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SD大鼠少突胶质前体细胞的纯化及氧糖剥夺对其活性的影响 预览
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作者 莫思思 朱丽华 +2 位作者 李棒棒 疏佳萍 乔立兴 《东南大学学报:医学版》 CAS 2019年第4期572-578,共7页
目的:纯化少突胶质前体细胞,并探讨氧糖剥夺不同时间对其活力的影响。方法:取SD乳鼠的脑皮质,采用差速贴壁、振荡分离纯化、限定培养基定向培养法,获取少突胶质前体细胞。镜下观察少突胶质前体细胞分化过程中各阶段细胞的形态变化。采... 目的:纯化少突胶质前体细胞,并探讨氧糖剥夺不同时间对其活力的影响。方法:取SD乳鼠的脑皮质,采用差速贴壁、振荡分离纯化、限定培养基定向培养法,获取少突胶质前体细胞。镜下观察少突胶质前体细胞分化过程中各阶段细胞的形态变化。采用特异性抗体A2B5、MBP、GFAP、IBA - 1标记纯化后少突胶质前体细胞、成熟少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞所占比例,以此分析纯化后的细胞纯度。体外制备细胞氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,采用CCK - 8法观察其对少突胶质细胞系增殖活性的影响。结果:(1)利用针对少突胶质前体细胞、成熟少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞的特异性抗体A2B5、MBP、GFAP和IGB - 1进行标记,A2B5、MBP染色阳性细胞分别占96.2%、2.1%,GFAP和IBA - 1染色阳性细胞小于3%。(2) MTT检测显示,随着OGD干预时间的延长,细胞活力呈降低的趋势。结论:(1)联合应用差速贴壁、恒温振荡分离和条件限定培养基可以获得高纯度的少突胶质前体细胞;(2)干预 3 h 适宜用于体外少突胶质前体细胞的OGD模型。体外建立的OGD模型可导致少突胶质前体细胞的损伤,使其细胞活性下降。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 细胞纯化 糖氧剥夺模型 SD大鼠
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不同纯化方式对脂肪细胞活性的影响 被引量:1
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作者 安然 孙家明 王介聪 《中华整形外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期58-63,共6页
目的研究不同纯化方式对负压抽吸获得的脂肪颗粒悬液中各组分比例及细胞活性的影响。方法常规肿胀麻醉下,通过负压抽吸的方式获得脂肪颗粒悬液,将其分为静置组、离心组和过滤漂洗组。①静置组:根据不同的静置时间(30 s、1 min、5 mi... 目的研究不同纯化方式对负压抽吸获得的脂肪颗粒悬液中各组分比例及细胞活性的影响。方法常规肿胀麻醉下,通过负压抽吸的方式获得脂肪颗粒悬液,将其分为静置组、离心组和过滤漂洗组。①静置组:根据不同的静置时间(30 s、1 min、5 min、10 min、30 min、1 h、4 h、12 h、24 h)分为9组;②离心组:采取不同的离心时间(3、5、10 min)及不同离心速度(1 000、2 000、3 000、4 000 r/min)分为12组;③过滤漂洗组:根据所采取的纱布层数(1、2和5层)分为3组。采用Calcein -AM/Hoechst33 342双荧光染色法检测脂肪细胞活性,计算细胞存活率。两样本之间的组间比较采用t检验,2组样本以上的组间比较采用one-way AVOVA分析。结果静置组的油脂、脂肪颗粒、液体层在静置5 min时趋于稳定。②离心组:当离心速度为2 000 r/min、离心时间为3 min时,脂肪细胞存活率及液体比例最大。③过滤漂洗组:2层纱布过滤后收集的脂肪颗粒较多。④静置5 min法、2 000 r/min离心3 min法及2层纱布过滤漂洗法的细胞存活率分别为(86.75±6.29)%、(89.05±7.16)%和(87.85±5.92)%,3组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论静置5 min法、双层纱布过滤漂洗法及2 000 r/min离心3 min法脂肪细胞存活率均较高,3组比较差异无统计学意义。临床上进行少量脂肪填充时,可选择2 000 r/min离心3 min法;进行大量脂肪组织填充时,过滤漂洗法则较为适用。 展开更多
关键词 脂肪细胞 细胞纯化 细胞存活 离心法 过滤漂洗 静置沉淀
一种原代小胶质细胞培养与纯化方法的改良 预览 被引量:1
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作者 徐蛟天 边立功 +5 位作者 张琰 王威 陈孝祥 陈鑫月 李庆 邓兴力 《中风与神经疾病杂志》 2018年第2期115-118,共4页
目的建立一种简易高效的新生大鼠小胶质细胞的原代培养和纯化方法,提高小胶质细胞的产量以及纯度。方法在传统Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上通过改良操作,混合培养小胶质细胞,并分别采用手拍法、摇床法以及温和胰酶消化法... 目的建立一种简易高效的新生大鼠小胶质细胞的原代培养和纯化方法,提高小胶质细胞的产量以及纯度。方法在传统Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上通过改良操作,混合培养小胶质细胞,并分别采用手拍法、摇床法以及温和胰酶消化法,纯化小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化细胞。荧光显微镜下标记小胶质细胞的特异性标记物Iba1、CD11b/c进行鉴定。结果 (1)分离培养第1天小胶质细胞呈不规则圆形,折光不均匀,继续培养3~5 d,小胶质细胞逐渐出现单极或多极突起,7 d时部分细胞转为静止状态,呈分枝状;(2)纯化后小胶质细胞多呈静息状态,细胞免疫荧光CD11b/c、Iba1双阳性;(3)不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示:手拍法纯化小胶质细胞,细胞阳性率(〉96%)明显高于胰酶消化法(〉90%,P〈0.05),前者细胞产量明显高于摇床法(P〈0.05)。结论通过改良传统Miriam Mecha的混合小胶质细胞的培养和纯化方法,可以提高小胶质细胞产量以及纯度。 展开更多
关键词 小胶质细胞 细胞培养 细胞纯化
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一种改进的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法 被引量:3
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作者 丁娟 丁敬宾 +4 位作者 马小虎 关立锋 杨慧莹 王志军 刘娟 《神经解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期349-353,共5页
目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D—Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消... 目的:改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的培养方法,从而获取高纯度星形胶质细胞用于神经科学研究。方法:新生大鼠(2~3日龄),75%酒精消毒后断头,于冰上取大脑皮质置于冰冷的D—Hanks液中,去除脑膜和血管,剪碎后用0.25%胰酶消化并分离细胞,以1×10^5/ml的密度接种于预铺0.015%多聚赖氨酸的细胞瓶中培养。细胞纯化采用“差速贴壁法”、“梯度血清法”和“十字手摇法”,以获取高纯度星形胶质细胞。通过星形胶质细胞特异性表达蛋白即胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)行免疫细胞荧光染色来鉴定细胞纯度。结果:星形胶质细胞纯度大于98%,可多次传代,细胞增殖快,且生长良好。结论:改进的原代星形胶质细胞培养方法,操作简单,细胞纯度高,能满足各种神经科学研究中对高纯度星形胶质细胞培养的实验要求,适宜推广。 展开更多
关键词 原代培养 星形胶质细胞 细胞纯化
应用流式细胞分选技术高效纯化大鼠视网膜神经节细胞及其鉴定 预览 被引量:1
5
作者 杨伯齐 高凤娟 吴继红 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2016年第4期234-238,共5页
目的 探索一种高效、稳定的纯化视网膜神经节细胞(RGC)方法。方法 结合免疫抗体吸附方法,利用流式细胞仪分离新生大鼠RGC,并采用流式细胞及荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测分选RGC的纯度。结果 新生SD大鼠视网膜混合细胞为(4.37... 目的 探索一种高效、稳定的纯化视网膜神经节细胞(RGC)方法。方法 结合免疫抗体吸附方法,利用流式细胞仪分离新生大鼠RGC,并采用流式细胞及荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测分选RGC的纯度。结果 新生SD大鼠视网膜混合细胞为(4.37±0.22)×106个/视网膜,通过流式细胞仪分离出Thy1.1阳性的RGC为(5.70±0.21)×103个/视网膜;荧光定量PCR及流式细胞分析结果均显示此方法分离的RGC细胞纯度高,可达90.11%,且纯度高低可控。结论 通过流式细胞分选技术可获得较高纯度的RGC。该方法分选速度快、稳定,为深入开展RGC的体外研究,提供了一种理想的、基于流式细胞仪的细胞快速分离纯化方法。(中国眼耳鼻喉科杂志,2016,16:234-238) 展开更多
关键词 视网膜神经节细胞 细胞纯化 流式细胞分选 细胞鉴定
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构建糖氧剥夺模型大鼠少突胶质细胞体外培养与分离纯化
6
作者 孟赞 唐勇 彭彦 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期601-606,共6页
目的:对原有少突胶质细胞祖细胞培养与分离纯化方法进行改进,以简单、高效获得少突胶质细胞并建立少突胶质细胞糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法:取SD乳鼠脑皮质,采用两种不同的细胞增殖法和两种不同的分离纯化... 目的:对原有少突胶质细胞祖细胞培养与分离纯化方法进行改进,以简单、高效获得少突胶质细胞并建立少突胶质细胞糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。方法:取SD乳鼠脑皮质,采用两种不同的细胞增殖法和两种不同的分离纯化法分四组培养,分别为细胞因子增殖联合摇床震荡分离纯化法组,B104CM增殖联合摇床震荡分离纯化法组,细胞因子增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组,B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组。倒置显微镜下观察神经细胞形态学变化并进行细胞计数。A2B5和髓鞘碱性蛋白鉴定少突胶质细胞并分析其纯度。纯化后的少突胶质细胞祖细胞分化培养3 d后分四组培养,正常组正常培养,低氧组分三组,换无糖DMEM培养基,OGD 1、2、3 h。然后采用MTT比色法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞的凋亡率。结果:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法较其他3种培养方法收获的少突胶质细胞祖细胞数量多(P〈0.05)。(2)A2B5和MBP特异性标记,细胞纯度可达到95%。(3)MTT结果显示:OGD 1 h少突胶质细胞的细胞活力即降低(P〈0.05),随着缺氧时间延长细胞活力呈降低的趋势更加明显(P〈0.05)。(4)流式细胞测细胞凋亡的结果显示:OGD 1 h、2 h、3 h,细胞的凋亡率分别为14.43%±0.20%,21.99%±0.42%和44.71%±0.20%,均高于正常对照组(6.86%±0.05%,P〈0.05)。结论:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化培养法与其他三种方法比较实验操作简单,收获的少突胶质细胞祖细胞数量最多,可用于少突胶质细胞的培养。(2)OGD可致少突胶质细胞损伤,且与OGD持续时间密切相关,实验成功的建立OGD损伤模型。 展开更多
关键词 少突胶质细胞 原代培养 细胞增殖 细胞纯化 B104CM EDTA 糖氧剥夺模型
肿瘤细胞原代培养与保存 被引量:13
7
作者 刘小珍 郑智国 凌志强 《中国肿瘤》 CAS 2015年第4期276-283,共8页
肿瘤细胞原代培养技术可为日益深入的肿瘤研究及治疗提供充足有效的细胞来源,是癌症在体外研究的重要手段,与体内研究相辅相成。但目前肿瘤细胞原代培养成功率不高,许多问题还需继续探讨与研究。全文综述目前国内外肿瘤原代培养方法、... 肿瘤细胞原代培养技术可为日益深入的肿瘤研究及治疗提供充足有效的细胞来源,是癌症在体外研究的重要手段,与体内研究相辅相成。但目前肿瘤细胞原代培养成功率不高,许多问题还需继续探讨与研究。全文综述目前国内外肿瘤原代培养方法、条件及冻存注意事项,包括:肿瘤组织类型与处理、细胞培养及纯化方法、原代肿瘤细胞生物特性检测、肿瘤细胞冻存条件等,综合探讨各方法的优缺点。比较获得更有效的肿瘤细胞原代培养方法,将其运用于探索肿瘤发生机制、肿瘤细胞治疗及药敏试验,推进肿瘤治疗的进程。 展开更多
关键词 肿瘤细胞原代培养 细胞纯化 细胞冻存
嗅鞘细胞的不同纯化方法及结果 被引量:1
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作者 丁冬 郝铁成 +2 位作者 曹军 牛建国 何仲义 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第19期3766-3769,共4页
:培养的嗅鞘细胞的最终纯度受到多种因素的影响,如嗅鞘细胞的取材来源、分离方法等等;对培养的嗅鞘细胞进行纯化可获得高纯度的嗅鞘细胞。纯化嗅鞘细胞的方法有许多种,主要有单纯差速贴壁法、免疫吸附法、化学药物抑制法、无血清饥... :培养的嗅鞘细胞的最终纯度受到多种因素的影响,如嗅鞘细胞的取材来源、分离方法等等;对培养的嗅鞘细胞进行纯化可获得高纯度的嗅鞘细胞。纯化嗅鞘细胞的方法有许多种,主要有单纯差速贴壁法、免疫吸附法、化学药物抑制法、无血清饥饿法等,现在的实验研究更趋向于以上2-3种方法联合应用对嗅鞘细胞进行纯化,这些联合纯化方案主要是在采用单纯差速贴壁方法的基础上再次运用其他一种或几种方法进行嗅鞘细胞的纯化。就获取的嗅鞘细胞的最终纯度而言,许多方法取得了可观的效果。但不同的纯化方法各有利弊,除了价格不同外,不同的纯化方法对嗅鞘细胞的生物活性造成不同程度的影响。因此在选择纯化方法时,应综合考虑各方面因素,根据研究目的和实际需要选择合理的方案进行纯化。本文通过查阅各数据库中与嗅鞘细胞的分离培养及纯化有关的文献和其他相关书籍,来探讨纯化嗅鞘细胞的不同方法以及这些纯化方法对嗅鞘细胞最终纯度的影响。 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 细胞培养 细胞纯化 纯化方法
绵羊肌内脂肪前体细胞的体外培养及分选 被引量:1
9
作者 耿晓晖 富俊才 +1 位作者 韩凯 陈东 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期110-115,共6页
为建立绵羊肌内脂肪前体细胞的体外培养模型,选用组织块法培养绵羊肌内脂肪前体细胞,制备用荧光染料PE(Phycoerythrin)标记的兔抗绵羊Pref-1蛋白的多克隆抗体,通过流式细胞术分离纯化脂肪前体细胞,对纯化后的细胞进行诱导分化以及油红O... 为建立绵羊肌内脂肪前体细胞的体外培养模型,选用组织块法培养绵羊肌内脂肪前体细胞,制备用荧光染料PE(Phycoerythrin)标记的兔抗绵羊Pref-1蛋白的多克隆抗体,通过流式细胞术分离纯化脂肪前体细胞,对纯化后的细胞进行诱导分化以及油红O染色鉴定。结果表明:利用流式细胞仪能分选纯化出被标记的肌内脂肪前体细胞且分选率近30%;纯化后得到的细胞是功能活跃的脂肪前体细胞。研究表明,用绵羊羔羊肌肉组织采用组织块培养法可以建立绵羊肌内脂肪前体细胞培养模型,抗绵羊Pref-1蛋白多克隆抗体可以作为纯化脂肪前体细胞的工具。 展开更多
关键词 绵羊 脂肪前体细胞 多克隆抗体 细胞纯化
大鼠骨骼肌细胞的原代培养及鉴定 预览 被引量:6
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作者 侯士方 孟馨 +1 位作者 相泓冰 王涤非 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2011年第4期 26-28,共3页
探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3~5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种... 探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3~5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种于L-多聚赖氨酸铺底的培养瓶中;采用骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞。肌卫星细胞培养5~6 h后开始贴壁,48 h完全贴壁,之后细胞进一步增多并相互融合,逐渐按一定方向呈有序排列。当细胞增殖至70%密度时,有融合趋势,加入分化培养基培养48 h后可形成多核的肌管,行免疫荧光染色,90%以上的细胞α-sarcometric actin染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。 展开更多
关键词 卫星细胞 骨骼肌 原代培养 细胞纯化 细胞鉴定
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改良冷喷注法纯化大鼠雪旺细胞的实验研究 被引量:4
11
作者 李爽 马信龙 +3 位作者 孙晓雷 李秀兰 张杨 郭悦 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 1000-1004,共5页
目的报道一种新的雪旺细胞提纯方法一改良冷喷注法,并与其他2种方法进行对比,评价其优缺点。方法分离新生6d的Wistar大鼠双侧坐骨神经,双酶消化法分离雪旺细胞,用S-100免疫细胞化学染色方法对雪旺细胞进行鉴定。将收集到的细胞分为... 目的报道一种新的雪旺细胞提纯方法一改良冷喷注法,并与其他2种方法进行对比,评价其优缺点。方法分离新生6d的Wistar大鼠双侧坐骨神经,双酶消化法分离雪旺细胞,用S-100免疫细胞化学染色方法对雪旺细胞进行鉴定。将收集到的细胞分为3组,分别应用冷喷注法、改良冷喷注法和酶消化法对细胞进行纯化,计算纯化后的细胞纯度,流式细胞仪测定细胞活性。结果改良冷喷注法提纯出的雪旺细胞,纯度和细胞活性与冷喷注法比较差异无统计学意义(P〉0.05),但二者均高于酶消化组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论改良冷喷注法提纯雪旺细胞的优点是操作简便,获得雪旺细胞纯度高且不影响细胞活性,缺点是对操作者实验操作技术和经验要求相对较高,初学者不易掌握。 展开更多
关键词 雪旺细胞 细胞培养 冷喷注法 细胞纯化
纯化取材脂肪提高实验中干细胞培养的纯度 预览 被引量:1
12
作者 宋小飞 傅强 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第40期 7529-7532,共4页
背景:在以往脂肪干细胞原代培养的文献中大多只是剔除脂肪表面的血管组织,而对于脂肪内部的血管,尤其是血管周围淋巴结的剔除很少有文献报道.目的:探讨通过脂肪纯化来提高培养干细胞纯度的可行性.方法:将取材自同一大鼠腹股沟处的脂... 背景:在以往脂肪干细胞原代培养的文献中大多只是剔除脂肪表面的血管组织,而对于脂肪内部的血管,尤其是血管周围淋巴结的剔除很少有文献报道.目的:探讨通过脂肪纯化来提高培养干细胞纯度的可行性.方法:将取材自同一大鼠腹股沟处的脂肪组织分成两份,一份给予纯化处理,剔除表面的血管、皮肤和肌肉组织的同时一并剔除组织内血管及其周围结节样组织.而另一份仅剔除表面血管及可能黏附的皮肤和肌肉组织,分别对两份脂肪行干细胞原代培养.结果与结论:经苏木精-伊红染色显微镜下观察,证实血管周围结节样组织为淋巴结.纯化脂肪组培养的细胞形态一致、呈长梭形.脂肪干细胞相关性抗原CD90的免疫荧光和流式细胞仪检测结果均证明纯化脂肪组培养的细胞纯度较未纯化组高.实验结果提示通过纯化取材可以提高原代培养的脂肪干细胞纯度. 展开更多
关键词 脂肪组织 细胞 淋巴结 细胞纯化 组织工程
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人早孕绒毛滋养层细胞原代培养:差异贴壁法与消化排除法联合应用的可行性 预览 被引量:7
13
作者 张小红 李玉红 +1 位作者 许倩 任春丽 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第28期 5220-5223,共4页
背景:国内外有关人绒毛膜滋养层细胞的体外培养方法,大多步骤繁琐,细胞纯度低而且成本很高,不适于普通实验室推广应用。目的:拟求建立一种人妊娠5~10周绒毛滋养层细胞简便有效的分离培养及鉴定方法。方法:采用改进的胰酶消化法分离... 背景:国内外有关人绒毛膜滋养层细胞的体外培养方法,大多步骤繁琐,细胞纯度低而且成本很高,不适于普通实验室推广应用。目的:拟求建立一种人妊娠5~10周绒毛滋养层细胞简便有效的分离培养及鉴定方法。方法:采用改进的胰酶消化法分离培养妊娠5~10周人绒毛滋养层细胞,加0.0625%胰酶,37℃消化25~40min;以差速贴壁法和消化排除法纯化细胞,倒置显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学方法鉴定细胞来源和纯度。结果与结论:倒置显微镜下原代培养滋养层细胞接种后见大量圆形细胞悬浮存在,1h后可见部分细胞贴壁,24h后70%~80%细胞贴壁,五六天细胞数量明显增多,细胞呈三角形、多边形平铺片状生长,核大卵圆形居中,部分细胞连接成片,部分细胞呈长梭形。七八天长满瓶壁的80%~90%可传代。9~10d铺满培养瓶底部。细胞碎屑不贴壁。传代接种后1.5h贴壁,迅速增长,三四天爬满瓶底,各代细胞形态基本一致。可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性细胞达70%~80%。采用低浓度胰酶进行长时间消化分离培养人早孕绒毛滋养层细胞,利用差异贴壁法和消化排除法以及反复换液法进行纯化,可简单、快捷地获得较高纯度的人早孕绒毛滋养层细胞。 展开更多
关键词 滋养层细胞 细胞培养 细胞纯化 细胞鉴定 绒毛组织
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流式细胞术纯化脐血嗜碱性粒细胞 预览 被引量:1
14
作者 杨玲 许以平 +4 位作者 姚苏杭 熊瑛 祝捷 王克敏 郭胤仕 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 75-77,共3页
目的采用流式细胞术提纯脐血嗜碱性粒细胞,以期得到研究过敏性疾病发病机制的理想标本。方法6份足月产妇新生儿脐血经沉淀红细胞及Ficoll-泛影葡胺处理后,采用流式细胞术分选CD203c-PE^+、CD45-PerCP^int的细胞。通过特异性识别嗜碱性... 目的采用流式细胞术提纯脐血嗜碱性粒细胞,以期得到研究过敏性疾病发病机制的理想标本。方法6份足月产妇新生儿脐血经沉淀红细胞及Ficoll-泛影葡胺处理后,采用流式细胞术分选CD203c-PE^+、CD45-PerCP^int的细胞。通过特异性识别嗜碱性粒细胞的阿利新蓝染色和细胞计数脐血嗜碱性粒细胞的纯度和回收率。结果流式细胞术分选嗜碱性粒细胞所得的纯度为(95.02±2.94)%,回收率为(61.42±5.95)%。结论用流式细胞术分选脐血中CD203c-PE^+、CD45-PerCP^int的细胞可获得高纯度、高回收率的嗜碱性粒细胞。 展开更多
关键词 流式细胞 免疫磁珠 细胞纯化 脐带血 嗜碱性粒细胞
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原代海马神经细胞体外培养的纯化与鉴定 预览 被引量:1
15
作者 刘歆 张一娜 +1 位作者 张云鹤 姜礼红 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第4期 322-325,共4页
目的 建立原代海马神经细胞体外培养纯化及鉴定的优选方法.方法 取新生Wistar乳鼠,分离海马后在体外采用含血清结合无血清法进行培养,并用NSE、GAP-43、MAP2等海马神经细胞特异抗体经免疫细胞化学方法鉴定细胞性质及纯度.结果 接种24 h... 目的 建立原代海马神经细胞体外培养纯化及鉴定的优选方法.方法 取新生Wistar乳鼠,分离海马后在体外采用含血清结合无血清法进行培养,并用NSE、GAP-43、MAP2等海马神经细胞特异抗体经免疫细胞化学方法鉴定细胞性质及纯度.结果 接种24 h后细胞全部贴壁,并长出突起,随时间增加,突起延长并交错形成网络,至第7~8天神经元形态最为成熟饱满,随后逐渐出现细胞老化,神经元最长可生存4周.经鉴定,海马神经元纯度达96%以上.结论 体外采用含血清和无血清法相结合进行原代海马神经细胞培养,细胞纯度高,杂细胞少,可为神经疾病体外研究提供必要细胞基础. 展开更多
关键词 海马神经元 原代培养 细胞纯化 免疫细胞化学
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Simplified methods to isolate, culture and purify olfactory ensheathing cells 预览
16
作者 Zhengfeng Lu Yixin Shen +3 位作者 Peng Zhang Zhihai Fan Qirong Dong Min Wang 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2010年第19期1495-1499,共5页
Conventional methods for harvesting,culturing and purifying olfactory ensheathing cells are complicated,time-consuming,and poorly reproducible.Olfactory bulbs were detached from adult Sprague Dawley rats and olfactory... Conventional methods for harvesting,culturing and purifying olfactory ensheathing cells are complicated,time-consuming,and poorly reproducible.Olfactory bulbs were detached from adult Sprague Dawley rats and olfactory ensheathing cells were isolated using shearing,dispersion processes.After the primary cultures reached confluence,the cells were purified using a three-step process.The olfactory ensheathing cells attached and grew rapidly.The purity of the olfactory ensheathing cells increased following the three purification steps,eventually exceeding 95%.These cells could be maintained for an extended period time in culture.This simple,inexpensive,reproducible method of harvesting,culturing and purifying olfactory ensheathing cells shortens the culture cycle and provides sufficient olfactory ensheathing cells of controllable purity. 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 原代培养 细胞纯化 分离 可重复性 SD大鼠 分散过程 培养周期
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Human Elongator complex is involved in cell cycle and suppresses cell growth in 293T human embryonic kidney cells 被引量:1
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作者 Junxia Gu Dongmei Sun +5 位作者 Qiping Zheng Xiaochun Wang Huicui Yang Jingcheng Miao Jingting Jiang Wenxiang Wei 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2009年第10期831-838,共8页
Elongator 建筑群与 hyperphosphorylated RNA 聚合酶 II 被联系了并且被知道在 transcriptional 延伸,以及在 tRNA 修正和 exocytosis 起关键作用。然而,人的 Elongator 建筑群怎么调整细胞生长和细胞周期的特定的机制仍然保持不清... Elongator 建筑群与 hyperphosphorylated RNA 聚合酶 II 被联系了并且被知道在 transcriptional 延伸,以及在 tRNA 修正和 exocytosis 起关键作用。然而,人的 Elongator 建筑群怎么调整细胞生长和细胞周期的特定的机制仍然保持不清楚。在房间生长上调查人的 Elongator 建筑群和它的效果的作文, 293T 房间被建立那稳定地 overexpressed Flag-Elp3 和 Flag-Elp4。由使用反旗帜 M2 抗体界限树脂,核心 Elongator 建筑群从房间被净化那稳定地 overexpressed Flag-Elp3。没有 Elongator 建筑群稳定地从房间被净化有 pFlagCMV4-Elp4 的 transfected。有趣地,细胞生长与 pFlagCMV4-Elp3 在 293T 细胞 transfected 被禁止。流动 cytometry 分析证明大多数稳定地, overexpressing Flag-Elp3 在 G1 被发现的房间上演,显示在为房间周期的规定的 G1 检查点的核心 Elongator 的一个角色。我们观察到增加的基础抄写和显著地提高的抄写在 293T 房间 overexpressing Flag-Elp3 由 VP16 刺激了。抄写能被 overexpressing synergistically 也激活 Elp3 和 Elp4。一起拿,而 Elp4, Elp5,和 Elp6 可能泛泛地联系并且和核心 Elongator 工作调整房间功能,我们的结果建议 Elp1, Elp2,和 Elp3 形成的核心 Elongator 建筑群是相当稳定的。 展开更多
关键词 细胞周期调控 细胞生长 流式细胞仪分析 人胚 RNA聚合酶 过度表达 细胞纯化 转染细胞
成年大鼠嗅鞘细胞的分离培养及形态学研究 预览 被引量:1
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作者 宋哲 贺西京 刘仲凯 《美中国际创伤杂志》 2009年第2期 1-4,共4页
目的:探讨成年大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的分离培养和纯化方法,并观察其形态学变化及免疫组织学特性,为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富嗅鞘细胞来源奠定理论基础。方法:采用原代培养技术,从成年SD大鼠... 目的:探讨成年大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的分离培养和纯化方法,并观察其形态学变化及免疫组织学特性,为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富嗅鞘细胞来源奠定理论基础。方法:采用原代培养技术,从成年SD大鼠的嗅球分离培养嗅鞘细胞,用Nash差速贴壁法和阿糖胞苷抑制相结合的方法培养纯化,倒置相差显微镜下观察嗅鞘细胞的形态变化特点及其生长情况,并行神经生长因子受体(NGFRp75)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学染色鉴定以及纯度检测。结果:体外培养的成年大鼠嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞,其突起细长。未经纯化则成纤维细胞生长迅速而占据优势,而纯化培养后的嗅鞘细胞纯度可达90%以上。免疫细胞化学染色显示,培养的嗅鞘细胞呈现NGFRp75和GFAP染色阳性。结论:成年大鼠嗅鞘细胞的原代培养中细胞纯化是必要且必须的;而在脊髓损伤修复的研究中,Nash差速贴壁法和化学药物法不失为一种简单、经济、实用的嗅鞘细胞纯化方法。 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 细胞培养 细胞纯化
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小鼠输卵管上皮细胞的原代培养及纯化方法研究 预览 被引量:5
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作者 赵晓娥 兰杰 +3 位作者 王妍 杨培先 胡林勇 马保华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期 30-34,共5页
建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法。小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5g/L胰酶+0.4g/LEDTA消化5、10、20min;处理2以0.5g/L胰酶+0.08g/L EDTA消... 建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法。小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5g/L胰酶+0.4g/LEDTA消化5、10、20min;处理2以0.5g/L胰酶+0.08g/L EDTA消化35、50、75min;处理3以0.3g/L的Ⅰ型胶原酶消化60、90、240min;处理4以2.5g/L胰酶+0.4g/L EDTA和0.3g/L Ⅰ型胶原酶(1:2)消化60min,150min。原代细胞纯化采用差速贴壁和反复差速贴壁法。传代采用胰酶两步消化法进一步纯化输卵管上皮细胞。组织块法原代培养成纤维细胞生长优势明显,传代纯化细胞效果不佳。用酶消化法原代培养时,处理1效果不理想;处理2采用3个消化时间时均取得比较理想的结果;处理3消化240min时结果较好;处理4消化150min效果较好。原代细胞纯化,反复差速贴壁得到的上皮细胞较纯,进一步传代纯化细胞取得了理想的结果。小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用酶消化法结合反复差速贴壁分离纯化细胞,传代采用两步消化法,可以成功地进行小鼠输卵管上皮细胞的分离纯化培养。 展开更多
关键词 输卵管上皮细胞 细胞培养 细胞纯化 小鼠
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用于移植的嗅鞘细胞的纯化培养方法研究 预览 被引量:4
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作者 李佳 张旭 余清 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2009年第4期 289-292,共4页
目的探讨移植用成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方法。方法取成年SD大鼠嗅球,将分离消化所得细胞悬液进行接种。然后分别于接种后2h、6h和18h3个时间点进行单步骤差速贴壁法去除成纤维细胞,纯化嗅鞘细胞,纯化培养约11d时... 目的探讨移植用成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方法。方法取成年SD大鼠嗅球,将分离消化所得细胞悬液进行接种。然后分别于接种后2h、6h和18h3个时间点进行单步骤差速贴壁法去除成纤维细胞,纯化嗅鞘细胞,纯化培养约11d时采用神经生长因子受体P^25(NGFRP^75)和碘化丙啶(PI)双染OECs并对其纯度及细胞数量进行免疫荧光鉴定分析。结果纯化培养11d后在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,数量级达10^5/mL,形态以梭形、双极或三极突起为主,亦有少量多极或单极细胞。2h、6h和18h组嗅鞘细胞纯度分别为(53±5)%、(73±8)%和(69±13)%,组间差异有统计学意义(F=11.766,P〈0.001)。结论分别经2、6、18h单步骤差速贴壁法纯化的OECs在纯度和数量级上均可满足移植用细胞的要求,且方法简单、经济、快捷。 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 细胞纯化 差速贴壁法 细胞移植 嗅球
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