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离心速率对大鼠心肌细胞线粒体提取质量的影响 预览
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作者 何玛莉 李心雨 +6 位作者 于睿 皮佳仪 孙雅涵 徐森 韩学超 田炜 徐菁蔓 《华北理工大学学报:医学版》 2019年第2期85-90,共6页
①目的探讨不同提取方案对心肌细胞线粒体质量的影响。②方法在体外用Langendorff法灌注雄性Wistar大鼠心脏,取左心室组织并分离线粒体;Western blot法检测确定分离线粒体的纯度,透射电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)检测... ①目的探讨不同提取方案对心肌细胞线粒体质量的影响。②方法在体外用Langendorff法灌注雄性Wistar大鼠心脏,取左心室组织并分离线粒体;Western blot法检测确定分离线粒体的纯度,透射电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)检测分离线粒体的结构形态,线粒体呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR)测定分离线粒体的功能。③结果当分离转速为3500g时,与12000g相比,分离得到的线粒体Tubulin蛋白和COXⅣ蛋白表达均较低,表明低转速能够提高分离线粒体的纯度。与此结果一致,电镜结果显示与3500g组相比,12000g组可见较多微丝微管结构及线粒体内外膜分离。与12000g组相比,3500g组Ⅲ态呼吸及RCR值明显增高,表明低转速分离获得的线粒体呼吸功能增强。④结论低转速不仅可以提高分离线粒体的纯度,而且有利于维持分离线粒体的正常结构和功能。 展开更多
关键词 线粒体分离 线粒体纯度 线粒体功能
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酶检测法在线粒体功能及混杂程度评价中的应用 预览 被引量:2
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作者 季静娟 刘雨生 童先宏 《临床输血与检验》 2004年第3期 167-168,共2页
目的建立一种检测制备线粒体的生物学功能及溶酶体混杂程度的方法.方法采用差速离心法分离小鼠肝脏线粒体,酶活力组以线粒体悬液与组织匀浆中琥珀酸脱氢酶的总活力之比作为线粒体的生物学功能保留百分比,以酸性磷酸酶总活力之比作为溶... 目的建立一种检测制备线粒体的生物学功能及溶酶体混杂程度的方法.方法采用差速离心法分离小鼠肝脏线粒体,酶活力组以线粒体悬液与组织匀浆中琥珀酸脱氢酶的总活力之比作为线粒体的生物学功能保留百分比,以酸性磷酸酶总活力之比作为溶酶体混杂百分比;酶活性组以酶的比活性之比计算上述两种百分比.结果两种方法检测结果的差异无显著性(P>0.05).结论以制备的线粒体悬液与组织匀浆中标志酶的总活力之比值来评价线粒体生物学功能保留情况和溶酶体混杂情况的方法较简单.与常规方法获得结果的准确性一致,可用于线粒体移植. 展开更多
关键词 线粒体分离 生物学功能 污染 线粒体移植
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沉默信息调节因子1在脂多糖诱导胰岛素瘤细胞-1线粒体损伤中的作用
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作者 莫兴兴 王晓 +1 位作者 葛勤敏 边帆 《中华急诊医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期1224-1231,共8页
目的 探讨沉默信息调节因子(silent mating type information regulation 2 homolog1,SIRT1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导胰岛素瘤细胞-1(insulinoma cell lines-1, INS-1)细胞线粒体损伤中的作用。方法 将对数生长期... 目的 探讨沉默信息调节因子(silent mating type information regulation 2 homolog1,SIRT1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导胰岛素瘤细胞-1(insulinoma cell lines-1, INS-1)细胞线粒体损伤中的作用。方法 将对数生长期的INS-1 细胞分为5 组:正常对照组、1 mg/L LPS组(LPS 干预细胞24 h)、白藜芦醇(resveratrol,RSV)+LPS 组(10 μmol/L RSV 预处理1 h 后,加入1 mg/L LPS 干预24 h)、EX527+LPS 组(20 μmol/L EX527 预处理1 h 后,加入1 mg/L LPS干预24 h)、EX527+RSV+LPS 组(20 μmol/L EX527 预处理1 h 后,加入10 μmol/L 的RSV 和1mg/L LPS 干预24 h)。检测细胞活力和ATP 生成;提取INS-1 细胞总蛋白、胞质蛋白和线粒体蛋白,Western-blot 法检测SIRT1、TLR4、乙酰化FoxO1、细胞色素C(cytochrome C,CytC)、线粒体融合蛋白1(mitofusion1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusion2,Mfn2)、线粒体分离蛋白1(fission1,Fis1)蛋白的表达; Real-time PCR 方法检测SIRT1、FoxO1、Mfn1、Mfn2、Fis1 基因水平的变化。多组间比较采用单因素方差分析,用LSD-t 法进行组间两两比较。结果 1 mg/L LPS 作用于INS-1 细胞24 h 后,细胞活力降低(n=4,F=13.98,P〈0.01),ATP 生成减少(n=4,F=27.92,P〈0.05),RSV 预处理后促进ATP 生成(P〈0.01),但不能逆转EX527 预处理后ATP 生成的降低(P〉0.05)。RSV 可以促进SIRT1、Mfn1、Mfn2 蛋白表达和基因上调,降低TLR4 和Fis1 蛋白表达,下调其基因水平,减少CytC 在细胞质中的释放(P〈0.01),而各组间FoxO1 蛋白表达差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 白藜芦醇可能通过改变SIRT1 的活性,调控FoxO1 的乙酰化,部分参与调节LPS 诱导的INS-1 细胞线粒体的损伤。 展开更多
关键词 沉默信息调节因子 乙酰化叉头蛋白1 TOLL样受体4 氧化应激 线粒体融合与分离 胰岛素瘤细胞-1
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