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绵羊肺炎支原体RPA检测技术的建立 预览
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作者 林裕胜 江锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期416-421,共6页
【目的】建立一种快速简便检测绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)的方法。【方法】根据Mo膜蛋白P80基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过条件优化建立检测Mo的RPA方法。【结果】该方法可特异性扩增Mo,... 【目的】建立一种快速简便检测绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)的方法。【方法】根据Mo膜蛋白P80基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过条件优化建立检测Mo的RPA方法。【结果】该方法可特异性扩增Mo,对其他羊常见病原无特异性扩增,对Mo核酸的检测灵敏度为70fg·μL^-1,与常规PCR敏感性一致。批内和批间结果显示Mo阳性样品均能扩增条带,而阴性对照均无扩增,表明重复性好。对186份临床样品应用建立的RPA方法和常规PCR方法同时进行检测,并对其中40份肺脏样品进行支原体的分离鉴定,结果显示分离鉴定出的13份Mo阳性样品及常规PCR法检测出的95份阳性样品经RPA检测,结果均为阳性。【结论】建立的Mo RPA方法特异性强、重复性好,可作为Mo的快速检测和流行病学调查的一项候选技术。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 重组聚合酶扩增 等温扩增
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国境口岸病原体检测新方向—重组酶聚合酶扩增技术
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作者 袁伟 廖凌 +1 位作者 童淑梅 康晓平 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第4期295-300,共6页
作为一项快速、高效、便捷的等温核酸扩增技术,重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术运用在病原体检测研究中,表现出灵敏度高、特异度好、用时短、应用广泛、操作简单等优势,有望应用于口岸病原体现场快速... 作为一项快速、高效、便捷的等温核酸扩增技术,重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术运用在病原体检测研究中,表现出灵敏度高、特异度好、用时短、应用广泛、操作简单等优势,有望应用于口岸病原体现场快速检测。本文在对比几种等温核酸扩增技术的基础上,重点介绍RPA技术原理和方法,以几种国境口岸重点关注病原体为例,探讨RPA在病原体检测、生物反恐、移动实验室方面的研究进展,为口岸卫生检疫工作提供新的技术参考和方向。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术 等温扩增 病原体 口岸 反恐
重组酶聚合酶扩增技术在番茄黄化曲叶病毒检测中的应用 预览
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作者 周莹 杨丽梅 +1 位作者 刘梅 黄金宝 《中国蔬菜》 北大核心 2019年第1期36-40,共5页
番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是引起番茄黄化曲叶病毒病的病原,在生产中造成严重危害,开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。依据番茄黄化曲叶病毒DNA-A基因序列,设计用于重组酶聚合酶等温扩增... 番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是引起番茄黄化曲叶病毒病的病原,在生产中造成严重危害,开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。依据番茄黄化曲叶病毒DNA-A基因序列,设计用于重组酶聚合酶等温扩增(RPA)检测的特异性引物,建立了TYLCV的重组酶聚合酶等温扩增检测方法,并分析该方法的特异性和灵敏度。结果表明,建立的TYLCV-RPA方法可从TYLCV阳性的番茄样品中扩增出343bp的特异性条带,反应条件为37℃恒温下40min,扩增时间短,对设备要求低,且与番茄其他病毒无交叉反应,特异性好,灵敏度可达到PCR方法的10倍,适用于TYLCV的快速检测。 展开更多
关键词 番茄黄化曲叶病毒 重组酶聚合酶扩增 等温扩增 检测方法
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杂交链反应在超灵敏检测方面的应用进展 预览
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作者 赵云虎 覃晓琳 +3 位作者 杨结仪 陈文韬 廖仪文(综述) 郑和平(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第7期863-867,共5页
DNA在生命活动中具有重要意义,针对DNA检测技术日益增多,近些年一种无酶等温高效的超灵敏扩增技术,杂交链反应(HCR)逐渐引起广泛的关注。HCR,仅在特定的核苷酸引发物(NI)和两个特殊设计的发夹DNA(H1,H2)同时存在的情况下进行自组装,实... DNA在生命活动中具有重要意义,针对DNA检测技术日益增多,近些年一种无酶等温高效的超灵敏扩增技术,杂交链反应(HCR)逐渐引起广泛的关注。HCR,仅在特定的核苷酸引发物(NI)和两个特殊设计的发夹DNA(H1,H2)同时存在的情况下进行自组装,实现了原位扩增反应。由于NI,H1,H2的可编辑性及可修饰性,使得HCR适用于分子生物学的各个领域,具有广泛的应用前景。该文通过HCR在核酸检测、蛋白检测、细胞检测及生物成像等方面的应用进展来探究其优点和不足。 展开更多
关键词 杂交链反应 等温扩增 超灵敏
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食源性致病菌等温扩增检测技术的研究进展 预览
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作者 葛航 吴朦晨 +1 位作者 张明洲 俞晓平 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期874-881,共8页
快速可靠的食源性致病菌检测方法是保障食品安全的关键。然而,传统培养法的检测周期过于冗长,无法适应对时间敏感度较高的现场或在线检测。为此,研究人员开发了多种以快速和高灵敏度为主要特征的等温扩增技术及相应的检测产品,为食源性... 快速可靠的食源性致病菌检测方法是保障食品安全的关键。然而,传统培养法的检测周期过于冗长,无法适应对时间敏感度较高的现场或在线检测。为此,研究人员开发了多种以快速和高灵敏度为主要特征的等温扩增技术及相应的检测产品,为食源性致病菌的现场或在线检测提供了强有力的技术支撑。该文对环介导等温扩增、滚环扩增、链置换扩增、切口酶信号扩增、核酸外切酶Ⅲ辅助扩增5种等温扩增方法的原理及其优缺点进行了梳理和比较。在此基础上,分析了等温扩增方法在细菌活性识别、非特异性扩增、前处理效率、检测通量4个方面所遇到的共性问题,并结合作者已有工作,提出了解决这些问题的方法或策略。 展开更多
关键词 等温扩增 细菌检测 现场检测 在线检测 食品安全
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猪瘟病毒重组酶聚合酶扩增检测方法的建立及应用 被引量:1
6
作者 王金凤 张若曦 +6 位作者 刘立兵 李睿文 孟令宅 顾文源 韩庆安 王建昌 袁万哲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期687-693,共7页
本研究基于猪瘟病毒(CSFV)5’UTR保守序列,设计特异性引物,建立了可快速检测CSFV的反转录重组酶聚合酶扩增检测方法(reverse-transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA)。该方法在40℃下恒温20 min即可完成反应;且特... 本研究基于猪瘟病毒(CSFV)5’UTR保守序列,设计特异性引物,建立了可快速检测CSFV的反转录重组酶聚合酶扩增检测方法(reverse-transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA)。该方法在40℃下恒温20 min即可完成反应;且特异性强,与其他瘟病毒和猪的重要病原无任何交叉反应。以体外转录的CSFV RNA为模板,该方法的检出下限为10~2copies。采用RT-RPA方法和实时荧光RT-PCR(real-time RT-PCR)方法同时对57份临床样品进行CSFV检测,结果,RT-RPA方法的阳性检出率为56.14%(32/57),略低于real-time RT-PCR方法的阳性检出率(64.19%,37/57)。以real-time RT-PCR作为参考方法,所建立的RT-RPA方法的诊断特异性为100%,诊断灵敏度为89.19%。上述结果表明,本研究建立的CSFV RT-RPA检测方法操作简单、反应快速,对没有装备荧光PCR仪地区的猪瘟诊断防控具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 5’UTR RT-RPA 等温扩增
基于核酸等温扩增的病原微生物微流控检测技术 预览
7
作者 何祥鹏 邹秉杰 +4 位作者 齐谢敏 陈杉 陆妍 黄青 周国华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期611-624,共14页
病原微生物的快速检测对疫情的预防控制至关重要。基于PCR的病原微生物核酸检测方法克服了传统病原微生物培养方法耗时长、免疫学检测存在窗口期等问题,已成为目前最主要的病原微生物筛查方法。然而,对精确控温热循环仪的依赖却严重限... 病原微生物的快速检测对疫情的预防控制至关重要。基于PCR的病原微生物核酸检测方法克服了传统病原微生物培养方法耗时长、免疫学检测存在窗口期等问题,已成为目前最主要的病原微生物筛查方法。然而,对精确控温热循环仪的依赖却严重限制了其在资源匮乏地区的应用。虽然基于核酸等温扩增的病原微生物检测方法可摆脱对高精度温控设备的依赖,但仍需要进行样本核酸分离提取、扩增与检测等步骤。近年来,微流控技术与核酸等温扩增技术相结合,诞生了多种病原微生物等温扩增微流控检测技术。该技术通过设计芯片结构、优化进样模式及检测方式,实现了病原微生物核酸提取、扩增与检测一体化,并具备多重检测、定量检测等功能,具有对仪器依赖度小、对操作人员要求不高、样本量需求小和自动化程度高等优点,适合于在多种环境下的病原微生物快速检测。本文从核酸等温扩增原理、进样方式、检测方式等方面对核酸等温扩增病原微生物微流控检测技术进行了综述,以期为病原微生物的快速筛查提供更多的方案思路,提升公共卫生领域对传染性疾病的防控能力。 展开更多
关键词 病原微生物检测 等温扩增 微流控芯片
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基于聚合酶螺旋反应技术快速检测铜绿假单胞菌
8
作者 朱渊 戴云山 +3 位作者 王俊虎 王萍 吕凤霞 顾秋琴 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1246-1256,共11页
【背景】铜绿假单胞菌是一种重要的水源和食源性致病菌,可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。加强铜绿假单胞菌的快速检测,对保障食品安全具有重要的意义。【目的】建立聚合酶螺旋反应(Polymerasespiralreaction,PSR)方... 【背景】铜绿假单胞菌是一种重要的水源和食源性致病菌,可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。加强铜绿假单胞菌的快速检测,对保障食品安全具有重要的意义。【目的】建立聚合酶螺旋反应(Polymerasespiralreaction,PSR)方法快速检测铜绿假单胞菌。【方法】针对铜绿假单胞菌外毒素A调控基因——ETA基因(toxA)设计引物,通过引入加速引物、优化反应条件和筛选颜色指示剂,建立快速检测铜绿假单胞菌的PSR方法,并研究方法的特异性、敏感性和可靠性。【结果】建立的方法在等温65°C条件下,40 min内可完成PSR反应,且可通过钙黄绿素和羟基萘酚蓝直接判读结果。方法特异性强、灵敏度高,最低检出限分别为20 CFU/mL细菌和1.011 5 pg/μL基因组DNA。可视化PSR方法检测包装饮用水来源的分离菌株与传统生化方法检测结果一致。【结论】研究建立的可视化PSR方法为铜绿假单胞菌DNA快速检测提供了一种可行的有效手段。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 聚合酶螺旋反应 等温扩增 DNA快速检测
禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 王潇 曹琛福 +3 位作者 黄超华 林彦星 花群义 贾伟新 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期1-7,共7页
为了建立一种简便、快速的禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H7亚型的检测方法,根据GenBank中禽流感病毒H7亚型的HA保守序列,并按照RPA引物探针的要求,设计多对引物及探针,通过条件的优化,建立禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法,... 为了建立一种简便、快速的禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H7亚型的检测方法,根据GenBank中禽流感病毒H7亚型的HA保守序列,并按照RPA引物探针的要求,设计多对引物及探针,通过条件的优化,建立禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法,并与实时荧光定量PCR方法进行比较。特异性试验结果显示,该方法特异性强,只有禽流感病毒H7亚型出现特异性曲线;灵敏性试验结果显示,该方法能检测到禽流感病毒H7亚型最低浓度为0.24×10-3μg/mL,与实时荧光定量PCR方法相比,灵敏性稍差,但该方法的检测快速,仅需要20min。表明所建立的禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法简单、快速,适合用于禽流感病毒H7亚型的现场检测。 展开更多
关键词 禽流感病毒H7亚型 重组酶聚合酶扩增(RPA) 等温扩增
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A型动物流感病毒RT-RPA检测方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 王潇 曹琛福 +3 位作者 林彦星 黄超华 贾伟新 花群义 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-6,共6页
根据A型流感病毒M基因核苷酸序列设计引物及探针,建立了一种灵敏度高、特异性强、检测迅速、操作简便的重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)。选用常见动物疫病病原验证引物探针的特异性,设计多对引物及探针,筛选出最适反应体系及反应条件,... 根据A型流感病毒M基因核苷酸序列设计引物及探针,建立了一种灵敏度高、特异性强、检测迅速、操作简便的重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA)。选用常见动物疫病病原验证引物探针的特异性,设计多对引物及探针,筛选出最适反应体系及反应条件,并与实时荧光RT-PCR方法比较。结果显示,本研究建立的RT-RPA方法特异性强,只有A型动物流感病毒呈阳性,其他相关常见病原均为阴性;反应时间短,检测反应时间仅需20 min;灵敏度高,最低可检测到A型动物流感病毒核酸浓度为0.96×10-2g/mL。与实时荧光RT-PCR方法相比,其灵敏度稍低。本研究建立的检测A型动物流感病毒的RT-RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,检测快速,适合现场检测以及在基层实验室推广应用。 展开更多
关键词 A型动物流感病毒 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 等温扩增
禽流感病毒H5亚型RT-exoRPA检测方法的建立 被引量:1
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作者 王潇 曹琛福 +3 位作者 黄超华 林彦星 花群义 贾伟新 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2339-2342,2347共5页
为建立一种特异、灵敏、简便、快速的禽流感病毒H5亚型的检测方法,根据近几年流行的禽流感病毒H5亚型毒株HA基因序列,采用DNAStar生物分析软件进行基因序列比对后,选择相对保守区域,设计多对引物及探针,建立了禽流感病毒H5亚型RT-exoRP... 为建立一种特异、灵敏、简便、快速的禽流感病毒H5亚型的检测方法,根据近几年流行的禽流感病毒H5亚型毒株HA基因序列,采用DNAStar生物分析软件进行基因序列比对后,选择相对保守区域,设计多对引物及探针,建立了禽流感病毒H5亚型RT-exoRPA检测方法,对该方法的反应条件进行优化并检测特异性和灵敏性。结果显示,建立的检测禽流感病毒H5亚型RT-exoRPA方法特异性强,只有禽流感病毒H5亚型呈阳性,其他均为阴性;灵敏性较高,最低可检测到质量浓度为0.89×10^-3 mg/L的禽流感病毒H5亚型核酸,比实时荧光RT-PCR方法灵敏性低10倍;检测快速,检测反应所需时间仅20min,比实时荧光RT-PCR方法缩短近1h。结果表明,所建立的禽流感病毒H5亚型RT-exoRPA检测方法适应于禽流感病毒H5亚型的现场检测,以及基层实验室的推广应用。 展开更多
关键词 禽流感H5亚型 RT-exoRPA 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 等温扩增
伪狂犬病病毒野毒和疫苗毒双重RPA鉴别检测方法的建立和应用 预览 被引量:2
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作者 刘立兵 王建昌 +2 位作者 耿云云 王金凤 袁万哲 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期306-310,共5页
为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒和疫苗毒的快速鉴别检测方法,本研究基于PRV gB和gE基因保守区域设计引物,建立了一种双重重组酶聚合酶扩增方法(RPA)。本研究所建立的双重RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应20min,能够在同一个反应体系中... 为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒和疫苗毒的快速鉴别检测方法,本研究基于PRV gB和gE基因保守区域设计引物,建立了一种双重重组酶聚合酶扩增方法(RPA)。本研究所建立的双重RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应20min,能够在同一个反应体系中实现对PRV野毒和疫苗毒的特异性鉴别检测,而与其它常见的猪病毒没有交叉反应。所建立的双重RPA方法对PRV gB和gE基因的检测限均为10^2拷贝,并且与荧光定量PCR方法检测限一致。通过对4株不同PRV株和37份临床样品的检测,结果表明双重RPA方法能够实现对不同PRV株的检测,对临床样品中PRV gB和gE基因的检出率均为45.9%(17/37),与荧光定量PCR方法检测的符合率为100%。本研究所建立的双重RPA方法反应快速、操作简便、结果可靠,可有效应用于对PRV野毒和疫苗毒的快速鉴别检测。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 等温扩增 聚合酶重组酶扩增 鉴别检测
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食品中蜡样芽胞杆菌实时荧光RPA检测方法的建立与应用 预览 被引量:2
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作者 刘立兵 南汇珠 +3 位作者 孙晓霞 姜彦芬 王金凤 王建昌 《食品科学技术学报》 CAS 北大核心 2018年第1期89-94,共6页
为实现简便快速地检测蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),根据Gen Bank中蜡样芽胞杆菌16 S RNA序列设计特异性引物和exo探针,建立了一种实时荧光重组酶聚合酶扩增方法,在39℃恒温下仅需20 min即可完成检测。该方法特异性扩增蜡样芽胞杆菌... 为实现简便快速地检测蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),根据Gen Bank中蜡样芽胞杆菌16 S RNA序列设计特异性引物和exo探针,建立了一种实时荧光重组酶聚合酶扩增方法,在39℃恒温下仅需20 min即可完成检测。该方法特异性扩增蜡样芽胞杆菌16 S RNA基因片段,对其他芽胞杆菌和非芽胞杆菌无扩增;以蜡样芽胞杆菌基因组DNA作为模板,该方法的检测灵敏度为1.0×10^-3ng/μL,同已发表的real-time PCR方法一致。人工污染实验表明,当大米饭中蜡样芽胞杆菌污染量≥1.5×10^4CFU/g时,即可通过real-time RPA方法检出,所需时间仅为6-13min;而当污染量≥1.5×10^5CFU/g时,才能通过real-time PCR方法检出,所需时间至少为30 min(Ct值为20-31)。 展开更多
关键词 蜡样芽胞杆菌 等温扩增 实时荧光RPA 检测方法
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MRSA的分子生物学检测方法研究进展 预览 被引量:1
14
作者 谢跃 魏莲花 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第7期867-870,共4页
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是引起院内感染和社区感染的重要病原菌之一。由于MRSA感染的治疗选择有限,且传播速度较快,暴发流行的概率较高,现已成为一个全球性的难题,因此,使临床医生在第一时间获得MRSA感染的准确信息,对疾... 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是引起院内感染和社区感染的重要病原菌之一。由于MRSA感染的治疗选择有限,且传播速度较快,暴发流行的概率较高,现已成为一个全球性的难题,因此,使临床医生在第一时间获得MRSA感染的准确信息,对疾病的及时治疗有着重要意义。目前,关于MRSA的分子生物学检测方法的研究热点主要集中在高效可靠、成本低廉、简单易行3个方面,本文就近年来MRSA的分子生物学检测方法的研究现状及发展趋势作一综述。 展开更多
关键词 MRSA 分子生物学 核酸杂交 PCR 等温扩增
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发卡型万能传导在基于核酸分子线路的基因诊断中的应用和性能优化 预览
15
作者 唐艺丹 刘一辰 +2 位作者 吕佰阳 郭路路 李冰凌 《分析化学》 CSCD 北大核心 2018年第6期865-874,共10页
核酸等温扩增技术作为核酸体外扩增技术,其反应过程始终维持在恒定温度下。与聚合酶链反应相比,核酸等温扩增反应具有优异的便携型,因而被视为最有望实现基因快检甚至即时快检的体外基因扩增方法。然而,由于反应过程中假阳性扩增频发、... 核酸等温扩增技术作为核酸体外扩增技术,其反应过程始终维持在恒定温度下。与聚合酶链反应相比,核酸等温扩增反应具有优异的便携型,因而被视为最有望实现基因快检甚至即时快检的体外基因扩增方法。然而,由于反应过程中假阳性扩增频发、反应后对产物的检测方法缺乏特异性和灵敏度等缺点,限制了其在实际分析检测中的应用。通过构建发卡型结构万能中转探针,成功地将恒温扩增产物转到一套性能良好的已知核酸分子线路上;借助核酸分子线路的百倍放大性能和序列特异性,实现对上游基因序列信息的精准识别和放大信号输出。针对不同的待测序列,仅需改变发卡型中转探针的序列,即可实现对不同序列目标物的检测。基于中转探针的重要性,本研究对中转探针的设计原理和方法进行了重点阐述,提出并验证了一套行之有效的普适性设计规律,确保中转探针良好的中转效率(信噪比)。利用这一规律获得的中转探针,与核酸分子线路偶联,可成功为低至近单分子(20个拷贝)的模型基因提供显著荧光和电化学信号输出。 展开更多
关键词 等温扩增 万能中转 发卡型中转探针 核酸分子线路 催化发卡型结构自组装 荧光 电化学
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基于反转录-环介导等温扩增技术检测沙门氏菌 被引量:1
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作者 梁玉林 刘秀 +2 位作者 周振森 周鹏飞 尹建军 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2293-2300,共8页
【背景】沙门氏菌是世界上最常见的食源性致病菌之一,全球每年沙门氏菌中毒事件居细菌性中毒事件首位。【目的】建立反转录-环介导等温扩增(Reversetranscriptaseloop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术特异性检测沙门... 【背景】沙门氏菌是世界上最常见的食源性致病菌之一,全球每年沙门氏菌中毒事件居细菌性中毒事件首位。【目的】建立反转录-环介导等温扩增(Reversetranscriptaseloop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术特异性检测沙门氏菌。【方法】针对沙门氏菌特异保守invA基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测沙门氏菌的实时荧光RT-LAMP方法。利用沙门氏菌及其人工污染脱脂乳样品,研究了方法的特异性和灵敏性,并与RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain)方法的灵敏度进行比较。【结果】等温65°C条件下30min内可完成RT-LAMP反应。利用该方法检测5株沙门氏菌均为阳性,其余21种检测菌株为阴性。在人工污染脱脂乳样品的检测中,灵敏度达到60 CFU/g,比RT-PCR方法高100倍。【结论】建立的实时荧光RT-LAMP方法将为沙门氏菌现场快速检测提供有力手段。 展开更多
关键词 反转录-环介导 等温扩增 沙门氏菌 检测 脱脂乳
基于双重脱氧核酶的超灵敏比色法检测铜离子 预览
17
作者 梅晓宏 田晶晶 +3 位作者 张洋子 杜再慧 张媛 许文涛 《分析化学》 CSCD 北大核心 2018年第12期1945-1952,共8页
铜是生命的必需元素,是某些活性蛋白的辅基,而过量的铜具有一定毒性,可导致肝炎、胃肠炎、肺炎等病症。因此对Cu2+的灵敏定量检测十分必要。本研究建立了一种基于双重脱氧核酶的比色生物传感器,用于灵敏、特异性定量检测Cu2+。此生物传... 铜是生命的必需元素,是某些活性蛋白的辅基,而过量的铜具有一定毒性,可导致肝炎、胃肠炎、肺炎等病症。因此对Cu2+的灵敏定量检测十分必要。本研究建立了一种基于双重脱氧核酶的比色生物传感器,用于灵敏、特异性定量检测Cu2+。此生物传感器包含两种具有不同功能的脱氧核酶:Cu2+依赖性的切割型脱氧核酶与G-四链体脱氧核酶。当待测物中存在Cu2+时,Cu2+依赖性的切割型脱氧核酶被切割,用于特异性信号识别;经末端转移酶诱导形成G-四链体脱氧核酶,用于“一对多”的信号放大与可视化信号输出。在“信号识别”与“信号输出”两步反应之间,利用指数扩增反应(Exponential amplification reaction,EXPAR),放大“信号识别”的反应信号。在最优条件下,可实现Cu2+的灵敏的选择性检测:使用全波长酶标仪测定,比色法检出限为7.6pmol/L;裸眼检出限为10pmol/L。将此传感器用于自来水中Cu2+的测定,裸眼检测范围为10~200pmol/L,比色法加标回收率为96.3%~98.4%。此检测平台为特异性检测自来水中的Cu2+提供了超灵敏、可视化的检测工具,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 铜离子 脱氧核酶 末端脱氧核苷酸转移酶 等温扩增
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利用重组酶聚合酶扩增技术快速鉴定肉及肉制品中的猪源性成分 被引量:3
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作者 吴昊 谢文佳 +1 位作者 王艳丽 郭良起 《食品科技》 北大核心 2017年第10期318-322,共5页
根据家猪线粒体细胞色素b的核苷酸序列设计和筛选实时荧光定量重组酶聚合酶扩增(Real time recombinase polymerase amplification,real-time RPA)反应所需的引物和探针,优化反应参数(Mg~(2+)和引物浓度),建立了一套利用real-tim... 根据家猪线粒体细胞色素b的核苷酸序列设计和筛选实时荧光定量重组酶聚合酶扩增(Real time recombinase polymerase amplification,real-time RPA)反应所需的引物和探针,优化反应参数(Mg~(2+)和引物浓度),建立了一套利用real-time RPA技术进行肉及肉制品中猪源性成分的鉴定方法。应用此方法可以检测出肉及肉制品中低至0.2%的猪源性成分,且能够在恒温的条件下(40℃)15min中内完成反应,克服了传统聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术需要精密温度循环控制设备的局限性,是一种新型、简单、高效的检测方法,对实现快捷便携式的猪源性成分鉴定检测具有重要的意义。 展开更多
关键词 生物化学与分子生物学 重组酶聚合酶扩增 等温扩增 猪源性成分鉴定 细胞色素B
猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 刘立兵 王建昌 +2 位作者 经美 王金凤 袁万哲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第11期3320-3326,共7页
试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcineparvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinasepolymeraseamplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1... 试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcineparvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinasepolymeraseamplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPVVP2作为模板,RPA的检测限为102拷贝,同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致,比普通PCR方法高100倍;RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%,略低于实时荧光定量PCR的检出率(86.9%),明显高于普通PCR的阳性检出率(66.7%)。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速,结果确实可靠,适用于PPV的快速检测。 展开更多
关键词 猪细小病毒(PPV) 等温扩增 聚合酶重组酶扩增 快速检测
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猪流行性腹泻病毒实时荧光RPA等温检测方法的建立 预览 被引量:3
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作者 吕继洲 范燕茹 +2 位作者 冯春燕 袁向芬 吴绍强 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第12期3434-3439,共6页
为建立一种简单、快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)分子检测方法,本研究基于PEDV病毒M基因保守序列,设计一系列扩增引物及其荧光探针,以包含PEDV病毒M基因片段的pUC57质粒为模板,同时以包含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病... 为建立一种简单、快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)分子检测方法,本研究基于PEDV病毒M基因保守序列,设计一系列扩增引物及其荧光探针,以包含PEDV病毒M基因片段的pUC57质粒为模板,同时以包含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)及古典猪瘟病毒(CSFV)等病毒膜蛋白或核衣壳蛋白基因序列的质粒作为对照,建立了一种PEDV实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)等温检测方法,测定了方法的特异性与敏感性。结果表明,该实时荧光RPA方法可在39 ℃恒温反应20 min特异性扩增PEDV病毒M基因,与TGEV、PRRSV等对照病毒基因无交叉反应,其检测限为10拷贝/μL。应用该实时荧光RPA方法可有效检测出血浆及血浆蛋白粉中的PEDV核酸。本研究建立的实时荧光RPA检测方法简单、快速、灵敏度高,可为PEDV的检测防控提供一种新的、可靠的技术支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分子检测 重组酶聚合酶扩增(RPA) 等温扩增
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