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改良无血清培养基对贴壁细胞体外培养的影响
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作者 纪丽 邹奕苏 +3 位作者 殷莹 龚玲丽 汪京京 邹健 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期726-730,共5页
目的观察改良的无血清培养基对体外贴壁培养的肿瘤细胞和正常细胞生物学表型的影响,探讨以无血清培养基为基础的培养方案用于贴壁细胞培养的可行性。方法培养人和大鼠多种肿瘤细胞和正常细胞株,分为无血清培养基组(DOBA)和有血清培养基... 目的观察改良的无血清培养基对体外贴壁培养的肿瘤细胞和正常细胞生物学表型的影响,探讨以无血清培养基为基础的培养方案用于贴壁细胞培养的可行性。方法培养人和大鼠多种肿瘤细胞和正常细胞株,分为无血清培养基组(DOBA)和有血清培养基组(D10),无血清培养基以等体积杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)高糖和减血清(Opti-MEM)培养基为基础,加入2% B-27和1%非必需氨基酸,有血清培养基用DMEM培养基添加10%胎牛血清。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同培养基对细胞正常生长和增殖的影响,或评估细胞对20 ng/ml表皮生长因子(EGF)和25 μmol/L Wnt通路小分子抑制剂(iCRT3)的敏感性,膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,克隆形成实验观察对细胞长期培养的影响。结果无血清组细胞均能正常生长和扩增,培养72 h后,A172、C6细胞的相对增殖率分别为(2.49±0.08)%比(2.10±0.07)%、(6.91±0.40)%比(2.97±0.27)%,DOBA组细胞增殖明显减弱(P<0.01),Hela和HREC细胞相对增殖率分别为(4.59±0.70)%比(6.01±0.31)%、(2.84±0.33)%比(3.95±0.20)%,DOBA组细胞增殖能力明显增强(P<0.01),SW480和U87细胞增殖差异无统计学意义(P>0.05);EGF刺激48 h后,U251和HUNEC增殖率是D10组的(1.29±0.03)倍和(1.18±0.08)倍,iCRT3刺激48 h后,HCT116和SW480细胞增殖率为D10组的(90±2)%和(78±10)%,所以DOBA组细胞对EGF或iCRT3刺激的敏感性高于有血清组(P<0.05,P<0.01);与有血清培养基比较,DOBA不影响细胞凋亡(P>0.05),长期培养能形成细胞克隆集落,但克隆数和单个克隆的细胞数均较有血清组少,培养10~14 d后,Hela、SW480和U251细胞克隆数分别为(368±29)个比(300±6)个、( 396±13)个比(324±13)个以及(372±9)个比(251±12)个(P<0.05,P<0.01)。结论DOBA无血清培养基可以维持贴壁培养的肿瘤和正常细胞的自我更新,可实现长时间培养和传代而不增加细胞凋亡比例,并且� 展开更多
关键词 无血清培养基 增殖 药物刺激 作用 长期培养
米诺环素对大鼠脑出血后细胞凋亡及Dickkopf-1、B细胞淋巴瘤/白血病-相关X蛋白和B细胞淋巴瘤/白血病表达的影响
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作者 岳赛超 郭付有 +2 位作者 孙逸杰 王国庆 宋来君 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期90-93,共4页
目的 观察米诺环素对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及Dickkopf-1(DKK-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达的影响。方法采用随机数字法将54只成年雄性SD大鼠分成假手术组(n=18)、脑出血组(n=18)及米... 目的 观察米诺环素对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及Dickkopf-1(DKK-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)表达的影响。方法采用随机数字法将54只成年雄性SD大鼠分成假手术组(n=18)、脑出血组(n=18)及米诺环素组(n=18)。通过颅内注射Ⅶ型胶原酶制作脑出血模型。采用平衡木行走实验、转身实验进行脑出血模型评估,并利用免疫组织化学检测大鼠脑组织中bcl-2、bax及DKK-1蛋白表达水平。利用原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡实验检测大鼠脑出血周围脑组织的细胞凋亡水平。结果脑出血组(4.11±0.75)及米诺环素组(4.28±0.86)大鼠平衡木行走得分及转身实验百分比均高于假手术组(0.50±0.51,P<0.01)。与假手术组比较,各时间点(1、3、7 d)脑出血组的大鼠脑出血部位周围脑组织bcl-2(P<0.05)、bax(均P<0.01)及DKK-1(均P<0.01)表达升高;与假手术组比较,各时间点(1、3、7 d)脑出血组的大鼠脑出血部位周围脑组织bcl-2(36.50±1.54、49.15±2.71、18.76±1.36,P<0.05),bax(41.75±2.46、62.15±1.24、26.54±3.86,P<0.05)及DKK-1(56.48±3.25、70.74±3.23、41.12±2.50,P<0.05)表达也升高。而与脑出血组比较,米诺环素组大鼠出血部位周围脑组织bcl-2表达升高(P<0.05),而bax(P<0.05,P>0.05,P<0.05)及DKK-1(P<0.05)表达下降。与假手术组比较,各时间点(1、3、7 d)脑出血组大鼠出血部位周围脑组织凋亡细胞镜下计数升高[(32.54±5.23)、(45.64±4.84)、(28.26±2.79)个,均P<0.01],而经米诺环素治疗后脑出血部位周围脑组织凋亡细胞显著下降[(15.43±3.04)、(23.15±2.49)、(17.68±4.54)个,P<0.05],同时伴有行为学功能改善:转身运动测验评分(1、3、7 d)优于脑出血组(均P<0.01)。结论 米诺环素通过减少神经细胞凋亡对大鼠脑出血发挥脑保护作用,其分子机制可能是通过减少DKK-1表达来促进bcl-2和抑制bax表达有关。 展开更多
关键词 脑出血 DICKKOPF-1 B细胞淋巴瘤/白血病-2相关x蛋白 B细胞淋巴瘤/白 血病-2 作用 米诺环素
丙氨酸-乙醛酸转氨酶2类似物1对人肝癌97H和HCCLM3细胞增殖、凋亡和周期的影响
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作者 李志坚 贺德 +2 位作者 马广念 李蒙 邓思远 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期248-250,共3页
目的 观察丙氨酸-乙醛酸转氨酶2类似物1(AGXT2L1)对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的调控作用。方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌细胞株97H、HCCLM3和正常肝细胞株LO2中AGXT2L1的表达水平;设计并构建AGXT2L1的靶向siRNA,将A... 目的 观察丙氨酸-乙醛酸转氨酶2类似物1(AGXT2L1)对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的调控作用。方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌细胞株97H、HCCLM3和正常肝细胞株LO2中AGXT2L1的表达水平;设计并构建AGXT2L1的靶向siRNA,将AGXT2L1-siRNA转染97H和HCCLM3细胞株构建AGXT2L1靶向敲低组和阴性对照组,通过RT-qPCR验证敲低效果;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组细胞在0、12、24、48、72、96 h的增殖能力;采用流式细胞周期实验检测各组细胞在G1、S、G2期的分布情况;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测各组细胞的凋亡率。结果 AGXT2L1在肝癌97H和HCCLM3细胞中相对表达高于正常肝细胞LO2(1 350.04±91.36、1 710.64±92.34,t97H=25.574,P<0.01;tHCCLM3=32.068,P<0.01)。转染AGXT2L1-siRNA后,对比对照组及空白组,肝癌97H和HCCLM3细胞内AGXT2L1相对表达量明显降低(0.19±0.04比1.10±0.04,t97H=-28.722,P<0.01;0.20±0.01比0.93±0.09,tHCCLM3=-13.887,P<0.01)。CCK-8实验结果显示,敲低AGXT2L1后,97H和HCCLM3细胞的增殖率明显下降(0.71±0.01比0.95±0.12,t97H=-31.243,P<0.01;0.67±0.13比0.87±0.17,tHCCLM3=-17.083,P<0.01),差异有统计学意义。细胞周期实验结果显示,干扰AGXT2L1表达后,S期细胞比例低于对照组[(13.45±1.20)%比(18.73±0.28)%,t97H=-7.451,P<0.01;(15.26±0.52)%比(20.45±1.08)%,tHCCLM3=-7.483,P<0.01];G2期细胞比例低于对照组[(16.90±0.54)%比(19.99±0.54)%,t97H=-6.992,P<0.01;(16.23±0.28)%比(23.36±0.39)%,tHCCLM3=-25.720,P<0.01],抑制细胞从G1期向S期转变,抑制肝癌细胞增殖。细胞凋亡实验显示:干扰AGXT2L1表达后,97H和HCCLM3细胞凋亡率明显升高[(13.06±1.86)%比(1.06±0.75)%,t97H=14.673,P<0.01;(14.41±2.21)%比(0.80±0.32)%,tHCCLM3=14.947,P<0.01],差异有统计学意义。结论 敲低AGXT2L1的表达抑制肝癌97H和HCCLM3细胞株增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝细胞 丙氨酸-乙醛酸转氨酶2类似物1 增殖 作用
混合脐血间充质干细胞体外抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡
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作者 焦红亮 王晓宁 +1 位作者 杜伟 杨波 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期873-876,共4页
目的探讨脐带血衍生间质干细胞(UCB-MSCs)体外抑制C6胶质瘤细胞增殖、诱导凋亡的机制。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测C6细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/... 目的探讨脐带血衍生间质干细胞(UCB-MSCs)体外抑制C6胶质瘤细胞增殖、诱导凋亡的机制。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测C6细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和Caspase-3 mRNA水平,膜联蛋白V(Annexin V)-碘化丙锭(PI)双染法检测细胞凋亡。结果混合UCB-MSCs在转录水平上有使Caspase-8、bax、Caspase-3 mRNA表达增高的趋势,bcl-2 mRNA表达降低的趋势。促凋亡蛋白表达量和凋亡细胞数随E/T(E:效应细胞即UCB-MSCs,T:靶细胞即C6细胞)的比例增高而增高,呈现比例依赖关系;E∶T=(5+5)∶1,RT-PCR检测C6细胞Caspase-8、bax、bcl-2和Caspase-3 mRNA相对表达量分别为0.78±0.13、0.28±0.03、0.70±0.08、0.76±0.12。当E/T=0∶1、5∶1、(2.5+2.5)∶1、10∶1、(5+5)∶1时,Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)和PI双染色检测凋亡C6细胞数量分别为(2.9±0.6)、(3.1±0.5)、(14.5±1.8)、(14.3±2.2)、(22.8±4.5)个。结论经植物凝集素(PHA)刺激后,大剂量UCB-MSCs和混合UCB-MSCs都对体外C6细胞具有抑制增殖作用,而且这种抑制作用可能与诱导凋亡明显相关。 展开更多
关键词 胶质瘤 脐血 间充质干细胞 作用 增殖
丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在肝癌细胞生物学功能中的作用
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作者 余细兵 兰超智 +3 位作者 陈玉冰 吕军 何松青 袁观斗 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期643-646,共4页
目的检测丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)在肝癌细胞及正常肝组织中的表达,并探索其对肝癌细胞生物学功能的影响。方法通过检测九种肝癌细胞株及正常肝组织STRAP相对表达量,并分别在肝癌细胞株HepG2、SNU449中构建STRAP过表达及... 目的检测丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)在肝癌细胞及正常肝组织中的表达,并探索其对肝癌细胞生物学功能的影响。方法通过检测九种肝癌细胞株及正常肝组织STRAP相对表达量,并分别在肝癌细胞株HepG2、SNU449中构建STRAP过表达及敲减细胞株。使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹技术检测细胞株构建后STRAP表达,用Transwell小室及含有基质胶的Transwell小室检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力,并使用细胞计数试剂盒(CCK-8)及细胞克隆形成实验检测STRAP对肝癌细胞增殖能力的影响,并利用流式细胞学技术检测STRAP对肝癌细胞凋亡的影响。结果肝癌细胞株中STRAP表达水平明显高于正常肝组织;在肝癌细胞中STRAP敲减后,敲减组与对照组mRNA相对表达量分别为(0.17±0.19)、(2.22±1.02),敲减组表达水平明显低于对照组(P<0.05)。过表达STRAP基因后,过表达组与对照组mRNA相对表达量分别为(3.25±0.39)、(1.05±0.37),过表达组明显高于对照组(P<0.01)。STRAP基因敲减后,SNU449细胞克隆形成实验对照组和敲减组细胞克隆数目分别为(221.30±9.60)、(58.30±4.49),迁移实验对照组和敲减组细胞穿膜数分别为(0.76±0.04)、(0.44±0.06),侵袭实验对照组和敲减组细胞穿膜数分别为(1.11±0.05)、(0.60±0.05),细胞增殖实验敲减组在第72、96、120小时,细胞增殖数目较对照组下降,细胞凋亡实验对照组和敲减组细胞凋亡比例分别(4.11±0.12)、(11.73±0.40),细胞的克隆形成能力、迁移侵袭能力及增殖能力明显受抑制(P<0.05),细胞凋亡明显增多(P<0.01);SRTAP基因过表达后,HepG2细胞在第48、72、96、120小时,细胞增殖数目较对照组增多,细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡实验对照组和过表达组细胞凋亡比例分别(8.87±0.12)、(8.34±0.06),细胞凋亡明显受抑制(P<0.05)。结论STRAP在肝癌细胞中呈高表达,并且起着促进肝癌细胞� 展开更多
关键词 肝细胞 丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白 增殖 作用 转移
N-乙酰氨基半乳糖转移酶14通过细胞外信号调节激酶1/2信号通路调控多形性胶质母细胞瘤凋亡的机制
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作者 郝书锋 吴建粱 +2 位作者 王程业 王刘帅 扈玉华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1062-1065,共4页
目的探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(GalNAc-T14)在胞内高表达促进多形性胶质母细胞瘤凋亡的机制。方法培养多形性胶质母细胞瘤U87MG细胞株,构建的pcDNA3.1-T14质粒转染U87MG细胞,分为未处理组(Control组)、转染pcDNA3.1(+)空载体组(NC1... 目的探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(GalNAc-T14)在胞内高表达促进多形性胶质母细胞瘤凋亡的机制。方法培养多形性胶质母细胞瘤U87MG细胞株,构建的pcDNA3.1-T14质粒转染U87MG细胞,分为未处理组(Control组)、转染pcDNA3.1(+)空载体组(NC1组)、转染pcDNA3.1-T14组(T组),采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测GalNAc-T14、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表达、ERK1/2的磷酸化水平;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染色的方法,在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况。应用SPSS 13.0统计软件分析,计量资料均值±标准差(Mean±SD)表示。结果质粒转染前GalNAc-T14、ERK1/2、bcl-XL相对表达量为1,在U87MG细胞内高表达GalNAc-T14相对量为(15393.43±30.35)。qPCR显示ERK1、ERK2、bcl-XL的mRNA相对表达量:NC1组为(0.98±0.12)、(0.91±0.05)、(0.89±0.11),T组为(0.74±0.29)、(0.68±0.31)、(0.68±0.23),T组ERK1/2与抗凋亡蛋白bcl-XL的基因表达水平较对照组下降;Westernblot分析显示:Control组、NC1组、T组ERK1/2的灰度值分别为(85.42±3.11、86.25±4.25、66.36±4.25),抗凋亡蛋白bcl-XL的灰度值为(82.57±3.71、79.52±3.78、46.85±4.52)。通过Annexin V-FITC/PI双染色的方法,在流式细胞仪上检测细胞凋亡显示高表达GalNAc-T14时U87MG细胞株早期凋亡与晚期凋亡的百分数分别为(7.74±1.23)%、(10.08±2.41)%,高于对照组(1.12±0.18)%、(0.51±0.14)%及NC1组(1.37±0.12)%、(0.90±0.08)%,差异有统计学意义(t=3.417,P<0.05)。结论GalNAc-T14通过抑制ERK1/2及bcl-XL的表达促进多形性胶质母细胞瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 多形性胶质母细胞瘤 N-乙酰氨基半乳糖转移酶14 细胞外信号调节激酶通路 作用
微小RNA-206抑制恶性胸膜间皮瘤细胞增殖的作用
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作者 石珍亮 张逊 孙大强 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期492-495,共4页
目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-206对恶性胸膜间皮瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法在H513、H2052和H2373等3种不同恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞株中通过转染引入一种miR-206的分子模拟物来过表达这种miRNA:(1)通过结晶紫染色实验分析转染... 目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-206对恶性胸膜间皮瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法在H513、H2052和H2373等3种不同恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞株中通过转染引入一种miR-206的分子模拟物来过表达这种miRNA:(1)通过结晶紫染色实验分析转染后的MPM细胞的增殖变化;(2)通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测与细胞周期稳态和凋亡相关的基因变化;(3)通过基因敲除实验和PCR分析miR-206抑制作用可能的分子机制。结果(1)转染3 d后,结晶紫实验量化分析提示在H513、H2052和H2373转染细胞组与对照组比较显著减少(570 nm吸光度值:0.406±0.196比0.682±0.042,0.192±0.181比0.587±0.264,0.178±0.056比0.794±0.276,P<0.05);(2)在转染48 h后,RT-qPCR检测结果显示促凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、p53和细胞周期阻滞基因p27的表达水平显著升高(平均差异倍数:1.489±0.355,1.298±0.336,1.746±0.389,P< 0.05),而细胞增殖基因增殖细胞核抗原(PCNA)和抗凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平显著减少(平均差异倍数:1.489±0.355,1.298±0.336,P<0.05);检测同时提示组蛋白去乙酰化转移酶(HDAC)基因活性受到抑制,miR-206过表达对HDAC4和HDAC6都有显著的负调控作用(平均差异倍数:0.984±0.271比0.442±0.149比0.520±0.193,P<0.05)。(3)在HDAC4或HDAC6基因被敲除后,3种MPM细胞株均显示出明显的结晶紫染色生长阻滞(570 nm吸光度值:0.971±0.205比0.427±0.152比0.520±0.191,P<0.05),这种表现与HDAC活性受到抑制一致,提示HDAC4和HDAC6基因亚型可能是miR-206转染过程中调控MPM细胞增殖的主导效应因子。结论miR-206过表达在恶性胸膜间皮瘤中起到抑制肿瘤细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 恶性胸膜间皮瘤 微小RNA 作用 生长停滞 组蛋白去乙酰化转移酶
表观遗传学诱导的长链非编码RNA1在肝细胞癌中的表达及功能
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作者 夏鹏 刘传江 +4 位作者 付强 翟振胜 刘攀 秦涛 张宏伟 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期529-532,共4页
目的观察表观遗传学诱导的长链非编码RNA1(lncRNA EPIC1)在肝细胞肝癌(HCC)的表达及其对肝癌细胞株增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测EPIC1在7例HCC组织和其癌旁组织和五株肝癌细胞株(HepG2... 目的观察表观遗传学诱导的长链非编码RNA1(lncRNA EPIC1)在肝细胞肝癌(HCC)的表达及其对肝癌细胞株增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测EPIC1在7例HCC组织和其癌旁组织和五株肝癌细胞株(HepG2、SK-HEP-1、HuH-7-80、SMMC-7721、SNU-387)和人正常肝细胞株(HL-7702)的表达量。使用携带有EPIC1目的基因的重组慢病毒颗粒[LV-小干扰RNA(siRNA)]转染Hep G2、HuH-7-80作为实验组,转染阴性对照慢病毒颗粒(LV-NC)的Hep G2、HuH-7-80作为对照组。转染后细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测Hep G2、HuH-7-80的增殖能力;Transwell侵袭实验检测HepG2、HuH-7-80的侵袭能力;流式细胞术检测Hep G2、HuH-7-80的凋亡率。结果EPIC1在HCC组织的表达量(8.77±0.36)显著高于其癌旁组织(2.39±0.45),差异有统计学意义(P<0.01)。EPIC1在5株肝癌细胞株(HepG2、SK-HEP-1、HuH-7-80、SMMC-7721、SNU-387)的表达量(7.24±0.81、3.11±0.35、5.17±1.12、4.38±0.48、2.69±0.65)均较人正常肝细胞株HL-7702的表达量(1.29±0.13)明显增高,其中,在HepG2、HuH-7-80中表达量最高,约为HL-7702的(5.61±0.12)、(4.01±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。低表达EPIC1组的HepG2在24、48、72 h细胞增殖能力(LV-siRNA1:0.43±0.02、0.72±0.02、1.31±0.01,P<0.05;LV-siRNA2:0.42±0.02、0.76±0.04、1.03±0.02,P<0.05)比对照组的Hep G2(0.59±0.02、0.98±0.02、1.63±0.02)显著下降;低表达EPIC1组的HuH-7-80在24、48、72 h细胞增殖能力(LV-siRNA1:0.59±0.01、0.73±0.02、1.31±0.05,P<0.05;LV-siRNA2:0.43±0.04、0.74±0.04、1.26±0.04,P<0.05)比对照组的HuH-7-80(0.64±0.02、0.82±0.02、1.78±0.02)显著下降。低表达EPIC1组的HepG2、HuH-7-80穿过基底膜的细胞数量[(43.35±6.16)、(55.40±8.18)个]比对照组相对细胞数量[(80.67±5.14)、(74.73±6.13)个]明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达EPIC1组HepG2、HuH-7-80细胞凋亡率[(23.20±0.37)%、(18.60±0.46)%] 展开更多
关键词 肝细胞 表观遗传学诱导的长链非编码RNA 增殖 侵袭 作用
长链非编码RNA ZNF674-AS1通过Wnt信号通路调节肝癌细胞的增殖与凋亡
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作者 彭宁 李绵靖 +4 位作者 兰超智 余细兵 唐杰 何则亮 吕军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期308-311,共4页
目的 检测长链非编码RNA ZNF674-AS1在肝癌组织中的表达,探讨其表达对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集2017年10月至2018年4月期间广西医科大学第一附属医院外科手术切除的肝癌标本10例及癌旁组织10例,通过反转录-聚合酶链反应(... 目的 检测长链非编码RNA ZNF674-AS1在肝癌组织中的表达,探讨其表达对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集2017年10月至2018年4月期间广西医科大学第一附属医院外科手术切除的肝癌标本10例及癌旁组织10例,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对组织中ZNF674-AS1的表达水平进行定量。此外,小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞株HepG2和QGY7701中构建ZNF674-AS1稳定敲低的细胞株,并利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测ZNF674-AS1对肝癌细胞增殖的影响,并检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达水平。利用原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞学技术检测空白对照组和ZNF674-AS1敲低组肝癌细胞的凋亡水平。同时利用免疫印迹技术检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平。结果 肝癌组织中ZNF674-AS1表达水平约为癌旁组织9.6倍(P<0.05);利用siRNA抑制ZNF674-AS1后,HepG2和QGY7701肝癌细胞增殖明显受到抑制,两组细胞NC-siRNA组和ZNF674-AS1 siRNA组克隆形成数分别为:HepG2:(282.13±2.13)个比(86.00±10.21)个;QGY7701:(225.52±1.93)个比(64.00±6.82)个(P<0.05);此外,两种细胞bax表达明显上调(HepG2:2.35±0.23比11.35±1.32;QGY7701:3.47±1.45比14.22±1.58),而bcl-2表达水平受到抑制(HepG2:12.17±0.39比4.22±1.92;QGY7701:13.52±1.92比3.89±1.42)。TUNEL和流式细胞学技术结果显示,敲低HepG2和QGY7701肝癌细胞中的ZNF674-AS1能够分别将凋亡率增加24.56倍及14.88倍(P<0.05)。ZNF674-AS1敲低后,两种细胞株中的Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达被抑制(P<0.05)。结论 抑制肝癌细胞中的ZNF674-AS1表达可以抑制肝癌细胞增殖,同时促进其凋亡,其机制可能与ZNF674-AS1介导的Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 肝细胞 ZNF674-AS1 增殖 作用 Wnt/β-连环蛋白
自噬和坏死性凋亡在肝脏缺血再灌注损伤中的作用进展 被引量:1
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作者 郭林政 何松青 王永芹 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期1376-1379,共4页
肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)一直是制约肝脏外科发展的一个重要因素,其发生机制主要是由细胞死亡最终造成的肝脏损伤。细胞坏死和凋亡是已被广泛研究的参与HIRI的两种细胞死亡方式。近年来的研究表明.自噬作为Ⅱ型程序性细胞死亡方式... 肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)一直是制约肝脏外科发展的一个重要因素,其发生机制主要是由细胞死亡最终造成的肝脏损伤。细胞坏死和凋亡是已被广泛研究的参与HIRI的两种细胞死亡方式。近年来的研究表明.自噬作为Ⅱ型程序性细胞死亡方式,在HIRI过程中起着双重调控作用(保护或损伤)。而最新的研究结果显示,一种全新的程序性细胞死亡方式--坏死性凋亡,也参与HIRI。因此,本文将侧重于对自噬和坏死性凋亡在HIRI中的作用的最新研究进展进行综述,并在此基础上进一步探讨不同细胞死亡方式(细胞坏死、凋亡、自噬和坏死性凋亡)在HIRI过程中的相互关系。 展开更多
关键词 肝脏缺血再灌注损伤 作用 坏死
白藜芦醇对肿瘤Hela细胞增殖和凋亡作用及影响 被引量:1
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作者 刘东媛 刘妮英 +4 位作者 汪向红 杜美玲 陈小奇 李正良 张红波 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期909-911,共3页
目的 观察白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡作用及影响.方法 白藜芦醇4个药物浓度(0、50、100、200 μg/ml)处理肿瘤Hela细胞,噻唑蓝(MTT)实验检测白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞24、48、72 h作用后的增殖和细胞毒性作用.Hoechst3325... 目的 观察白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡作用及影响.方法 白藜芦醇4个药物浓度(0、50、100、200 μg/ml)处理肿瘤Hela细胞,噻唑蓝(MTT)实验检测白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞24、48、72 h作用后的增殖和细胞毒性作用.Hoechst33258荧光染色观察细胞形态变化,免疫印迹技术检测B细胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达改变.结果 白藜芦醇0、50、100、200 μg/ml 4个浓度处理对照组和实验组宫颈癌Hela细胞,24、48、72 h后细胞增殖率明显降低,增殖抑制率与药物浓度呈递增关系(P=0.031).24 h细胞增殖率分别为:0.99、0.87、0.78、0.60,48 h细胞增殖率分别为:0.99、0.84、0.67、0.48,72 h细胞增殖率分别为:0.99、0.83、0.66、0.47,各组比较差异有统计学意义(P =0.020).Hoechst33258染色显示肿瘤细胞数量明显减少,两组比较差异有统计学意义(P=0.011).随白藜芦醇药物作用于Hela细胞浓度的增加,Hela细胞bcl-2逐渐降低,bax逐渐升高(P=0.024).结论 不同浓度的白藜芦醇对宫颈癌细胞Hela细胞增殖抑制作用.白藜芦醇浓度增加,增殖率逐渐降低,具有浓度依赖性. 展开更多
关键词 白藜芦醇 宫颈癌 增殖 作用
热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C/EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响
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作者 孙忠东 马海峰 +1 位作者 任冠桦 赵春华 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1830-1833,共4页
目的观察热休克蛋白70(HSP70)表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12、C/EBP同源蛋白(CHOP)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70(HSP70)基因... 目的观察热休克蛋白70(HSP70)表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12、C/EBP同源蛋白(CHOP)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70(HSP70)基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达,建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型,测定细胞凋亡,提取内质网测定,采用免疫组织化学和Westernblot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变。结果对照组细胞凋亡率(9.28±0.83)%、晚期(28.60±1.83)%,HSP70基因转染组早期细胞凋亡率(4.30±0.72)%、晚期(11.6±1.66)%,HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率(29.3±2.54)%、晚期(34.4±2.43)%,免疫组织化学和Westernblot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达;HSP70表达抑制细胞凋亡,但HSPT0反义寡核苷酸则促进;HSPT0显著抑制Caspase-12和CHOP的表达,HSP70增加JNK的表达;HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达。结论转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 心肌细胞 热休克蛋白70 内质网应激 半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12 C/EBP同源蛋白 c-Jun氨基末端激酶通路 作用
上调Yes相关蛋白1表达抑制动脉夹层血管平滑肌细胞凋亡的研究
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作者 刘涛 徐娟 +5 位作者 张立 刘华 李亦舒 张群献 张军 郭家龙 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1834-1838,共5页
目的观察Yes相关蛋白1(YAP1)的表达在血管平滑肌细胞凋亡和主动脉夹层(AD)发病中的作用。方法建立AD大鼠模型,比较AD模型大鼠血管组织和正常对照大鼠血管组织中细胞凋亡、YAPl的表达。体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)... 目的观察Yes相关蛋白1(YAP1)的表达在血管平滑肌细胞凋亡和主动脉夹层(AD)发病中的作用。方法建立AD大鼠模型,比较AD模型大鼠血管组织和正常对照大鼠血管组织中细胞凋亡、YAPl的表达。体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),分成4组:Control组、循环拉伸应力加载(Cyclicstretch)组、Cyclicstretch+plRES2-blank组、Cyclicstretch+plRES2-YAPl组,检测细胞凋亡率和YAPl、生存素(Survivin)表达。AD模型大鼠分成3组:单纯AD组、Ad.NC注射组、Ad-YAPl注射组,比较YAPl、Survivin的表达,检测血管内细胞凋亡,比较AD形成率和AD直径、长度。结果单纯AD模型组AD形成率为43.1%,AD直径为(6.21±1.13)mm,AD长度为(9.25±1.77)mm;Ad-NC注射组AD形成率为42.3%,AD直径为(6.35±1.22)mm,AD长度为(9.11±1.64)mm;Ad-YAPl注射组AD形成率为28.5%,AD直径为(3.72±0.43)mm,AD长度为(6.42±1.16)mm。与对照组比较,模型大鼠AD血管组织内细胞凋亡明显增加,YAP1的表达明显降低。Cyclicstretch明显诱导VSMC细胞凋亡,过表达YAPl明显上调Survivin的表达,拮抗Cyclicstretch诱导的细胞凋亡。尾静脉注射Ad.YAPl明显上调AD模型大鼠血管组织内YAPI、Survivin的表达,使细胞凋亡明显减少,AD形成率和AD直径、长度也明显降低。结论YAPl的表达降低在促进VSMC细胞凋亡和AD发病中起作用,上调YAPl的表达则可抑制VSMC细胞凋亡和AD的形成。 展开更多
关键词 Yes相关蛋白1 Hippo-Yes相关蛋白 血管平滑肌细胞 主动脉夹层 作用
细胞程序性死亡蛋白5联合阿霉素对人尤文肉瘤细胞凋亡的协同作用及其机制
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作者 卢新昌 张岩 +4 位作者 刘宏建 王义生 吴学建 张翼 李甲振 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期35-37,共3页
目的观察重组细胞程序性死亡蛋白5(rhPDCD5)和阿霉素对人尤文肉瘤细胞株A673的化疗增敏作用,探讨PDCD5在尤文肉瘤化疗中与阿霉素的协调作用机制。方法体外培养人尤文肉瘤细胞株A673,使用噻唑蓝(MTT)法检测实验组(rhPDCD5 10 μg... 目的观察重组细胞程序性死亡蛋白5(rhPDCD5)和阿霉素对人尤文肉瘤细胞株A673的化疗增敏作用,探讨PDCD5在尤文肉瘤化疗中与阿霉素的协调作用机制。方法体外培养人尤文肉瘤细胞株A673,使用噻唑蓝(MTT)法检测实验组(rhPDCD5 10 μg/ml)和对照组对不同浓度梯度阿霉素的增殖抑制表现;流式细胞技术研究A673细胞在rhPDCD5组(rhPDCD5 10 μg/ml)、阿霉素组(1 μmol/L阿霉素)、联合组(rhPDCD5 10 μg/ml+1 μmol/L阿霉素)的凋亡率;并通过Western blot实验分析rhPDCD5蛋白对尤文肉瘤细胞株凋亡信号通路的调控作用。结果体外培养尤文肉瘤细胞株加入rhPDCD5蛋白后并无明显的凋亡促进作用,而联合使用阿霉素后凋亡率为67.88%,明显高于阿霉素组14.66%;Western blot结果显示rhPDCD5联合阿霉素可明显抑制B细胞淋巴瘤/白血病(bcl)-2、bcl-xl蛋白表达,而增加bcl-2相关X蛋白(bax)和Cleaved Caspase-3的表达,对Bid表达无明显作用。结论PDCD5蛋白单用对尤文肉瘤细胞无明显促凋亡作用,但可明显增加阿霉素化疗敏感性,该作用与上调凋亡蛋白有关。 展开更多
关键词 程序性死亡蛋白5 尤文肉瘤 作用 阿霉素
JIB-04对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制
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作者 钟春强 莫聪 +2 位作者 朱润芝 刘斌 包仕廷 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1855-1858,共4页
目的观察JIB-04对肝癌细胞增殖、凋亡的影响,探讨其影响发生的机制。方法用不同浓度的组蛋白去甲基化酶抑制剂JIB-04(0、4、8、16μmol/L)分别处理肝癌细胞HepG2、QGY7703、Huh7、MHCC-97H、MHCC-97L及正常肝细胞L02,采用细胞计数... 目的观察JIB-04对肝癌细胞增殖、凋亡的影响,探讨其影响发生的机制。方法用不同浓度的组蛋白去甲基化酶抑制剂JIB-04(0、4、8、16μmol/L)分别处理肝癌细胞HepG2、QGY7703、Huh7、MHCC-97H、MHCC-97L及正常肝细胞L02,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖变化;流式胞仪检测细胞肝癌细胞HepG2、Huh7及MHCC-97H细胞周期分布及凋亡;选取肝癌细胞HepG2及Huh7行蛋白质印迹法检测凋亡蛋白表达。结果JIB-04对正常肝细胞L02抑制作用不明显,经最高浓度为16μmol/L培养48h后.抑制率仅为6%,而不同浓度JIB-04对各肝癌细胞分别有不同程度的抑制作用,其中对肝癌细胞Huh7及QGY7703抑制作用最明显,其半数抑制浓度(IC50)分别为3、3.5μmol/L,且JIB-04对各肝癌细胞抑制作用呈现时间及浓度依赖性;在流式细胞仪检测中,各肝癌细胞S、M期比例明显减少,而G,期比例明显升高且呈药物浓度依赖性;同时随着JIB-04浓度的增加,肝癌细胞HepG2、Huh7及MHCC-97H凋亡率明显提高,经最高浓度8μmol/L作用48h后其凋亡率分别为(27.84±0.42)%、(25.31±0.93)%、(46.86±0.63)%,且不同浓度组与对照组两两比较其凋亡率差异有统计学意义;在凋亡蛋白检测中,肝癌细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)均上调及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)均下调,两者肝癌细胞中凋亡蛋白p53均明显上调。结论JIB-04对正常肝细胞抑制作用不明显,但对不同肝癌细胞有不同程度的抑制作用;JIBJD4通过干扰细胞周期分布及诱导凋亡来抑制肝癌细胞增殖;JIB-04有可能通过线粒体凋亡途径来诱导肝癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝细胞 作用 增殖 JIB-04
微小RNA-218在胆管癌中的表达及其对胆管癌细胞凋亡的影响
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作者 刘学青 梁云飞 +4 位作者 周泽高 王朝龙 吴卫中 崔忠 刘三光 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1865-1867,共3页
目的检测胆管癌中微小RNA(miRNA,miR)-218的表达水平及观察其对胆管癌细胞凋亡的影响。方法培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939)和非肿瘤胆管细胞株(H69),采用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)检测miR-218,分为CCLPl... 目的检测胆管癌中微小RNA(miRNA,miR)-218的表达水平及观察其对胆管癌细胞凋亡的影响。方法培养两种胆管癌细胞株(CCLP1)和(QBC939)和非肿瘤胆管细胞株(H69),采用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)检测miR-218,分为CCLPl、QBC939、H69组,每组随机取3个结果,比较其在胆管癌细胞株与非肿瘤胆管细胞株中的差异。合成miR-218mimics(miR.218激动剂),将miR-218minics及阴性对照转染CCLPl和QBC939细胞。设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,分别利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,每组随机取3个结果。结果miR-218在胆管癌细胞株CCLPl、QBC939及非肿瘤胆管细胞株中的相对定量分别为:1.000(以CCLP1为对照)、0.602±0.108、25.199±5.128,miR-218在胆管癌细胞株CCLP1、QBC939中的表达显著低于非肿瘤胆管细胞株(H69)(P=0.000)。CCLPI细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0.121±0.010,阴性对照组细胞凋亡率为0.048±0.021,空白对照组细胞凋亡率为0.076±0.017;QBC939细胞株中miR-218组细胞凋亡率为0.118±0。039,阴性对照组细胞凋亡率为0.017±0.036,空白对照组细胞凋亡率为0.048±0.161。miR-218组较阴性对照组及空白对照组细胞凋亡率显著增加,miR-218组与空白对照组及阴性对照组之间的差异有统计学意义(CCLP-1细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.005、0.006)。结论miR-218在胆管癌的发生发展发挥了抑癌因子的作用,并且增加了胆管癌细胞的凋亡。 展开更多
关键词 胆管癌 微小RNA-218 作用
替莫唑胺、全反式维甲酸联合放疗抗脑胶质瘤的研究
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作者 李明 李毅平 +3 位作者 时敬国 鲁质成 王长坤 綦斌 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期261-263,共3页
目的探讨替莫唑胺(TMZ)、全反式维甲酸(ATRA)联合放疗诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其分子机制。方法应用流式细胞仪检测对照组(100 μl培养液)、放疗组(放射剂量8 Gy)、药物组(200 μmol/L TMZ+20 μmol/L ATRA)和联合组... 目的探讨替莫唑胺(TMZ)、全反式维甲酸(ATRA)联合放疗诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其分子机制。方法应用流式细胞仪检测对照组(100 μl培养液)、放疗组(放射剂量8 Gy)、药物组(200 μmol/L TMZ+20 μmol/L ATRA)和联合组(放射剂量8 Gy+200 μmol/L TMZ+20 μmol/L ATRA)脑胶质瘤U251细胞的凋亡率;Western blot检测各组p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果对照组、放疗组、药物组和联合组细胞凋亡率分别为(9.96±3.78)%、(37.35±5.36)%、(59.89±7.15)%和(69.35±8.25)%,联合组细胞凋亡数明显增高,与对照组、放疗组及药物组比较差异有统计学意义(χ^2=7 471.175, P=0.000;χ^2=2 057.235, P=0.000;χ^2=195.717,P=0.000);联合组与对照组、放疗组及药物组比较,p38MAPK表达上调,差异有统计学意义(t=46.000,P=0.000;t=10.150,P=0.000;t=4.266,P=0.013);联合组与对照组、放疗组及药物组比较,NF-κB表达下调,差异有统计学意义(t=36.380,P=0.000;t=30.090,P=0.000;t=68.620,P=0.000)。结论TMZ、ATRA联合放疗具有协同诱导脑胶质瘤U251细胞凋亡的作用,其分子机制可能与凋亡相关基因p38MAPK蛋白表达上调、NF-κB蛋白表达下调有关。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 作用 替莫唑胺 全反式维甲酸 放疗 P38丝裂原活化蛋白激酶 核因子-κB
斯钙素-1促进膀胱癌5637细胞增殖和迁移、抑制凋亡的研究
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作者 樊鑫 师磊 宋东奎 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期936-939,共4页
目的 观察斯钙素-1(STC-1)在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞5637生物学行为的影响.方法 取60例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测膀胱癌及其对应的癌旁组织中STC-1 mRNA... 目的 观察斯钙素-1(STC-1)在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞5637生物学行为的影响.方法 取60例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测膀胱癌及其对应的癌旁组织中STC-1 mRNA和蛋白的表达.随后分别应用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞仪、Transwell小室观察STC-1蛋白对5637细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.结果 膀胱癌组织中STC-1 mRNA的相对表达量(0.826 ±0.112)明显高于癌旁正常组织(0.283 ±0.006)(P=0.000).STC-1蛋白在膀胱癌组织中的相对表达量(0.795±0.107)显著高于癌旁正常组织(0.164±0.039) (P=0.000).随着TNM分期的增加,STC-1 mRNA和蛋白表达水平有升高的趋势,但各分期间的表达差异无统计学意义.与对照组比较,STC-1可显著促进5637细胞的增殖.此外,与STC-1单克隆抗体组(56.26 ±2.27)%和空白对照组(53.43±2.04)%比较,STC-1蛋白组的5637细胞凋亡比例(18.48±0.87)%明显下降(P=0.000).Transwell 小室结果显示,STC-1蛋白组细胞迁移数为(96±7)个,与STC-1单克隆抗体组[(28±2)个]和空白对照组[(32±3)个]比较,细胞迁移能力明显增强(P =0.000).结论 STC-1可能在膀胱癌的发生发展中发挥重要作用. 展开更多
关键词 膀胱癌 斯钙素-1 增殖 作用 迁移
FLOT1基因小干扰RNA联合姜黄素在体外诱导肾癌细胞凋亡的机制
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作者 李帅 顾朝辉 +6 位作者 冯子煜 兰东阳 姚文诚 刘秉乾 贾占奎 杨锦建 武玉东 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1908-1911,共4页
目的探讨FLOT1基因小干扰RNA(siRNA)联合姜黄素对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。方法以LipofeetamineTM2000为载体,将FLOT1-siRNA转染人肾癌786-0细胞,Westernblot检测转染siRNA后的细胞中FLOTl的蛋白表达。后续研究分FLOT1-siRNA组... 目的探讨FLOT1基因小干扰RNA(siRNA)联合姜黄素对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。方法以LipofeetamineTM2000为载体,将FLOT1-siRNA转染人肾癌786-0细胞,Westernblot检测转染siRNA后的细胞中FLOTl的蛋白表达。后续研究分FLOT1-siRNA组、姜黄素组和FLOTl-siRNA+姜黄素组进行细胞干预,并设置空白对照组,细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞仪分别检测4组细胞活力及凋亡率;H2DCFHDA探针检测4组细胞ROS含量;Westernblot检测4组细胞磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3)及信号转导与转录激活因子-3(STAT3)信号通路下游增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白表达。结果FLOT1-siRNA转染786-0细胞后FLOTl的表达(0.087±0.010)明显受到抑制,与空白对照组(0.454±0.038)比较差异有统计学意义(t=16.177,P=0.000)。si-FLOT1(0.491±0.053)或姜黄素(0.542±0.058)均可抑制786.0细胞活力,诱导786-0细胞凋亡(18.22±1.07)%、(12.39±0.86)%及ROS产生(189.5±8.2)、(147.7±7.1),下调p-STAT3(0.118±0.014)、(0.110±0.012)和PCNA(0.229±0.025)、(0.302±0.034)表达,上调bax(0.206±0.021)、(0.123±0.014)表达,与NC组比较差异均有统计学意义(0.792±0.065)、(1.62±0.25)%、(57.7±3.5)、(0.202±0.023)、(0.577±0.049)、(0.069±0.010)(t=6.736、7.378、12.796、10.112、7.186、2.832,P=0.0130、0.000、0.000、0.000、0.000、0.022),联合使用si-FLOT1和姜黄素对786.0细胞活力(0.378±0.044)抑制、细胞凋亡(24.18±1.22)%及ROS产生(249.3±9.4)诱导、p-STAT3(0.054±0.008)和PCNA表达(0.135±0.016)下调及bax表达(0.411±0.038)上调作用更明显,且与单一的si-FLOT1或姜黄素比较差异均有统计学 展开更多
关键词 肾癌 FLOT1基因 姜黄素 作用 信号转导与转录激活因子-3信号通路
RNA干扰靶向抑制胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白1基因对肾癌细胞的抑制作用及其机制
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作者 毕建朋 顾朝辉 +2 位作者 贾占奎 杨锦建 杨艳芳 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1912-1914,共3页
目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白1(IGF2BPl)基因对肾癌细胞活力和凋亡的影响及其机制。方法以人胚肾HEK293细胞为对照组细胞,通过Westernblot检测人肾癌786-0、A498、ACHN和CaKi-2细胞中IGF2BPl的蛋白表... 目的探讨RNA干扰(RNAi)抑制胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白1(IGF2BPl)基因对肾癌细胞活力和凋亡的影响及其机制。方法以人胚肾HEK293细胞为对照组细胞,通过Westernblot检测人肾癌786-0、A498、ACHN和CaKi-2细胞中IGF2BPl的蛋白表达。将设计并合成的IGF2BP1小干扰RNA(siRNA)经LipofectamineTM2000转染CaKi-2细胞,Westernblot检测转染后的细胞中IGF2BP1、Wnt/β-连环蛋白(B-catenin)信号通路关键分子p-catenin及增殖凋亡相关靶基因增殖细胞核抗原(PCNA)、生存素(Survivin)的蛋白表达。结果786-(0.415±0.038)、A498(0.278±0.030)、ACHN(0.326±0.032)和CaKi-2(0.557±0.053)细胞中IGF2BPl的表达均明显高于在HEK293细胞(0.062±0.009)表达(P=0.003),选择CaKi-2细胞为研究对象。IGF2BPlsiRNA转染后的细胞中IGF2BPI(0.073±0.010)、B-catenin(0.178±0.021)、PCNA(0.147±0.016)、Survivin(0.095±0.010)的蛋白表达均明显低于NC组(0.485±0.055)、(0.547±0.050)、(0.246±0.028)、(0.168±0.018),细胞活力(0.557,c0.045)明显低于NC组(0.804±0.057,细胞凋亡率(21.48±1.54)%明显高于NC组(2.46±0.27)%,差异均有统计学意义(P=0.000)。结论IGF2BPl在肾癌细胞表达升高,抑制其表达后可明显降低细胞活力和诱导凋亡,机制可能是Wnt/β-catenin信号通路的降低。 展开更多
关键词 肾癌 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白l基因 作用 Wnt/β一连环蛋白信号通路
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