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稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体GluA1亚基单克隆细胞株的构建
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作者 李炯 张吉凤 +3 位作者 赵波 蔡振彬 朱肖楠 郭国庆 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期591-597,共7页
目的构建稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体GluA1亚基的细胞株。方法PCR扩增GluA1目的基因,并将其装载至慢病毒表达载体PLV. 0-绿色荧光蛋白(GFP),采用4质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒。嘌呤霉素抗性筛选细... 目的构建稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体GluA1亚基的细胞株。方法PCR扩增GluA1目的基因,并将其装载至慢病毒表达载体PLV. 0-绿色荧光蛋白(GFP),采用4质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒。嘌呤霉素抗性筛选细胞,挑选单克隆细胞株用Real-time PCR、Western blotting、免疫荧光和全细胞膜片钳鉴定GluA1的表达与功能。结果菌落PCR鉴定扩增产物与GluA1分子量(2724 bp)一致,经测序插入慢病毒载体序列与GluA1序列一致;慢病毒感染并抗性筛选的HEK293T细胞经Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光实验证明,GluA1在过表达GluA1组的HEK293T细胞正确表达,空载体组不表达。单克隆挑选的稳定细胞株免疫荧光染色显示,各细胞膜表面GluA1蛋白表达相对一致。单克隆细胞在电压钳模式下,细胞外液加10 mmol/L谷氨酸诱导,空载体组检测不到电信号,而过表达GluA1组可记录5~40 p A电信号。结论成功构建了稳定表达AMPA受体GluA1亚基的HEK293T细胞株。 展开更多
关键词 GluA1亚基 慢病毒 单克隆 细胞株 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法
AQP1在不同转移潜能的人鼻咽癌细胞株中的表达 预览
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作者 覃云英 罗宁斌 +1 位作者 王鹏 姬逸男 《临床医学进展》 2018年第10期948-952,共5页
目的:探讨AQP1在不同转移潜能人鼻咽癌细胞中表达的差异。方法:利用RT-PCR及Western blot两种方法,检测CNE1、CNE2、5-8F三种不同转移潜能的人鼻咽癌细胞株中AQP1的表达情况,并分析AQP1表达与细胞转移潜能的关系。结果:在CNE1、CNE2及5... 目的:探讨AQP1在不同转移潜能人鼻咽癌细胞中表达的差异。方法:利用RT-PCR及Western blot两种方法,检测CNE1、CNE2、5-8F三种不同转移潜能的人鼻咽癌细胞株中AQP1的表达情况,并分析AQP1表达与细胞转移潜能的关系。结果:在CNE1、CNE2及5-8F细胞株中均可检测到AQP1的表达。在三种不同转移潜能细胞株中,AQP1的表达量水平有统计学差异(P <0.05)。而且,AQP1的表达水平随着细胞株转移潜能的增高而增加。结论:AQP1的表达水平可能与人鼻咽癌细胞的转移潜能密切相关。 展开更多
关键词 鼻咽癌 细胞株 AQP1 RT-PCR WESTERN BLOT
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胰腺癌耐药细胞株JF3OS/CDDP和PANC-1/GEM的生物学特性及新耐药相关基因MSX2的发现
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作者 袁伟 隋晨光 +1 位作者 马肖 马洁 《中华肿瘤杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期330-334,共5页
目的建立胰腺癌耐药细胞株,探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制。方法采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)... 目的建立胰腺癌耐药细胞株,探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制。方法采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)及交叉耐药情况,并观察其生长差异。应用流式细胞术检测耐药细胞的周期变化,Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中多药耐药相关基因的变化。结果 成功获得对CDDP耐药的细胞株JF305/CDDP和对GEM耐药的细胞株PANC-1/GEM。JF305/CDDP和PANC-1/GEM细胞株的耐药指数分别为15.3和27.31,并存在交叉耐药。与亲代细胞相比,JF305/CDDP细胞的生长增殖速度减慢,第4天时吸光度(A)值分别为0.60±0.01和1.00±0.06(P=0.002);JF305/CDDP细胞的G1+G2期细胞比例增加[(70±3)%和(55±3)%],而S期细胞比例减少[(30±2)%和(45±2)%,P=0.041];JF305/CDDP细胞穿过Transwell小室的数量增加[(158±5)个/视野和(32±1)个/视野,P〈0.001];JF305/CDDP细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)和同源(异型)框基因2(MSX2)的表达量增加到(5.10±0.63)倍、(7.20±0.84)倍和(6.95±0.77倍)。在JF305细胞中,敲降MSX2则MRP2表达降低(0.69±0.17);在PANC-1细胞中,过表达MSX2则MRP2表达升高(2.1±0.31)。结论 成功建立了2株稳定的耐药胰腺癌细胞株JF305/CDDP和PANC-1/GEM。发现了新的耐药相关基因MSX2,MSX2可能通过上调MRP2的表达促进胰腺癌细胞耐药。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 耐药 细胞株 MSX2 MRP2
Kuippel样因子6经活化转录因子4通路对晶状体上皮细胞凋亡的调控作用 预览
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作者 田芳 赵今稚 +8 位作者 滕贺 黄亮瑜 刘勋 苏睿虹 高美子 张晓敏 李筱荣 东莉洁 张红 《中华实验眼科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期181-186,共6页
目的以活化转录因子4(ATF4)为靶点,探讨Krüppel样因子6(KLF6)调控紫外线B(UVB)诱导的晶状体上皮细胞(HLECs)凋亡的分子机制。方法HLECs系(HLE-B3)进行常规培养,采用脂质体转染法将构建的真核表达质粒pEGFP-C2-ATF4转染... 目的以活化转录因子4(ATF4)为靶点,探讨Krüppel样因子6(KLF6)调控紫外线B(UVB)诱导的晶状体上皮细胞(HLECs)凋亡的分子机制。方法HLECs系(HLE-B3)进行常规培养,采用脂质体转染法将构建的真核表达质粒pEGFP-C2-ATF4转染HLECs作为UVB+ATF4转染组,并用能量密度为20 mJ/cm2的UVB照射细胞;未转染的ATF4细胞作为正常对照组。采用苏木精-伊红染色法和Hoechst染色法观察ATF4对HLECs细胞形态学的影响。将培养的细胞分为KLF6转染组及相应空质粒对照组,小干扰KLF6(siKLF6)组(转染pSilencer-KLF6质粒)及相应的空载体对照组(转染pSilencer空质粒),采用Western blot法检测细胞中ATF4蛋白的相对表达量。将培养的细胞分为4个组,联合空载体组HLECs联合转染pEGFP-C2空载体和pSilencer空载体;KLF6+pSilencer空质粒组HLECs联合转染pEGFP-C2-KLF6和pSilencer空载体;小干扰ATF4(siATF4)+pEGFP-C2组HLECs联合转染pEGFP-C2空载体和pSilencer-ATF4;KLF6+siATF4组HLECs联合转染pEGFP-C2-KLF6和pSilencer-ATF4,各组细胞均暴露于UVB 200 s,采用ELISA法检测上述各组HLECs凋亡值。结果正常对照组培养的HLECs大小均匀,排列整齐,细胞核呈卵圆形,数量多且完整;UVB照射后部分细胞核固缩,细胞间隙增大,少数细胞出现核分裂;UCB+ATF4转染组细胞数量减少,多数细胞出现核固缩和核分裂。UVB+ATF4转染组细胞中ATF4蛋白表达条带灰度明显强于UVB+空载体组,ATF4蛋白相对表达量分别为0.99±0.06和0.13±0.02,差异有统计学意义(t=23.13,P〈0.01)。KLF6转染组细胞中KLF6和ATF4蛋白相对表达量均明显高于其空载体对照组,siKLF6组细胞中KLF6和ATF4蛋白相对表达量均明显低于其空载体对照组,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。ELISA检测显示ATF4转染组HLECs凋亡值为1.37±0.11,明显高于正常对照组的0.31±0.11,差异有统计学意 展开更多
关键词 Kuippel样因子6 Kruppel样转录因子/代谢 活化转录因子4 晶状体上皮细胞 晶状体 细胞株 凋亡
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溴莫尼定对视网膜神经节细胞氧化应激损伤的保护作用 预览
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作者 王璐 林斌武 +1 位作者 王燕 庞龙 《中华实验眼科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期12-15,共4页
目的探讨溴莫尼定对视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤的保护作用。 方法小鼠RGC-5细胞株在含低糖(1 g/L)、体积分数10%胎牛血清和100 U/ml(商品单位)青链霉素混悬液的DMEM培养液中进行培养,将传代的RGC-5细胞分为正常对照组... 目的探讨溴莫尼定对视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤的保护作用。 方法小鼠RGC-5细胞株在含低糖(1 g/L)、体积分数10%胎牛血清和100 U/ml(商品单位)青链霉素混悬液的DMEM培养液中进行培养,将传代的RGC-5细胞分为正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定+H2O2处理组。H2O2处理组在细胞培养液中加入800 μmol/L H2O2,溴莫尼定+H2O2处理组在细胞培养中加入1 μmol/L溴莫尼定处理2 h,然后加入800 μmol/L H2O2,各组细胞继续培养24 h。采用Hoechst荧光染色法观察各组细胞的细胞核形态和数量变化;采用Western blot法测定各组细胞中凋亡相关蛋白bcl-2和bax蛋白相对表达量变化;采用荧光标记JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位改变。 结果正常对照组细胞核呈圆形或椭圆形,细胞核大小均匀;H2O2处理组可见细胞核固缩和碎裂,细胞核数量减少;溴莫尼定+H2O2处理组出现核固缩和碎裂的细胞核明显少于H2O2处理组。正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定+H2O2处理组细胞中bcl相对表达量分别为0.76±0.15、0.50±0.13和0.75±0.17,H2O2处理组细胞中bcl-2相对表达量明显低于正常对照组和溴莫尼定+H2O2处理组,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。正常对照组、H2O2处理组和溴莫尼定+H2O2处理组细胞中bax相对表达量分别为0.65±0.13、0.83±0.07和0.70±0.10,H2O2处理组细胞中bax相对表达量均明显高于正常对照组和溴莫尼定+H2O2处理组,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。正常对照组RGC-5线粒体膜可见较强的橙色荧光,与细胞膜绿色荧光共表达;H2O2处理组细胞中橙色荧光减弱且表达JC-1的细胞数量减少;溴莫尼定+H2O2处理组细胞线粒体膜橙色荧光较H2O2处理组增强,JC-1阳性细胞数量明显增多。 结论溴莫尼定预处理能够预防氧化应激导致的RGCs线粒体损害,从而发挥视神经保护作用。 展开更多
关键词 神经保护剂/药理作用 细胞缺氧/药物诱导 氧化应激 视网膜神经节细胞 凋亡 线粒体/病理损伤 溴莫尼定 细胞株
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稳定表达全长人促甲状腺激素受体细胞株构建及功能评价 被引量:1
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作者 屠晓芳 张洪梅 苏青 《中华内分泌代谢杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期154-157,共4页
目的建立能稳定表达全长人促甲状腺激素受体的细胞株并对其进行功能鉴定。方法利用PCR方法钓取全长人促甲状腺激素受体(hTSHR)基因,纯化后交换进入线性化GV208载体,构建出重组载体,载体转化后在辅助包装原件载体质粒的帮助下包装... 目的建立能稳定表达全长人促甲状腺激素受体的细胞株并对其进行功能鉴定。方法利用PCR方法钓取全长人促甲状腺激素受体(hTSHR)基因,纯化后交换进入线性化GV208载体,构建出重组载体,载体转化后在辅助包装原件载体质粒的帮助下包装成慢病毒颗粒,感染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),单克隆培养后筛选出稳定表达hTSHR的细胞,用qPCR检测其mRNA表达情况。用牛TSH(bTSH)或Graves病患者血清刺激细胞,检测上清cAMP浓度变化来鉴定构建的细胞株功能。结果基因检测证明阳性转化子目的基因序列正确。与对照组或空白组细胞相比,构建的实验组细胞株表达的hTSHRmRNA升高,在受到bTSH刺激时,随着bTSH浓度增加,cAMP明显增高,初发Graves病患者血清刺激细胞时,与对照组血清相比cAMP明显增高。结论构建的CHO细胞株能稳定表达全长人促甲状腺激素受体,并且该细胞株功能良好,可用于后续研究。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体 细胞株 构建 功能
siRNA沉默hDOT1L基因表达对人THP-1细胞增殖活性作用机制研究
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作者 牛志云 王颖 +3 位作者 温树鹏 邢丽娜 王福旭 张学军 《中华肿瘤防治杂志》 北大核心 2018年第22期1551-1557,共7页
目的调节蛋白混合性白血病(regulatory protein mixed lineage leukaemia,MLL)是常见的复发/难治性急性白血病,目前仍无标准有效的治疗方案,急需研发新的靶向药物。本研究旨在检测小干扰RNA(siRNA)沉默人类组蛋白赖氨酸甲基转移酶hDOT1... 目的调节蛋白混合性白血病(regulatory protein mixed lineage leukaemia,MLL)是常见的复发/难治性急性白血病,目前仍无标准有效的治疗方案,急需研发新的靶向药物。本研究旨在检测小干扰RNA(siRNA)沉默人类组蛋白赖氨酸甲基转移酶hDOT1L基因表达对人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞增殖的影响,探讨hDOT1L基因在白血病发病中的作用机制。方法利用LipofectamineTM2000将hDOT1LsiRNA转染体外培养的THP-1细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测hDOT1LsiRNA单独或与地西他滨(Decitabine)联合应用对THP-1细胞增殖的影响。采用RT-PCR法检测THP-1细胞hDOT1L、HOXA9、HOXA10和MLL-AF10(MLLT10)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测THP-1细胞H3K79甲基化水平、hDOT1L蛋白表达水平及PI3K/AKT通路中关键分子表达变化。结果 MTT结果显示,与对照组相比(0.17±0.02),hDOT1LsiRNA单独(0.56±0.04)或与地西他滨联合应用(0.66±0.06)48h后可明显抑制THP-1细胞增殖,F=284.225,P<0.001。RT-PCR结果表明,THP-1细胞的HOXA9、HOXA10、MLLT10和hDOT1LmRNA表达水平在hDOT1LsiRNA组分别为0.34±0.06、0.27±0.06、0.32±0.08和0.26±0.07;在hDOT1LsiRNA+Decitabine组分别为0.15±0.06、0.14±0.05、0.16±0.06和0.13±0.06;与对照组(0.92±0.18、0.77±0.13、0.79±0.13和0.68±0.14)比较明显下降,差异有统计学意义,均P<0.001。蛋白质印迹法检测monoH3K79、di-H3K79、tri-H3K79蛋白表达水平在对照组分别为0.54±0.06、0.58±0.09和0.75±0.05,hDOT1LsiRNA组分别为0.44±0.02、0.31±0.06、0.41±0.09,hDOT1LsiRNA+Decitabine组分别为0.38±0.08、0.21±0.03、0.27±0.04,均较对照组明显降低,均P<0.001;Control siRNA组细胞内T-AKT、p-AKT、PI3K及hDOT1L蛋白表达水平分别为0.70±0.15、0.71±0.13、0.49±0.14、0.72±0.05,hDOT1LsiRNA组分别为0.64±0.12、0.51±0.04、0.30±0.04和0.36±0.04,hDOT1LsiRNA+Decitabine组分别为0.65±0.05、0.31±0.09、0.22±0.04和0.24±0.04,后两组与Control siRNA组相比,细胞内p-AKT、PI3K及 展开更多
关键词 白血病 细胞株 hDOT1L基因 组蛋白甲基化 细胞增殖
Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立
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作者 左春霞 卞晓翠 +3 位作者 杨振丽 冯海凉 周芳颖 刘玉琴 《中华肿瘤杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期572-579,共8页
目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株,并验证Cas9的基因编辑活性,以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞(Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7)、人胆管癌细胞(RBE)和人胆囊癌... 目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株,并验证Cas9的基因编辑活性,以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞(Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7)、人胆管癌细胞(RBE)和人胆囊癌细胞(GBC-SD)中,分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1,挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后,通过基因组聚合酶链反应(PCR)和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry,流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞,再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA,细胞扩增后,通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株,其中表达Cas9-Neo的细胞35株,表达Cas9-Puro的细胞25株,表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示,同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下,同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry-EGFP+细胞。流式细胞仪检测结果显示,mCherry-EGFP+细胞占0.3%~93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株,其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。 展开更多
关键词 细胞 胆管癌 胆囊肿瘤 基因编辑 CRISPR/Cas9 细胞株
毒素安全评估在食品质量与安全专业实训教学中的应用 预览
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作者 胡卫成 刁恩杰 王新风 《广东化工》 CAS 2018年第23期107-107,111共2页
在食品质量与安全专业实训教学中,以人体肾脏上皮细胞系HEK293细胞和赭曲霉毒素A(OTA)为实验材料,进行了无菌操作技术、细胞培养、细胞计数和细胞毒性评估等实验教学。该教学方案内容完整,教学过程清晰,取得了较好的教学效果。
关键词 安全评估 细胞株 食品质量与安全 实训教学
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纳米羟基磷灰石对卵巢癌细胞株的抑制作用研究 被引量:1
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作者 韩丽丽 张慧慧 +1 位作者 马慧芳 付莉 《新医学》 2017年第11期775-778,共4页
目的研究纳米羟基磷灰石(nHAP)对卵巢癌细胞株SKOV3生长的影响及其作用机制.方法培养卵巢癌SKOV3细胞,分别计算出nHAP对卵巢癌SKOV3细胞的30%、50%、70%抑制浓度(IC30、IC50、IC70),绘制量效曲线和时效曲线.选用IC50的nHAP作用卵巢... 目的研究纳米羟基磷灰石(nHAP)对卵巢癌细胞株SKOV3生长的影响及其作用机制.方法培养卵巢癌SKOV3细胞,分别计算出nHAP对卵巢癌SKOV3细胞的30%、50%、70%抑制浓度(IC30、IC50、IC70),绘制量效曲线和时效曲线.选用IC50的nHAP作用卵巢癌SKOV3细胞48h,与无nHAP的对照组卵巢癌SKOV3细胞对比,分别进行透射电镜观察、流式细胞仪检测.结果nHAP作用48h后,不同浓度nHAP对卵巢癌SKOV3细胞均表现出抑制作用,nHAP对卵巢癌SKOV3细胞的IC30、IC50、IC70分别为9.46、28.83、60.80mg/L.IC30、IC50、IC70的nHAP作用于卵巢癌SKOV3细胞48h期间,抑制率随时间延长而升高,48h后抑制率增速变缓.形态学观察和定量分析显示IC50的nHAP作用卵巢癌SKOV3细胞48h可诱导其凋亡,其凋亡率为(43.32±12.53)%,对照组为(10.88±5.48)%,组间比较差异有统计学意义(P〈0.05),且与对照组比较,IC50的nHAP作用下的卵巢癌SKOV3细胞G0/G1期百分比高、S期细胞百分比低(P均〈0.05).结论nHAP对卵巢癌细胞株SKOV3的生长具有明显的抑制作用,其机制可能是nHAP作用于卵巢癌SKOV3细胞的S期,诱导肿瘤细胞凋亡. 展开更多
关键词 纳米羟基磷灰石 卵巢癌 细胞株
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现代商品仔猪传代肾细胞株的培育与应用研究 预览
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作者 胡鸿惠 吴静波 +2 位作者 黄健强 南文金 于文涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期586-593,共8页
细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成... 细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成功得到一株可以连续传代的细胞株,命名为SDPK-D,且已在体外连续传代90代。SDPK-D细胞株F33和F83代倍增时间分别为40.9和32.7h,细胞活率分别为97.55%和98.86%,8h细胞贴壁率分别为91.67%和97.06%。在该细胞株接种猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性病料均出现明显的细胞病变。本研究首次针对现代商品猪培育出一株可以在体外连续传代的细胞株,并对多种动物病毒敏感,为相关动物病毒的分离培养提供了新的细胞系选择。 展开更多
关键词 仔猪肾细胞 原代培养 传代培养 细胞株
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Paclitaxel-loaded hollow-poly(4-vinylpyridine) nano- particles enhance drug chemotherapeutic efficacy in lung and breast cancer cell lines
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作者 Rafael Contreras-Caceres Maria C. Leiva +7 位作者 Raul Ortiz Amelia Diaz Gloria Perazzoli Miguel A.Casado-Rodriguez Consolacion Melguizo Jose M. Baeyens Juan M. Lopez-Romero Jose Prados 《纳米研究:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第3期856-875,共20页
Paclitaxel (PTX ) ,为胸和肺癌症的治疗的最有效的细胞毒素之一,被它的严重副作用和低肿瘤选择限制。在这个工作,( 4-vinylpyridine )( hollow-p4VP ) hollow-poly , nanoparticles ( NP )被用于第一次产生 PTX@p4VP NP ,采用在 ... Paclitaxel (PTX ) ,为胸和肺癌症的治疗的最有效的细胞毒素之一,被它的严重副作用和低肿瘤选择限制。在这个工作,( 4-vinylpyridine )( hollow-p4VP ) hollow-poly , nanoparticles ( NP )被用于第一次产生 PTX@p4VP NP ,采用在 NP 的中心的一个金核心是进一步的一种新奇在技术氧化了生产 PTX 分子能被合并到的空结构。当在血(没有溶血) 和房间文化(没有 cytotoxicity ) 上测试了时, hollow-p4VP NP 展出好物理化学的性质和显示的优秀 biocompatibility。有趣地, PTX@p4VP NP 显著地在人的肺(A-549 ) 和胸(MCF-7 ) 增加了 PTX cytotoxicity 有 PTX IC <sub>50</sub> 的重要减小的癌症房间(从在 A-549 的 5.9 ~ 3.6 nM 并且从在 MCF-7 的 13.75 ~ 4.71 nM ) 。另外, PTX@p4VP 在 A-549 和 MCF-7 多细胞的肿瘤球状体(山) 的体积引起了减少,一在里面在 vivo 肿瘤模仿的 vitro 系统,与免费 PTX 相比。这项增加的 antitumoral 活动被有效房间成为主观伴随并且增加了 apoptosis,特别在我们的结果为 hollow-p4VP NP 能改进 PTX 的 antitumoral 活动的第一条证据提供的肺癌症山。这个系统能被用作新 nanoplatform 克服当前的胸和肺癌症治疗的限制。 展开更多
关键词 4-乙烯基吡啶 纳米颗粒增强 治疗药物 乳腺癌 紫杉醇 细胞株 肺癌 中空
稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白细胞的构建
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作者 黄文波 刘振卫 +4 位作者 周荣 李潇 曾军 李小锋 苏晓波 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期494-500,共7页
获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株。采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒。将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-... 获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株。采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒。将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro通过脂质体介导法共转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选后得到重组细胞株HEK293-HA,通过流式细胞术法(FCM)来检测细胞中HA的表达情况。所得到的重组细胞经扩大培养后再连续培养15代,采用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(WB)来检测HA蛋白表达的稳定性。结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-HA经双酶切及测序鉴定正确;共获得3株高表达阳性细胞株。细胞扩大培养后连续传代培养15代后进行Western blot和IFA检测结果表明,重组细胞的HA蛋白得到稳定的表达。已成功获得了能稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞,可为乙型流感病毒HA蛋白的进一步研究提供良好的基础。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 血凝素(HA)蛋白 细胞株
细胞无血清培养现状概述
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作者 郭芳睿 秦俊红 +4 位作者 李彦霖 康玮笠 王晨曦 朱玲 徐志文 《生物技术通讯》 CAS 2017年第6期865-870,共6页
在动物细胞培养过程中,血清的存在能满足细胞的生长繁殖需求,但实际生产中血清提取工艺复杂,成本高昂,给大规模生产带来困难,不利于商业化开发。常见细胞源疫苗血清残留对疫苗免疫效果有很大的影响,而无血清培养基避免了血清所带... 在动物细胞培养过程中,血清的存在能满足细胞的生长繁殖需求,但实际生产中血清提取工艺复杂,成本高昂,给大规模生产带来困难,不利于商业化开发。常见细胞源疫苗血清残留对疫苗免疫效果有很大的影响,而无血清培养基避免了血清所带来的血源性污染等问题,其成分和含量明确,制备流程简易,提高了实验的稳定性和准确性,有利于获得高质量的生物产品,与天然培养基等传统的培养基相比有着许多优势。随着生物科学的发展,细胞无血清培养技术的创新和应用已成为生物工程重点研究课题。我们简要综述了无血清驯化细胞的发展历程、应用,及无血清培养基的组成成分、优缺点等内容,以期对未来细胞培养技术的发展进程提供助力。 展开更多
关键词 无血清 培养 细胞株
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慢病毒介导的靶向干扰MEX3A基因膀胱癌稳定细胞株的建立 预览 被引量:1
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作者 房超 尹晶 +2 位作者 于秋爽 陈云云 黄瑛 《中国医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期1057-1061,1066共6页
目的 构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,建立稳定干扰MEX3A基因表达的膀胱癌细胞株。方法 采用实时PCR检测膀胱癌细胞株中MEX3A基因的表达;应用GV115质粒构建重组靶向MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,鉴定及测序合格后,与包装载体共转染2... 目的 构建针对MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,建立稳定干扰MEX3A基因表达的膀胱癌细胞株。方法 采用实时PCR检测膀胱癌细胞株中MEX3A基因的表达;应用GV115质粒构建重组靶向MEX3A基因的shRNA慢病毒载体,鉴定及测序合格后,与包装载体共转染293T细胞产生慢病毒颗粒,病毒滴度测定后转染膀胱癌细胞,经抗生素筛选建立稳定表达si RNA的细胞株,实时PCR检测敲减效率。结果 MEX3A基因在膀胱癌5637和T24细胞中均有表达,且5637的表达量高于T24;鉴定及测序结果显示成功构建MEX3A-shRNA慢病毒载体,包装后病毒滴度较高,实时PCR结果表明慢病毒转染5637细胞后能稳定抑制MEX3A基因的表达。结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术可成功建立稳定抑制MEX3A基因表达的细胞株。 展开更多
关键词 MEX3A基因 膀胱癌 慢病毒 细胞株
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稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定 预览
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作者 陈姣 王晓冬 贾永前 《中国药科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期727-732,共6页
构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型。筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克... 构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型。筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长。然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞。收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况。207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长。双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证。慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增。同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况。通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型。 展开更多
关键词 急性髓细胞白血病(AML) Fms样酪氨酸激酶-3 内部串联重复 细胞株
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FOXC2在非小细胞肺癌细胞株及组织中的表达及意义
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作者 刘曙光 章思思 +2 位作者 邹振宁 马红梅 周有俭 《川北医学院学报》 CAS 2017年第5期656-658,共3页
目的:研究叉头框C2(Forkhead box c2,FOXC2)在人非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞株和组织中的表达水平,并探讨FOXC2与临床病理因素的相关性。方法:应用RT-PCR方法检测FOXC2在人肺癌细胞株A549和H460中mRNA水... 目的:研究叉头框C2(Forkhead box c2,FOXC2)在人非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞株和组织中的表达水平,并探讨FOXC2与临床病理因素的相关性。方法:应用RT-PCR方法检测FOXC2在人肺癌细胞株A549和H460中mRNA水平的表达情况,并与永生化人支气管上皮细胞株16HBE进行比较;应用免疫组化(IHC)方法检测FOXC2蛋白在66例NSCLC组织和8例癌旁肺组织中的表达情况,并分析FOXC2表达与NSCLC患者临床病理因素的关系。结果:肺癌细胞株A549和H460中FOXC2的mRNA表达水平高于永生化人肺上皮细胞株,差异有统计学意义(P〈0.05);FOXC2蛋白在NSCLC组织中表达高于癌旁组织,与肺癌组织淋巴结转移密切相关(P〈0.05),而与患者年龄、性别、吸烟、组织学类型、分化程度和TNM分期无明显相关(P〉0.05)。结论:FOXC2可能在促进NSCLC的发生和发展过程中发挥了重要的作用,有望作为评估临床肺癌患者预后的指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 FOXC2 细胞株 免疫组织化学
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Inhibitory effect of pyrvinium pamoate on uveal melanoma cells involves blocking of Wnt/β-catenin pathway
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作者 Lei Zheng Yizhi Liu Jingxuan Pan 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第10期890-898,共9页
关键词 Β-CATENIN 黑色素瘤 信号转导 细胞株 WNT 葡萄 抑制作用 Survivin
Homeopathic potencies of Arnica montana L. change gene expression in a Tamm-Horsfall protein-1 cell line in vitro model: the role of ethanol as a possible confounder and statistical bias
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作者 Salvatore Chirumbolo Geir Bjφrklund 《结合医学学报:英文版》 CAS CSCD 2017年第4期255-264,共10页
Marzotto et al. showed that homeopathic preparations of Arnica montana L. acted directly on gene expression of Tamm-Horsfall protein-1(THP-1) monocyte/macrophage cell lines activated with phorbol12-myristate13-acetate... Marzotto et al. showed that homeopathic preparations of Arnica montana L. acted directly on gene expression of Tamm-Horsfall protein-1(THP-1) monocyte/macrophage cell lines activated with phorbol12-myristate13-acetate and interleukin-4(IL-4). A. montana homeopathic dilutions are used in complementary and alternative medicine to treat inflammation disorders and post-traumatic events as well as for wound repair. The French Pharmacopoeia of these remedies uses 0.3% ethanol in each centesimal dilution. In this paper, we discuss how ethanol-containing A. montana homeopathic centesimal dilutions can change gene expression in IL-4-treated monocyte/macrophage THP-1. We assessed the role of ethanol in the Arnica homeopathic dilutions containing this alcohol by investigating its action on gene expression of THP-1 cell. Evidence would strongly suggest that the presence of ethanol in these remedies might play a fundamental role in the dilutions ability to affect gene expression, particularly for doses from 5c to 15 c. Where, rather than playing a major role in the mesoscopic structure of water, the ethanol might have a chemical-physical role in the induction of THP-1 gene expression, apoptosis, and deoxyribonucleic acid function. This evidence generates a debate about the suggestion that the use of a binary-mixed solvent in homeopathic chemistry, used by Hahnemann since 1810, may be fundamental to explain the activity of homeopathy on cell models. 展开更多
关键词 基因表达 细胞模型 细胞株 乙醇 疗法 统计偏差 蛋白 混杂
白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究 预览 被引量:5
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作者 邓凤芸 《中国民族民间医药杂志》 2016年第11期7-7,9共2页
目的:应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌 HT -29细胞株、结肠癌 HCTI16细胞株的抑制实验,观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。方法:通过体外培养的方法培养人结肠癌 HT -29细胞株和结肠癌 HCTI16细胞株,对比分析不同浓度白花蛇... 目的:应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌 HT -29细胞株、结肠癌 HCTI16细胞株的抑制实验,观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。方法:通过体外培养的方法培养人结肠癌 HT -29细胞株和结肠癌 HCTI16细胞株,对比分析不同浓度白花蛇舌草提取物对细胞株的影响。结果:白花蛇舌草提取物对 HT -29、HCTI16细胞株的影响为:3mg/ml 浓度时抑制率分别为(25.64±1.36)%、(27.36±1.87)%;5mg/ml 浓度时抑制率(37.25±2.01)%、(39.01±1.65)%;7mg/ml 浓度时抑制率(49.87±1.68)%、(51.22±2.33)%,其抑制率均优于对照组(P <0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可有效抑制结肠癌 HT -29细胞株以及结肠癌 HCTI16细胞株的增值,具有显著的抗肿瘤效果。 展开更多
关键词 白花蛇舌草 提取物 结肠癌 HT -29 细胞株 结肠癌 HCTI16 细胞株 凋亡作用
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