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脓毒症小鼠肝细胞自噬与LC3及P62表达的实验研究
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作者 沈美佳 孙力超 张国强 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期467-472,共6页
目的探究盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)建立的脓毒症小鼠模型肝细胞自噬的发生情况及不同时间点自噬相关蛋白的表达规律。方法50只6~8周龄清洁级雄性ICR小鼠按照随机数字表法随机分为5组:CLP 3 h组,CLP 6 h组,CLP 1... 目的探究盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)建立的脓毒症小鼠模型肝细胞自噬的发生情况及不同时间点自噬相关蛋白的表达规律。方法50只6~8周龄清洁级雄性ICR小鼠按照随机数字表法随机分为5组:CLP 3 h组,CLP 6 h组,CLP 12 h组,CLP 24 h组和对照组,于术后相应时间点取材。生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST);ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达量;HE染色观察肝组织炎症情况;电镜观察肝组织自噬体和自噬溶酶体的超微结构;免疫印迹法检测肝组织自噬蛋白LC3(微管相关蛋白轻链3)和P62的表达量;免疫荧光观察自噬体的位置和数量。采用SPSS 21.0进行统计学分析,两组间比较采用两独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果CLP术后ALT和AST明显升高,均在12 h到达高峰,分别为(137.8±11.94)U/L和(475.3±57.34)U/L;IL-6的表达量在6 h到达高峰(2589.63±27.96)pg/ml;TNF-α在3 h到达高峰(320.21±8.9)pg/ml;HE染色观察到肝库普弗细胞活化,单个粒细胞浸润;电镜观察到自噬体,自噬溶酶体形成;与对照组相比,免疫印迹法显示LC3Ⅱ/Ⅰ比值在先升高后降低,6 h达到高峰(t=13.35,P<0.05),P62蛋白含量先降低后升高,在6 h达到最低(t=66.11,P<0.05),与LC3Ⅱ/Ⅰ趋势正好相反;免疫荧光结果显示LC3荧光强度于6 h达到高峰(t=12.52,P=0.05)。结论盲肠结扎穿孔法建立脓毒症小鼠模型肝脏发生了自噬现象,且自噬先增强后减弱,自噬体形成在6 h达高峰。 展开更多
关键词 脓毒症 盲肠结扎穿孔 肝损伤 自噬 LC3 P62 炎症因子 小鼠
关于脓毒症动物模型建立的基础研究 预览
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作者 王欢 郝舒捷 唐小晓 《大连大学学报》 2018年第6期58-62,共5页
探索小鼠脓毒症模型的机制,为临床脓毒症治疗提供参考。首先采用盲肠结扎穿孔法制作小鼠脓毒症模型,并制作对照组实验。然后观察各组小鼠的生理状况并且每天称量一次小鼠的体重,分别记录各组别小鼠的体重。最后进行血清内毒素的检测。... 探索小鼠脓毒症模型的机制,为临床脓毒症治疗提供参考。首先采用盲肠结扎穿孔法制作小鼠脓毒症模型,并制作对照组实验。然后观察各组小鼠的生理状况并且每天称量一次小鼠的体重,分别记录各组别小鼠的体重。最后进行血清内毒素的检测。假手术组(正常组)小鼠体重明显高于造模组(轻型造模组)小鼠的体重,这显示了假手术组(正常组)小鼠可以正常进食,随时间推移体重稳步上升。而造模组小鼠因为生理状况变差,体内发生严重的全身炎症反应导致无法进食,随着时间推移导致体重逐渐下降甚至死亡。与假手术组相比,在轻型及重型造模的模型组小鼠中,内毒素水平明显增高。 展开更多
关键词 脓毒症 盲肠结扎穿孔 内毒素 炎症反应
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乌司他丁对脓毒症大鼠神经功能的保护作用 被引量:1
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作者 翟小竹 杨正飞 +1 位作者 王鹏 蒋龙元 《岭南急诊医学杂志》 2017年第2期107-109,共3页
目的:探讨乌司他丁对脓毒症大鼠神经功能的保护作用方法:46只SD大鼠随机分为空白对照组(Norm组,n=8)、假手术组(Sham组,n=8)和盲肠结扎穿孔组(CLP组,n=30),仅CLP组进行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)。24 h后评估各... 目的:探讨乌司他丁对脓毒症大鼠神经功能的保护作用方法:46只SD大鼠随机分为空白对照组(Norm组,n=8)、假手术组(Sham组,n=8)和盲肠结扎穿孔组(CLP组,n=30),仅CLP组进行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)。24 h后评估各组的神经功能缺损评分(neurological deficient score,NDS),将脓毒症动物(S~+)随机分为S~+-control组和S~+-UTI组,检测Norm组、Sham组、S~+-control组和S~+-UTI组血清S100β的含量,随后腹腔注射乌司他丁(Ulinastatin,UTI)10万U/kg(tid,6 h/次)或等体积生理盐水。干预后24 h再次评估NDS,检测血清S100β的含量。结果:CLP术后24 h,约35%(10/29)的大鼠未发展为脓毒症;与Sham组相比,S~+的NDS明显降低(P<0.01),血清S100β明显升高(P<0.01)。干预后24 h,S~+-UTI组的NDS高于S~+-control组(P=0.019),而血清S100β低于S~+-control组(P=0.015)。结论:乌司他丁对脓毒症大鼠的神经功能具有保护作用。 展开更多
关键词 脓毒症 乌司他丁 神经功能 盲肠结扎穿孔
血管内皮祖细胞移植对脓毒症大鼠的保护作用研究 预览 被引量:2
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作者 王伟 刘德红 +2 位作者 许长琼 李卓成 裴晓改 《海南医学院学报》 CAS 2015年第3期303-305,309共4页
目的:探讨血管内皮祖细胞移植对脓毒症大鼠的保护作用。方法:盲肠结扎穿孔法构建脓毒症大鼠模型,尾静脉移植血管内皮祖细胞,观察假手术组、模型组及血管内皮祖细胞移植组大鼠的尾动脉平均动脉压、体温、呼吸频率及脉率等主要生命体征... 目的:探讨血管内皮祖细胞移植对脓毒症大鼠的保护作用。方法:盲肠结扎穿孔法构建脓毒症大鼠模型,尾静脉移植血管内皮祖细胞,观察假手术组、模型组及血管内皮祖细胞移植组大鼠的尾动脉平均动脉压、体温、呼吸频率及脉率等主要生命体征,HE染色法检测肺部损伤情况、PAS染色法检测肾脏损伤情况,并用荧光显微镜观察大鼠肺部及肾脏血管内皮祖细胞的聚集情况。结果:盲肠结扎大鼠的尾动脉平均动脉压下降,体温、脉率及呼吸频率上升,但血管内皮祖细胞移植大鼠的生命体征都得到改善;肺部HE染色及肾脏PAS染色显示血管内皮祖细胞移植组肺部炎症细胞浸润及肾小球基底膜损伤均较模型组减轻,追踪血管内皮祖细胞的定位发现,在肺部及肾脏都有血管内皮祖细胞的聚集。结论:血管内皮祖细胞移植可以迅速聚集在血管损伤部位,对脓毒症大鼠的器官功能受损具有保护作用。 展开更多
关键词 血管内皮祖细胞 脓毒症 盲肠结扎穿孔
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促肝细胞生长因子对脓毒血症大鼠多器官损伤的保护作用 被引量:2
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作者 吴航 姚继红 +4 位作者 田晓峰 刘健 李卫平 刘克辛 高东雁 《大连医科大学学报》 CAS 2013年第1期8-13,共6页
目的探讨促肝细胞生长因子(HGF)对脓毒血症诱导的大鼠多器官损伤的保护作用。方法将雄性SD大鼠分为对照组、假手术组、模型组、HGF治疗组、血红蛋白加氧酶-1(HO-1)抑制剂组及HO一1抑制剂+HGF治疗组。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制... 目的探讨促肝细胞生长因子(HGF)对脓毒血症诱导的大鼠多器官损伤的保护作用。方法将雄性SD大鼠分为对照组、假手术组、模型组、HGF治疗组、血红蛋白加氧酶-1(HO-1)抑制剂组及HO一1抑制剂+HGF治疗组。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制大鼠脓毒血症模型。尾静脉注射给药,2次/d;HO-1抑制剂及HO-1抑制剂+HGF治疗组于给予HGF后2h静脉注射锌原卟啉。术后72h处死存活大鼠,取血清及主要脏器检测相关指标。结果静脉注射HGF(75、150μg/kg·d)能够降低脓毒血症大鼠死亡率,显著降低血清IL-1β水平(P〈0.05);明显改善脓毒血症对大鼠肺、肾和肠的病理改变,增强肺、肾和肠中SOD活性。HO-1抑制剂锌原卟啉可部分拮抗HGF的保护作用。结论HGF对脓毒血症造成大鼠多器官损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 促肝细胞生长因子 脓毒血症 多器官损伤 血红蛋白加氧酶-1 盲肠结扎穿孔
电刺激迷走神经对感染性休克大鼠血浆肿瘤坏死因子α、一氧化氮合酶及一氧化氮的影响 预览 被引量:5
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作者 谢守嫔 李海龙 +3 位作者 梁永林 王清峰 李永盛 明海霞 《中国康复理论与实践》 CSCD 2009年第3期 225-227,共3页
目的研究电刺激迷走神经对感染性休克大鼠血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮合酶(NOS)及一氧化氮(NO)水平的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)复制感染性休克模型,随机分为5组:假CLP组、CLP组、迷切... 目的研究电刺激迷走神经对感染性休克大鼠血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮合酶(NOS)及一氧化氮(NO)水平的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,采用盲肠结扎穿孔法(CLP)复制感染性休克模型,随机分为5组:假CLP组、CLP组、迷切组、电刺激左侧迷走神经组、电刺激右侧迷走神经组。各组动物均行颈总动脉置管连续监测平均动脉压,ELISA法检测血浆TNF-α,生化法检测血浆中NOS活性和NO水平。结果CLP组术后平均动脉血压进行性下降,2h时血浆TNF-α、NOS及NO水平显著升高;与CLP组比较,电刺激组动物平均动脉压下降幅度减轻,血浆TNF-α、NOS及NO水平显著降低。结论电刺激左、右迷走神经均可能缓解CLP致感染性休克大鼠的进行性血压下降,降低血浆TNF-α、NOS及NO水平,有助于抗休克。 展开更多
关键词 感染性休克 迷走神经 电刺激 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 一氧化氮合酶(NOS) 一氧化氮(NO) 盲肠结扎穿孔(CLP) 大鼠
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一种经肝门静脉注射制备肠源性脓毒症大鼠模型的方法 预览
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作者 王守军 康新 +4 位作者 路晓光 杨轶仑 范治伟 白黎智 宋轶 《中华卫生应急电子杂志》 2017年第1期48-56,共9页
目的建立一种经肝门静脉注射制备肠源性脓毒症(GOS)大鼠模型。方法清洁级SD大鼠84只(250~300 g,12周龄),12只大鼠用于盲肠结扎并穿孔法(CLP)制备肠源性腹腔渗出液。72只大鼠采用随机数字法分为肝门静脉对照组(PV-S组)、肝门静脉渗液组(P... 目的建立一种经肝门静脉注射制备肠源性脓毒症(GOS)大鼠模型。方法清洁级SD大鼠84只(250~300 g,12周龄),12只大鼠用于盲肠结扎并穿孔法(CLP)制备肠源性腹腔渗出液。72只大鼠采用随机数字法分为肝门静脉对照组(PV-S组)、肝门静脉渗液组(PV-E组)和下腔静脉渗液组(VC-E组),每组24只。PV-S组经肝门静脉注射0.9%氯化钠注射液(1 m L/只),PV-E组和VC-E组分别经肝门静脉和下腔静脉注射等量腹腔渗出液。各组大鼠再按腹腔渗液注射后1,2,4,6 h分为4个亚组。各亚组大鼠在相应时相点经腹主动脉采血,处死后取肺组织并收集肺泡灌洗液(BALF),测定血清和BALF中内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)含量,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,观察肺形态学和病理形态学变化。结果 PV-E组在腹腔渗液注射液后1,2,4,6 h血清和BALF中内毒素、TNF-α及IL-6含量以及肺组织病理学评分、肺湿/干重比均显著高于同时相点PV-S组大鼠(P均<0.05)。与PV-E组比较,VC-E组在腹腔渗液注射液后1,2,4,6 h血清和BALF中内毒素水平均升高(P均<0.05),而血清和BALF中TNF-α、IL-6水平降低(P均<0.05)。PV-E组大鼠经肝门静脉注射腹腔渗出液后1,2,4,6 h肺组织W/D值(1 h:8.53±2.05;2 h:9.41±1.24;4 h:10.35±0.69;6 h:11.05±1.95)较同时相点的PV-S组(1 h:5.16±1.13;2 h:5.17±1.34;4 h:5.14±2.04;6 h:5.13±1.95)和VC-E组(1 h:6.71±0.73;2 h:7.65±1.32;4 h:8.40±0.43;6 h:9.41±1.87)均明显增大(P均<0.05)。与PV-S组比较,PV-E组肺组织明显肿胀,有广泛点、片状出血点及淤血;VC-E组肺组织病变程度较PV-E组轻。与PV-S组和VC-E组比较,PV-E组肺病理组织学结果显示肺泡腔中见大量中性粒细胞、单核细胞和红细胞浸润,肺泡壁破坏严重、肺间质明显水肿,各时相点病理学组织学评分高于PV-S组(1 h:5.32±1.35 vs 0.25±0.02;2 h:6.44±0.72 vs 0.23±0.04;4 h:7.52±1.45 vs 0.27±0.02;6 h:8.69±0.35 vs 0.22±0.05,P均<0.05)和VC-E组 展开更多
关键词 肠源性脓毒症 盲肠结扎穿孔 肝门静脉注射 内毒素 肿瘤坏死因子-Α 白介素-6
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