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Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响 预览
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作者 王超 刘玉 +3 位作者 安然 赵京山 孙佳欢 李爱英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期376-381,共6页
目的观察Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响。方法组织贴块法培养大鼠VSMC细胞,采用TNF-α诱导其增殖,加入不同浓度的Roscovitine预处理15 h,将细胞分为:对照组、TNF-α组、Roscovitine 5、10、15... 目的观察Roscovitine对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响。方法组织贴块法培养大鼠VSMC细胞,采用TNF-α诱导其增殖,加入不同浓度的Roscovitine预处理15 h,将细胞分为:对照组、TNF-α组、Roscovitine 5、10、15、30μmol·L-1组。MTT比色法检测细胞增殖活性;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA);流式细胞仪检测细胞周期;荧光定量RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白(Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4、CDK5)、细胞周期抑制蛋白(p53、p21、p27)的表达。结果Roscovitine能抑制VSMC增殖;抑制细胞周期从G 0/G 1期向S期转化。与TNF-α组比较,Roscovitine 5、10、15、30μmol·L^-1组能降低细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E蛋白表达,降低细胞周期蛋白依赖激酶CDK4、CDK5蛋白表达,升高细胞周期抑制蛋白p53、p21、p27蛋白表达(P<0.05)。结论Roscovitine可抑制大鼠VSMC细胞周期进程及增殖活性。 展开更多
关键词 ROSCOVITINE 血管平滑肌细胞 增殖 细胞周期 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖性激酶 细胞周期抑制蛋白
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基于3D微流控芯片分析鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa的药理作用
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作者 王妮佳 王嘉仡 +3 位作者 孟宪生 包永睿 王帅 李天骄 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期103-108,共6页
目的:研究鸡血藤总鞣质的化学成分,并分析该有效部位对宫颈癌细胞HeLa的药效与作用机制,为鸡血藤抗宫颈癌提供实验依据。方法:运用UPLC-Q-TOF/MS对鸡血藤鞣质类化学成分进行定性分析。将不同质量浓度的鸡血藤总鞣质作用于宫颈癌细胞HeLa... 目的:研究鸡血藤总鞣质的化学成分,并分析该有效部位对宫颈癌细胞HeLa的药效与作用机制,为鸡血藤抗宫颈癌提供实验依据。方法:运用UPLC-Q-TOF/MS对鸡血藤鞣质类化学成分进行定性分析。将不同质量浓度的鸡血藤总鞣质作用于宫颈癌细胞HeLa,通过3维(3D)微流控芯片筛选合适的给药浓度及时间。运用流式细胞仪测定鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa周期与凋亡的影响,分别应用Flow Jo v10. 0. 7及ModFit LT 3. 2软件进行分析。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)与半胱天冬酶-3(Caspase-3)因子的含量变化。结果:鉴定并推断了鸡血藤总鞣质中15种成分。最终确定鸡血藤总鞣质低、中、高给药质量浓度分别为0. 5,1. 0,2. 0 g·L^-1,36 h为最佳给药时间。经鸡血藤总鞣质作用后宫颈癌细胞HeLa早凋与晚凋比例明显增加,宫颈癌细胞HeLa DNA合成前期(G0/G1期)明显增加,DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2/M期)减小。经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中VEGF-A因子显著降低,Caspase-3因子显著增加。结论:鸡血藤中含有丰富的鞣质类成分,此类成分对宫颈癌细胞HeLa有明显的抑制其增殖并促进其凋亡的作用,为该有效部位的后续研究与开发提供了实验依据。 展开更多
关键词 鸡血藤 总鞣质 3D微流控芯片 宫颈癌细胞HELA 细胞凋亡 细胞周期 酶联免疫吸附测定法
阻断STAT3信号通路对恶性淋巴瘤细胞凋亡的影响 预览
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作者 姚金晓 杨如玉 +2 位作者 马海龙 李超 魏旭东 《癌症进展》 2019年第2期227-230,共4页
目的探讨阻断信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路对恶性淋巴瘤细胞凋亡的影响。方法用0、200、400、800、1600 nmol/L的STAT3信号通路特异性阻断剂JSI-124作用于恶性淋巴瘤细胞株Raji,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖水平,计算半数抑制... 目的探讨阻断信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路对恶性淋巴瘤细胞凋亡的影响。方法用0、200、400、800、1600 nmol/L的STAT3信号通路特异性阻断剂JSI-124作用于恶性淋巴瘤细胞株Raji,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖水平,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的JSI-124作用于Raji细胞,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、STAT3、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase 3)的蛋白相对表达水平。结果随着JSI-124作用浓度的升高,细胞存活率逐渐下降。计算半数抑制浓度为(615.62±52.98)nmol/L,故后续选用600 nm/L的JSI-124作用于恶性淋巴瘤细胞。600 nm/L作用组细胞凋亡率明显高于0 nm/L作用组(P﹤0.01)。600 nm/L作用组G0/G1期细胞所占比例明显低于0 nm/L作用组,G2/M期细胞所占比例明显高于0 nm/L作用组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);两组S期细胞所占比例比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。600 nm/L作用组p-STAT3、cyclin D1蛋白相对表达水平明显低于0 nm/L作用组,cleaved caspase 3蛋白相对表达水平明显高于0 nm/L作用组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论阻断STAT3信号通路可促进恶性淋巴瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期。 展开更多
关键词 淋巴瘤 凋亡 STAT3 细胞周期 增殖
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保妇康栓对宫颈癌细胞SiHa体外增殖和凋亡的影响 预览
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作者 李倩珺 胡艺琳 +3 位作者 梁琰 王婷 吴晓宾 晁艳 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第1期16-18,共3页
目的研究中药保妇康栓含药血清在细胞水平对宫颈癌SiHa细胞体外增殖及凋亡的影响,探讨保妇康栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制。方法中药保妇康栓含药血清培养液作用于SiHa细胞24、48、72h,并设立阴性及阳性(西药含药血清)对照组... 目的研究中药保妇康栓含药血清在细胞水平对宫颈癌SiHa细胞体外增殖及凋亡的影响,探讨保妇康栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制。方法中药保妇康栓含药血清培养液作用于SiHa细胞24、48、72h,并设立阴性及阳性(西药含药血清)对照组,采用CCK8及流式细胞分析技术进行细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡检测。结果保妇康栓对宫颈癌SiHa细胞增殖具有抑制作用,24h抑制作用最强。与阴性对照组比较,保妇康栓组SiHa细胞中G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论保妇康栓的作用可能是通过阻断细胞从G0/G1期向S期分化,从而抑制宫颈癌SiHa细胞增殖并诱导凋亡来抑制肿瘤生长。 展开更多
关键词 莪术 冰片 宫颈肿瘤 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡
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Ras鸟嘌呤核苷酸交换因子1对人结直肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响
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作者 何新 胡晓梅 +4 位作者 黄文峰 李元成 范琳 张自翔 孟凡 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期30-34,共5页
目的观察Ras鸟嘌呤核苷酸交换因子1(RasGRF1)在结直肠癌细胞的表达及对人肠癌细胞株HCT116增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用RT-PCR方法检测结直肠癌细胞中RasGRF1的表达;MTT法检测RasGRF1对人结直肠癌细胞增殖的影响;Annexin V-FIT... 目的观察Ras鸟嘌呤核苷酸交换因子1(RasGRF1)在结直肠癌细胞的表达及对人肠癌细胞株HCT116增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用RT-PCR方法检测结直肠癌细胞中RasGRF1的表达;MTT法检测RasGRF1对人结直肠癌细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果RasGRF1在人结肠癌细胞HCT116中过表达;siRNA干扰RasGRF1表达使人结肠癌细胞HCT116的增殖率降低;siRNA干扰RasGRF1表达使人结肠癌细胞HCT116的凋亡率增加并使细胞周期停留在G1期。结论在人结直肠癌细胞中RasGRF1是高表达的,siRNA干扰RasGRF1的表达可抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖,凋亡率增加并使HCT116的细胞周期停留在G1期。 展开更多
关键词 RasGRF1 结直肠癌 凋亡 细胞周期
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白龙灵沙汤对小鼠Lewis肺癌的生长抑制作用研究 预览
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作者 胡志萍 甘宁 +3 位作者 陈焕朝 李泽浩 江建平 付皓云 《现代中西医结合杂志》 CAS 2019年第6期585-588,共4页
目的研究白龙灵沙汤对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用。方法将40只荷Lewis肺癌C57BL/6雄性小鼠随机分为模型组及白龙灵沙汤高、中、低剂量组,每组10只。取传代好的带瘤小鼠的实体瘤块,研磨后右腋下皮下接种。接种后次日,白龙灵沙汤高、中... 目的研究白龙灵沙汤对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用。方法将40只荷Lewis肺癌C57BL/6雄性小鼠随机分为模型组及白龙灵沙汤高、中、低剂量组,每组10只。取传代好的带瘤小鼠的实体瘤块,研磨后右腋下皮下接种。接种后次日,白龙灵沙汤高、中、低剂量组分别给予33.33g/(kg·d)、16.67g/(kg·d)、8.33g/(kg·d)白龙灵沙汤灌胃,模型组给予等体积生理盐水灌胃,均1次/d,连续28d。期间观察各组小鼠的一般状况,末次给药24h后取瘤块称质量,计算肿瘤抑制率,采用流式细胞仪检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率,采用免疫组化方法检测肿瘤组织中微血管密度。结果白龙灵沙汤高剂量组小鼠的一般状况明显好于模型组。白龙灵沙汤各剂量组小鼠瘤质量均明显低于模型组(P均<0.05),且白龙灵沙汤高、中剂量组均明显低于白龙灵沙汤低剂量组(P均<0.05);白龙灵沙汤高、中剂量组抑瘤率均明显高于白龙灵沙汤低剂量组(P均<0.05);白龙灵沙汤高、中剂量组G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均明显高于模型组和白龙灵沙汤低剂量组(P均<0.05),S期细胞比例明显低于模型组和白龙灵沙汤低剂量组(P均<0.05);白龙灵沙汤各剂量组小鼠肿瘤组织中微血管密度均明显低于模型组(P均<0.05),且白龙灵沙汤高、中剂量组均明显低于白龙灵沙汤低剂量组(P均<0.05)。结论白龙灵沙汤能通过抑制细胞周期促进细胞凋亡,从而降低小鼠Lewis肺癌组织中微血管密度,具有明显抑瘤作用。 展开更多
关键词 白龙灵沙汤 LEWIS肺癌 细胞凋亡 细胞周期 微血管密度
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MCUR1在多发性骨髓瘤中的作用 预览
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作者 牟佼 戴进前 +2 位作者 雷小茹 宋艳萍 徐莉 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第1期47-52,共6页
目的探讨线粒体钙单向转运体调节分子1(MCUR1)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达变化,观察其对MM细胞周期、凋亡的作用,初步分析其内在分子机制。方法设瞬时转染MCUR1干涉片段1和2的人MM细胞系RPMI8226细胞作为实验组(命名为siMCUR1-1和si... 目的探讨线粒体钙单向转运体调节分子1(MCUR1)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达变化,观察其对MM细胞周期、凋亡的作用,初步分析其内在分子机制。方法设瞬时转染MCUR1干涉片段1和2的人MM细胞系RPMI8226细胞作为实验组(命名为siMCUR1-1和siMCUR1-2细胞),阴性干涉片段转染的RPMI8226细胞(命名为siCtrl细胞)作为对照组;实时定量PCR测定MCUR1在MM患者及正常对照者骨髓单个核细胞中的表达水平;实时定量PCR和Western blot检测MCUR1沉默效果;用CCK-8法和流式细胞计量术分别测定沉默MCUR1后细胞增殖、细胞周期和凋亡,Western blot检测MCUR1沉默后p53及其下游分子表达变化。结果与对照者相比,MCUR1在MM患者中的表达显著升高(P<0.05);MM细胞系RPMI8226中干扰MCUR1后,与对照组相比,细胞增殖显著减慢(P<0.05),G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,细胞凋亡比例增加;与对照组相比,干扰MCUR1组细胞内p53、BAX蛋白表达增加,BCL2、cyclinD1和cyclinE蛋白表达减少。结论MCUR1在MM患者中表达上调,MCUR1通过抑制p53通路进而促进MM细胞增殖。 展开更多
关键词 线粒体钙单向转运体调节分子1 细胞周期 细胞凋亡 P53 多发性骨髓瘤
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芦荟大黄素对培养人成纤维细胞Smad 2与I型胶原表达及细胞周期的影响
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作者 杨成华 程基焱 《医学理论与实践》 2019年第2期157-159,共3页
目的:探讨中药大黄提取物芦荟大黄素对培养人成纤维细胞Smad 2、Ⅰ型胶原蛋白表达及细胞周期的影响,分析芦荟大黄素对成纤维细胞的调控作用及作用机制。方法:体外培养人成纤维细胞,用芦荟大黄素进行干扰,分为对照组(CG)、低剂量组(50-TG... 目的:探讨中药大黄提取物芦荟大黄素对培养人成纤维细胞Smad 2、Ⅰ型胶原蛋白表达及细胞周期的影响,分析芦荟大黄素对成纤维细胞的调控作用及作用机制。方法:体外培养人成纤维细胞,用芦荟大黄素进行干扰,分为对照组(CG)、低剂量组(50-TG)、中剂量组(100-TG)、高剂量组(500-TG),观察细胞生长特征,并用量子点免疫荧光技术检测Smad 2、Ⅰ型胶原的表达,流式细胞仪检测的细胞周期。结果:(1)干扰48h后,实验组Smad 2表达的荧光强度,与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);(2)0x09实验组Ⅰ型胶原表达,与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);(3)流式细胞仪检测细胞周期结果显示,对照组、实验组G1期细胞所占比例比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:芦荟大黄素对培养成纤维细胞的Smad 2、Ⅰ型胶原蛋白表达具有调控作用,并能影响其细胞周期和细胞的活性,可能是含有芦荟大黄素的中药如芦荟、大黄等调控成纤维细胞功能的主要机制之一。 展开更多
关键词 芦荟大黄素 成纤维细胞 SMAD 2 Ⅰ型胶原 细胞周期
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脂联素干预高糖介导人牙周膜细胞凋亡的相关机制 预览
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作者 林仰东 殷恺 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第7期1097-1102,共6页
背景:脂联素是最近发现的一种由脂肪细胞分泌的特异蛋白质,因其在调节糖脂代谢和抗氧化应激等方面的功效,而被认为是治疗糖尿病及其并发症的潜在物质。目的:探讨脂联素干预对高糖介导人牙周膜细胞凋亡及其经典Wnt/β-catenin信号转导通... 背景:脂联素是最近发现的一种由脂肪细胞分泌的特异蛋白质,因其在调节糖脂代谢和抗氧化应激等方面的功效,而被认为是治疗糖尿病及其并发症的潜在物质。目的:探讨脂联素干预对高糖介导人牙周膜细胞凋亡及其经典Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。方法:体外复苏培养人牙周膜细胞。将所有细胞随机平均分为4组:对照组(正常RPMI1640完全培养基,葡萄糖浓度为11mmol/L),高糖组(葡萄糖浓度40mmol/L的RPMI1640培养基),甘露醇组(RPMI1640培养基+甘露醇19.5mmol/L)和脂联素组(葡萄糖浓度40mmol/L的RPMI1640培养基+20mg/L脂联素)。在培养24-96h后的不同时间点,采用MTT法检测各组细胞的细胞存活情况,采用流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况的变化。通过RT-PCR和Westernblot检测Wnt1、Wnt10b及β-catenin的表达水平。结果与结论:①高糖在体外对人牙周膜细胞有显著的抑制增殖和促进凋亡作用,但对细胞周期的影响不明显;②人牙周膜细胞经体外高糖培养基培养24-96h后,其抑制增殖作用呈时间依赖性;而脂联素则显著提高了高糖干预下细胞的增殖并抑制了细胞凋亡(P<0.05);③RT-PCR和Westernblot结果显示,与对照组及甘露醇组相比,高糖组Wnt1、Wnt10b及β-cateninmRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),脂联素干预后Wnt1、Wnt10b及β-cateninmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05);④结果提示,高糖条件可以促进人牙周膜细胞凋亡,抑制细胞增殖,对细胞周期无显著影响。而脂联素可以抑制上述作用,可能通过上调Wnt1和Wnt10b表达继而激活Wnt/β-catenin信号转导通路发挥作用。 展开更多
关键词 脂联素 高糖环境 人牙周膜细胞 WNT/Β-CATENIN信号转导通路 细胞凋亡 细胞增殖 细胞周期 牙周炎 牙周膜 Wnt1蛋白质 组织工程
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泛素结合酶UBE2T在结直肠癌中的表达及其生物学作用
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作者 潘烽平 徐言 +2 位作者 徐龙生 马兴杰 陈一鹏 《中华全科医学》 2019年第2期306-309,共4页
目的探索泛素结合酶UBE2T在结直肠癌的表达及其生物学作用。方法运用免疫组化法检测78对结直肠癌和对应癌旁正常组织中UBE2T的蛋白表达水平。脂质体转染法将UBE2T-siRNA及对照NC-siRNA转染结直肠癌细胞SW480后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8... 目的探索泛素结合酶UBE2T在结直肠癌的表达及其生物学作用。方法运用免疫组化法检测78对结直肠癌和对应癌旁正常组织中UBE2T的蛋白表达水平。脂质体转染法将UBE2T-siRNA及对照NC-siRNA转染结直肠癌细胞SW480后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)及平板克隆实验分析增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期情况;Western blotting检测细胞中UBE2T、cyclin D1、cyclin E等蛋白表达情况。结果与正常结直肠组织相比,结直肠癌组织中UBE2T表达水平增高(P<0.001)。癌组织中UBE2T异常高表达与不良病理指标相关:肿瘤大小(P=0.014)、组织分化程度(P=0.005)、浸润深度(P=0.033)和TNM分期(P=0.014)。CCK-8增殖实验和平板克隆形成实验都提示沉默UBE2T表达能显著抑制结直肠癌细胞的增殖。沉默UBE2T抑制周期蛋白cyclin D1和cyclin E的表达,促进结直肠癌细胞发生G1/S期细胞周期阻滞。结论 UBE2T在结直肠癌组织中异常高表达,并与不良病理指标相关。沉默UBE2T通过促进G1/S期细胞周期阻滞抑制结直肠癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 UBE2T 结直肠癌 增殖 细胞周期 CYCLIN D1 CYCLIN E
肠道病毒A71型致人扁桃体上皮细胞系UT-SCC-60B凋亡和S期阻滞的研究
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作者 谢广成 苏萌 +6 位作者 于莉 李丹 潘靖丹 王宏 章青 杜娈英 段招军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期77-84,共8页
肠道病毒A71型(Enterovirus A71,EV-A71)是手足口病的重要病原体,为研究EV-A71感染人扁桃体上皮细胞后对细胞凋亡和细胞周期的影响,确定ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific protei... 肠道病毒A71型(Enterovirus A71,EV-A71)是手足口病的重要病原体,为研究EV-A71感染人扁桃体上皮细胞后对细胞凋亡和细胞周期的影响,确定ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)的作用,本文以人扁桃体上皮细胞系UT-SCC-60B为细胞模型,CCK-8试剂盒检测EV-A71对UT-SCC-60B的抑制率、流式细胞仪检测EV-A71感染组和抑制剂处理组的凋亡和细胞周期、Caspase活力检测试剂盒测定Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活力。EV-A71以感染剂量和感染时间依赖方式抑制UT-SCC-60B增殖;EV-A71感染致UT-SCC-60B发生细胞凋亡,抑制ERK1/2、JNK1/2和PI3K/Akt能够降低UT-SCC-60B细胞凋亡比例;EV-A71感染UT-SCC-60B后发生S期阻滞,抑制ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和Caspase阻止UT-SCC-60B发生S期阻滞;EV-A71感染UT-SCC-60B能够活化Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9且ERK1/2、JNK1/2和PI3K/Akt调控Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活力。因此,EV-A71能够导致人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60B发生凋亡和S期阻滞,并且ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和Caspase参与凋亡和S期阻滞的调控。 展开更多
关键词 肠道病毒A71型(EV-A71) UT-SCC-60B 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase) 细胞凋亡 细胞周期
SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响 预览
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作者 陈洋 单雪松 +2 位作者 赵志辉 刘红羽 吕文发 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第3期1-6,13共7页
【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2~6mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了... 【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2~6mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体(shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306)及1条阴性对照载体(shRNA-NC),利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染sh-RNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48h shRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组(P<0.05),故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染后24~48h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。 展开更多
关键词 SIRT1基因 牛卵泡颗粒细胞 细胞增殖 细胞周期
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miR-195靶向RAF1调控口腔鳞状细胞癌的生长、凋亡及迁移侵袭 预览
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作者 郭芳 黄硕 +2 位作者 刘宁 朱勇 刘昌奎 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第2期163-168,共6页
目的探讨miR-195与RAF1的靶向关系及二者对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长、凋亡及迁移侵袭的调控。方法构建miR-195过表达载体并合成si-RAF1,转染入SCC-4细胞,以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-195及si-RAF1在SCC-4细胞中的转染效率。... 目的探讨miR-195与RAF1的靶向关系及二者对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长、凋亡及迁移侵袭的调控。方法构建miR-195过表达载体并合成si-RAF1,转染入SCC-4细胞,以荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-195及si-RAF1在SCC-4细胞中的转染效率。MTT法、克隆形成及细胞周期实验评价miR-195对SCC-4细胞生长的影响,流式细胞仪检测miR-195对SCC-4细胞凋亡的影响;并通过双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR及Western blot检测miR-195与RAF1的靶向关系。结果成功构建miR-195真核表达载体并合成si-RAF1,qRT-PCR显示miR-195真核表达载体及si-RAF1在SCC-4细胞中均具有较高的转染效率(P<0.01)。miR-195的过表达能够显著抑制SCC-4细胞的增殖活性及克隆形成,诱导细胞周期G1/S的阻滞,并促进细胞凋亡的发生;同时双荧光素酶报告基因分析表明,miR-195过表达能够显著抑制RAF1野生型报告载体荧光活性;Western blot和qRT-PCR进一步证实了miR-195能够抑制RAF1的mRNA和蛋白的表达。结论miR-195可能通过直接靶向RAF1来抑制OSCC细胞的生长及迁移侵袭,诱导细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞 miR-195 RAF1 细胞增殖 凋亡 细胞周期
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YC-1增强顺铂对卵巢癌A2780s细胞的增殖抑制和促凋亡作用
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作者 周筠 洪莉 +1 位作者 黄金玲 洪莎莎 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期137-139,共3页
目的研究转录因子缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人卵巢癌组织中的表达水平,HIF-1α抑制剂3-(5-羟甲基-2-呋喃基)-1-苯甲基吲唑(YC-1)对人卵巢癌细胞A2780s的细胞凋亡及细胞周期的影响,及其与顺铂(CDDP)抗肿瘤治疗的协同作用。方法下载并... 目的研究转录因子缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人卵巢癌组织中的表达水平,HIF-1α抑制剂3-(5-羟甲基-2-呋喃基)-1-苯甲基吲唑(YC-1)对人卵巢癌细胞A2780s的细胞凋亡及细胞周期的影响,及其与顺铂(CDDP)抗肿瘤治疗的协同作用。方法下载并分析可公开获取的基因表达综合(GEO)数据库,比较HIF-1α基因在上皮性卵巢癌和正常卵巢组织中的表达水平。将培养好的A2780s细胞随机分为空白组、对照组Ⅰ、对照组Ⅱ和实验组。空白组给予等体积的10%小牛血清RPMI培养液处理,对照组Ⅰ用10μmol·L^-1YC-1处理,对照组Ⅱ用10μg·L^-1顺铂处理,实验组用10μmol·L^-1YC-1和10μg·L^-1顺铂处理。以流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期分布的变化。结果 HIF-1α基因在上皮性卵巢癌组织中的表达水平显著高于正常卵巢组织(P <0. 05)。对照组Ⅰ、对照组Ⅱ和实验组均诱导人卵巢癌A2780s细胞凋亡并使细胞周期阻滞于S期。对照组Ⅰ、对照组Ⅱ和实验组对卵巢癌细胞增殖的抑制率分别为(8. 80±0. 24)%,(14. 41±0. 75)%,(20. 52±1. 23)%,细胞S期阻滞率分别为(45. 77±0. 73)%,(49. 75±0. 66)%,(54. 43±0. 91)%,实验组与对照组Ⅰ、对照组Ⅱ比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 HIF-1α高表达于人卵巢癌;YC-1与顺铂联合应用治疗人卵巢癌可通过增强细胞凋亡和细胞周期阻滞发挥协同抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 卵巢癌 缺氧诱导因子-1Α 顺铂 凋亡 细胞周期
青藤碱对人胃癌MGC803细胞增殖的抑制作用及机制研究
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作者 陈伟毅 秦春宏 《中国药师》 CAS 2019年第1期65-68,共4页
目的:探讨青藤碱对人胃癌MGC803细胞的抑制作用及机制。方法:采用不同浓度青藤碱(300,600,900,1 200μg·ml^-1)作用人胃癌MGC803细胞24,48,72 h后,采用CCK-8法检测其吸光度值,并计算细胞增殖抑制率;采用不同浓度青藤碱(300,600,900... 目的:探讨青藤碱对人胃癌MGC803细胞的抑制作用及机制。方法:采用不同浓度青藤碱(300,600,900,1 200μg·ml^-1)作用人胃癌MGC803细胞24,48,72 h后,采用CCK-8法检测其吸光度值,并计算细胞增殖抑制率;采用不同浓度青藤碱(300,600,900,1 200μg·ml^-1)作用人胃癌MGC803细胞48 h后,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期,Western-Blot法检测p21蛋白表达。结果:不同浓度青藤碱作用人胃癌MGC803细胞24,48,72 h后,与空白对照组相比,细胞抑制率上升,除青藤碱300μg·ml^-1作用细胞24 h外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.001)。不同浓度青藤碱作用人胃癌MGC803细胞48 h后,细胞处于G1期的比率(P<0.01或P<0.001)和p21蛋白表达(P<0.05或P<0.001)上升。结论:青藤碱能够显著抑制人胃癌MGC803细胞增值,并有时间浓度依赖性,其作用机制与阻断细胞周期G1期、上调p21蛋白有关。 展开更多
关键词 青藤碱 人胃癌MGC803细胞 抑制细胞增殖 细胞周期 P21
汉黄芩素体外对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的实验性研究 预览
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作者 张永海 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期89-95,共7页
目的探讨汉黄芩素对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及可能分子机制。方法不同浓度(20、50、100μmol/L)汉黄芩素分别作用于人胃癌SGC7901细胞24、48、72 h,空白对照不进行任何处理。采用MTT法检测细胞增殖能力;采用划痕实验观察细胞... 目的探讨汉黄芩素对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及可能分子机制。方法不同浓度(20、50、100μmol/L)汉黄芩素分别作用于人胃癌SGC7901细胞24、48、72 h,空白对照不进行任何处理。采用MTT法检测细胞增殖能力;采用划痕实验观察细胞迁移能力;采用Transwell法观察细胞侵袭能力;采用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡情况;RT-qPCR和Western blot分别对细胞基质金属蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)以及金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果MTT实验结果显示,不同浓度的汉黄芩素抑制人胃癌SGC7901细胞呈浓度和时间依赖性;作用48 h后,汉黄芩素s期比例上升,诱导细胞凋亡(P<0.05);Transwell实验结果显示,汉黄芩素呈浓度依赖性抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭;RT-qPCR和Western blot检测结果显示,汉黄芩素能够抑制SGC7901细胞中ICAM-1、MMP9、MMP2的mRNA和蛋白表达水平,但上调TIMP2 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论汉黄芩素能够抑制人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞在S周期,诱导其凋亡。 展开更多
关键词 汉黄芩素 胃癌 细胞周期 增殖 迁移 侵袭
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结直肠癌组织中差异表达cirRNA的筛选及功能分析 预览
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作者 李建祺 张晶 +4 位作者 甄亚男 魏飞力 欧阳雅博 肖瑞雪 徐忠法 《山东医药》 CAS 2019年第8期13-16,共4页
目的筛选结直肠癌组织中差异表达的环状RNA(circRNA),并分析其在结直肠癌发生发展中的作用。方法收集9例原发性结直肠癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本,根据TNM分期分为A(T 1~3 N 0M 0)、B(T 4a~b N 0M 0)、C(T 4a~b N 1~2 M 0)组。... 目的筛选结直肠癌组织中差异表达的环状RNA(circRNA),并分析其在结直肠癌发生发展中的作用。方法收集9例原发性结直肠癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本,根据TNM分期分为A(T 1~3 N 0M 0)、B(T 4a~b N 0M 0)、C(T 4a~b N 1~2 M 0)组。用Affymetrix Clariom D芯片检测、筛选各组差异表达的circRNA并进行聚类分析和表达趋势分析,通过构建共表达调控网络筛选重点差异表达circRNA及其对应的mRNA。利用GO数据库和KEGG数据库分别进行基因功能注释分析和信号通路富集分析,最终筛选功能最显著的基因及其对应circRNA。结果A组癌组织与癌旁组织比较,circRNA表达降低者有165个、升高239个;B组分别为284个、276个;C组分别为190个、220个。随着结直肠癌病情进展,差异表达circRNA的表达水平呈逐渐下降趋势。选择既符合主流表达变化趋势同时更具有统计学意义的circRNA群与共表达调控网络基因属性评分前10位的circRNA进行交集处理,筛选出8个与结直肠癌进展密切相关的circRNA即hsa_circ_0000007、hsa_circ_0001111、hsa_circ_0006977、hsa_circ_0079656、hsa_circ_0023608、hsa_circ_0024508、hsa_circ_0026694、hsa_circ_0029903。预测8个circRNA相应的mRNA,GO分析及KEGG分析结果显示,被富集的大部分基因及hsa03010通路主要参与核糖体RNA的加工与代谢、RNA的剪切与加工处理等细胞基础功能,其中hsa_circ_0079656相关的HINFP基因主要参与细胞周期中G 1/S期转录过程调控。结论hsa_circ_0079656在结直肠癌组织中低表达,且随结直肠癌进展表达逐步降低;其可能通过作用于HINFP基因调控细胞周期中G 1/S期的转录过程,进而影响结直肠癌的进展。 展开更多
关键词 结直肠癌 环状RNA hsa_circ_0079656 HINFP基因 细胞周期
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丹酚酸B-TAT脂质体对HSF细胞增殖、侵袭和细胞周期的影响
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作者 时军 吴艳婷 +3 位作者 郭思旖 陈桂添 赖建辉 许小琪 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期357-363,共7页
制备载丹酚酸B的穿膜肽TAT修饰脂质体(SAB-TAT-LIP),研究其对人皮肤成纤维细胞(HSF)生长增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响,初步评价其用于防治增生性瘢痕的效果。以体外培养的HSF细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐MTT法检测SAB-TAT-LI... 制备载丹酚酸B的穿膜肽TAT修饰脂质体(SAB-TAT-LIP),研究其对人皮肤成纤维细胞(HSF)生长增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响,初步评价其用于防治增生性瘢痕的效果。以体外培养的HSF细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐MTT法检测SAB-TAT-LIP对细胞生长增殖的抑制作用;采用Transwell小室法和划痕法检测SAB-TAT-LIP对细胞侵袭和迁移能力的影响;采用流式细胞术检测细胞周期变化。空白脂质体对HSF细胞基本无毒副作用,不同浓度的SAB-TAT-LIP干预HSF细胞不同时间后,均具有一定的增殖抑制作用,且呈现剂量和时间依赖性,同时细胞迁移和侵袭能力明显降低;SAB-TATLIP干预HSF细胞48 h后,可使细胞周期阻滞于G0/G1期,与空白对照组相比,P<0. 01。SAB-TAT-LIP对HSF细胞的增殖、侵袭和迁移有显著的抑制作用,对细胞周期G0/G1期有阻滞作用。 展开更多
关键词 丹酚酸B 穿膜肽TAT 脂质体 人皮肤成纤维细胞 增殖 迁移 细胞周期
SFPQ在肝细胞癌的表达及其对细胞增殖与细胞周期的影响
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作者 陈云茹 丹增措姆 +2 位作者 白文东 李青 涂康生 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-57,共9页
目的:探讨脯氨酸、谷氨酰胺剪接因子(SFPQ)在肝细胞癌(HCC)中的表达及作用。方法:采用实时定量PCR及Western blot检测HCC患者的癌组织和对应癌旁组织SFPQ mRNA及蛋白表达。采用TCGA和GEO数据库分析正常肝组织及HCC组织中SFPQ的表达丰度... 目的:探讨脯氨酸、谷氨酰胺剪接因子(SFPQ)在肝细胞癌(HCC)中的表达及作用。方法:采用实时定量PCR及Western blot检测HCC患者的癌组织和对应癌旁组织SFPQ mRNA及蛋白表达。采用TCGA和GEO数据库分析正常肝组织及HCC组织中SFPQ的表达丰度差异;采用TCGA数据库分析SFPQ表达与HCC患者临床分期、病理分级以及患者生存期的关系以及与增殖基因PCNA、Ki-67和周期蛋白CCNE1、CDK2的相关性。观察敲低HCC细胞株HepG2及Hep3B中SFPQ的表达后增殖能力与细胞周期的变化。结果:组织标本分析结果显示,SFPQ mRNA及蛋白表达水平在HCC组织中明显高于癌旁组织(均P<0.05)。数据库分析结果显示,HCC组织中SFPQ mRNA表达丰度明显高于正常肝组织,且患者临床分期及病理学分级越高,SFPQ mRNA水平越高,高表达SFPQ的患者的总生存率明显降低,SFPQ mRNA表达与PCNA、Ki-67、CCNE1、CDK2的表达均呈明显正相关(均P<0.05)。敲低SFPQ表达后,HepG2及Hep3B细胞的增殖能力明显减弱,并出现明显G1期阻滞(均P<0.05)。结论:SFPQ在HCC中表达升高,升高的SFPQ可通过调节HCC细胞周期,促进HCC细胞的增殖,加速肿瘤进展。 展开更多
关键词 细胞 PTB相关剪接因子 细胞增殖 细胞周期
黄芩苷对人舌鳞癌细胞SCC15的抑制作用
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作者 钟文德 刘荣静 +1 位作者 管红兵 陈广盛 《口腔疾病防治》 2019年第4期226-230,共5页
目的 探讨黄芩苷对人舌鳞癌细胞株SCC15细胞的抑制作用及可能机制,为舌鳞癌的防治提供新 的思路及实验基础。方法 单纯DMEM培养液培养的SCC15细胞为对照组,加入20mg/mL黄芩苷溶液培养 的SCC15细胞为黄芩苷组。2组细胞分别以划痕实验及Tr... 目的 探讨黄芩苷对人舌鳞癌细胞株SCC15细胞的抑制作用及可能机制,为舌鳞癌的防治提供新 的思路及实验基础。方法 单纯DMEM培养液培养的SCC15细胞为对照组,加入20mg/mL黄芩苷溶液培养 的SCC15细胞为黄芩苷组。2组细胞分别以划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的改变,流式细 胞术检测细胞周期的改变,Westernblotting检测细胞信号转导与转录激活子3(signaltransductionandtranscrip? tionactivator3,STAT3)磷酸化水平的差异。结果 与对照组比较,划痕实验及Transwell迁移实验结果显示黄 芩苷组细胞迁移能力降低(t=4.927, P=0.008);流式细胞术结果显示黄芩苷组G0/G1期增高(t=9.893, P= 0.001), S期降低(t=8.528, P=0.001), G2/M期降低(t=3.550, P=0.024);Westernblotting结果显示黄芩苷组 SCC15细胞STAT3蛋白磷酸化水平下降(t=8.262, P=0.001)。结论 黄芩苷对人舌鳞癌细胞SCC15具有抑 制作用,其机制可能与降低STAT3通路磷酸化活性有关。 展开更多
关键词 黄芩苷 鳞状细胞 SCC15细胞 迁移 细胞周期 信号转导与转录激活子3
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