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miR-182在肺动脉高压患者中的表达分析及对HPVSMC细胞增殖的影响 预览
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作者 郭天聪 宁欣 +3 位作者 倪楠 孟晓丹 边明艳 薛运昕 《重庆医学》 CAS 2019年第2期229-232,共4页
目的研究miR-182在肺动脉高压(PAH)患者的差异性表达,探索其在PAH中的诊断及治疗中的辅助作用。方法收集该院2017年2月至2018年2月就诊的PAH患者30例为试验组,并选取同期健康体检者30例为对照组,采用荧光素酶报告基因检测miR-182,并研... 目的研究miR-182在肺动脉高压(PAH)患者的差异性表达,探索其在PAH中的诊断及治疗中的辅助作用。方法收集该院2017年2月至2018年2月就诊的PAH患者30例为试验组,并选取同期健康体检者30例为对照组,采用荧光素酶报告基因检测miR-182,并研究与肌细胞增强因子2C(MEF2C)靶向关系,采用Western blot方法验证miR-182对MEF2C蛋白的调控作用,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-182及MEF2C的相对表达水平,采用CCK8方法检测miR-182对肺动脉平滑肌细胞(HPVSMC)细胞增殖的作用。结果miR-182靶向结合于MEF2C的3′UTR区;与对照组比较,miR-182在试验组中高表达(0.963±0.148vs.2.347±0.220,P=0.006),而MEF2C在试验组中低表达(1.013±0.179vs.0.413±0.068,P=0.035);下调miR-182导致MEF2C蛋白表达增高(P=0.024);下调miR-182可抑制HPVSMC细胞增殖能力(P=0.019)。结论miR-182在PAH患者中上调,并通过调节MEF2C促进平滑肌细胞增殖,miR-182及MEF2C表达改变在PAH发病机制中起到一定的作用。 展开更多
关键词 miR-182 高血压 肺性 肌细胞 平滑 细胞增殖 肌细胞增强因子2C
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Wnt信号通路调控血管平滑肌细胞在脑血管病变中的研究进展 预览
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作者 唐海双 闫亚洲 +1 位作者 黄清海 刘建民 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期53-56,共4页
在现代社会,脑血管疾病的高发病率和高病死率严重威胁人类的健康。作为脑血管壁的主要成分,血管平滑肌细胞广泛地参与到血管粥样硬化、脑血管狭窄、颅内动脉瘤等疾病中。Wnt蛋白是一种保守的分泌蛋白,Wnt信号通路在调节平滑肌细胞的增... 在现代社会,脑血管疾病的高发病率和高病死率严重威胁人类的健康。作为脑血管壁的主要成分,血管平滑肌细胞广泛地参与到血管粥样硬化、脑血管狭窄、颅内动脉瘤等疾病中。Wnt蛋白是一种保守的分泌蛋白,Wnt信号通路在调节平滑肌细胞的增生、迁移、凋亡和分化的过程中发挥着重要作用,成为促进脑血管疾病发生的重要一环。该综述聚焦于Wnt信号通路与血管平滑肌细胞的关系,探讨Wnt信号通路在脑血管病变中的关键作用。 展开更多
关键词 WNT蛋白质类 肌细胞 平滑 信号通路 脑血管疾病 综述
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HO-1通过下调TLR4介导的炎性反应抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫样变 预览
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作者 尹延伟 孙倩倩 +5 位作者 沈勇 胡爱民 王琦 陈大伟 赵炫柱 石进 《重庆医学》 CAS 2019年第16期2701-2704,共4页
目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在血管平滑肌细胞(VSMCs)泡沫样变过程中的作用及可能的机制。方法用组织贴块法体外培养C57BL/6J背景野生型小鼠及TLR4基因敲除(TLR4^-/-)小鼠主动脉VSMCs;用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激VSMCs泡沫样变... 目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在血管平滑肌细胞(VSMCs)泡沫样变过程中的作用及可能的机制。方法用组织贴块法体外培养C57BL/6J背景野生型小鼠及TLR4基因敲除(TLR4^-/-)小鼠主动脉VSMCs;用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激VSMCs泡沫样变构建细胞模型,利用HO-1激动剂钴原卟啉(CoPPIX)及抑制剂锌卟啉(ZnPPIX)刺激模型细胞;用油红O染色观察VSMCs内脂质聚积情况;酶法检测VSMCs内胆固醇水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测VSMCs中HO-1、Toll样受体4(TLR4)表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测VSMCs培养液中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况,以探索HO-1在VSMCs泡沫样变过程中的具体作用。结果ox-LDL刺激VSMCs48h显著诱导VSMCs泡沫样变;ox-LDL诱导VSMCs泡沫样变过程中伴随着TLR4及其下游炎症因子IL-6、TNF-α表达的上调;而对于TLR4^-/-型VSMCs,ox-LDL刺激并不能有效诱导VSMCs泡沫样变及影响IL-6、TNF-α表达;激活HO-1显著抑制ox-LDL诱导的VSMCs泡沫样变,伴随着TLR4及其下游炎症因子IL-6、TNF-α表达的下调;而抑制HO-1进一步促进ox-LDL诱导的VSMCs泡沫样变,同时伴随着TLR4及其下游炎症因子IL-6、TNF-α表达的上调。结论HO-1的激活可通过下调TLR4介导的炎性反应抑制VSMCs泡沫细胞的形成。 展开更多
关键词 血红素加氧酶-1 Toll样受体4 平滑 血管 肌细胞 平滑 泡沫细胞
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莫西沙星增加哮喘大鼠气道平滑肌细胞Caveolin-1的表达
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作者 李慧婷 赵杰 +3 位作者 李海泉 施萍 张衍民 杜永亮 《国际呼吸杂志》 2019年第11期820-824,共5页
目的观察在莫西沙星作用下,支气管哮喘(哮喘)大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)小凹蛋白-1(Cav-1)蛋白及mRNA表达的变化,探讨莫西沙星对ASMC发挥抗炎调节的可能机制。方法用随机数字表法将40只SD大鼠随机分为正常组(10只)及哮喘组(30只)。复制... 目的观察在莫西沙星作用下,支气管哮喘(哮喘)大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)小凹蛋白-1(Cav-1)蛋白及mRNA表达的变化,探讨莫西沙星对ASMC发挥抗炎调节的可能机制。方法用随机数字表法将40只SD大鼠随机分为正常组(10只)及哮喘组(30只)。复制哮喘大鼠模型,体外传代培养正常及哮喘组大鼠ASMC,正常组作为空白对照组(A组)、哮喘组分为哮喘对照组(B组)、莫西沙星干预组(C组,莫西沙星5mg/L干预哮喘模型细胞)、地塞米松干预组(D组,地塞米松10-6mol/L干预哮喘模型细胞),均孵育48h后,分别应用Westernblot和qRT-PCR检测Cav-1蛋白水平及mRNA表达。结果Westernblot检测显示,B组Cav-1蛋白表达量(1.16±0.05)较A、C、D组[Cav-1蛋白表达量(3.56±0.05,2.86±0.11,3.01±0.17)]降低,差异有统计学意义(P值均<0.05)。C组与D组之间Cav-1蛋白表达量差异无统计学意义(P=0.172)。qRT-PCR结果显示B组Cav-1mRNA表达量(1.00±0.11)较A、C、D组[mRNA表达量分别为(3.26±0.22,2.68±0.11,2.93±0.05)]降低,差异有统计学意义(P值均<0.05),C组与D组之间Cav-1mRNA表达量差异无统计学意义(P=0.052)。结论莫西沙星可增加哮喘大鼠ASMCCav-1蛋白及mRNA表达,这可能与莫西沙星对ASMC发挥抗炎作用相关。 展开更多
关键词 肌细胞 平滑 莫西沙星 小凹蛋白-1
三苦滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤和心肌细胞凋亡的保护作用研究 预览
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作者 孙野 舒遵华 《重庆医学》 CAS 2019年第10期1665-1668,共4页
目的探究三苦滴丸对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤和心肌细胞凋亡的保护作用研究。方法取70只Wistar雄性大鼠,分为空白组(n=10)、模型组(n=10)、假手术组(n=10)、阳性对照组(复方丹参滴丸,n=10)、给药组(三苦滴丸),给药组再分为高、中、... 目的探究三苦滴丸对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤和心肌细胞凋亡的保护作用研究。方法取70只Wistar雄性大鼠,分为空白组(n=10)、模型组(n=10)、假手术组(n=10)、阳性对照组(复方丹参滴丸,n=10)、给药组(三苦滴丸),给药组再分为高、中、低剂量组,每组10只。阳性对照组、给药组用药7d,其他组给等量蒸馏水,除空白组外其他组小组行心肌缺血再灌注造模,观察各组大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平变化,采用Western blot法检测心肌Cleaved-Caspase3、Bcl-2基因表达,采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果与空白组比较,阳性对照组,假手术组,模型组,高、中、低剂量组的MDA、CK-MB水平均显著增高,而除假手术组外,其他组SOD水平均显著减低,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组的MDA、CK-MB水平显著低于中、低剂量组,SOD水平显著高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组,假手术组,高、中、低剂量组的Bcl-2水平均显著升高,而Cleaved-Caspase3、细胞凋亡数,NF-κB水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组的Cleaved-Caspase3、细胞凋亡数水平显著低于中、低剂量组,Bcl-2水平显著高于中、低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三苦滴丸能抑制I/R损伤后氧化应激,减轻全身炎性反应,提高心肌对抗I/R的能力,其通过作用Caspase蛋白、调控Bcl-2基因表达保护心肌细胞。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 再灌注损伤 中成药 血管细胞黏附因子-1
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左西孟旦调控磷酸酶基因蛋白激酶B通路降低猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞的凋亡 预览
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作者 张龙岩 鄢华 +5 位作者 宋丹 刘成伟 彭剑 苏晞 王琛 王江友 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期750-753,共4页
目的探讨左西孟旦能否通过调控磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)通路降低猪冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后心肌细胞的凋亡.方法选择12周龄健康小型猪1 5只,随机分为假手术组、CME组、左西孟旦组,每组5只.猪CME模型建... 目的探讨左西孟旦能否通过调控磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)通路降低猪冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后心肌细胞的凋亡.方法选择12周龄健康小型猪1 5只,随机分为假手术组、CME组、左西孟旦组,每组5只.猪CME模型建立,观察12h进行心脏超声检测,评估心功能的指标包括左心室舒张末期内径(LVEDD)、LVEF、心排血量及左心室短轴缩短率(LVFS).TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测PTEN、Akt、磷酸化Akt、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、活化caspase-3表达水平.结果与假手术组比较,CME组LVEDD明显升高,CME组和左西孟旦组LVEF、LVFS及心排血量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与CME组比较,左西孟旦组LVEF、LVFS及心排血量明显升高,LVEDD明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).与假手术组比较,CME组心肌细胞PTNE和活化caspase-3表达明显升高,CME组磷酸化Akt表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).与CME组比较,左西孟旦组心肌细胞PTNE和活化caspase-3表达明显降低(0.236±0.095 vs 0.485±0.135,0.364±0.196 vs 0.725±0.436,P<0.05),磷酸化Akt表达明显升高(0.972±0.467 vs 0.723±0.265,P<0.05).结论左西孟旦预处理可明显减少CME后心肌细胞凋亡并改善心功能,其机制可能是通过调控PTEN/Akt通路来实现. 展开更多
关键词 冠状动脉疾病 无复流现象 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 肌细胞 心脏 细胞凋亡
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心脏转录因子Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用 预览
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作者 麦丽萍 杨翔宇 +2 位作者 吴岳恒 何国东 李晓红 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第5期685-690,共6页
背景:大多数研究通过使用小分子物质或病毒等方式诱导获取心肌样细胞,而关于重组蛋白用于细胞重编程获得心肌样细胞的报道较少。目的:探讨Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用。方法:构建Nkx2.5原核表达载体,... 背景:大多数研究通过使用小分子物质或病毒等方式诱导获取心肌样细胞,而关于重组蛋白用于细胞重编程获得心肌样细胞的报道较少。目的:探讨Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用。方法:构建Nkx2.5原核表达载体,不同时间点诱导Nkx2.5重组蛋白表达和分离纯化。使用纳米转导试剂包裹Nkx2.5形成纳米-蛋白复合体,转染人骨髓间充质干细胞,观察蛋白转导效率;蛋白转导成功后,检测心肌细胞特异性标志MHC的表达,观察人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转化情况。结果与结论:①28℃IPTG诱导培养4h获取的蛋白表达量更高;②纳米-Nkx2.5复合体可成功转染人骨髓间充质干细胞并诱导其向心肌样细胞转化;③结果表明,重组蛋白能被高效转导到细胞内,并能促使人骨髓间充质干细胞重编程为心肌样细胞,但细胞转分化效率尚待提高。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 Nkx2.5重组蛋白 细胞重编程 纳米-蛋白复合体 细胞 细胞 骨髓 间质干细胞 转录因子 肌细胞 心脏 组织工程
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心脏发育及心脏病理性重构过程中 YAP/TAZ 介导的调控机制研究进展 预览
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作者 岳鹏 华益民 +2 位作者 周开宇 李一飞 吴刚 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2019年第1期103-108,共6页
心脏作为对于力学刺激极度敏感的器官,力学应力刺激在心脏发育及心脏病理性重构的过程中具有重要意义。随着近年研究的不断深入,力学信号的传导及相关调控机制越来越受到关注。其中,YAP/TAZ作为一对新近阐明的转录辅助激活因子,将细胞... 心脏作为对于力学刺激极度敏感的器官,力学应力刺激在心脏发育及心脏病理性重构的过程中具有重要意义。随着近年研究的不断深入,力学信号的传导及相关调控机制越来越受到关注。其中,YAP/TAZ作为一对新近阐明的转录辅助激活因子,将细胞内、外刺激对于心脏的调控联系在一起。已有研究结果证实,YAP/TAZ及相关的Hippo信号通路参与心肌细胞的发育及发展,并且参与心脏病理性重构及多种病理进程。笔者拟对心脏发育和心脏病理性重构中YAP/TAZ介导的调控机制进行综述。 展开更多
关键词 胚胎发育 心脏 YAP/TAZ 心脏扩大 肌细胞 心脏 心脏病理性重构 信号传导
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小檗碱通过NF-κB信号通路调控缺氧复氧心肌细胞损伤
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作者 张丽平 毛蕾芳 孙玉梅 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2019年第1期57-62,共6页
目的研究小檗碱对缺氧复氧心肌细胞损伤的影响。方法构建缺氧复氧心肌细胞损伤模型。将心肌细胞分成正常组(正常培养)、模型组(缺氧复氧处理)、小檗碱组(缺氧复氧处理前1h,添加50μmol/L的小檗碱预处理)、小檗碱+PMA组(缺氧复氧处理前1h... 目的研究小檗碱对缺氧复氧心肌细胞损伤的影响。方法构建缺氧复氧心肌细胞损伤模型。将心肌细胞分成正常组(正常培养)、模型组(缺氧复氧处理)、小檗碱组(缺氧复氧处理前1h,添加50μmol/L的小檗碱预处理)、小檗碱+PMA组(缺氧复氧处理前1h,添加50μmol/L的小檗碱和1μmol/L的NF-κB信号激活剂PMA预处理),免疫印迹检测各组细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达变化。用小檗碱及联合NF-κB信号激活剂处理缺氧复氧心肌细胞,MTT检测细胞增殖,二硝基苯肼显色法检测LDH漏出率,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡,免疫印迹检测Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平,黄嘌呤氧化法检测SOD活性,硫代巴比妥酸法检测MDA含量。结果缺氧复氧处理后的心肌细胞中NF-κBp65蛋白水平升高,细胞增殖活性降低,LDH漏出率升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高,SOD活性降低,MDA含量升高。小檗碱可以降低缺氧复氧条件下心肌细胞中NF-κBp65蛋白表达水平,提高细胞增殖活性,降低LDH漏出率,减少细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平,提高SOD活性并减少MDA含量。NF-κB信号激活剂处理可以逆转小檗碱对缺氧复氧心肌细胞增殖、LDH漏出率、凋亡及SOD、MDA水平的影响。结论小檗碱通过下调NF-κB信号激活水平抑制缺氧复氧心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 小檗碱 肌细胞 心脏 缺氧复氧 NF-ΚB
DHF对过氧化氢诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用 预览
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作者 卢畅 宋妤 +3 位作者 朱文珍 冯慢慢 李佳玮 韩晓华 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2019年第1期35-39,共5页
目的 探讨7,8-二羟基黄酮(DHF)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法 首先观察DHF对H2O2诱导的H9c2细胞损伤的保护作用(实验1),H9c2细胞分为对照组(无药物处理)、H2O2组(700μmol/L H2O2孵育24h)、DHF... 目的 探讨7,8-二羟基黄酮(DHF)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法 首先观察DHF对H2O2诱导的H9c2细胞损伤的保护作用(实验1),H9c2细胞分为对照组(无药物处理)、H2O2组(700μmol/L H2O2孵育24h)、DHF+H2O2组(1、5、10、20μmol/L DHF预处理1h,700μmol/L H2O2孵育24h)、DHF组(20μmol/L DHF孵育24h)。为观察各组Akt蛋白水平的改变(实验2),H9c2细胞分为对照组、H2O2组(700μmol/L H2O2孵育24h)、DHF+H2O2组(10μmol/L DHF预处理1h,余同H2O2组)、LY294002+DHF+H2O2组(先加入10μmol/L LY294002孵育30min,其余处理同DHF+H2O2组)、DHF组(10μmol/L DHF孵育24h)。为观察PI3K阻断剂LY294002对DHF保护作用的影响(实验3),实验分5组:前4组分组及处理方法同实验2,第5组为LY294002组(加入10μmol/L LY294002孵育24h)。采用MTT法测定各组细胞存活率,Western blot法检测p-Akt蛋白表达。结果 实验1结果表明,H2O2处理后细胞存活率降低至(54.1±5.8)%,而5~20μmol/L DHF发挥明显的细胞保护作用(n=6,F=16.50,q=1.95~4.76,P<0.05)。实验2结果显示,H2O2能显著减少p-Akt蛋白表达,而DHF预处理上调了p-Akt蛋白水平,该作用可被PI3K抑制剂LY294002所阻断,单独使用DHF对Akt的磷酸化无明显影响(n=3,F=18.67,q=6.17~10.47,P<0.01)。实验3结果表明,与对照组比较,H2O2组细胞存活率明显降低,该作用可被10μmol/L DHF所拮抗,而DHF的保护作用可部分被LY294002所阻断(n=6,F=44.75,q=8.52~17.16,P<0.01)。结论DHF对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤具有明显的保护作用,该作用可能与PI3K/Akt信号通路激活密切相关。 展开更多
关键词 7 8-二羟基黄酮 过氧化氢 氧化性应激 肌细胞 心脏
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体外研究小鼠心肌细胞自噬过程中人抗原R对溶酶体酸化的作用
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作者 林洁志 易若凡 +8 位作者 张星月 贾杰只 张琼 崔琳 杨雷 叶晶莹 张东霞 吕艳玲 黄跃生 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期169-178,共10页
目的探讨人抗原R在体外培养的小鼠心肌细胞自噬过程中对溶酶体酸化的作用。方法取1~2d龄C57BL/6小鼠(雌雄不限)20只,分离心脏培养原代心肌细胞,进行以下实验。(1)采用随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为5组,即正常对照组和无糖无血清... 目的探讨人抗原R在体外培养的小鼠心肌细胞自噬过程中对溶酶体酸化的作用。方法取1~2d龄C57BL/6小鼠(雌雄不限)20只,分离心脏培养原代心肌细胞,进行以下实验。(1)采用随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为5组,即正常对照组和无糖无血清0.5、1.0、3.0、6.0h组。正常对照组用DMEM/F12培养基常规培养(常规培养条件下同)54.0h,无糖无血清0.5、1.0、3.0、6.0h组常规培养53.5、53.0、51.0、48.0h后更换无糖无血清培养基分别处理0.5、1.0、3.0、6.0h,蛋白质印迹法检测细胞总蛋白中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白5、腺苷三磷酸酶V1区E1亚基(ATP6V1E1)蛋白表达。(2)将细胞分为正常对照组和无糖无血清3.0h组,相应各组细胞处理同实验(1),激光扫描共聚焦显微镜下观测细胞溶酶体酸化水平。(3)取2个批次细胞,均同实验(1)分组处理,蛋白质印迹法检测一个批次细胞总蛋白及另一个批次细胞胞质、胞核蛋白中人抗原R蛋白表达。(4)将细胞分为正常对照组、单纯对照小干扰RNA(siRNA)组、单纯人抗原R-siRNA1(HuR-siRNA1)组、单纯HuR-siRNA2组、无糖无血清3.0h组、无糖无血清+对照siRNA组、无糖无血清+HuR-siRNA1组、无糖无血清+HuR-siRNA2组。常规培养48h后,单纯对照siRNA组及无糖无血清+对照siRNA组加入阴性对照siRNA、单纯HuR-siRNA1组及无糖无血清+HuR-siRNA1组加入HuR-siRNA1、单纯HuR-siRNA2组及无糖无血清+HuR-siRNA2组加入HuR-siRNA2转染6h,8组均继续常规培养48h后,正常对照组及各单纯siRNA处理组更换DMEM/F12培养基、其余各组更换无糖无血清培养基培养3h,蛋白质印迹法检测细胞总蛋白中人抗原R蛋白表达。(5)取2个批次细胞,均分为无糖无血清+对照siRNA组、无糖无血清+HuR-siRNA1组,相应各组细胞处理同实验(4),免疫荧光法观测一个批次细胞人抗原R分布及表达,激光扫描共聚焦显微镜下观测另一批次细胞溶酶体 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 自噬 人抗原R 溶酶体酸化
体外研究瞬时受体电位香草酸亚型1对缺氧早期小鼠心肌细胞自噬的影响及机制
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作者 韦劲宇 崔琳 +8 位作者 林洁志 张琼 袁红萍 向飞 宋华培 贾杰只 吕艳玲 张东霞 黄跃生 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期186-192,共7页
目的初步探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对体外培养的缺氧早期小鼠心肌细胞自噬的影响及机制。方法取120只1~2d龄雌雄不拘C57BL/6小鼠,分离心脏培养原代心肌细胞,并进行如下实验,分组方法均按照随机数字表法。(1)将细胞分为常氧组... 目的初步探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对体外培养的缺氧早期小鼠心肌细胞自噬的影响及机制。方法取120只1~2d龄雌雄不拘C57BL/6小鼠,分离心脏培养原代心肌细胞,并进行如下实验,分组方法均按照随机数字表法。(1)将细胞分为常氧组及缺氧3、6、9h组,每组1孔。常氧组细胞行常规培养(下同),缺氧3、6、9h组细胞采用不含胎牛血清的DMEM无糖培养基于体积分数1%氧气、5%二氧化碳、94%氮气的低氧条件下分别培养3、6、9h。蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1及TRPV1的蛋白表达。(2)将细胞分为常氧组和缺氧组,每组2张盖玻片,其中缺氧组细胞同前缺氧处理6h。免疫荧光法检测TRPV1的阳性表达。(3)将细胞分为4组,每组1孔。单纯缺氧组细胞同前行缺氧处理6h;缺氧+0.1μmol/L辣椒素组、缺氧+1.0μmol/L辣椒素组、缺氧+10.0μmol/L辣椒素组细胞分别加入0.1、1.0、10.0μmol/L辣椒素处理30min后,行缺氧处理6h。蛋白质印迹法检测LC3、Beclin-1及TRPV1的蛋白表达。(4)将细胞分为5组,每组5孔。缺氧组细胞同前缺氧处理6h;缺氧+氯喹组、缺氧+辣椒素组、缺氧+辣椒素+氯喹组细胞分别加入50μmol/L氯喹、10.0μmol/L辣椒素、50μmol/L氯喹+10.0μmol/L辣椒素处理30min后缺氧处理6h。细胞计数试剂盒8法检测细胞活力。(5)将细胞分为单纯缺氧组及缺氧+10.0μmol/L辣椒素组,每组1孔,前者细胞同前缺氧处理6h;后者细胞加入10.0μmol/L辣椒素处理30min后,行缺氧处理6h。蛋白质印迹法检测溶酶体相关膜蛋白1(LAMP-1)、LAMP-2的蛋白表达。各实验重复3次或5次。对数据行单因素方差分析、LSD-t检验、Bonferroni校正。结果(1)与常氧组比较,缺氧3、6、9h组心肌细胞中LC3、Beclin-1、TRPV1蛋白表达明显增高(t3h=4.891、5.890、4.928,t6h=9.790、6.750、10.590,t9h=6.948、6.764、5.049,P<0.05或P<0.01);缺氧6h组3种蛋白表达最高,分别为1.08±0. 展开更多
关键词 自噬 缺氧 肌细胞 心脏 瞬时受体电位香草酸亚型1
罗格列酮联合依折麦布对脂化后血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的影响及可能机制的研究 预览
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作者 刘雅婧 马倩倩 +2 位作者 员旭红 李佳 申晓彧 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期240-244,共5页
目的探究罗格列酮联合依折麦布对脂化血管平滑肌细胞(SMC)胆固醇含量的影响及可能机制。方法将原代大鼠胸主动脉SMC分空白对照组、泡沫细胞组、依折麦布3.0、10.0、30.0μmol/L组、罗格列酮组(25.0μmol/L)、联合组(罗格列酮25.0μmol/L... 目的探究罗格列酮联合依折麦布对脂化血管平滑肌细胞(SMC)胆固醇含量的影响及可能机制。方法将原代大鼠胸主动脉SMC分空白对照组、泡沫细胞组、依折麦布3.0、10.0、30.0μmol/L组、罗格列酮组(25.0μmol/L)、联合组(罗格列酮25.0μmol/L+依折麦布30.0μmol/L)。采用酶荧光法检测各组细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)的含量,并计算胆固醇酯(CE)值。RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达,Western blot检测LXRα和ABCA1蛋白表达量。结果泡沫细胞组较空白对照组LXRα和ABCA1mRNA(0.2980±0.0247 vs 1.0010±0.0554,0.3022±0.0266 vs 1.0009±0.0526)以及蛋白表达均减少(P<0.05),TC、FC和CE含量显著增加(P<0.05);与泡沫细胞组比较,依折麦布组3.0、10.0、30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白表达均增加,依折麦布组则呈现浓度依赖性;依折麦布组30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组TC、FC和CE含量减少(P<0.05);且联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白增加更为明显(P<0.05)。结论罗格列酮与依折麦布联合,显著减少细胞内胆固醇含量,增加SMC内的胆固醇逆转运效率,其机制可能与LXRα-ABCA1通路有关。 展开更多
关键词 血脂异常 肌细胞 平滑 胆固醇 泡沫细胞 载脂蛋白A-Ⅰ ATP结合匣式转运子
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Herpud1蛋白在同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞表型转化中的作用
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作者 林辉 张杰 +5 位作者 孟立平 倪婷娟 高飞丹 池菊芳 郭航远 许富康 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期561-569,共9页
目的探讨同型半胱氨酸诱导内质网应激诱导的泛素样结构域1蛋白(Herpud1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法取雄性SpragueDawley大鼠胸主动脉,改良组织贴块法分离VSMC并进行培养,取第4~7代的VSM... 目的探讨同型半胱氨酸诱导内质网应激诱导的泛素样结构域1蛋白(Herpud1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法取雄性SpragueDawley大鼠胸主动脉,改良组织贴块法分离VSMC并进行培养,取第4~7代的VSMC用于实验.为明确Hcy能否诱导VSMC发生表型转化,将VSMC分为4组,即对照组以及Hcy100、500和1000μmol/L组.为明确内质网应激(ERS)是否参与VSMC表型转化,将VSMC分为3组,即对照组、Hcy500μmol/L组(Hcy组)和Hcy+4-苯基丁酸钠盐(4-PBA)2mg/ml组(Hcy+4-PBA组).为进一步验证Herpud1在VSMC表型转化中的作用,将VSMC分为对照组、Hcy组、Hcy+siRNA阴性对照(scrambled)组和Hcy+Herpud1siRNA组.免疫荧光法观察VSMC形态学变化和Herpud1蛋白改变.Westernblot法检测VSMC表型转化相关标志蛋白骨桥蛋白、钙调节蛋白(Calponin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC),ERS相关蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)、丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶/内切核糖核酸酶肌醇需要酶1(IRE-1)、葡萄糖调节蛋白质78(GRP78)以及Herpud1蛋白的表达水平.实时荧光定量PCR法检测VSMCHerpud1mRNA的表达水平.结果(1)不同浓度Hcy对VSMC表型转化的影响:免疫荧光结果示,对照组VSMC成长梭形,肌丝明显,成束状分布,极性明显;干预24h后,Hcy100μmol/L组可见VSMC不同程度地变成椭圆形,肌丝分布紊乱,但仍具有一定极性;干预24h后,Hcy500μmol/L组VSMC肌丝不明显、极性缺失,而Hcy1000μmol/L组VSMC改变则与Hcy100μmol/L组类似.Westernblot结果显示,Hcy100μmol/L组VSMC骨桥蛋白表达水平高于对照组,SM-MHC表达水平则低于对照组(P均<0.05);Hcy500μmol/L组VSMC骨桥蛋白表达水平高于Hcy100μmol/L组,Calponin和SM-MHC表达水平则低于Hcy100μmol/L组(P均<0.05),而Hcy1000μmol/L组以上改变趋势不如500μmol/L明显.(2)ERS在VSMC表型转化中的作用:干预24h后,Hcy100、500和1000μmol/L组VSMCCHOP、IRE-1和GRP78蛋白表达水平均高于对照组(P均 展开更多
关键词 血管 肌细胞 平滑 高半胱氨酸 Herpud1
经皮消融治疗肾血管平滑肌脂肪瘤应用进展 预览
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作者 李新飞 林乐涛 +1 位作者 宋莉 邹英华 《中国介入影像与治疗学》 北大核心 2019年第7期430-433,共4页
肾血管平滑肌脂肪瘤(AML)是肾脏良性肿瘤,对有症状或病灶直径>4cm患者,既往推荐采用部分肾切除术和选择性动脉栓塞术进行治疗。近年来,经皮消融疗法用于治疗肾AML,具有对肾功能影响小、并发症少、复发率低等优点,但证据尚不充分。本... 肾血管平滑肌脂肪瘤(AML)是肾脏良性肿瘤,对有症状或病灶直径>4cm患者,既往推荐采用部分肾切除术和选择性动脉栓塞术进行治疗。近年来,经皮消融疗法用于治疗肾AML,具有对肾功能影响小、并发症少、复发率低等优点,但证据尚不充分。本文主要对射频消融、微波消融和冷冻消融治疗肾AML的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 肾肿瘤 脂肪瘤 肌细胞 平滑 血管 导管消融术
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心肌缺氧状态下间充质干细胞对巨噬细胞M2极化的影响及其机制研究 预览
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作者 彭智勇 赵吉玲 +1 位作者 张烨 余国龙 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第10期1-9,共9页
目的探讨心肌缺氧状态下间充质干细胞(MSC)对巨噬细胞极化的影响,并揭示其调控巨噬细胞极化的机制。方法在M0型巨噬细胞培养液中加入无糖无氧培养的心肌细胞上清液,与MSC共培养。采用流式细胞术、Western blotting及逆转录聚合酶链反应... 目的探讨心肌缺氧状态下间充质干细胞(MSC)对巨噬细胞极化的影响,并揭示其调控巨噬细胞极化的机制。方法在M0型巨噬细胞培养液中加入无糖无氧培养的心肌细胞上清液,与MSC共培养。采用流式细胞术、Western blotting及逆转录聚合酶链反应检测M1/M2型巨噬细胞生物学标志,以判断MSC在模拟心肌缺氧状态下对巨噬细胞极化的影响,并观察MSC对巨噬细胞髓样分化因子88及其上游TLR2、TLR4受体表达的影响,以及其下游的细胞核转录因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路磷酸化的水平。结果与M0组比较,模拟心肌缺氧状态下培养的M0巨噬细胞成功诱导M1极化(P<0.05);与MSC共培养促进M1向M2极化(P<0.05)。同等条件下加入不同浓度髓样分化因子88抑制剂后,与M0+OGD组比较,M2型巨噬细胞比例随着ST2825剂量的增加逐渐升高(P<0.05)。与M0+OGD组比较,M0+OGD+MSC组白细胞介素10、转化生成因子-β1表达水平升高(P<0.05)。Western blotting检测显示MSC共培养后,巨噬细胞TLR2、TLR4及髓样分化因子88表达下调,其下游的NF-κB和MAPK信号通路标志分子P65、IKKAα/β、JNK1/2、P38、ERK1/2等磷酸化水平降低。结论在心肌缺氧状态下,MSC促进巨噬细胞M2极化。其机制之一可能是MSC下调巨噬细胞TLR2、TLR4及髓样分化因子88表达,抑制TLR2/4-髓样分化因子88信号及其下游的NF-κB和MAPK通路。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 间充质干细胞 巨噬细胞
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微小RNA-1在心脏发育中的作用及机制
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作者 李浴萱 夏颖 +3 位作者 张晓晨 王雨晨 陈涛 姜岩 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期581-584,共4页
微小RNA-1(miRNA-1)在肌肉组织中特异性表达,其异常表达见于心肌梗死和心律失常等心脏疾病.近期研究表明,miRNA-1参与心肌分化及心脏发育,因而可能在先天性心脏病的发生过程中发挥重要作用.除作为重要的生物标志物外,miRNA-1还可能是心... 微小RNA-1(miRNA-1)在肌肉组织中特异性表达,其异常表达见于心肌梗死和心律失常等心脏疾病.近期研究表明,miRNA-1参与心肌分化及心脏发育,因而可能在先天性心脏病的发生过程中发挥重要作用.除作为重要的生物标志物外,miRNA-1还可能是心脏分化异常的潜在干预目标.本文综述miRNA-1对心脏发育的调控机制,论述miRNA-1主要的作用靶标以及其影响的信号通路. 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 微小RNA-1 心脏发育
微小RNA-21在心脏疾病中的研究进展 预览
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作者 杨坤 胡晓晟 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期214-218,共5页
心肌凋亡、心脏肥大、心肌纤维化和心房电重构等病理过程参与了绝大部分心脏疾病的发生和发展,阐明其中病理机制有助于心脏疾病的诊断和治疗。近年研究发现,微小RNA-21(miR-21)作为一类新型内源性调节因子,具有抑制心肌细胞凋亡、改善... 心肌凋亡、心脏肥大、心肌纤维化和心房电重构等病理过程参与了绝大部分心脏疾病的发生和发展,阐明其中病理机制有助于心脏疾病的诊断和治疗。近年研究发现,微小RNA-21(miR-21)作为一类新型内源性调节因子,具有抑制心肌细胞凋亡、改善高血压和心脏肥大、促进心肌纤维化进展、促进心房电重构等作用。本文就miR-21在心脏疾病中的作用和机制研究进展进行综述,并初步探讨miRNA作为心脏疾病临床诊断标志物和治疗靶点的应用前景。 展开更多
关键词 微RNA 基因表达 心脏扩大 肌细胞 心脏 细胞凋亡 心脏病/治疗 心脏病/诊断 综述
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NLRP3介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
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作者 岳荣川 卢圣忠 +7 位作者 罗瑜 曾静 梁豪 王小波 秦丹 杨小利 胡厚祥 曾春雨 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期471-478,共8页
目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法为明确缺氧/复氧是否会引起细胞焦亡,采用抓阄法将H9c2心肌细胞随机分为2组:对照组(细胞不予缺氧/复氧处理)和缺氧/复氧组(细胞... 目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法为明确缺氧/复氧是否会引起细胞焦亡,采用抓阄法将H9c2心肌细胞随机分为2组:对照组(细胞不予缺氧/复氧处理)和缺氧/复氧组(细胞进行缺氧/复氧处理);为了明确焦亡在缺氧/复氧损伤中的作用,采用抓阄法将细胞随机分为4组:对照组(细胞正常培养)、YVAD组[用含有20 μm Z-缬氨酸-丙氨酸-消旋天冬氨酸(甲酯)-氟甲基酮(Z-YVAD-FMK)的培养基预处理4 h后,换普通培养基正常培养]、缺氧/复氧组(细胞进行缺氧/复氧处理)和YVAD+缺氧/复氧组(用含有20 μm Z-YVAD-FMK的培养基处理4 h后,再进行缺氧/复氧处理);为明确缺氧/复氧诱导的细胞焦亡是否与NLRP3有关,采用抓阄法将细胞随机分为4组:对照组[培养基中加入非特异性小干扰RNA(si-RNA)]、si-NLRP3组(培养基中加入NLRP3的si-RNA)、缺氧/复氧组(对培养基中加入非特异性si-RNA的细胞进行缺氧/复氧处理)和si-NLRP3+缺氧/复氧组(对培养基中加入NLRP3 si-RNA的细胞进行缺氧/复氧处理)。采用碘化丙啶(PI)染色检测细胞膜上的孔隙形成,采用CCK8法检测细胞活力,采用Western blot检测NLRP3、焦亡相关蛋白Caspase-1和白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平。结果(1)缺氧/复氧组PI染色阳性率[(26.46±5.15)%比(1.69±0.73)%]、NLRP3(0.57±0.16比0.23±0.06)、Caspase-1(1.07±0.13比0.37±0.08)和IL-1β(0.38±0.08比0.16±0.05)蛋白表达水平均高于对照组(P均<0.01)。(2)YVAD+缺氧/复氧组细胞活力高于缺氧/复氧组[(87.31±9.05)%比(73.30±7.19)%,P<0.05],PI染色阳性细胞率低于缺氧/复氧组[(18.12±4.36)%比(26.45±4.60)%,P<0.05],Caspase-1(0.72±0.12比1.07±0.15,P<0.05)和IL-1β(0.29±0.07比0.39±0.06,P<0.05)蛋白表达水平均低于缺氧/复氧组。(3)si-NLRP3+缺氧/复氧组细胞活力高于缺氧/复氧组[(85.46±7.71)%比(72.41±5.53)%,P<0.05],PI染色� 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 缺氧/复氧 焦亡
肝肺综合征大鼠血清诱导肺动脉平滑肌细胞增殖时Talin1和F-actin表达的变化
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作者 陈杨 陈林 +4 位作者 杨勇 张铭 鲁开智 吴艳 陆军 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期471-474,共4页
目的评价肝肺综合征(HPS)大鼠血清诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖时踝蛋白1(Talin1)和F-肌动蛋白(F-actin)表达的变化。方法雄性SD大鼠20只,体重220~250 g,采用慢性胆总管结扎法制备HPS模型,取腹主动脉血样制备血清。将原代培养的大... 目的评价肝肺综合征(HPS)大鼠血清诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖时踝蛋白1(Talin1)和F-肌动蛋白(F-actin)表达的变化。方法雄性SD大鼠20只,体重220~250 g,采用慢性胆总管结扎法制备HPS模型,取腹主动脉血样制备血清。将原代培养的大鼠PASMCs接种于6或96孔板,采用随机数字表法分为2组:对照组(C组)和HPS组,每组24孔(6孔板)或30孔(96孔板)。C组加入正常大鼠血清,HPS组加入HPS大鼠血清,终浓度为5%。分别于细胞孵育24、48和72 h时,采用Western blot法测定Talin1、F-actin和G-actin的表达水平,计算F-actin/G-actin比值;采用3H-TdR掺入法和CCK-8法测定PASMCs增殖水平。结果与C组比较,HPS组PASMCs增殖增强,Talin1表达上调,F-actin/G-actin比值升高(P<0.05)。HPS组随孵育时间延长,PASMCs增殖逐渐增强,Talin1表达逐渐上调,F-actin/G-actin比值逐渐升高(P<0.05)。结论HPS大鼠血清诱导PASMCs增殖的机制可能与上调Talin1和F-actin的表达有关。 展开更多
关键词 肝肺综合征 肌细胞 平滑 肺动脉 踝蛋白 动蛋白类
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