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TRIM21基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 认领
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作者 赵克学 许淑娟 +4 位作者 马瑞仙 耿金静 刘杨 李琼毅 冯若飞 《热带生物学报》 2020年第1期111-117,共7页
三基序蛋白21(TRIM21)与癌症、肿瘤及固有免疫等密切相关。为了快速检测TRIM21基因的表达,根据Genbank中公布的TRIM21基因序列设计引物,通过常规PCR扩增该基因后克隆至pMD-18T载体上,测序并鉴定正确后制备重组质粒,以pMD-18T-TRIM21重... 三基序蛋白21(TRIM21)与癌症、肿瘤及固有免疫等密切相关。为了快速检测TRIM21基因的表达,根据Genbank中公布的TRIM21基因序列设计引物,通过常规PCR扩增该基因后克隆至pMD-18T载体上,测序并鉴定正确后制备重组质粒,以pMD-18T-TRIM21重组质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。采用重复性、特异性及灵敏性等试验,成功建立了检测TRIM21基因的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法灵敏度高,最低检测下限为37.7 copies·μL^-1,比普通PCR高出10倍。在3次独立的试验中,组内和组间变异系数较小,具有较高的可重复性,同时,还能检出不同细胞中TRIM21的表达。因此,该荧光定量方法可为TRIM21的检测及临床研究提供技术支持。 展开更多
关键词 三基序蛋白21 荧光定量PCR 标准曲线
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荧光定量PCR基因检测对G6PD缺乏症的诊断价值探讨 认领
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作者 王亨莉 钟志娟 《吉林医学》 CAS 2020年第3期558-559,共2页
目的:探讨荧光定量PCR对G6PD缺乏症患者进行基因检测的诊断价值。方法:选取接收的100份血样(阴性标本和阳性标本各50份),分别使用荧光定量PCR(观察组)和高铁血红蛋白还原法(对照组)对血样进行检测,最终用Sanger测序法评判结果。结果:观... 目的:探讨荧光定量PCR对G6PD缺乏症患者进行基因检测的诊断价值。方法:选取接收的100份血样(阴性标本和阳性标本各50份),分别使用荧光定量PCR(观察组)和高铁血红蛋白还原法(对照组)对血样进行检测,最终用Sanger测序法评判结果。结果:观察组的特异性、灵敏度、阴性预测值、阳性预测值、诊断符合率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:荧光定量PCR在诊断G6PD缺乏症时,灵敏度更高、特异性更好、准确率更好,值得在临床上进行推广。 展开更多
关键词 荧光定量PCR G6PD缺乏症 高铁血红蛋白还原法 Sanger测序法
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基于三步荧光定量PCR技术揭示不同产区白酒酿造系统中Lactobacillus sp.的分布特征 认领 被引量:1
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作者 杜如冰 吴群 徐岩 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-12,共12页
[背景]Lactobacillus sp.是一株存在于白酒酿造系统中的功能微生物,但是针对Lactobacillus sp.的定量方法及其在中国白酒酿造系统中的分布尚未被研究。[目的]建立一种基于特异性引物的荧光定量PCR定量方法,并应用于实际生产检测,揭示Lac... [背景]Lactobacillus sp.是一株存在于白酒酿造系统中的功能微生物,但是针对Lactobacillus sp.的定量方法及其在中国白酒酿造系统中的分布尚未被研究。[目的]建立一种基于特异性引物的荧光定量PCR定量方法,并应用于实际生产检测,揭示Lactobacillus sp.在中国白酒酿造系统中的分布特征。[方法]基于16S rRNA基因序列设计特异性引物,并通过PCR验证引物特异性;优化荧光定量PCR反应程序,提高引物扩增效率;定量分析所采集样本中Lactobacillus sp.的含量,揭示Lactobacillus sp.在中国白酒酿造系统中的分布特征。[结果]设计了一对扩增产物大小为445 bp的特异性引物。通过优化扩增条件,构建含有变性、退火、延伸过程的三步荧光定量PCR方法,该方法扩增线性较强,R^2>0.99;灵敏度高,定量限为17.9 copies/μL;重复性好,Ct值的变异系数小于1%。跟踪检测全国10个产区代表产地的白酒酿造系统,其中8个产区均检测到Lactobacillus sp.,在相同产地不同酿造工艺的酿造系统中均检测到Lactobacillus sp.,但是含量上有显著差异。山东潍坊产地的芝麻香型白酒发酵体系含量最高(7.27±0.04 lgcopies/g),跟踪发酵时间样本发现Lactobacillus sp.的生长分为两个阶段:生长期(0-15 d)和稳定期(15-45 d)。[结论]基于特异性引物所建立的三步荧光定量PCR技术可实现对白酒酿造系统中Lactobacillus sp.的鉴定和定量,通过跟踪检测发现Lactobacillus sp.广泛分布在中国白酒发酵体系中,其中产地决定Lactobacillus sp.的分布,酿造工艺影响含量,在发酵过程中Lactobacillus sp.的含量具有明显的动态变化规律,为进一步研究该菌在发酵过程中的功能提供参考。 展开更多
关键词 中国白酒 定量 荧光定量PCR 未培养乳杆菌 LACTOBACILLUS sp.
果蔬废弃物两相厌氧发酵产己酸的效能研究 认领
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作者 余江南 刘春梅 +2 位作者 黄振兴 缪恒锋 阮文权 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期232-240,共9页
利用厌氧菌群生物合成己酸被认为是一种非常有潜力的新型废弃物资源化技术,但是其合成效能的提高是目前亟待解决的关键问题。本研究以实际果蔬废弃物为原料,对两相厌氧发酵产己酸的效能进行了研究。首先优化接种比以提高酸化相的水解转... 利用厌氧菌群生物合成己酸被认为是一种非常有潜力的新型废弃物资源化技术,但是其合成效能的提高是目前亟待解决的关键问题。本研究以实际果蔬废弃物为原料,对两相厌氧发酵产己酸的效能进行了研究。首先优化接种比以提高酸化相的水解转化效率;在此基础上通过调控醇酸比和pH以强化产己酸相的发酵效能。结果显示,果蔬废弃物厌氧产酸的最佳接种比为2∶1,此时水解率和酸化率分别可达到98.1%和83.2%,乙酸和丁酸产量分别达到5.4 g/L和3.3 g/L。合理控制醇酸比和pH对提高产己酸相的发酵效能非常关键。当醇酸比和pH控制为4∶1和7.5时,己酸生成量可达14.9 g/L,约占液相总COD的80.84%;而低醇酸比和低pH易造成丁酸的累积,从而降低了己酸产量。己酸发酵过程属于非生长偶联型,己酸菌(Clostridium kluyveri)指数增长期伴随着丁酸的生成,而己酸合成主要发生在生长中后期。此外,己酸菌对于pH变化较为敏感,适当提高pH有助于减轻有机酸毒性,提高生物量;但是碱性环境会严重抑制己酸菌的生长繁殖。研究表明,通过分别对酸化相和产己酸相进行优化和调控,两相发酵策略更有利于提高己酸合成效能。 展开更多
关键词 两相发酵 醇酸比 己酸 荧光定量PCR
甜菜M14品系BvM14-STPK基因的生物信息学分析及响应盐胁迫的表达分析 认领
5
作者 赵冬美 张咏雪 李海英 《中国农学通报》 2020年第1期35-42,共8页
旨在进一步研究BvM14-STPK蛋白激酶对盐胁迫的应答反应,本研究以甜菜M14品系为材料,使用特异性引物通过聚合酶链式反应进行扩增,获得BvM14-STPK基因cDNA全长,并进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR探究该基因响应盐胁迫的表达分析。生... 旨在进一步研究BvM14-STPK蛋白激酶对盐胁迫的应答反应,本研究以甜菜M14品系为材料,使用特异性引物通过聚合酶链式反应进行扩增,获得BvM14-STPK基因cDNA全长,并进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR探究该基因响应盐胁迫的表达分析。生物信息学分析结果表明,BvM14-STPK基因cDNA全长1668 bp,包含1527 bp的最大ORF,编码508个氨基酸;BvM14-STPK蛋白激酶具有典型的蛋白激酶保守结构域。实时荧光定量PCR结果表明,BvM14-STPK基因在甜菜M14品系叶、根中均有广泛表达,叶中的表达量高于根中。该基因在200、400 mmol/L NaCl处理下,在叶片和根中呈现不同的表达状态,表明该基因可以应答盐胁迫,但在不同组织中应答盐胁迫的表达量存在差异。本项研究在挖掘甜菜M14品系优质基因和提高栽培甜菜抗逆性等方面具有重要指导意义,为进一步开展甜菜遗传改良工作奠定基础。 展开更多
关键词 甜菜M14品系 BvM14-STPK 生物信息学分析 荧光定量PCR 盐胁迫
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谷胱甘肽过氧化物酶-3在腮腺多形性腺瘤中的表达及意义 认领
6
作者 张帆 刘啸 +3 位作者 阿迪力·麦木提敏 安尼卡尔·安尼瓦尔 帕丽黛姆·图尔迪 吴佩玲 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2020年第1期16-22,共7页
目的 :研究谷胱甘肽过氧化物酶-3(glutathione peroxidase-3,GPX-3)基因及蛋白在腮腺良、恶性多形性腺瘤中的表达,以明确GPX-3与腮腺多形性腺瘤发生、发展的相关性,为临床预测腮腺多形性腺瘤的发生及恶变提供理论依据。方法:采用荧光定... 目的 :研究谷胱甘肽过氧化物酶-3(glutathione peroxidase-3,GPX-3)基因及蛋白在腮腺良、恶性多形性腺瘤中的表达,以明确GPX-3与腮腺多形性腺瘤发生、发展的相关性,为临床预测腮腺多形性腺瘤的发生及恶变提供理论依据。方法:采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测30例腮腺多形性腺瘤,30例腮腺多形性腺瘤的瘤旁2 cm腺体组织,以及10例恶性腮腺多形性腺瘤中的GPX-3 mRNA及蛋白的表达,对其相对表达量进行统计学分析。结果:GPX-3 mRNA和蛋白在腮腺良、恶性多形性腺瘤中的表达明显低于瘤旁腺体组织,且在腮腺恶性多形性腺瘤中的表达最低,差异有统计学意义(P<0.01)。GPX-3在腮腺多形性腺瘤中的表达与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关,差异无统计学意义(P>0.05),且GPX-3在腮腺多形性腺瘤中的表达与肿瘤TNM分期及恶性成分比例有关,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GPX-3在腮腺良性多形性腺瘤中低表达,且在腮腺恶性多形性腺瘤中的表达最低,提示GPX-3的低表达与腮腺多形性腺瘤的发生及恶变密切相关。 展开更多
关键词 谷胱甘肽过氧化物酶3 腮腺多形性腺瘤 荧光定量PCR 蛋白免疫印迹
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广州市黄埔区首例韦泰夫雷登沙门氏菌食物中毒事件的溯源检测 认领
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作者 徐秋琼 单桂花 +1 位作者 彭明益 陈庆胜 《医学动物防制》 2020年第3期300-304,共5页
目的对广州市黄埔区首例韦泰夫雷登沙门氏菌食物中毒事件进行溯源检测,为今后疫情防控提供科学依据。方法现场进行流行病学及食品卫生学调查,采集相关样品送实验室进行致病菌筛查及病原学特征分析。结果经荧光定量PCR检测,在12份病人大... 目的对广州市黄埔区首例韦泰夫雷登沙门氏菌食物中毒事件进行溯源检测,为今后疫情防控提供科学依据。方法现场进行流行病学及食品卫生学调查,采集相关样品送实验室进行致病菌筛查及病原学特征分析。结果经荧光定量PCR检测,在12份病人大便样/肛拭子,1份食品凉拌牛肉,1份砧板涂抹样中检测出沙门氏菌核酸,分离培养出12株沙门氏菌,11株来源病人、1株来源砧板涂抹样,血清学鉴定为韦泰夫雷登沙门氏菌,菌株多重耐药,PFGE聚类分型显示菌株同源性为100%。可疑食品为凉拌牛肉。结论本次食物中毒事件是由韦泰夫雷登沙门氏菌污染凉拌牛肉引起,建议卫生监督部门加强对餐饮业监督抽查及开展食品安全知识宣贯,预防类似食物中毒事件暴发。 展开更多
关键词 食物中毒 韦泰夫雷登沙门氏菌 荧光定量PCR PFGE 溯源
荧光定量PCR快速检测在病毒性角膜炎诊疗中的应用 认领
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作者 秦力维 廖强华 +7 位作者 石芊 彭秀军 曹利群 高原 郭建巍 陈昌国 陈秋圆 马志家 《转化医学杂志》 2020年第1期37-40,共4页
目的为病毒性角膜炎的患者进行疱疹病毒病原学快速检测,根据检测结果指导临床治疗。方法选取未进行抗病毒药物治疗的患者,根据病情分别取其泪液或病变区角膜上皮细胞,用荧光定量PCR方法对单纯疱疹病毒(herpessimplex virus,HSV)1型、HSV... 目的为病毒性角膜炎的患者进行疱疹病毒病原学快速检测,根据检测结果指导临床治疗。方法选取未进行抗病毒药物治疗的患者,根据病情分别取其泪液或病变区角膜上皮细胞,用荧光定量PCR方法对单纯疱疹病毒(herpessimplex virus,HSV)1型、HSV2、水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)和EB病毒(EB virus,EBV)的核酸进行定量检测。结果90例病毒性角膜炎患者中有54例检测出疱疹病毒核酸,检出率为60.0%;发病后首次就诊的病毒性角膜炎患者中疱疹病毒核酸的检出率为94.7%,明显高于多次发作后就诊的患者(检出率为34.6%),2者差异比较具有统计学意义(P<0.001)。发病后首次就诊的病毒性角膜炎患者感染的主要病毒为HSV1、EBV和HSV2,多次发作后就诊的患者感染的病毒主要为HSV1和HCMV。5种疱疹病毒中HSV占病毒检出数的74.0%,上皮型角膜炎中疱疹病毒核酸的检出率为30.6%,基质型角膜炎中疱疹病毒核酸的检出率为95.1%,基质型角膜炎中疱疹病毒检出率高于上皮型角膜炎(P<0.001)。上皮型角膜炎中HSV1病毒的检出率和平均拷贝数明显高于其他病毒;基质型角膜炎中HSV1、HSV2病毒的拷贝数明显高于其他疱疹病毒拷贝数。结论病毒性角膜炎患者应尽早进行核酸检测以明确疱疹病毒类型及拷贝数,检测结果为进一步的抗病毒治疗和疗效判断提供科学依据。 展开更多
关键词 病毒性角膜炎 荧光定量PCR 快速诊断 抗病毒治疗
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毛竹LTR反转录转座子PHRE8的鉴定与转录模式分析 认领
9
作者 季航 周明兵 +2 位作者 蒋政勤 郑浩 徐芷馨 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期705-713,共9页
LTR反转录转座子是植物基因组中重要的组成部分,可作为遗传工具在生物学研究上发挥重要作用。为探究毛竹中具有潜在活性的LTR反转录转座子,解析LTR反转录转座子转座激活机制,本研究从毛竹基因组中克隆1条典型的LTR反转录转座子序列,命名... LTR反转录转座子是植物基因组中重要的组成部分,可作为遗传工具在生物学研究上发挥重要作用。为探究毛竹中具有潜在活性的LTR反转录转座子,解析LTR反转录转座子转座激活机制,本研究从毛竹基因组中克隆1条典型的LTR反转录转座子序列,命名为PHRE8,系统地分析了PHRE8的结构特征、插入特性和进化关系,并利用荧光定量PCR检测PHRE8在DNA甲基化抑制剂(5-氮杂胞苷)、辐射、高温、低温、高盐逆境胁迫下的转录水平。结果表明,PHRE8属于Ty3-gypsy超家族,全长5296 bp,具有完整的GAG与POL结构域,插入时间约为123.07万年,是具有理论潜在活性的转座子;在不同胁迫处理下,与野生实生苗相比,PHRE8的相对表达量均有所增加,猜测PHRE8在不同胁迫条件下,会激发其转录活性,影响宿主基因组结构和基因表达模式的变化,以适应外界环境改变。本研究结果为进一步探究毛竹基因组中活性转座子的功能奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 LTR反转录转座子 活性 荧光定量PCR 逆境胁迫 转录水平
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不同龄期柞蚕的表皮生长因子受体(ApEGFR)基因的表达特性分析 认领
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作者 宫田娇 张月 +4 位作者 李雪 朱兴友 周成利 刘隽彦 朴玉兰 《北方蚕业》 2020年第1期1-5,13共6页
根据NCBI公共数据库获取的家蚕表皮生长因子受体基因序列,设计8对针对表皮生长因子受体基因的特异性引物。提取柞蚕中不同龄期和不同组织中总RNA,以Oligo-dT为引物,反转录为第一链cDNA,经PCR扩增,荧光定量PCR检测,结果表明表皮生长因子... 根据NCBI公共数据库获取的家蚕表皮生长因子受体基因序列,设计8对针对表皮生长因子受体基因的特异性引物。提取柞蚕中不同龄期和不同组织中总RNA,以Oligo-dT为引物,反转录为第一链cDNA,经PCR扩增,荧光定量PCR检测,结果表明表皮生长因子受体基因在不同发育阶段中的表达有差异。不同发育阶段和整个眠期的柞蚕中,ApEGFR的mRNA均有表达,但在5龄和3眠期的时候的表达量最高。不同组织中,在柞蚕的丝腺中ApEGFR的mRNA表达量最高,表皮最低。 展开更多
关键词 柞蚕 表皮生长因子受体 荧光定量PCR 基因表达
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丙型肝炎病毒RNA室内质控品的制备及其临床应用评估 认领
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作者 何学虎 赵倩颖 +6 位作者 梁小燕 董洁 赵玥 郭雅琪 师志云 张玉英 赵志军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期45-49,共5页
目的探讨自制丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)RNA定量检测室内质控品的可行性,并评估其临床应用价值。方法收集已发过HCV-RNA临床报告的血浆样本,分别将HCV-RNA阴性血浆(<50 IU/mL)、弱阳性血浆(102~103 IU/mL)和强阳性血浆(105... 目的探讨自制丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)RNA定量检测室内质控品的可行性,并评估其临床应用价值。方法收集已发过HCV-RNA临床报告的血浆样本,分别将HCV-RNA阴性血浆(<50 IU/mL)、弱阳性血浆(102~103 IU/mL)和强阳性血浆(105~106 IU/mL)混合、离心后,获得阴性质控品(HCV-RNA-N)、弱阳性质控品(HCV-RNA-L)和强阳性质控品(HCV-RNA-H),小量分装后于-80℃冻存。确定靶值后,评价其均一性、重复性、准确性和稳定性。结果自制HCV RNA室内质控品具有良好的均一性、重复性和准确性,可在-80℃保持稳定至少12个月。结论HCV RNA室内质控品制备过程简单,样品均一,重复性好,准确性高,稳定性良好,可用于临床检测HCV-RNA。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒RNA 室内质控品 荧光定量PCR
金针菇假定蛋白E3泛素连接酶基因的鉴定与表达分析 认领
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作者 武鑫 温蝶 +2 位作者 黄千慧 谢宝贵 温志强 《北方园艺》 CAS 北大核心 2020年第5期129-137,共9页
以金针菇基因组与转录组数据为基础,通过本地BLAST方法鉴定金针菇假定蛋白E3泛素连接酶基因,命名为GENE5116,并对其结构、编码蛋白的基本性质与表达模式进行了分析,以期了解其在金针菇子实体生长发育过程中的作用。结果表明:该基因有9... 以金针菇基因组与转录组数据为基础,通过本地BLAST方法鉴定金针菇假定蛋白E3泛素连接酶基因,命名为GENE5116,并对其结构、编码蛋白的基本性质与表达模式进行了分析,以期了解其在金针菇子实体生长发育过程中的作用。结果表明:该基因有9个外显子,8个内含子,基因总长为1998 bp,共编码438个氨基酸残基,相对分子质量为48987.36,等电点8.83;系统进化分析结果表明该基因与真菌E3泛素连接酶具有高度同源性,与陶兰柱担菌(Cylindrobasidium torrendii)亲缘关系最近;实时荧光定量PCR结果表明该基因在菌柄的表达量最高且菌柄上部基因表达量显著高于下部,在菌丝的表达量最低,所以推测该基因可能与子实体菌柄伸长有关。 展开更多
关键词 E3泛素连接酶 荧光定量PCR 表达量 菌柄伸长
LPS胁迫下五个群体菲律宾蛤仔TYR基因在鳃和肝胰腺中表达特性研究 认领
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作者 刘杰 聂鸿涛 +4 位作者 姜坤银 王政兴 孙晓彤 霍忠明 闫喜武 《海洋科学》 CAS 北大核心 2020年第1期81-88,共8页
为了解TYR基因与蛤仔免疫的关系,本实验利用荧光定量PCR技术研究了菲律宾蛤仔五个群体(白蛤、白斑马蛤、斑马蛤、养殖和野生群体)的鳃组织和肝胰腺组织在LPS胁迫下TYR基因在不同时间(0 h、3 h、12 h、24 h、48 h)的表达特性。结果表明,... 为了解TYR基因与蛤仔免疫的关系,本实验利用荧光定量PCR技术研究了菲律宾蛤仔五个群体(白蛤、白斑马蛤、斑马蛤、养殖和野生群体)的鳃组织和肝胰腺组织在LPS胁迫下TYR基因在不同时间(0 h、3 h、12 h、24 h、48 h)的表达特性。结果表明,在LPS注射后鳃组织中TYR6基因表达水平在白蛤和白斑马蛤3 h、6 h、12 h,野生蛤仔3 h,斑马蛤3 h、6 h,养殖群体6 h、12 h显著上调(P<0.05),3h野生蛤仔和斑马蛤达到峰值, 6 h白蛤、白斑马蛤、养殖群体达到峰值(P<0.05);在肝胰腺中,养殖群体和白斑马蛤6 h,白蛤6 h、24 h,野生群体24 h,斑马蛤3 h显著上调, 3 h野生蛤仔和斑马蛤达到峰值,6h养殖群体、白蛤、白斑马达到峰值(P<0.05);鳃组织中TYR10基因表达水平在白蛤、野生群体和白斑马蛤3 h,养殖群体3 h、6 h,斑马蛤3 h、12 h显著上调(P<0.05),肝胰腺组织中TYR10基因表达水平在白蛤3 h,野生群体3 h、6 h、12 h,斑马蛤、养殖群体6 h显著上调(P<0.05),推测TYR基因在五个菲律宾蛤仔群体的鳃和肝胰腺中参与了免疫应答。通过对TYR基因的氨基酸序列进行二级结构分析和系统发育树分析,找到两个铜离子结合位点和6个组氨酸残基,并发现TYR6基因和长牡蛎同源性最高,为39.43%, TYR10基因和大珠母贝同源性最高,为51.04%。本文首次探讨在LPS胁迫下菲律宾蛤仔TYR基因的表达特性,为进一步探究TYR基因与菲律宾蛤仔免疫应答机制提供参考。 展开更多
关键词 菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum) 酪氨酸酶基因(Tryosinase TYR) 基因表达 荧光定量PCR
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猪圆环病毒3型荧光定量PCR检测方法的建立 认领
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作者 王阳 胡胜云 +3 位作者 石玉佩 申贞彦 孙彤 周双海 《北京农学院学报》 2020年第2期29-33,共5页
【目的】建立一种可以定量检测猪圆环病毒3型(PCV3)的荧光定量PCR检测方法。【方法】设计与验证1对PCV3特异性引物,以系列稀释后的PCV3全基因组质粒为模板进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增。【结果】该方法不能检出PCV1与PCV2等常见猪DN... 【目的】建立一种可以定量检测猪圆环病毒3型(PCV3)的荧光定量PCR检测方法。【方法】设计与验证1对PCV3特异性引物,以系列稀释后的PCV3全基因组质粒为模板进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增。【结果】该方法不能检出PCV1与PCV2等常见猪DNA病毒,精确灵敏度至少达到100 copies,所绘制标准曲线回归方程的决定系数为0.999,扩增效率为83.6%,对53份临床样品的检测阳性率高于常规PCR。【结论】建立1种具有良好特异性、敏感性与重复性的定量检测PCV3的荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 荧光定量PCR 定量检测
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鸡肝细胞中C/EBPα基因的敲低及对糖脂代谢相关基因表达的影响 认领
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作者 张燕萍 李柯晔 +5 位作者 王中亮 曾岫 苏媛媛 吴玉婷 金晶 顾志良 《中国家禽》 北大核心 2020年第4期15-19,共5页
C/EBPα即CCAAT/增强子结合蛋白α基因,其编码的CCAAT/增强子结合蛋白是重要的转录调控因子,在细胞的分化和代谢过程中发挥着重要的调节作用。试验利用RNAi来敲低鸡LMH细胞系中C/EBPα基因的表达,以研究C/EBPα基因影响脂肪代谢的机制... C/EBPα即CCAAT/增强子结合蛋白α基因,其编码的CCAAT/增强子结合蛋白是重要的转录调控因子,在细胞的分化和代谢过程中发挥着重要的调节作用。试验利用RNAi来敲低鸡LMH细胞系中C/EBPα基因的表达,以研究C/EBPα基因影响脂肪代谢的机制。根据鸡C/EBPα基因的mRNA序列,设计3对siRNA,用RNAi干扰技术来敲低鸡LMH细胞中的C/EBPα基因表达,然后用荧光定量PCR检测C/EBPα基因的表达情况,发现其中的C/EBPα-siRNA-161能够显著降低C/EBPα基因的表达;并将C/EBPα-siRNA-161转染LHM细胞后48 h后,利用荧光定量PCR检测LMH细胞中糖脂代谢相关基因(PCK1、SCD、GLUT2、PPARγ、INS、G6PC、IGF1、IGF2、INSR、STAT3)的表达,发现在LMH细胞中PCK1、G6PC、GLUT2基因的mRNA表达量下降,结果表明C/EBPα基因能影响糖代谢相关基因G6PC、GLUT2、甘油异生相关基因PCK1的表达,证实了C/EBPα基因对鸡肝细胞中的糖脂代谢具有调控作用,通过调控C/EBPα基因的表达将影响糖吸收及甘油异生。 展开更多
关键词 LMH细胞系 C/EBPα基因 基因敲低 荧光定量PCR 糖脂代谢
外源性TGF-β1影响肝癌细胞中YAP mRNA及TGF-β1 mRNA的研究 认领
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作者 王成 刘承利 +3 位作者 张洪义 张辉 赵刚 孔亚林 《空军医学杂志》 2020年第1期45-47,共3页
目的研究外源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对97H细胞(人肝癌97细胞系中高转移潜能型)中YAP mRNA及TGF-β1 mRNA水平的影响。方法应用重组人TGF-β1因子作用于97H细胞,再应用荧光定量PCR技术检测YAP mRNA... 目的研究外源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对97H细胞(人肝癌97细胞系中高转移潜能型)中YAP mRNA及TGF-β1 mRNA水平的影响。方法应用重组人TGF-β1因子作用于97H细胞,再应用荧光定量PCR技术检测YAP mRNA、TGF-β1 mRNA的变化。结果肝癌细胞97H接受外源性TGF-β1因子刺激2 h后出现YAP mRNA的表达下降,此时内源性TGF-β1mRNA无明显变化。结论外源性TGF-β1因子刺激可引起97H细胞YAPmRNA下降,此过程对内源性TGF-β1 mRNA无影响。 展开更多
关键词 YAP MRNA 转化生长因子Β1 荧光定量PCR 肝细胞癌
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禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒比对结果分析 认领
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作者 吴迪 王林 +5 位作者 吴惠明 高晓龙 张启龙 张跃 刘晓冬 周德刚 《科学技术与工程》 北大核心 2020年第12期4647-4652,共6页
对6种禽流感病毒通用型荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),PCR检测试剂盒进行比对与科学评价,为实验室采购提供依据。利用禽流感病毒H5、H7、H9亚型标准品,鸡新城疫活疫苗与传染性支气管炎活疫苗对市售的6种品牌(分别... 对6种禽流感病毒通用型荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),PCR检测试剂盒进行比对与科学评价,为实验室采购提供依据。利用禽流感病毒H5、H7、H9亚型标准品,鸡新城疫活疫苗与传染性支气管炎活疫苗对市售的6种品牌(分别记为A、B、C、D、E、F)禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒灵敏性与特异性进行了比对,并对97份临床样品进行了检测,筛选出禽流感病毒通用型最佳检测试剂盒。结果表明:A厂家试剂盒最低可检出1:100倍稀释的H7亚型标准品浓度,B厂家试剂盒最低可检出1:1倍稀释的H7亚型标准品浓度,C厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,D厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,E厂家试剂盒最低可检出1:1 000倍稀释的H7亚型标准品浓度, F厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,6种试剂盒特异性均良好。综上,E厂家试剂盒优于其他厂家试剂盒,可以作为动物疫病检测实验室在实施监测任务中的首要选择。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 禽流感病毒 试剂盒比对
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山羊关节炎脑炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用 认领
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作者 汪伟 杜倩 +8 位作者 韩知晓 辛佳亮 闫修魁 梁莹莹 朱远致 曹亮 孙文超 胡传活 郑敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期294-299,共6页
为建立检测山羊关节炎脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus,CAEV)的快速诊断方法,本研究根据CAEV甘肃株Gag基因设计1对引物,并以含有CAEV甘肃株全基因组序列的质粒pUC57-CAEV为模板,建立CAEV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方... 为建立检测山羊关节炎脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus,CAEV)的快速诊断方法,本研究根据CAEV甘肃株Gag基因设计1对引物,并以含有CAEV甘肃株全基因组序列的质粒pUC57-CAEV为模板,建立CAEV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.19×109~1.19×10^1 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.997,斜率为-3.74,检测下限为1.19×10^1 copies/μL,且对痘苗病毒、山羊痘病毒均无扩增。重复性试验结果显示,批间与批内变异系数均小于1%,重复性好。本研究首次建立了CAEVGag基因的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法,为CAEV的快速检测和病毒感染预防提供了技术手段。 展开更多
关键词 山羊关节炎脑炎病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR GAG基因
湖南省猪肉及相关产品非洲猪瘟监测与分析 认领
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作者 何世成 王昌建 +6 位作者 林源 贺银辉 彭志 鲁杏华 唐小明 王卫国 刘道新 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期254-256,共3页
2018年10-12月在湖南省内652个冷库、肉品加工厂及超市等场点,对1 356个批次的产品中随机抽取4 787份猪肉及其产品,使用荧光定量PCR方法进行非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸检测。结果显示,有77份样品ASFV核酸阳性,... 2018年10-12月在湖南省内652个冷库、肉品加工厂及超市等场点,对1 356个批次的产品中随机抽取4 787份猪肉及其产品,使用荧光定量PCR方法进行非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸检测。结果显示,有77份样品ASFV核酸阳性,阳性率为1.6%;阳性样品类型包括冻猪肉、肥膘、板油、冻猪肚、冻猪内脏、腊肉、香肠、水饺、冻猪舌等,至少有33份阳性样品来自外省,占总阳性数的42.9%,生产时间最早为2018年4月份;表明我省ASFV疫情的最早传播可能来自肉产品。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 猪肉 冻肉 荧光定量PCR
LPS对肉鸡空肠多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA表达及其底物酮康唑小肠渗透性的影响 认领
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作者 李香秀 戴小华 王丽平 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第5期34-38,共5页
为了探讨脂多糖对肉鸡空肠中多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA表达及转运功能的影响,采用荧光定量PCR方法检测脂多糖处理6 h和12 h后对健康肉鸡空肠组织中MRP2 mRNA表达的影响;采用小肠原位单向灌流试验测定了不同剂量脂多糖(5 mg/kg和15 mg... 为了探讨脂多糖对肉鸡空肠中多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA表达及转运功能的影响,采用荧光定量PCR方法检测脂多糖处理6 h和12 h后对健康肉鸡空肠组织中MRP2 mRNA表达的影响;采用小肠原位单向灌流试验测定了不同剂量脂多糖(5 mg/kg和15 mg/kg)对酮康唑空肠渗透性的影响。结果显示:经LPS处理6和12 h后,空肠中MRP2 mRNA的表达水平均极显著降低(P<0.01);鸡小肠原位单向灌流试验显示高浓度的脂多糖(15 mg/kg)能显著增加酮康唑在小肠的有效渗透率(Peff)(P<0.05)。试验表明,脂多糖能抑制肉鸡空肠组织中MRP2 mRNA的表达并对空肠的外排转运功能产生影响,从而促进其底物药物的小肠渗透性,进而可能会影响其体内生物利用度。该结果可为炎症状态下肉鸡的合理用药提供理论支持。 展开更多
关键词 脂多糖 MRP2 荧光定量PCR 小肠原位单向灌流
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