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绿色荧光蛋白结合蛋白的表达纯化与鉴定 预览
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作者 胡业辉 李益鹏 +3 位作者 王紫英 陈勖 任真 丁澦 《复旦学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期183-190,共8页
绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原... 绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物已经被广泛应用于生物化学和分子生物学研究,其纳米抗体(GBP)也已在近期被鉴定,但GBP大规模表达及纯化流程优化尚未见报道,并且GBP与不同荧光蛋白之间的亲和力尚未被测定.我们首先构建了GBP基因(GBP1)的原核表达系统,然后通过Ni-NTA亲和层析和MonoQ阴离子交换层析纯化,每升菌液能够得到超过43mg、纯度超过95%的重组GBP1蛋白.我们通过MALDI-TOF/TOF质谱法测定纯化的GBP1的精确分子量,通过微量热泳动(MST)和等温滴定量热(ITC)实验检测GBP1与7种不同来源荧光蛋白的亲和力.结果显示GBP1特异性地与源自Aequoreavictoria的荧光蛋白及其衍生荧光蛋白相互作用,与RFP和ZoanthusGFP等无相互作用.GBP1与EGFP和sfGFP的亲和力最高,与YPet和T-Sapphire的亲和力稍弱,与CyPet的亲和力最低. 展开更多
关键词 荧光蛋白 绿色荧光蛋白结合蛋白 纳米抗体 蛋白表达 蛋白纯化 微量热泳动
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简述荧光蛋白 预览
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作者 王裕鹏 《生物学教学》 北大核心 2019年第5期73-74,共2页
荧光蛋白的发现为生命科学研究提供了极为有效的方法,具有划时代的意义。本文就荧光蛋白的发现、分类、理化性质和基本应用进行归纳总结。
关键词 荧光蛋白 生色团 荧光标记 蛋白质互作
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蓝藻红色荧光蛋白All1280 GAF2在E. coli BL21(DE3)中的表达及其突变体构建 预览
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作者 马琼 谢菲 +1 位作者 周志 周明 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期181-187,共7页
采用PCR技术从鱼腥藻(Anabaena sp.) PCC 7120中扩增获得红色荧光蛋白基因all1280 gaf2,并利用Bam HⅠ和SalⅠ酶切位点,将该基因插入到pET-30a(+)中,构建表达载体pET-all1280 gaf2。将该表达载体与藻胆色素生物合成质粒pACYC-ho1-pcyA... 采用PCR技术从鱼腥藻(Anabaena sp.) PCC 7120中扩增获得红色荧光蛋白基因all1280 gaf2,并利用Bam HⅠ和SalⅠ酶切位点,将该基因插入到pET-30a(+)中,构建表达载体pET-all1280 gaf2。将该表达载体与藻胆色素生物合成质粒pACYC-ho1-pcyA同时转化到大肠杆菌E. coli BL21 (DE3),表达后获得大肠杆菌色素细胞。结果显示,该色素细胞在荧光显微镜下具有红色荧光,且在15E/15Z态之间具有可逆光效应。进一步以pET-all1280 gaf2为模板,通过定点突变技术在all1280 gaf2基因中引入C53A突变,获得了突变体All1280 GAF2 (C53A)。将All1280 GAF2 (C53A)与藻胆色素在E. coli BL21 (DE3)中共表达,获得了比野生型红色荧光更强的大肠杆菌色素细胞。研究结果表明,与野生型相比,All1280 GAF2 (C53A)具有较高的摩尔消光系数和荧光量子产率,红色荧光更强。 展开更多
关键词 蓝藻光敏色素 荧光蛋白 探针 可逆效应
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苜蓿根瘤菌绿色荧光蛋白标记株的构建及对菌株结瘤固氮能力的影响 预览
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作者 杨晓玫 周彤 +1 位作者 阿芸 师尚礼 《草原与草坪》 CAS CSCD 2018年第1期44-49,56共7页
以苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti12531,Sinorhizobium meliloti343和苜蓿根瘤菌Rhizobium meliloti GN5为受体菌,以Escherichia coli pRK2073为辅助菌及绿色荧光蛋白GFP104为供体菌,采用三亲本杂交法进行结合转导。以Winogradsk... 以苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti12531,Sinorhizobium meliloti343和苜蓿根瘤菌Rhizobium meliloti GN5为受体菌,以Escherichia coli pRK2073为辅助菌及绿色荧光蛋白GFP104为供体菌,采用三亲本杂交法进行结合转导。以Winogradsky无氮培养基和TY培养基对标记菌株进行荧光表达及固氮特性的遗传稳定性检测,再对选出的荧光标记菌株以甘农5号紫花苜蓿和WL.343紫花苜蓿为宿主进行回接验证,测定了回接植物的生物量,结瘤数和标记菌的占瘤率等指标。结果表明:(1)三亲本杂交法适用于苜蓿根瘤菌GFP荧光标记菌株的构建,能以S.meliloti 343、R.meliloti GN5和S.meliloti 12531为出发菌株成功构建荧光标记菌株;(2)传代筛选后得到的荧光标记菌株中,S.meliloti 343-gfp2、R.meliloti GN5-gfp4和S.meliloti12531-gfp4遗传稳定性好,荧光表达量高;(3)含抗生素Winogradsky无氮培养基平板筛选与现有含抗生素平板分离筛选法相比,能显著提高荧光标记根瘤菌株的筛选效率;(4)获得的苜蓿根瘤菌荧光标记菌株间无显著差异,对标记菌株形成根瘤的固氮能力,及标记菌株对苜蓿植株生物量的影响进行比较,GFP荧光标记根瘤菌具有较高的遗传稳定性。 展开更多
关键词 苜蓿根瘤菌 荧光蛋白 荧光标记菌构建 三亲本杂交
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荧光蛋白标记逆转录病毒整合酶及Brd2真核表达载体的构建
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作者 汪速飞 杨梓艺 +3 位作者 魏巍 余冰 李雨蔓 倪明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期699-703,共5页
目的构建绿色荧光蛋白标记的莫洛尼鼠白血病病毒(MLV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)整合酶及红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒,为研究整合酶与Brd2相互作用打下基础。方法以Prr88-MLV、HIV质粒pNL4-3及含有Brd2的质粒为模板,采用PC... 目的构建绿色荧光蛋白标记的莫洛尼鼠白血病病毒(MLV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)整合酶及红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒,为研究整合酶与Brd2相互作用打下基础。方法以Prr88-MLV、HIV质粒pNL4-3及含有Brd2的质粒为模板,采用PCR技术扩增MLV-IN、HIV-IN、Brd2片段;利用酶切反应体系构建psectag2A-GFP-mIN、psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳后进行测序分析;用重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜观察目的蛋白表达情况,并进行WB鉴定。结果构建psectag2A-GFP-hIN、psectag2AGFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表达质粒,酶切以及测序结果与预期相符。将上述质粒分别转染293T细胞,WB及荧光显微镜均检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了绿色荧光标记的HIV、MLV整合酶真核表达质粒和红色荧光蛋白标记的Brd2真核表达质粒,尽管Brd2真核表达质粒荧光相对较弱,但这对整合酶与Brd2相互作用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 莫洛尼鼠白血病病毒 人类免疫缺陷病毒 整合酶 溴结合蛋白(Brd2) 荧光蛋白
荧光蛋白化学修饰在生物化学应用技术中的设想 预览
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作者 陈醒豪 《化工管理》 2018年第3期90-91,共2页
荧光蛋白的原理和研究进展对现代生命科学具有划时代的意义。至今,荧光蛋白已在生命科学领域被广泛利用,极大地推进荧光蛋白标记技术在观察生命生物学过程中的应用。同时,随着各种荧光蛋白研究的深入与发展,荧光蛋白工程技术不断取... 荧光蛋白的原理和研究进展对现代生命科学具有划时代的意义。至今,荧光蛋白已在生命科学领域被广泛利用,极大地推进荧光蛋白标记技术在观察生命生物学过程中的应用。同时,随着各种荧光蛋白研究的深入与发展,荧光蛋白工程技术不断取得新的突破,其中,基因工程改造和蛋白质化学修饰荧光蛋白成为研究热点。本文以蛋白质化学修饰为例,探讨蛋白质化学修饰在荧光蛋白工程中原理、方法和设想,旨在提升荧光蛋白的应用价值。 展开更多
关键词 荧光蛋白 蛋白化学修饰 生物化学技术 应用
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红、黄、绿三种颜色荧光质粒导入大肠杆菌中的稳定性表达 预览
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作者 杨晓玫 师尚礼 《甘肃农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期193-198,共6页
【目的】红、黄、绿3种颜色荧光蛋白质粒导入大肠杆菌的热稳定表达是实现质粒与受体菌杂交获得荧光标记菌的关键,荧光标记菌的构建,可极大地丰富荧光标记菌的颜色类别,为微生物示踪研究提供丰富的工具.【方法】采用大肠杆菌DH5α热激转... 【目的】红、黄、绿3种颜色荧光蛋白质粒导入大肠杆菌的热稳定表达是实现质粒与受体菌杂交获得荧光标记菌的关键,荧光标记菌的构建,可极大地丰富荧光标记菌的颜色类别,为微生物示踪研究提供丰富的工具.【方法】采用大肠杆菌DH5α热激转导法构建荧光标记菌.【结果】黄色和绿色蛋白质粒在原液浓度基础上,稀释10倍进行热激转导,红色蛋白质粒原液直接进行热激转导,可将携带红、黄、绿3种颜色荧光蛋白的质粒DNA成功导入大肠杆菌.【结论】经PCR重复检测,条带明显并符合红、黄、绿3种颜色荧光质粒基因序列大小,3种颜色荧光质粒热稳定表达水平较高. 展开更多
关键词 大肠杆菌 质粒转导 荧光蛋白 基因表达
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基于报告基因敲入构建果生刺盘孢细胞核荧光标记菌株
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作者 董秋月 梁晓飞 +2 位作者 张玮 孙广宇 张荣 《菌物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期166-174,共9页
运用基因敲入技术,将GFP、mCherry整合到果生刺盘孢Colletotrichum fructicola组蛋白histone H1位点,实现融合表达,获得细胞核荧光标记菌株。基于标记菌株可以对分生孢子、营养菌丝、附着胞、侵染菌丝等结构中的细胞核进行实时活体观察... 运用基因敲入技术,将GFP、mCherry整合到果生刺盘孢Colletotrichum fructicola组蛋白histone H1位点,实现融合表达,获得细胞核荧光标记菌株。基于标记菌株可以对分生孢子、营养菌丝、附着胞、侵染菌丝等结构中的细胞核进行实时活体观察。果生刺盘孢存在性亲和的“+”、“-”型菌株分化,GFP“+”型菌株和mCherry“-”型菌株接触形成明显杂交线,杂交线上单子囊内含红绿两种孢子,表明“+”、“-”型菌株间发生杂交;杂交线上子囊壳壁表达mCherry,表明由“-”型菌株发育而来。本研究构建的核荧光标记菌株将是研究果生炭疽菌细胞周期调控和有性繁殖过程的重要材料。 展开更多
关键词 小丛壳属 子囊壳 荧光蛋白 基因敲入 有性繁殖
疱疹病毒的示踪技术:看到了什么?还能看到什么?
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作者 王亚林 仇华吉 孙元 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1721-1733,共13页
病毒感染宿主细胞是一个非常复杂的过程,涉及病毒与多种宿主成分的相互作用。目前通过可视化病毒示踪技术可对病毒复制周期的各个过程进行实时、原位观察。疱疹病毒是一类有囊膜的DNA病毒,在自然界中广泛存在,对人类和动物健康构成严重... 病毒感染宿主细胞是一个非常复杂的过程,涉及病毒与多种宿主成分的相互作用。目前通过可视化病毒示踪技术可对病毒复制周期的各个过程进行实时、原位观察。疱疹病毒是一类有囊膜的DNA病毒,在自然界中广泛存在,对人类和动物健康构成严重威胁。文中综述了病毒示踪技术在疱疹病毒研究中的应用。这些研究为认识疱疹病毒的感染、复制机制以及病毒与宿主相互作用的过程开拓了新的视野。但该技术还不是十分完善,包括标记物最佳插入位点的选择、无法示踪病毒生命周期的全过程等。相信随着相关技术的发展与进步,会实现对疱疹病毒复制周期更加详细地追踪,从而更为详尽地揭示其复制机制。 展开更多
关键词 病毒示踪技术 疱疹病毒 荧光蛋白 复制 潜伏感染 轴突转运
新方法:聆听脑电交响乐
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作者 传植(编译) 《世界科学》 2018年第12期4-6,共3页
2010年,生物物理学家亚当·科恩(Adam Cohen)漫步于加利福尼亚旧金山时,接到一个意料之外的电话:“我们捕捉到信号了!”电话的另一端在5000公里之外的马萨诸塞州坎布里奇,是他的合作者二铲挖到了宝藏。在实验失败了几个月后,研究者... 2010年,生物物理学家亚当·科恩(Adam Cohen)漫步于加利福尼亚旧金山时,接到一个意料之外的电话:“我们捕捉到信号了!”电话的另一端在5000公里之外的马萨诸塞州坎布里奇,是他的合作者二铲挖到了宝藏。在实验失败了几个月后,研究者终于发现了一种荧光蛋白,可以反映信号在神经元间的传递。 展开更多
关键词 交响乐 脑电 加利福尼亚 马萨诸塞州 物理学家 荧光蛋白 旧金山 神经元
mRuby2在原核细胞中的表达及纯化 预览
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作者 余瑛 刘志云 +1 位作者 余磊 鲁秀敏 《重庆理工大学学报:自然科学》 北大核心 2018年第6期128-133,共6页
采用PCR技术扩增mRuby2,将其插入原核表达载体p ET30a(+)中,用p ET30a(+)-mRuby2转化BL21(DE3)并诱导重组蛋白表达,用荧光显微镜及SDS-PAGE观察、检测目标蛋白的表达情况,以Ni亲和层析技术纯化重组蛋白。结果表明:构建的重组... 采用PCR技术扩增mRuby2,将其插入原核表达载体p ET30a(+)中,用p ET30a(+)-mRuby2转化BL21(DE3)并诱导重组蛋白表达,用荧光显微镜及SDS-PAGE观察、检测目标蛋白的表达情况,以Ni亲和层析技术纯化重组蛋白。结果表明:构建的重组表达菌株经IPTG诱导后,发酵液颜色随诱导时间延长逐渐转为橙红,离心后的沉淀菌体为深粉红色,在荧光显微镜下,菌体发出明亮的红色荧光。SDS-PAGE检测发现,IPTG诱导5 h,重组蛋白表达量达到峰值。采用Ni螯合亲和层析技术从发酵菌体中分离出纯度大于80%的重组蛋白。由此可见:采用DNA重组技术能在原核系统中成功表达mRuby2编码的荧光蛋白,该重组蛋白亮度高、可视性好,能直观呈现实验结果,便于观察相关实验现象、理解并掌握实验原理,非常适合于生化、分子生物学实验教学。 展开更多
关键词 mRuby2 荧光蛋白 重组 表达 纯化
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一种改进型基于荧光蛋白重定位系统的丙型肝炎病毒滴度检测方法的建立
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作者 毕研伟 李智华 +5 位作者 龙琼 张辉 陈晨 李亚东 李育中 寸韡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期181-187,共7页
目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素B启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulatot-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位... 目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素B启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulatot-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸(C462-540)的基因序列及含有SV40核定位信号的IPS.1(C462.540)基因序列,插入经同样酶切的慢病毒表达载体LV-CAG-EGFP-WPRE、LV-CAG--mCherry(RFP)-WPRE,构建表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-NLS-IPS-1(C462-540)的慢病毒重组表达质粒;在此基础上构建含有IPS.1(C462-540)-2A-EGFP-puro、IPS-1(C462-540)-IRES-EGFP-puro的慢病毒重组表达质粒;利用293T细胞包装含有IPS-1(C462-540)蛋白的重组慢病毒;感染Huh7-5细胞,流式细胞仪筛选稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的Huh7.5细胞,或用puromycin筛选稳定表达EGFP的Huh7-5细胞;利用10倍系列稀释的HCV感染上述细胞,检测HCV的滴度。结果测序表明4种慢病毒表达质粒构建正确;收获的慢病毒感染Huh7-5细胞48h后,可见EGFP或RFP表达,经流式细胞仪分选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-IPS-1(C462-540)的细胞系,经puromycin筛选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462.540)的细胞系;经10倍系列稀释的HCV感染后,弥散在细胞质中的点状EGFP、RFP会扩散到整个细胞或定位到细胞核中,在甲基纤维素的限制下形成明显的荧光噬斑点,通过计算荧光噬斑点数得到用Huh7-5-EGFP-IPS-1(462-540)-IRES-PURO、Huh7.5两种细胞检测的HCV滴度分别为(5.6±0.2)×10^5和(5.5±0.2)×10^5PFU/mL,二者无显著差异。结论成功构建了含有绿色荧光或红色荧光报告系统的细胞系,建立了一种简单、快速检测HCV滴度的新方法。 展开更多
关键词 干扰素β启动刺激因子-l 丙型肝炎病毒 病毒滴度 慢病毒 荧光蛋白 Huh7.5细胞
利用荧光蛋白标记研究稻瘟病菌有性世代的细胞结构
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作者 郭晓宇 李玲 +8 位作者 董波 王教瑜 柴荣耀 张震 毛雪琴 邱海萍 郝中娜 王艳丽 孙国昌 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第7期1138-1145,共8页
稻瘟病是水稻最重要的病害之一,同时稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)是植物病原真菌研究的模式生物。稻瘟病菌是异宗配合的子囊菌,但其有性世代的细胞学过程、形态结构、分子机制以及对病菌变异的贡献研究都较少,也缺乏必要的研究手段... 稻瘟病是水稻最重要的病害之一,同时稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)是植物病原真菌研究的模式生物。稻瘟病菌是异宗配合的子囊菌,但其有性世代的细胞学过程、形态结构、分子机制以及对病菌变异的贡献研究都较少,也缺乏必要的研究手段。该文利用荧光蛋白标记结合荧光染色的方法对稻瘟病菌有性世代结构进行了标记和显微观察,以期为稻瘟病菌有性生殖过程和机制研究提供方法与借鉴。将绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白m Cherry分别导入两个相对交配型的稻瘟病菌菌株Guy11(MAT1-2)和70-15(MAT1-1),各转化子及野生型按交配型组合对峙培养,观察有性世代结构中的荧光表达情况。结果表明,组蛋白H3启动子、核糖体蛋白RP27启动子和疏水蛋白MPG1启动子均可在稻瘟病菌有性孢子形成过程中高丰度表达。进一步利用这三种启动子和两种荧光蛋白对稻瘟病菌有性孢子的细胞器(细胞核、过氧化物酶体)进行标记和观察,结果表明,融合组蛋白H2B的m Cherry及融合核定位信号(NLS)的GFP均能有效标记子囊孢子细胞的细胞核,荧光集中而明亮;带有过氧化物酶体定位信号1(PTS1)的GFP可以有效地标记子囊孢子中的过氧化物酶体,每个细胞中均有数量不等的过氧化物酶体,表明子囊孢子中需要过氧化物酶体参与生化代谢。该文还利用脂肪染色剂尼罗红、BODIPY和细胞壁染色剂卡氏白结合荧光蛋白标记对子囊和子囊孢子进行组合染色。结果显示,尼罗红、BODIPY、卡氏白染色剂互不干扰,可以与不同颜色的荧光蛋白相互组合,从而更加清晰地标记子囊和子囊孢子的结构、细胞器和储藏物质。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 有性世代 荧光蛋白 BODIPY 尼罗红 卡氏白
结构导向的可逆光激活绿色荧光蛋白探针的研制
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作者 王盛 陈轩泽 +2 位作者 常蕾 薛瑞莹 孙育杰 《光学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期15-24,共10页
近几年,可逆光激活荧光蛋白的研制越来越受到人们的重视,这类荧光蛋白极大地促进了活细胞超高分辨显微成像技术的发展及应用。可逆光激活荧光蛋白可被不同波长的光多次可逆地进行调制,因而被广泛地应用于高密度数据的光存储、光致变色... 近几年,可逆光激活荧光蛋白的研制越来越受到人们的重视,这类荧光蛋白极大地促进了活细胞超高分辨显微成像技术的发展及应用。可逆光激活荧光蛋白可被不同波长的光多次可逆地进行调制,因而被广泛地应用于高密度数据的光存储、光致变色荧光共振能量转移的测量以及基于可逆饱和线性荧光跃迁原理的超高分辨率显微成像中。从研制这类荧光蛋白所涉及的关键氨基酸位点出发,本文综述了近几年可逆光激活绿色荧光蛋白的研制进展,并简要地讨论荧光蛋白结构与光学特性的关系,从而为后续结构导向的可逆光激活荧光蛋白的研制提供参考。 展开更多
关键词 显微 光学显微术 可逆光激活 荧光蛋白 超分辨成像 荧光探针 绿色荧光蛋白
基于Keima荧光蛋白的线粒体自噬评价体系的建立 预览
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作者 陈洪丞成 姚铖铖 +2 位作者 陈佳意 徐广 潘欣 《感染.炎症.修复》 2017年第4期195-198,F0002共5页
目的:探讨建立一种基于Keima荧光蛋白评价线粒体自噬的体系。方法:由于Keima蛋白具有在酸性和中性pH中荧光信号不同的特性,因此定位于线粒体的Keima(mt-Keima)可显示通过自噬途径进入溶酶体中的线粒体,以此可以直观反映线粒体自噬... 目的:探讨建立一种基于Keima荧光蛋白评价线粒体自噬的体系。方法:由于Keima蛋白具有在酸性和中性pH中荧光信号不同的特性,因此定位于线粒体的Keima(mt-Keima)可显示通过自噬途径进入溶酶体中的线粒体,以此可以直观反映线粒体自噬的程度。构建定位于线粒体的Keima(mt-Keima)稳定表达载体,利用慢病毒感染的方式获得稳定表达细胞系。以CCCP刺激诱导线粒体自噬,观察刺激0-8 h 440 nm通道(指示中性pH下的Keima)和586 nm通道(指示酸性pH下的Keima)激发荧光信号的变化。结果:电泳结果显示mt-Keima基因片段扩增成功,酶切质粒鉴定结果显示重组质粒构建成功。不同pH条件下440 nm和586 nm激发光激发出的荧光信号不同,表明Keima蛋白表达正常并能够指示酸碱变化。在线粒体自噬诱导剂CCCP刺激下,细胞的酸性荧光信号随刺激时间逐步增加,表明线粒体自噬程度逐渐增强。结论:构建的体系能够准确评价线粒体自噬,为进一步探讨线粒体自噬机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 线粒体自噬 Keima 荧光蛋白
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美实现细胞周期全部四个阶段的可视化 预览
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《生物学教学》 北大核心 2017年第4期77-78,共2页
据北京科普之窗网2016年11月1日援引报道,美国斯坦福大学研究人员迈克尔·林及其同事开发了一种名为mMaroonl的荧光蛋白,其荧光位于可见光谱远红端,能同时与青绿、绿色和橙色荧光蛋白成像。
关键词 细胞周期 可视化 美国斯坦福大学 荧光蛋白 研究人员 可见光谱 迈克尔 种名
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酿酒酵母高效自主复制区的筛选与鉴定 预览
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作者 沈方琳 黄双成 +2 位作者 侯朋晨 耿安丽 阮文权 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期20-25,共6页
在酵母表达过程中,传统的表达载体存在着拷贝数低以及稳定性差的缺点。因此,找到一个可用于构建复制整合型载体的高效酵母自动复制区(Autonomously Replicating Sequence,ARS)是解决问题的关键。研究中,从酿酒酵母基因组中扩增得到4... 在酵母表达过程中,传统的表达载体存在着拷贝数低以及稳定性差的缺点。因此,找到一个可用于构建复制整合型载体的高效酵母自动复制区(Autonomously Replicating Sequence,ARS)是解决问题的关键。研究中,从酿酒酵母基因组中扩增得到4种不同的ARS(ARS304、ARS315、ARS735、ARS1512),然后连接到整合载体p NTS2K中,得到4种复制整合型载体(p NTS2K-ARS304、p NTS2K-ARS315、p NTS2K-ARS735、p NTS2KARS1512)。经电转化后,4种转化子(36a(p NTS2K-ARS304)、36a(p NTS2K-ARS315)、36a(p NTS2K-ARS735)、36a(p NTS2K-ARS1512))都能在含有300μg/m L G418的YPD平板上生长。然而,只有转化子36a(p NTS2KARS315)能在含有500μg/m L G418的YPD液体培养基里较快生长。经过G418耐受性检测后,36a(p NTS2KARS315)仍能在含有1 mg/m L G418的YPD培养基中很好地生长。此外,通过质粒p NTS2K-ARS315表达荧光蛋白,其表达效果高于普通商业质粒。实验结果证明,4种复制区都能在酿酒酵母中独立自主复制,其中ARS315复制能力最强。因此,ARS315可用于构建高拷贝且稳定的重组质粒,为构建高表达且稳定的工程酵母菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 自动复制区 高拷贝复制整合型质粒 荧光蛋白
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蛋白质亚细胞定位实验课程在细胞生物学实验教学中的应用
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作者 宋洁琼 包曙光 +2 位作者 李鲁华 朱士锋 门淑珍 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第3期341-347,共7页
蛋白质的亚细胞定位是功能基因组学的重要研究内容。瞬时表达是一种简单快速的研究蛋白质亚细胞定位的实验技术。该实验设计了适合为本科生开设的综合实验课程。该实验项目利用在烟草叶片中瞬时表达荧光蛋白研究蛋白质的亚细胞定位。该... 蛋白质的亚细胞定位是功能基因组学的重要研究内容。瞬时表达是一种简单快速的研究蛋白质亚细胞定位的实验技术。该实验设计了适合为本科生开设的综合实验课程。该实验项目利用在烟草叶片中瞬时表达荧光蛋白研究蛋白质的亚细胞定位。该文对实验原理、方法及教学安排等进行了详细的介绍,该实验设计为高校生物学实验教学提供了有价值的参考。 展开更多
关键词 亚细胞定位 瞬时表达 烟草 荧光蛋白
基于荧光蛋白FRET特性DasR与效应小分子的相互作用 预览
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作者 魏文平 叶邦策 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2017年第4期397-401,共5页
本研究利用黄色荧光蛋白 (YFP) 和青色荧光蛋白 (CFP) 构建含有 DasR 蛋白的双荧光蛋白融合蛋白, 以效应小分子与 DasR 作用前后导致的双荧光蛋白 FRET 效应变化为指标考察 DasR 与效应小分子的相互作用.研究结果表明:效应小分子与... 本研究利用黄色荧光蛋白 (YFP) 和青色荧光蛋白 (CFP) 构建含有 DasR 蛋白的双荧光蛋白融合蛋白, 以效应小分子与 DasR 作用前后导致的双荧光蛋白 FRET 效应变化为指标考察 DasR 与效应小分子的相互作用.研究结果表明:效应小分子与 DasR 的相互作用可以通过荧光蛋白 FRET 特性有效的呈现; 该荧光蛋白系统能够反映出单独的 DasR 小分子结合结构域与效应物质的相互作用.本研究方法为研究调控蛋白与效应小分子相互作用、 调控蛋白效应分子的高通量筛选等方面提供了理论借鉴与方法学参考. 展开更多
关键词 荧光蛋白 FRET DasR 相互作用
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基于FRET荧光蛋白探针的活体定量分子影像方法探究 预览
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作者 王颖奇 唐吉 +2 位作者 刘晴 白净 刘晓冬 《北京生物医学工程》 2016年第6期566-570,共5页
目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目... 目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标物浓度,以及如何基于FRET探针实现三维成像。方法基于探针和目标物结合时的化学反应平衡关系,提出一种新型分析方法,以精确定量待测物[钙调素(calmodulin,Ca M)]的浓度。同时对于FRET探针的活体分子成像,结合荧光透射成像(3DFMT)方法,建立了可进行三维时空动态FRET检测的平台系统,对FRET探针的测量结果(即待测物浓度)进行实时定量的三维重建。结果准确地定量了待测物Ca M浓度,并得到了高质量的3D-FRET分布影像。结论提出FRET探针在活体成像应用领域两个关键问题的解决方案,为基因编码FRET探针向活体分子影像领域的推广奠定了重要的技术基础。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 基因编码FRET探针 荧光蛋白 荧光断层成像 钙调素
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