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破囊壶菌△^4-脂肪酸脱饱和酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定 预览 被引量:2
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作者 江贤章 陈金卿 +5 位作者 田宝玉 高媛媛 舒正玉 李欣 蓝灿华 黄建忠 《福建师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2008年第6期 89-94,共6页
应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000bp的海洋破囊壶菌△^4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有... 应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000bp的海洋破囊壶菌△^4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件。将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞。荧光显微观察大肠杆菌阳性转化予发出荧光,侧翼序列合有启动子功能得到确认。 展开更多
关键词 破囊壶菌 脱饱和酶 衔接PCR 启动子 绿色荧光蛋白
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蓝猪耳胚珠磷脂酶C基因TfPLC1启动子的克隆、序列分析及植物表达载体的构建 预览
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作者 罗滟苏 宋梅芳 韩玉珍 《农业生物技术学报》 CAS 2007年第2期 263-267,共5页
应用衔接头PCR技术,以蓝猪耳(Torenia foumien)全基因组DNA分别经DraI、EeoRⅤ、PvuⅡ和SmaⅠ消化后与衔接头连接产物为模板,用衔接头引物和TfPLC1基因的特异引物经过多轮的巢式PCR,先后克隆到2个798和813bp的Tf-PLC1基因上游序列... 应用衔接头PCR技术,以蓝猪耳(Torenia foumien)全基因组DNA分别经DraI、EeoRⅤ、PvuⅡ和SmaⅠ消化后与衔接头连接产物为模板,用衔接头引物和TfPLC1基因的特异引物经过多轮的巢式PCR,先后克隆到2个798和813bp的Tf-PLC1基因上游序列;经测序、blast比较分析和拼接得到一个蓝猪耳TfPLC1基因的启动子序列,共1432bp。序列分析表明它含有类似于TATAbox和CAATbox的元件,在其远端上游区域还有多个AT富含区,而且还含有多个胚乳特异表达启动子的元件。将该启动子全序列和5’端缺失的700bp序列与PBI121分别构建了植物表达载体PPP1326和PPP700,用于转化蓝猪耳,以验证该启动子的功能。 展开更多
关键词 蓝猪耳 衔接PCR 磷脂酶C 启动子
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扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定 被引量:3
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作者 杨月梅 江贤章 +4 位作者 张娟梅 谢必峰 杨欣伟 林琳 黄建忠 《工业微生物》 CAS 北大核心 2007年第1期 14-19,共6页
应用衔接头PCR技术,扩增得到约2000bp的扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序并提交GenBank数据库(GenBank accession DQ677520),经序列比对分析,发现该序列具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒... 应用衔接头PCR技术,扩增得到约2000bp的扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序并提交GenBank数据库(GenBank accession DQ677520),经序列比对分析,发现该序列具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、GC盒等元件。将扩增得到的脂肪酶基因5’端侧翼序列,连接到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒中,构建了一个重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞。荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认。 展开更多
关键词 扩展青霉 脂肪酶 5’端侧翼区 衔接PCR 启动子 GFP
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用衔接头PCR克隆新的胡萝卜Ⅱ型转化酶基因启动子 预览 被引量:19
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作者 王新国 张国华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS 北大核心 2001年第1期 61-65,共5页
为克隆新的胡萝卜Ⅱ型转化酶基因启动子,将胡萝卜基因DNA分别PvuⅡ、EcoRⅤ、DraⅠ和SmaⅠ酶切,酶切片段与一特殊的衡接头连接,取连接产物作模板,以衔接头引物和基因特异引物做PCR,得到的主要PCR产物分别为3.4kb、1.... 为克隆新的胡萝卜Ⅱ型转化酶基因启动子,将胡萝卜基因DNA分别PvuⅡ、EcoRⅤ、DraⅠ和SmaⅠ酶切,酶切片段与一特殊的衡接头连接,取连接产物作模板,以衔接头引物和基因特异引物做PCR,得到的主要PCR产物分别为3.4kb、1.3kb、0.4kb和0.6kb,交EcoRⅤ-衔接头体系的PCR产物克隆和测序,并将其序列与GenBank中的已知序列进行比较分析,发现了一个新的胡萝卜Ⅱ型转化酶启动子序列,它含有类似于TATAbox和CAATbox的元件,在启动子的远上游区域还含有多个AT富含区,该启动子的发现对于研究植物中糖代谢具有重要意义。 展开更多
关键词 衔接PCR Ⅱ型转化酶 启动子 胡萝卜 糖代谢
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