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实时荧光定量PCR法对肝衰竭合并侵袭性肺曲霉菌病患者的诊断价值 预览
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作者 卓丽 兰芸 +2 位作者 李粤平 陈万山 邓西龙 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第18期2946-2949,共4页
目的探讨实时荧光定量PCR法对肝衰竭合并侵袭性肺曲霉菌病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)患者的诊断价值。方法本研究共纳入肝衰竭合并IPA患者17例,肝衰竭无肺部感染者13例和健康肝衰竭无肺部感染组20例。留取血清样本,以荧光... 目的探讨实时荧光定量PCR法对肝衰竭合并侵袭性肺曲霉菌病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)患者的诊断价值。方法本研究共纳入肝衰竭合并IPA患者17例,肝衰竭无肺部感染者13例和健康肝衰竭无肺部感染组20例。留取血清样本,以荧光定量PCR法进行血清曲霉菌DNA测定,并与半乳甘露聚糖检测(GM试验)的结果进行对比。结果(1)在17例肝衰竭合并IPA患者中,15例(88.2%)患者血清曲霉菌DNA阳性,GM试验阳性9例(47.1%),两种方法阳性率差异有统计学意义(P=0.026),肝衰竭合并IPA患者中,荧光定量PCR法测定血清曲霉菌DNA强阳性(定义为曲霉菌DNA≥1 000 copies/mL)的患者共6例(35.3%),与GM试验阳性率的差异无统计学意义(P=0.728)。(2)在肝衰竭无肺部感染者的13例血清样本中,荧光定量PCR测定血清曲霉菌DNA阳性1例(7.7%),阴性12例(92.3%);GM试验阳性3例(23.1%),阴性10例(77.0%)。两种方法阳性率差异无统计学意义(P=0.592)。(3)20例健康肝衰竭无肺部感染组血清曲霉DNA均为阴性。结论荧光实时定量PCR法测定血清曲霉菌DNA含量,敏感性高于GM实验,可以协助肝衰竭合并侵袭性肺曲霉菌病的诊断。 展开更多
关键词 肝衰竭 侵袭性肺曲霉菌病 荧光实时定量PCR
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小麦K2型脱水蛋白DHN14响应非生物胁迫的功能分析 预览
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作者 史学英 田野 +2 位作者 李核 齐玉红 张林生 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第5期23-31,41共10页
【目的】研究脱水蛋白DHN14的功能及其在植物响应非生物胁迫中的潜在作用。【方法】从小麦品种'郑引1号'克隆获得脱水蛋白基因DHN14,对其进行生物信息学分析,利用实时定量PCR分析该基因在逆境胁迫下的表达水平,构建脱水蛋白DHN1... 【目的】研究脱水蛋白DHN14的功能及其在植物响应非生物胁迫中的潜在作用。【方法】从小麦品种'郑引1号'克隆获得脱水蛋白基因DHN14,对其进行生物信息学分析,利用实时定量PCR分析该基因在逆境胁迫下的表达水平,构建脱水蛋白DHN14基因的原核表达载体(重组菌pET28a-DHN14),经IPTG诱导表达后,在非生物胁迫下,研究该蛋白对大肠杆菌及乳酸脱氢酶(LDH)的保护作用。【结果】克隆获得脱水蛋白基因DHN14的CDS为339 bp,编码112个氨基酸,该蛋白含有2个保守的K片段,属于高亲水性无序蛋白,其分子质量为24 ku,等电点(pI)约为6.28;多序列比对分析表明,DHN14蛋白与WCOR726(Triticum aestivum)脱水蛋白的亲缘关系最近;实时定量RT-PCR结果表明,脱水蛋白基因DHN14受干旱、低温和ABA诱导表达;在20 mmol/L金属离子(Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+)胁迫下,表达DHN14重组蛋白的大肠杆菌的活力明显高于对照,表明该蛋白在大肠杆菌中对金属离子胁迫具有保护作用;用1.0 mmol/L过氧化氢进行胁迫处理,重组菌DHN14存活率显著增高,说明脱水蛋白DHN14能够提高大肠杆菌对过氧化氢胁迫的耐受性;在低温和脱水胁迫下,DHN14脱水蛋白对乳酸脱氢酶的活性具有保护作用。【结论】小麦脱水蛋白DHN14能够响应非生物胁迫,提高对低温、干旱、金属离子、过氧化氢的耐受性。 展开更多
关键词 脱水蛋白 非生物胁迫 小麦 乳酸脱氢酶 荧光实时定量PCR
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长期施肥对黄土旱塬农田土壤微生物丰度的影响
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作者 邢亚薇 李春越 +5 位作者 刘津 王益 井丽娟 王苁蓉 薛英龙 党廷辉 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1351-1358,共8页
以长武黄土高原农业生态试验站的长期定位试验为平台,通过荧光实时定量PCR (real-time PCR)技术,研究不同施肥制度下的黄土旱塬农田土壤微生物群落丰度,揭示长期不同施肥制度对土壤微生物群落的影响规律.结果表明:单施化肥处理细菌数量... 以长武黄土高原农业生态试验站的长期定位试验为平台,通过荧光实时定量PCR (real-time PCR)技术,研究不同施肥制度下的黄土旱塬农田土壤微生物群落丰度,揭示长期不同施肥制度对土壤微生物群落的影响规律.结果表明:单施化肥处理细菌数量较CK裸地增加21%,古菌增加32%;化肥配施有机肥处理细菌数量增加37%,古菌数量增加36%.化肥配施有机肥处理显著增加了土壤细菌和古菌的丰度.30年长期施氮肥处理导致氨氧化细菌(AOB)的增幅达7.13倍,而氨氧化古菌(AOA)的增幅仅为0.2倍.AOB对施肥的响应程度较高,尤其是对氮肥具有较高的敏感性.与单施氮肥和氮肥混施有机肥处理相比,施磷肥处理显著增加了固氮酶铁蛋白和甲烷氧化菌含量,撂荒地的固氮酶铁蛋白、亚硝酸还原酶和甲烷氧化菌含量显著高于耕作土壤.结合土壤基本理化性质的相关性分析结果,pH、全氮和有机碳含量是影响土壤微生物群落丰度的重要因子.总之,长期施肥显著改变了黄土旱塬农田土壤各微生物丰度,不同施肥模式、耕作方式对微生物群落丰度具有显著影响. 展开更多
关键词 黄土旱塬 长期施肥 微生物群落丰度 荧光实时定量PCR
C型禽偏肺病毒SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及应用 被引量:1
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作者 陈基明 张文 +5 位作者 赵长润 何怡宁 王海勇 韦平 韦天超 磨美兰 《中国家禽》 北大核心 2018年第17期17-21,共5页
根据GenBank发表的禽偏肺病毒(aMPV)F基因序列,设计一对特异性引物,建立C亚型aMPV的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法。对该反应体系进行条件优化,建立了标准曲线,并进行特异性、敏感性及重复性试验,然后将建立的方法应用于临床... 根据GenBank发表的禽偏肺病毒(aMPV)F基因序列,设计一对特异性引物,建立C亚型aMPV的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法。对该反应体系进行条件优化,建立了标准曲线,并进行特异性、敏感性及重复性试验,然后将建立的方法应用于临床样品和攻毒样品的检测。结果显示:标准曲线循环闽值与模板浓度呈现良好的线性关系;建立的方法只能检测出C亚型aMPV,最低可以检测到0.8×10^1拷贝机L的核酸模板,重复性试验的变异系数小于4%。应用建立的方法对43份临床样品检测,结果显示均为阴性;对42份35日龄SPF鸡人工感染后1-21d的气管和肺脏样品进行检测,结果显示攻毒样品均为阳性。因此,研究建立的特异、灵敏、重复性好的C型aMPV实时荧光定量PCR方法,既可适合于该病的早期诊断和流行病学调查,又为该病毒的致病机制研究提供技术支撑。 展开更多
关键词 C型禽偏肺病毒 基因 SYBR Green 荧光实时定量PCR
反硝化深床滤柱深度脱氮效果及反硝化功能基因分析 预览
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作者 刘灵婕 季民 +3 位作者 王芬 孙未 翟思媛 王阳 《化工进展》 CSCD 北大核心 2018年第12期4917-4923,共7页
采用石英砂、活性炭双层滤料反硝化深床滤柱处理城镇污水处理厂二沉池出水中硝酸盐氮(NO3^–-N),研究了深床滤柱反硝化脱氮性能以及主要反硝化功能基因对进水碳氮比(化学需氧量/总氮,即COD/TN,简称C/N)的响应。结果表明,NO3^–-N平均转... 采用石英砂、活性炭双层滤料反硝化深床滤柱处理城镇污水处理厂二沉池出水中硝酸盐氮(NO3^–-N),研究了深床滤柱反硝化脱氮性能以及主要反硝化功能基因对进水碳氮比(化学需氧量/总氮,即COD/TN,简称C/N)的响应。结果表明,NO3^–-N平均转化率随着C/N升高,由46.5%升高至90.0%,化学需氧量(COD)平均去除率由97.2%降至76.5%。低碳氮比(C/N<6)条件下,出水亚硝酸盐氮(NO2^–-N)出现明显的积累,在C/N=4.2时,积累率达41.5%,在高碳氮比(C/N≥6)条件下,NO2^–-N积累量逐渐减少,直至出水无NO2^–-N。研究表明,反硝化深床滤柱对污染物的转化主要发生在前35cm滤料深度,COD去除率和NO3^–-N转化率分别为94.0%、81.2%。采用荧光实时定量PCR技术在C/N分别为4.2、6和7条件下,对深床滤柱中反硝化功能基因napA、narG、nirK、nirS和nosZ数量进行分析,结果表明,随着C/N升高,各反硝化功能基因拷贝数也随之升高,说明增加碳源投加量可以为反硝化细菌提供更好的生长环境,有利于其生长繁殖,促进反硝化过程的进行;当narG基因拷贝数大于(nirS+nirK)基因拷贝数时,NO2^–-N会产生积累。 展开更多
关键词 反硝化深床滤柱 C/N比 荧光实时定量PCR 反硝化功能基因
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β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫的表达研究 预览
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作者 刘晓慧 齐晓龙 +5 位作者 常迪 盛熙晖 王相国 倪和民 郭勇 李秋明 《中国农学通报》 2017年第20期124-127,共4页
为探讨卢catenin在人工诱导发情绵羊子宫组织中的表达情况,本试验采用实时荧光定量PCR与半定量PCR检测绵羊发情后第10、12、14、16、18天子宫组织中β-cateninmRNA的表达情况。实时荧光定量PCR与半定量PCR结果显示:2种检测方法均能检... 为探讨卢catenin在人工诱导发情绵羊子宫组织中的表达情况,本试验采用实时荧光定量PCR与半定量PCR检测绵羊发情后第10、12、14、16、18天子宫组织中β-cateninmRNA的表达情况。实时荧光定量PCR与半定量PCR结果显示:2种检测方法均能检测出不同时期的绵羊子宫中房cateninmRNA表达,其中绵羊发情后第10天β-cateninmRNA的相对表达量最大,显著高于其他4个时间点(P〈0.05),第12天相对表达量显著降低(P〈0.05),之后相对保持恒定,到第18天又显著升高(P〈0.05)。结果表明:实时荧光定量PCR与半定量PCR均可用于检测绵羊子宫组织中β-cateninmRNA的相对表达量;在绵羊发情后第10~18天,β-catenin在子宫中的呈现先减少后增加的波动变化趋势. 展开更多
关键词 绵羊 Β-CATENIN 子宫 荧光实时定量PCR 定量PCR
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荧光实时定量PCR研究GA负调控因子基因在棉花纤维不同发育时期的表达模式 预览 被引量:1
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作者 易小平 谢翔 廖文彬 《热带农业科学》 2017年第10期36-40,共5页
棉花纤维发育经历起始期、延伸期、次级细胞壁加厚期、脱水期共4个发育时期。为了了解GA负调控因子基因在整个纤维发育时期的调节作用,采用敏感的实时定量PCR对GA负调控因子基因Gh RGL在棉花纤维不同发育时期中的转录水平进行了定量研究... 棉花纤维发育经历起始期、延伸期、次级细胞壁加厚期、脱水期共4个发育时期。为了了解GA负调控因子基因在整个纤维发育时期的调节作用,采用敏感的实时定量PCR对GA负调控因子基因Gh RGL在棉花纤维不同发育时期中的转录水平进行了定量研究,通过提取来源于不同纤维发育阶段[包括-3~0 DPA(开花后)胚珠,3 DPA胚珠,5 DPA胚珠,10 DPA胚珠,15 DPA纤维,25 DPA纤维]的样品总RNA,探讨不同发育时期Gh RGL基因的表达模式。结果显示,Gh RGL基因在所有被选的样品中都有表达,其中在5 DPA胚珠和10 DPA胚珠中转录水平较高,在10 DPA胚珠中表达水平最高,在-3~0 DPA胚珠、3 DPA胚珠、15 DPA纤维、25 DPA纤维中的表达水平较低,表明Gh RGL基因在纤维伸长期表达水平较高,暗示Gh RGL可能对纤维伸长起着重要作用。 展开更多
关键词 荧光实时定量PCR 棉花纤维发育 GA负调控因子基因 表达模式
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Notch1基因在妊娠期合并高血压孕妇胎盘组织中的表达及相关研究 预览
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作者 梅丽娜 宁启鹏 +2 位作者 赵清 吴孝立 杜英 《浙江临床医学》 2017年第5期804-806,共3页
目的 探讨Notch1基因在妊娠期高血压(妊高症)、重度子痫前期及正常胎盘组织中的表达水平及其相关的临床意义。方法分别采用免疫组化和荧光实时定量PCR检测50例妊高症、30例重度子痫前期及50例正常胎盘组织中Notchl基因的表达情况。结... 目的 探讨Notch1基因在妊娠期高血压(妊高症)、重度子痫前期及正常胎盘组织中的表达水平及其相关的临床意义。方法分别采用免疫组化和荧光实时定量PCR检测50例妊高症、30例重度子痫前期及50例正常胎盘组织中Notchl基因的表达情况。结果免疫组化检测Nocth1蛋白在妊高症组、重度子痫组及正常对照组中的表达率分别为52.0%、43.4%、76%,组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05);荧光实时定量PCR检测Notchl基INmRNA含量在妊高症组、重度子痫组及正常对照组中分别为(4.10±0.57)、(3.07±0.45),(4.88±0.70),组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论Notch1基因的低表达与妊娠期高血压的发生、发展存在相关性。 展开更多
关键词 Notch1妊娠期高血压 重度子痫前期 荧光实时定量PCR 免疫组化
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微小RNA-200家族在子宫内膜癌中的临床研究 预览 被引量:1
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作者 邢景娜 王世荣 +2 位作者 薛娟 任红伟 丁亚 《中国妇幼健康研究》 2017年第S1期57-58,共2页
目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA)-200家族在子宫内膜癌中的临床研究。方法:子宫内膜癌组选取子宫内膜样腺癌组织50例,按国际妇产科联(FIGO)手术病理标准进行临床分期;正常对照组为子宫肌瘤患者之正常子宫内膜组织,共10例。所有样本均... 目的:研究微小RNA(microRNA,miRNA)-200家族在子宫内膜癌中的临床研究。方法:子宫内膜癌组选取子宫内膜样腺癌组织50例,按国际妇产科联(FIGO)手术病理标准进行临床分期;正常对照组为子宫肌瘤患者之正常子宫内膜组织,共10例。所有样本均采用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-200家族的表达量。子宫内膜癌miRNA-200家族高表达与患者年龄、组织学分级、临床分期均无相关性(均P>0.05)。结论:miRNA-200家族可能参与了子宫内膜癌的发生、发展过程,起到癌基因的作用,其高表达可以作为一个早期筛查的分子标记物。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 MICRORNA 荧光实时定量PCR
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Notch1基因在宫颈癌组织中的表达及临床意义 预览 被引量:2
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作者 楼朝霞 梅丽娜 +3 位作者 杜英 胡庆伟 赵清 邢建民 《浙江临床医学》 2017年第2期231-232,235共3页
目的研究Notch1基因在不同宫颈组织中的表达,探讨其在宫颈癌发生发展中的意义。方法分别采用免疫组化和荧光实时定量PCR检测27例子宫颈癌、33例宫颈上皮内瘤变和19例正常宫颈组织中Notch1基因的表达情况。结果免疫组化检测Nocth1蛋白... 目的研究Notch1基因在不同宫颈组织中的表达,探讨其在宫颈癌发生发展中的意义。方法分别采用免疫组化和荧光实时定量PCR检测27例子宫颈癌、33例宫颈上皮内瘤变和19例正常宫颈组织中Notch1基因的表达情况。结果免疫组化检测Nocth1蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组及正常宫颈癌组的表达率分别为63.0%、45.5%、15.8%,组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05);荧光实时定量PCR检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织及正常宫颈组织中NotchlmRNA含量分别为(5.10±1.91)、(3.24±0.69)、(2.07±0.40),组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。宫颈癌NotchlmRNA的高表达与患者年龄、组织学分级、临床分期差异均无统计学意义(P〈0.05)。结论Notch1mRNA的高表达与宫颈组织的恶变演进有关,在子宫颈癌的发生、发展上起重要作用。 展开更多
关键词 NOTCH1 宫颈癌 荧光实时定量PCR 免疫组化
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实时荧光定量PCR法检测新城疫病毒的方法建立 预览 被引量:1
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作者 丽牧 《食品安全导刊》 2017年第01X期136-138,共3页
为建立新城疫病毒的荧光定量PCR快速检测方法,根据新城疫病毒的基因序列设计引物与探针,通过TaqMan一步法qRT—PCR检测方法快速检测样品。结果表明,该方法能准确、快速地检测新城疫病毒,且特异性、灵敏度、稳定性较强,能够满足实... 为建立新城疫病毒的荧光定量PCR快速检测方法,根据新城疫病毒的基因序列设计引物与探针,通过TaqMan一步法qRT—PCR检测方法快速检测样品。结果表明,该方法能准确、快速地检测新城疫病毒,且特异性、灵敏度、稳定性较强,能够满足实际工作中的检测要求。 展开更多
关键词 新城疫病毒 荧光实时定量PCR 检测
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血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义 预览 被引量:4
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作者 祝敏捷 孙莲芳 杨静 《现代中西医结合杂志》 CAS 2017年第11期1167-1170,共4页
目的 观察血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义。方法 选择手术治疗的宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者45例作为CIN组,早期宫颈浸润癌(ICC)患者85例作为ICC组,子宫肌瘤全切子宫后正常宫颈上皮(NCE)患者20例作为NCE... 目的 观察血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义。方法 选择手术治疗的宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者45例作为CIN组,早期宫颈浸润癌(ICC)患者85例作为ICC组,子宫肌瘤全切子宫后正常宫颈上皮(NCE)患者20例作为NCE组。用Real time PCR法检测各组血清miR-21和miR-10b表达情况及ICC组手术后miR-21和miR-10b表达情况,分析miR-21和miR-10b相对表达量与CIN分级、ICC临床指标的关系及ICC患者血清miR-21和miR-10b表达的相关性。结果 ICC组的miR-21相对表达量明显高于CIN组和NCE组(P均〈0.05),并随着CIN分级的升高相对表达量增加(P〈0.05),手术后血清miR-21相对表达量明显降低(P〈0.05);ICC组的miR-10b相对表达量明显低于CIN组和NCE组(P均〈0.05),并随着CIN分级的升高相对表达量降低(P〈0.05),手术后血清miR-10b表达量明显增加(P〈0.05)。血清miR-21和miR-10b表达量与年龄、组织类型、肿瘤直径、肌层浸润深度、脉管浸润和神经浸润无明显相关性(P均〉0.05),而与临床分期、组织分化程度、高位HPV和淋巴转移具有明显的相关性(P均〈0.05)。ICC患者的血清miR-21相对表达量与血清miR-10b相对表达量呈负相关(r=-0.618,P〈0.05)。结论 miR-21可能为促癌基因,miR-10b为抑癌基因,miR-21和miR-10b参与了宫颈癌的发生发展,联合检测血清miR-21和miR-10b表达量对于早期诊断宫颈癌和监测预后具有重要意义。 展开更多
关键词 宫颈癌 荧光实时定量PCR 微小RNA 预后
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血清循环miR-103a-2在非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义 预览 被引量:1
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作者 王旭 李丹妮 +1 位作者 付俣萧 冯辉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第5期346-348,共3页
目的 探讨miR-103作为非侵袭性生物学标志物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)代谢异常的筛查意义。方法 以健康人群和NAFLD患者为研究对象,采集血清样本进行生化指标检测。采用Nucleo ZOL法分离血清miRNA,SYBR Green法对miR-103a-2进行相... 目的 探讨miR-103作为非侵袭性生物学标志物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)代谢异常的筛查意义。方法 以健康人群和NAFLD患者为研究对象,采集血清样本进行生化指标检测。采用Nucleo ZOL法分离血清miRNA,SYBR Green法对miR-103a-2进行相对定量分析。Speraman法对miR-103a-2和生化指标进行相关性分析。结果 血清学分析结果显示,与健康人对照组相比,NAFLD组TC(P〈0.01)、TG(P〈0.01)、ALT(P〈0.01)和γ-GGT(P〈0.01)水平均明显升高。与血脂正常NAFLD组相比,高脂血症NAFLD组中TC(P〈0.01)、TG(P〈0.01)和LDL-C(P〈0.05)水平均明显升高,与健康人对照组相比,血脂正常NAFLD患者(P〈0.05)和伴有高血脂症NAFLD患者(P〈0.01)血清miR-103a-2表达水平均升高。血清miR-103a-2水平与血清TC水平呈正相关(r=0.495,P=0.001)。结论 血清miR-103a-2较血脂更为敏感,可能成为NAFLD无创性筛查指标。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 高脂血症 MIRNA miR-103a 荧光实时定量PCR
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miR-145在非小细胞肺癌中的表达 预览 被引量:2
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作者 张伟 刘伟良 +1 位作者 王勇 张潍 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第15期2424-2427,共4页
目的:检测非小细胞肺癌患者癌血清和组织中miR-145的表达量与临床病理参数的关系,探讨其作为非小细胞肺癌分子标志物的可能性。方法:采用实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌及健康血清,以及非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织中miR-145的... 目的:检测非小细胞肺癌患者癌血清和组织中miR-145的表达量与临床病理参数的关系,探讨其作为非小细胞肺癌分子标志物的可能性。方法:采用实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌及健康血清,以及非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织中miR-145的表达量,分析miR-145的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系。采用ROC曲线分析miR-145对非小细胞肺癌的诊断价值。结果:miR-145在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织(P〈0.05);miR-145在患者血清中的表达显著低于对照组(P〈0.05)。miR-145的ROC曲线下面积(AUC)为0.875,灵敏度为88.5%,特异度为84.8%。结论:非小细胞肺癌患者癌组织和血清miR-145低表达,miR-145有望作为NSCLC早期的诊断指标。 展开更多
关键词 MIR-145 荧光实时定量PCR 非小细胞肺癌
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半滑舌鳎miR-200a和miR-200b前体克隆及其免疫应答分析 预览 被引量:1
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作者 沙珍霞 陈学杰 +1 位作者 陈亚东 颜慧 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期314-320,共7页
为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)miR-200a和miR-200b在免疫应答中的作用,采用PCR方法克隆了半滑舌鳎miR-200家族的miR-200a和miR-200b的前体序列,长度分别为82和88 bp;用The mfold Web Server和Clustalx1.83软件对其前体序... 为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)miR-200a和miR-200b在免疫应答中的作用,采用PCR方法克隆了半滑舌鳎miR-200家族的miR-200a和miR-200b的前体序列,长度分别为82和88 bp;用The mfold Web Server和Clustalx1.83软件对其前体序列进行了二级结构和同源性分析,miR-200a和miR-200b都具有典型的颈环结构,与其他物种具有较高的同源性。qRT-PCR分析结果显示,miR-200a和miR-200b在健康半滑舌鳎13种组织(肝脏、肠、脾脏、头肾、后肾、鳃、血液、脑、皮肤、肌肉、胃、心脏和卵巢)中均有表达,miR-200a在头肾中表达量最高,在血液中表达量最低,miR-200b在肝脏中表达量最高,在肌肉中表达量最低;miR-200a和miR-200b在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染半滑舌鳎后不同时间点的4种免疫相关组织(肝脏、肠、脾脏和头肾)中的表达呈现出先上调后下降的规律,但表达达到峰值的时间点有所不同。miR-200a在肝脏和脾中的表达峰值出现在鳗弧菌感染后6h,在肠和头肾中则是鳗弧菌感染后12h,miR-200b在肠、脾和头肾中均在鳗弧菌感染后12h达到表达高峰;miR-200a和miR-200b在脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)、葡聚糖(WGP)、聚肌胞苷酸(poly I:C)4种病原模拟物刺激后的半滑舌鳎肝脏细胞系中呈现出上调表达趋势,其中Poly I:C刺激半滑舌鳎肝脏细胞系后miR-200a上调表达趋势明显,6h的表达量为0h的9倍,在WGP刺激半滑舌鳎肝脏细胞后miR-200b上调表达趋势明显,2h的表达量为0的9倍。研究结果为揭示miRNA在半滑舌鳎免疫应答中的作用提供了科学依据。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 miR-200a miR-200b 前体克隆 荧光实时定量PCR 免疫应答
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间接免疫荧光法在台山地区艾滋病并发PCP的应用 预览
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作者 陈达富 邵筱 《实验与检验医学》 CAS 2016年第1期29-30,43共3页
目的比较间接免疫荧光法(IFA)与瑞-姬氏复合染色法、荧光实时定量PCR法(Real-time PCR)三种方法对肺孢子菌肺炎的差异,探讨实验室方法 IFA在诊断肺孢子菌肺炎的应用价值。方法通过回顾性分析,收集2013年1月至2015年8月间在我院经病... 目的比较间接免疫荧光法(IFA)与瑞-姬氏复合染色法、荧光实时定量PCR法(Real-time PCR)三种方法对肺孢子菌肺炎的差异,探讨实验室方法 IFA在诊断肺孢子菌肺炎的应用价值。方法通过回顾性分析,收集2013年1月至2015年8月间在我院经病原学及临床诊断确诊的肺孢子菌肺炎(PCP)患者56例作为实验组,另外收集60例非PCP感染的呼吸道疾病患者作为对照组,收集两组患者的痰液和支气管肺泡灌洗液(BALF),分别用IFA、瑞-姬氏复合染色法、Real-time PCR对两组的痰液和BALF进行检测,比较三种方法的检测结果。结果通过比较,IFA检测与real-time PCR一致性极高,对痰液和BALF标本阳性检出率均高于瑞-姬氏复合染色法,P〈0.05,差异显著。三种方法学对BALF的阳性检出率明显高于痰液,P〈0.05。结论瑞-姬氏复合染色法由于方法学上的局限性,存在阳性率不高的问题。IFA无论对痰液或BALF的检测灵敏度均高于瑞-姬氏复合染色法,与Real-time PCR一致性极高。IFA可以作为常规方法用于基层医院PCP的检测。在本研究中,瑞-姬氏复合染色法、IFA、Real-time PCR对BALF标本的检测率高于痰液标本,临床上建议尽量留取BALF标本,条件无法许可的情况可留取痰液标本。 展开更多
关键词 艾滋病 肺孢子菌 肺孢子菌肺炎 间接免疫荧光 荧光实时定量PCR
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金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素基因sek的表达 预览 被引量:1
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作者 王琼 张荣 +2 位作者 陈娟 龙虎 唐俊妮 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期190-194,共5页
目的:研究金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素sek的时序性表达。方法:将实验室保存的三株携带sek基因的金黄色葡萄球菌SA005、SA008和SAB0分别接种于无菌猪肉上37℃静置培养至120 h,每隔12 h取样进行细菌计数以及p H测定,同... 目的:研究金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素sek的时序性表达。方法:将实验室保存的三株携带sek基因的金黄色葡萄球菌SA005、SA008和SAB0分别接种于无菌猪肉上37℃静置培养至120 h,每隔12 h取样进行细菌计数以及p H测定,同时收集不同时间点的菌体提取RNA,利用实时荧光定量PCR监测细菌生长过程中sek的相对表达量。结果:三株菌株在猪肉上生长36 h以后进入稳定期,48 h肉上已经出现肉眼可见的金黄色葡萄球菌菌体聚集,120 h肉粒变得粘稠并有黏液渗出;猪肉p H在细菌生长的36 h前变化不大,在120 h已逐渐上升到p H8.85-9.14;三株金黄色葡萄球菌sek的表达量在细菌生长的对数期有一次高表达,随后表达量下降,在生长的稳定后期表达量再次升高,其中,SA005的sek基因在细菌的生长过程中表达量明显高于SA008和SAB0(p〈0.01)。结论:三株金黄色葡萄球菌在猪肉上生长,肠毒素sek基因持续表达但相对表达量因菌株而存在差异,sek基因在转录水平上的高表达将会带来食品安全的潜在威胁。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 猪肉 新型肠毒素sek 荧光实时定量PCR 时序性表达
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microRNA34a/p53信号通路在大鼠肺鳞癌发生过程中的表达及意义 预览 被引量:1
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作者 王全志 杨旸 +1 位作者 郭艳风 杨廷桐 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第19期3024-3028,共5页
目的:探讨microRNA34a/p53信号通路在大鼠肺癌发生过程中的表达及意义。方法:用免疫组化检测大鼠模型不同组织中p53蛋白表达情况;qRT-PCR技术检测正常大鼠肺组织、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变(原位癌)、浸润癌中microRNA34... 目的:探讨microRNA34a/p53信号通路在大鼠肺癌发生过程中的表达及意义。方法:用免疫组化检测大鼠模型不同组织中p53蛋白表达情况;qRT-PCR技术检测正常大鼠肺组织、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变(原位癌)、浸润癌中microRNA34a的相对表达量。结果:p53蛋白阳性表达率在正常对照组0(0/40)、低级别上皮内瘤变组45.5%(5/11)、高级别上皮内瘤变组(原位癌)76.5%(13/17)和浸润性癌组80.0%(16/20)中表达逐渐增高,阳性强度增高。p53蛋白在正常对照组与低、高级别上皮内瘤变、浸润癌阳性表达比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。microRNA34a在正常对照组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、浸润癌组中平均表达量逐渐降低,分别为0.989 0±0.094 2、0.865 4±0.035 6、0.044 6±0.001 7、0.009 1±0.004 1,浸润癌表达水平显著低于对照组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组(P〈0.05)。p53蛋白与microRNA34a在肺癌中的表达呈负相关性(P〈0.01)。结论:microRNA34a/p53通路与肺癌的发生发展具有密切关系,联合检测有利于肺癌的早期诊断。 展开更多
关键词 肺癌 微小RNA P53 荧光实时定量PCR
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山羊GDF-8基因的表达差异与发育性变化分析 预览
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作者 管凇 周汉林 侯冠彧 《热带农业工程》 2016年第4期27-32,共6页
为探索GDF-8基因在山羊不同生长阶段的肝脏、心脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中m RNA表达发育性变换规律,采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术对2月龄、3月龄和4月龄的海南本地山羊进行检测。结果显示,GDF-8基因在3月龄的心脏组织中m RNA表达... 为探索GDF-8基因在山羊不同生长阶段的肝脏、心脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中m RNA表达发育性变换规律,采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术对2月龄、3月龄和4月龄的海南本地山羊进行检测。结果显示,GDF-8基因在3月龄的心脏组织中m RNA表达量最高,其次是肾脏和骨骼肌;在2月龄和4月龄时5种组织中GDF-8基因表达量较低,尤其是在心脏组织中几乎不表达;在肝脏和脂肪中的表达依次为4月龄〉2月龄〉3月龄,且各月龄之间表达差异极显著(p〈0.01);心脏、肾脏和骨骼肌的表达依次为3月龄〉4月龄〉2月龄,其中,肾脏在不同月龄段表达差异极显著(p〈0.01),而心脏和骨骼肌在2月龄和4月龄之间表达差异不显著(p〉0.05)。 展开更多
关键词 GDF-8基因 MRNA表达 荧光实时定量PCR 山羊
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小麦wzy2-1基因的克隆及功能分析 预览 被引量:2
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作者 强治全 梁雅珺 +4 位作者 于正阳 杜娅 张帅 朱维宁 张林生 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1253-1258,共6页
脱水素是一类植物胚胎发育后期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA蛋白),属于LEA D-11家族,植物受非生物胁迫会大量表达。利用同源克隆技术,从郑引1号小麦中克隆了1个Kn型脱水素基因,命名为wzy2-1。该基因全长1740 bp... 脱水素是一类植物胚胎发育后期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA蛋白),属于LEA D-11家族,植物受非生物胁迫会大量表达。利用同源克隆技术,从郑引1号小麦中克隆了1个Kn型脱水素基因,命名为wzy2-1。该基因全长1740 bp,编码579个氨基酸,含有9个保守的K片段,与大麦的Dhn5基因具有较高同源性。生物信息学预测该蛋白属于高度亲水性的无序蛋白。通过该蛋白对大肠杆菌的保护作用研究表明,WZY2-1蛋白能够提高大肠杆菌对低温、高温、高盐以及高渗胁迫的耐受性。荧光实时定量PCR分析表明,wzy2-1基因受低温、盐渍、干旱诱导表达,但不受外源ABA诱导,说明wzy2-1基因属于非ABA依赖型脱水素基因。 展开更多
关键词 小麦 脱水素 荧光实时定量PCR 原核表达
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