膜牙囊复合细胞膜片较单一细胞膜片,细胞层数更多,基质分泌量更大,骨向分化能力更强,为牙周再生提供了新的思路。 展开更多
关键词 细胞膜片 牙囊细胞 牙周膜干细胞 牙周再生
牙囊细胞对炎症组织来源牙周膜干细胞增殖、成骨和干性作用的影响 预览 被引量:1
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作者 刘佳 王丽颖 +4 位作者 刘文佳 宋扬 黄闯 金岩 金作林 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期168-173,共6页
目的:研究牙囊细胞(Dental follicle cells,DFCs)对炎症组织来源的牙周膜干细胞(peri—odomtitis tissue derived periodontal ligament stemcells,PPDLSCs)增殖、成骨能力和干性作用的影响。方法:利用transwell小室进行DFCs与P... 目的:研究牙囊细胞(Dental follicle cells,DFCs)对炎症组织来源的牙周膜干细胞(peri—odomtitis tissue derived periodontal ligament stemcells,PPDLSCs)增殖、成骨能力和干性作用的影响。方法:利用transwell小室进行DFCs与PPDLSCs共培养,通过克隆形成率和细胞周期实验对共培养的PPDLSCs增殖能力进行检测;成骨诱导实验观察其成骨分化能力;同时利用RT—PCR检测成骨相关基因和干性相关基因的表达水平。结果:和对照组相比,与DFCs共培养后的PPDLSCs克隆形成率增强(P〈0.05),处于增殖期细胞增多;成骨诱导后矿化结节明显增多,成骨相关基因Runx2,OCN,ALP明显上调(P〈0.05);干性相关基因Oct4,Sox2,Klf4的表达也大幅上调(P〈0.05)。结论:与DFCs共培养可以增强PPDLSCs的增殖与成骨分化能力,并增强其干性基因的表达。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 牙囊细胞 共培养
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p38MAPK信号通路在BMP-2诱导人牙囊细胞成骨分化中的作用 被引量:2
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作者 陈学鹏 施洁珺 +2 位作者 叶青松 蔡霞 张天厚 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期816-823,共8页
该丈主要探讨p38MAPK信号通路在人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导人牙囊细胞成骨分化中的作用。从人成骨肉瘤细胞株MG-63中克隆hBMP-2基因,通过基因重组技术构建pcDNA3.1(+)-hBMP-2真核表达质粒,采用脂质体法转染人牙囊细胞,以G... 该丈主要探讨p38MAPK信号通路在人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导人牙囊细胞成骨分化中的作用。从人成骨肉瘤细胞株MG-63中克隆hBMP-2基因,通过基因重组技术构建pcDNA3.1(+)-hBMP-2真核表达质粒,采用脂质体法转染人牙囊细胞,以G418筛选得到能够稳定表达BMP-2的细胞克隆。Quantitative Real-time R1=PCR及Western blot检测BMP-2目的基因和蛋白的表达。以p38MAPK特异性抑制剂SB203580作用于稳定表达BMP-2的人牙囊细胞,观察MAPKAP激酶-2磷酸化蛋白、碱性磷酸酶活性及成骨相关基因表达水平变化。结果显示,通过基因重组和基因转染获得能够稳定表达BMP.2的人牙囊细胞。SB203580明显降低MAPKAP激酶-2磷酸化蛋白的表达水平。BMP-2水平持续高表达能诱导人牙囊细胞碱性磷酸酶活性升高,同时增强OSX,Runx2、OCN、B印及DPⅣ等成骨相关基因的表达水平,但BMP-2诱导人牙囊细胞成骨分化的作用被SB203580抑制。这表明.p38MAPI滞号通路在BMP-2诱导人牙囊细胞成骨分化中发挥调控作用. 展开更多
关键词 牙囊细胞 骨形态发生蛋白-2 成骨分化 p38 MAPK信号通路
携带RUNX2基因突变的人牙囊细胞的分离培养及鉴定 预览
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作者 轩东英 陈沛 +2 位作者 魏迪欣 谢宝仪 章锦才 《口腔生物医学》 2013年第2期57-60,共4页
目的:研究携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞的分离、鉴定及意义。方法:收集颅骨锁骨发育不良(cleidocranial dysplasia,CCD)患者,鉴定其致病基因RUNX2的突变位点,通过离体培养CCD患者的未萌牙牙囊细胞,检测其携带的基因突变位点,... 目的:研究携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞的分离、鉴定及意义。方法:收集颅骨锁骨发育不良(cleidocranial dysplasia,CCD)患者,鉴定其致病基因RUNX2的突变位点,通过离体培养CCD患者的未萌牙牙囊细胞,检测其携带的基因突变位点,鉴定RUNX2+/m牙囊细胞。结果:全血基因组测序结果发现,患者RUNX2基因第2外显子插入TG突变,该突变型为c.309_310insTG,成功分离培养及鉴定RUNX2+/m牙囊细胞,并发现RUNX2基因突变减少了牙囊细胞中此蛋白的表达水平。结论:成功分离培养携带RUNX2基因突变位点的人牙囊细胞,为进一步研究RUNX2基因在牙囊及牙齿萌出中的作用提供实验模型。 展开更多
关键词 RUNX2基因 牙囊细胞 基因突变
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BMP-2和地塞米松对体外培养大鼠牙囊细胞矿化能力的影响 预览 被引量:4
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作者 徐璐璐 鄂玲玲 +2 位作者 吴婷 田越 刘洪臣 《口腔颌面修复学杂志》 2013年第3期129-132,共4页
目的:探讨BMP-2和地塞米松联合作用对大鼠牙囊细胞分化能力的影响,为牙囊细胞在牙周组织工程中的应用提供实验依据。方法:取生长状态良好的第3代大鼠牙囊细胞,血清饥饿同步化后,分别加入含BMP-2000ng/ma)、地塞米松Dex(10^-^8mo... 目的:探讨BMP-2和地塞米松联合作用对大鼠牙囊细胞分化能力的影响,为牙囊细胞在牙周组织工程中的应用提供实验依据。方法:取生长状态良好的第3代大鼠牙囊细胞,血清饥饿同步化后,分别加入含BMP-2000ng/ma)、地塞米松Dex(10^-^8mol/ml)、BMP-2(100ng/ml)+地塞米松(10-Smol/E1)的DMEM培养液,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒、钙化结节染色分别检测不同诱导条件下对大鼠牙囊细胞分化的影响。结果:经BMP-2、Dex、BMP-2+Dex诱导后,体外培养的大鼠牙囊细胞碱性磷酸酶活性均显著高于未诱导组,各组问ALP活性与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.01)。BMP-2+Dex诱导组ALP活性最强,与BMP-2诱导组间差异有统计学意义(P〈0.01),而与Dex诱导组间ALP活性则差异无统计学意义(P〉0.01)。培养14d时,BMP-2+Dex诱导组牙囊细胞ALP活性增强最为显著,与BMP-2诱导组及Dex诱导组相比差异均有统计学意义(P〈0.01)。矿化结节计数分析显示,各组细胞矿化结节形成的数量及面积明显存在显著的差异,BMP-2,Dex、BMP-2+Dex诱导组与未诱导组相比,其矿化结节形成量差异均有统计学意义(P〈0.01),BMP-2+Dex诱导组矿化结节形成量明显大于BMP-2和Dex单独诱导组。结论:BMP-2、地塞米松均能促进牙囊细胞的分化,然而两者联合作用促分化的能力最为显著,提示其在牙周组织工程中的应用前景。 展开更多
关键词 牙囊细胞 骨形成蛋白-2 地塞米松
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