期刊文献+
共找到5,884篇文章
< 1 2 250 >
每页显示 20 50 100
gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响 预览
1
作者 余祖华 丁轲 +8 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张梦珂 邱静静 张春杰 程相朝 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第2期1-6,共6页
【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga... 【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154 bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MDCC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。 展开更多
关键词 gga-miRNA-155 表达载体 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖
在线阅读 下载PDF
结球甘蓝BoTCTP基因表达载体的构建及转化芥蓝的研究
2
作者 王静静 曹必好 +3 位作者 陈国菊 陈长明 陈清华 雷建军 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-33,共11页
芥蓝(Brassica alboglabra)是十字花科重要蔬菜之一,在栽培过程中常常会遭受各种逆境的严重影响,给芥蓝的生产造成很大的损失。为提高芥蓝对逆境胁迫的抵抗能力,本研究根据结球甘蓝翻译控制肿瘤蛋白基因(translationally controlled tum... 芥蓝(Brassica alboglabra)是十字花科重要蔬菜之一,在栽培过程中常常会遭受各种逆境的严重影响,给芥蓝的生产造成很大的损失。为提高芥蓝对逆境胁迫的抵抗能力,本研究根据结球甘蓝翻译控制肿瘤蛋白基因(translationally controlled tumor protein cloned from Brassica oleracea, BoTCTP)序列设计特异引物,经PCR扩增得到目的片段,然后构建过表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法导入芥蓝中,并对其转基因植株进行了分子生物学鉴定。研究结果显示,4株外源目的基因已经整合到受体基因组中,1株以双拷贝形式存在,另外3株以单拷贝形式存在。转基因植株的长势旺盛,生长速率加快,叶面积较大,在逆境胁迫(高低温,盐碱,干旱,重金属等)下转基因植株对胁迫的耐受性明显优于对照植株,从而表明BoTCTP基因与芥蓝的生长密切相关,并对芥蓝的抗逆性起调控作用。本研究结果为芥蓝抗逆性的进一步研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 翻译控制肿瘤蛋白基因(TCTP) 表达载体 芥蓝 遗传转化 生长速度 抗逆性
FoxO1基因对Jurkat细胞FoxO1-KLF2-S1P1通路的调节作用 预览
3
作者 闫飞 刘萍萍 +4 位作者 张键 赵瑞 倪文鹏 李倩如 杜英 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期335-339,共5页
目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用... 目的:通过构建FoxO1表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控研究模型,观察FoxO1过表达、干扰表达在Jurkat细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat细胞,采用荧光定量PCR、Western blot和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+细胞比率增高(P<0.05),CCR7+细胞和CD69+细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1和CD62L mRNA水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p和KLF2胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05),但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h时减少(P<0.05)。结论:FoxO1表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat细胞并调节KLF2、S1P1和CD62L等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。 展开更多
关键词 FOXO1 表达载体 干扰载体 S1P1 CD62L
在线阅读 下载PDF
马铃薯脱落酸受体StPYR1基因生物信息学分析及过表达载体构建
4
作者 赵仕荣 杨江伟 +4 位作者 唐勋 张宁 文义凯 周香艳 司怀军 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第22期7309-7314,共6页
以马铃薯基因数据库中基因ID为PGSC0003DMT400005378 (落酸受体PYR1基因)的核苷酸序列作为原始序列,用在线比对软件NCBI进行Blast比对其在拟南芥、番茄、烟草等物种中同源序列,以同源性为100%的核苷酸序列(GenBank accession No. XM... 以马铃薯基因数据库中基因ID为PGSC0003DMT400005378 (落酸受体PYR1基因)的核苷酸序列作为原始序列,用在线比对软件NCBI进行Blast比对其在拟南芥、番茄、烟草等物种中同源序列,以同源性为100%的核苷酸序列(GenBank accession No. XM_006361126.2)进行生物信息学分析,并作为模板序列设计引物,以马铃薯栽培品种‘陇薯3号’无菌试管薯为实验材料,用RT-PCR的方法获得StPYR1基因的cDNA序列,构建了其过表达载体pCPB-StPYR1,取得的结果可为研究StPYR1基因在马铃薯块茎休眠调控中的作用提供基础。 展开更多
关键词 脱落酸 PYR1基因 马铃薯 休眠 表达载体
水牛AMH序列分析及表达载体的构建与鉴定 预览
5
作者 乔同 华丽萍 +3 位作者 刘双行 李赞 杨利国 梁爱心 《中国奶牛》 2018年第12期13-17,共5页
本研究采用基因测序方法获得地中海水牛AMH mRNA序列,将该序列与NCBI数据库中(水牛)AMH mRNA序列进行比对,发现二者相似度达99%。随后,采用基因合成方法构建AMH真核表达载体,经双酶切、测序鉴定后转染CHO细胞,能观察到绿色荧光,且发现转... 本研究采用基因测序方法获得地中海水牛AMH mRNA序列,将该序列与NCBI数据库中(水牛)AMH mRNA序列进行比对,发现二者相似度达99%。随后,采用基因合成方法构建AMH真核表达载体,经双酶切、测序鉴定后转染CHO细胞,能观察到绿色荧光,且发现转染24h后荧光强度最大,表明水牛AMH真核表达载体构建成功。此结果为深入研究水牛AMH基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 抗缪勒氏管激素 表达载体 鉴定 水牛
在线阅读 下载PDF
库尔勒香梨自交不亲和 SFBB-γ基因F-box区和可变区V3 RNAi表达载体的构建及遗传转化
6
作者 钟颖 冯建荣 +3 位作者 刘海楠 李文慧 吕文娟 田雯 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2018年第4期467-474,共8页
目的 为在分子水平应用 RNAi(RNA interference)技术调控梨自交不亲和性状,培育自交亲和梨品种。方法 基于本实验室获得的库尔勒香梨(Pyrus bretschneideri Rehd)自交不亲和品种花粉决定子SFBB-γ基因cDNA全长序列,选取SFBB-γ基... 目的 为在分子水平应用 RNAi(RNA interference)技术调控梨自交不亲和性状,培育自交亲和梨品种。方法 基于本实验室获得的库尔勒香梨(Pyrus bretschneideri Rehd)自交不亲和品种花粉决定子SFBB-γ基因cDNA全长序列,选取SFBB-γ基因F-box区和可变区V3分别设计 141 bp和120 bp的片段作为干扰序列,以棉花基因组 DNA 242 bp 的序列作为间隔片段,利用融合 PCR(Fusion PCR)构建SFBB-γ基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihpRNA),酶切后与pCAMBIA1304植物表达载体相连,构建SFBB-γ基因 RNAi 表达载体并转化至农杆菌GV3101 中。利用叶盘转化法转化到库尔勒香梨无菌叶片中,用GUS组织化学染色法鉴定侵染叶片。测序结果表明干扰F-box区获得的ihpRNA臂长为 141 bp,茎环 253 bp;干扰可变区V3获得的ihpRNA臂长为120 bp,茎环253 bp。结果 说明 SFBB-γ基因F-box区和V3 区的ihpRNA 结构融合成功。通过双酶切检验及PCR 证实,SFBB-γ基因F-box区和V3区的RNAi表达载体 pCAMBIA1304-RNAi-SFBB 构建成功; PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌GV3101中,GUS染色检验获得蓝色,目的基因已整合进入库尔勒香梨叶片中。结论 成功构建库尔勒香梨SFBB-γ基因F-box区及可变区V3 的RNAi表达载体,为诱导香梨SFBB-γ基因转录后基因沉默及培育自交亲和梨品种提供参考。 展开更多
关键词 库尔勒香梨 自交不亲和 SFBB-γ基因 F-BOX RNAi 表达载体
在线阅读 免费下载
PRL-3表达载体构建及其对结直肠癌细胞生长的影响 预览
7
作者 刘军 董文刚 +6 位作者 褚楚 穆楠 顾锦涛 张旺倩 薛晓畅 张英起 张伟 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第11期1653-1656,共4页
目的:构建PRL-3过表达载体,研究其对结直肠癌细胞系SW620生长的影响。方法:提取Hela细胞总RNA并反转为c DNA,以c DNA为模板通过PCR反应扩增PRL-3基因,将扩增产物克隆至表达载体pc DNA3.1,通过转染让SW620细胞过表达PRL-3,空载体组和... 目的:构建PRL-3过表达载体,研究其对结直肠癌细胞系SW620生长的影响。方法:提取Hela细胞总RNA并反转为c DNA,以c DNA为模板通过PCR反应扩增PRL-3基因,将扩增产物克隆至表达载体pc DNA3.1,通过转染让SW620细胞过表达PRL-3,空载体组和空白组作为阴性对照。q PCR、Western blot实验用来检测PRL-3在SW620细胞的表达水平,CCK-8实验、平板克隆形成实验用来检测SW620细胞的增殖状况,流式细胞术用来检测SW620细胞的周期分布。结果:成功构建了PRL-3过表达载体。与空载体组和空白组相比,PRL-3过表达载体转染结直肠癌细胞系SW620后,q PCR检测PRL-3表达水平上调数倍。CCK-8实验表明过表达PRL-3能够促进SW620细胞增殖。平板克隆形成实验表明上调PRL-3能够增强SW620细胞增殖能力。流式细胞术结果表明过表达PRL-3能够加快SW620细胞周期进程。结论:PRL-3能够促进结直肠癌细胞系SW620生长,为结直肠癌早期诊断和靶向治疗提供实验依据。 展开更多
关键词 PRL-3 表达载体 结直肠癌 细胞生长
在线阅读 下载PDF
内含子介导的TBSV病毒表达载体的构建和功能分析
8
作者 吴乐乐 徐丽 +2 位作者 丁向真 李志英 王盛 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期719-728,共10页
重组植物RNA病毒对寄主的侵染力下降是影响植物RNA病毒表达载体效率的一个限制因素。为了探索提高病毒载体表达效率的途径,在番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)表达载体p TBSV-G的基础上,于病毒编码的两个关键基因编码区... 重组植物RNA病毒对寄主的侵染力下降是影响植物RNA病毒表达载体效率的一个限制因素。为了探索提高病毒载体表达效率的途径,在番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)表达载体p TBSV-G的基础上,于病毒编码的两个关键基因编码区内插入不同数量拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组内含子序列,构建了内含子数目和位置不同的系列病毒表达载体。接种寄主植物Nicotiana excelsiana后,通过比较分析病毒携带的绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,gfp)在寄主植物叶片中的表达情况,对在病毒基因组编码区内引入内含子的有效性和规律性进行了探索。结果显示,Net Plant Gene软件可以准确地识别出插入病毒序列中的全部内含子序列,表明利用该软件对内含子剪接情况进行提前预判的方法具有一定的实用价值。反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测结果显示,对照组的扩增产物片段均大于实验组且条带大小与理论预期一致;Western blots实验能够检测到完整的P19、P33和P92目的蛋白表达产物。RT-PCR和Western blots实验结果表明,病毒载体中内含子在寄主植物细胞核中确实能够被正确的识别和剪接。GFP在接种叶片上的表型和蛋白质水平定性与定量实验结果显示,插入2个内含子和11个内含子可以使病毒表达载体的表达效率提高约2倍,而插入9个内含子对病毒表达载体效率无明显的增效作用。由此推测,增效作用与内含子数量无关,内含子的插入位置可能发挥着关键的作用。研究结果将为内含子在植物病毒RNA表达载体中的应用奠定一定的理论和实践基础。 展开更多
关键词 植物RNA病毒 番茄丛矮病毒(TBSV) 表达载体 内含子 烟草
鞘蕊苏贝壳杉烯酸氧化酶基因的克隆及表达载体的构建
9
作者 马朝芝 黄晓 +3 位作者 余坤 尤朋涛 刘焱文 但汉雄 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第9期3919-3925,共7页
为提高鞘蕊苏有效成分的含量,开展Coleus Ent-kaurenoic acid oxidase(KAO)基因的克隆以及表达载体构建方面的研究。提取鞘蕊苏叶片的总RNA,利用套式PCR技术克隆获得KAO基因全长,将该基因连接到克隆载体p MD-18T,经测序鉴定正确后,再... 为提高鞘蕊苏有效成分的含量,开展Coleus Ent-kaurenoic acid oxidase(KAO)基因的克隆以及表达载体构建方面的研究。提取鞘蕊苏叶片的总RNA,利用套式PCR技术克隆获得KAO基因全长,将该基因连接到克隆载体p MD-18T,经测序鉴定正确后,再将该基因连接到p ET-28a表达载体中。结果显示,成功克隆出的鞘蕊苏KAO基因大小为1 500 bp,对克隆基因进行测序及酶切鉴定,均得到正确大小的DNA片段,说明表达载体构建成功。本研究成功克隆得到鞘蕊苏贝壳杉烯酸氧化酶基因并构建其表达载体,为提高鞘蕊苏有效成分含量提供了基础。 展开更多
关键词 鞘蕊苏 贝壳杉烯酸氧化酶 PCR 表达载体
高粱SbCYP79A1基因表达载体的构建及转化玉米研究
10
作者 李金红 霍岩 +3 位作者 付莉 翁倩 陶承光 史振声 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第9期2859-2866,共8页
为研究SbCYP79A1基因功能及其转化玉米抗虫能力的研究,本试验根据NCBI公布的SbCYP79A1基因序列设计PCR引物,利用高粱品种BTX623克隆到同源性达到100%的SbCYP79A1基因全长cDNA序列,该序列开放阅读框包含1 887 bp,由629个氨基酸组成。构建... 为研究SbCYP79A1基因功能及其转化玉米抗虫能力的研究,本试验根据NCBI公布的SbCYP79A1基因序列设计PCR引物,利用高粱品种BTX623克隆到同源性达到100%的SbCYP79A1基因全长cDNA序列,该序列开放阅读框包含1 887 bp,由629个氨基酸组成。构建SbCYP79A1基因植物超表达载体,PCR及测序结果均显示植物表达载体pMDC141-CYP79A1构建成功。将该表达载体导入农杆菌EHA105中,热激法转化到玉米A188幼胚,共培养7 d后,在幼胚检测到GUS基因瞬时表达,说明该农杆菌介导的玉米转化体系的转化效率具有可靠性;经选择培养获得54株转化植株,经PCR鉴定获得38株阳性植株,同时利用GUS基因对阳性植株的叶片和根部进行组织定位分析,均观测到较强的GUS基因表达,进一步验证了PCR检测结果。以上结果均证明高粱的SbCYP79A1基因已经整合到玉米基因组中,该研究结果为进一步获得玉米抗虫的新材料提供依据。 展开更多
关键词 高粱 基因 表达载体 玉米 遗传转化
灵芝转化体系的建立 预览
11
作者 孙墨可 李晓薇 +4 位作者 孙晓文 张曼 田娟 董玉迪 李海燕 《安徽农业科学》 CAS 2018年第26期91-93,107共4页
利用TPS法提取平菇基因组,克隆甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GPD),用GPD启动子替换原表达载体p CAMBIA1302中的35s启动子,构建p CAMBIA1302表达载体,利用PEG法转化灵芝原生质体。通过酶切验... 利用TPS法提取平菇基因组,克隆甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GPD),用GPD启动子替换原表达载体p CAMBIA1302中的35s启动子,构建p CAMBIA1302表达载体,利用PEG法转化灵芝原生质体。通过酶切验证与测序结果表明GPD启动子已成功构建到表达载体p CAMBIA1302中,通过灵芝转化子的PCR检测和荧光显微镜观察证明绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)已转入到灵芝中。该研究成功构建了灵芝转化体系,对今后开展灵芝的分子生物学研究具有重要意义。 展开更多
关键词 灵芝 表达载体 PEG 转化 GFP
在线阅读 下载PDF
拟南芥AAP6基因的克隆与转化马铃薯的研究 预览
12
作者 李倩 王罡 +9 位作者 张松皓 杨丹 王昱蓉 季静 安婷 李辰 马志刚 史怀宇 关春峰 刘玉 《天津大学学报:自然科学与工程技术版》 CSCD 北大核心 2018年第9期941-948,共8页
氨基酸透性酶(AAP)是植物中的氨基酸转运蛋白,在氨基酸转运过程中发挥着重要作用.以野生拟南芥(生态型col-0)为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆得到拟南芥中的氨基酸透性酶基因(AtAAP6).该基因全长1,446,bp,构建AtAAP6基因的植物表达载... 氨基酸透性酶(AAP)是植物中的氨基酸转运蛋白,在氨基酸转运过程中发挥着重要作用.以野生拟南芥(生态型col-0)为材料,利用PCR和DNA重组技术,克隆得到拟南芥中的氨基酸透性酶基因(AtAAP6).该基因全长1,446,bp,构建AtAAP6基因的植物表达载体pCAMBIA2300-AtAAP6,并利用农杆菌介导的遗传转化方法在马铃薯品种“早大白”中异源过表达AtAAP6基因.经过抗性筛选与植株再生,成功得到马铃薯转基因植株,并诱导得到转基因马铃薯微型薯.RT-PCR结果表明,AtAAP6基因在转基因马铃薯中都能正常地转录表达.这一研究为进一步开展AtAAP6基因功能验证,提高马铃薯块茎中的氨基酸以及贮藏蛋白的含量提供了研究基础. 展开更多
关键词 氨基酸透性酶 马铃薯 AtAAP6基因 表达载体 遗传转化
在线阅读 下载PDF
一种新型双荧光素酶报告基因表达载体的构建
13
作者 冯龙 马云云 +6 位作者 曹珊 李晓娟 王媛媛 陈肖楠 孙倩倩 吴建博 赵国强 《郑州大学学报:医学版》 北大核心 2018年第1期38-41,共4页
目的:构建一种新型的双荧光素酶报告基因表达载体。方法:设计并扩增海肾荧光素酶基因hRLUC,将其插入到双酶切的含有萤火虫荧光素酶报告基因(Firefly)的载体pGL4.10中,得到pGL4.10-hRLUC;使用lipofectamine3000将pGL4.10和pGL4.10-hR... 目的:构建一种新型的双荧光素酶报告基因表达载体。方法:设计并扩增海肾荧光素酶基因hRLUC,将其插入到双酶切的含有萤火虫荧光素酶报告基因(Firefly)的载体pGL4.10中,得到pGL4.10-hRLUC;使用lipofectamine3000将pGL4.10和pGL4.10-hRLUC分别转染入HEK293细胞,检测细胞中荧光素酶活性,以未转染细胞作对照。结果:使用PCR方法获得hRLUC表达单元(2 350 bp);双荧光素酶报告基因表达载体pGL4.10-hRLUC经酶切和测序鉴定,插入正确。转染pGL4.10组荧光素酶活性相对值为(220.311±2.082);转染pGL4.10-hRLUC的细胞中荧光素酶活性低于pGL4.10转染细胞,高于未转染细胞(P〈0.05)。结论:成功构建了双荧光素酶报告基因(hRLUC和Firefly)表达载体。 展开更多
关键词 荧光素酶报告基因 表达载体 hRLUC
在线阅读 免费下载
蓖麻耐盐基因HKT的克隆及表达载体构建
14
作者 丛娇娇 王晓宇 +3 位作者 李平 李惠根 张丽雪 张继星 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第14期4648-4657,共10页
为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,... 为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,推测分子量为59.74 kD,等电点(pI)为9.32。多重序列比对和系统发育树分析表明该蛋白与木薯和橡胶树的同源性最高,分别为69.13%和67.03%,且与HKT1蛋白家族成员同源性较高,为S-G-G-G类型蛋白,推测该蛋白为HKT1类蛋白。二级结构预测蓖麻HKT蛋白有9个跨膜结构域,主要定位于内质网上,是典型的跨膜蛋白。根据蓖麻HKT基因序列设计带有Bam HⅠ和PstⅠ酶切位点的引物扩增出全长基因,用限制性内切酶Bam HⅠ和PstⅠ进行双酶切后与表达载体pCHF-3300连接。本研究成功构建了蓖麻HKT基因的表达载体,为进一步研究该基因的转化及功能验证提供参考。 展开更多
关键词 蓖麻 高亲和钾离子转运蛋白 基因克隆 生物信息学分析 表达载体
食品用酶毕赤酵母表达载体的构建
15
作者 刘文山 刘立辉 傅荣昭 《生物技术通讯》 CAS 2018年第2期262-265,共4页
目的:构建可用于表达食品用酶的毕赤酵母表达载体pMA,该载体不含非GRAS认证来源的DNA片段。方法:以pPIC9K为模板,通过重叠延伸PCR方法,将来源于大肠杆菌的AmpR抗性标记和复制区ori插入AOX1启动子的SacⅠ位点,最终线性化载体时可用... 目的:构建可用于表达食品用酶的毕赤酵母表达载体pMA,该载体不含非GRAS认证来源的DNA片段。方法:以pPIC9K为模板,通过重叠延伸PCR方法,将来源于大肠杆菌的AmpR抗性标记和复制区ori插入AOX1启动子的SacⅠ位点,最终线性化载体时可用SacⅠ将该来源于大肠杆菌的片段切除。为了避免使用G418等抗性标记并减少载体大小,将原来的HIS4标记和G418标记删除,采用截短了启动子的ADE2标记来实现高拷贝整合。结果:构建获得载体pMA,用SacⅠ线性化后大小仅为3.6 kb;利用pMA表达了一种食品用β-半乳糖苷酶。结论:pMA可用于表达食品用酶,为酵母生产食品用酶奠定了基础。 展开更多
关键词 毕赤酵母 食品用酶 表达载体
在线阅读 免费下载
V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建 预览
16
作者 徐国 梁海英 +8 位作者 曾智勇 王彬 黄涛 汤德元 代振江 叶百川 张爱琼 何小莉 咸文 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第7期1775-1782,共8页
试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体。采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2 ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆入pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA-ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac... 试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体。采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2 ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆入pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA-ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使用脂质体介导法将鉴定后的重组杆状病毒质粒转染于Sf9细胞中;运用间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE和Western blotting试验对Sf9细胞中V5标记Cap蛋白的表达进行验证。结果显示,本试验成功将V5标签引入到PCV2 ORF2基因末端,pFastBacHTAORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后获得了Bacmid-ORF2-V5重组杆状病毒质粒;IFA、SDS-PAGE和Western blotting试验结果显示,在Sf9细胞中能检测到重组杆状病毒V5标记的PCV2Cap蛋白,具有良好的反应原性,说明本试验成功获得一株rAcMNPV Cap-V5重组杆状病毒。试验结果为PCV2标记亚单位疫苗的研制提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) Cap-V5蛋白 重组杆状病毒 表达载体
在线阅读 下载PDF
基于核心素养的探究式教学活化复习课堂--以"基因工程"的复习为例 预览
17
作者 陈招弟 黄惠玲 《中学生物学》 2018年第12期22-24,共3页
为有效突破基因表达载体构建过程中的重点和难点,本节复习课创设三个探究活动,结合小组合作交流、模型构建等方法进行难点突破。
关键词 核心素养 活动探究 表达载体
在线阅读 下载PDF
BLM解旋酶基因的克隆、表达载体构建及表达研究
18
作者 赵佳福 许厚强 +2 位作者 宋书弦 段志强 陈祥 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第11期152-159,共8页
克隆获得BLM基因全长CDS区,研究其在细胞中的表达情况。从人前列腺癌PC3细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,采用分段克隆的方法获得BLM全长CDS区,将其定向插入到原核表达载体pET-32a和真核表达载体pEGFP-N3,构建p ET-32a-BLM和p EGFP-N3-BL... 克隆获得BLM基因全长CDS区,研究其在细胞中的表达情况。从人前列腺癌PC3细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,采用分段克隆的方法获得BLM全长CDS区,将其定向插入到原核表达载体pET-32a和真核表达载体pEGFP-N3,构建p ET-32a-BLM和p EGFP-N3-BLM。将获得的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞或转染PC3细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、荧光定位观察等方法研究人BLM解旋酶在细胞中的表达或定位。BLM解旋酶的原核表达结果显示,不同IPTG浓度对BLM解旋酶的表达量影响不大,低温有助于其表达量的提高。Western blotting检测发现,构建的人BLM解旋酶重组原核和真核表达载体分别能在大肠杆菌细胞和PC3细胞中表达出分子量约为179 kD的蛋白质,与预期分子量大小一致。荧光共定位结果显示,人BLM解旋酶主要定位在细胞核。成功克隆了人BLM解旋酶全长CDS区,且构建的重组表达载体pET-32a-BLM和pEGFP-N3-BLM能在相应的宿主细胞中正确表达。 展开更多
关键词 BLM解旋酶 基因克隆 表达载体 亚细胞定位 蛋白印迹
在线阅读 免费下载
两种表达载体对西瓜食酸菌生物学特性的影响 预览
19
作者 黄成文 王希东 +3 位作者 刘君 杨东晟 古妮萨罕·麦托合提 热孜宛·奥布力 《新疆农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期457-467,共11页
【目的】分析两种常用基因功能表达载体对宿主西瓜食酸菌生物学特性的影响,为基因功能研究选择载体提供理论参考。【方法】以西瓜食酸菌野生型FC440菌株为宿主菌,分别转入表达载体pBBR1MCS-5和pHC60,从胞外纤维素酶活性、胞外蛋白酶活... 【目的】分析两种常用基因功能表达载体对宿主西瓜食酸菌生物学特性的影响,为基因功能研究选择载体提供理论参考。【方法】以西瓜食酸菌野生型FC440菌株为宿主菌,分别转入表达载体pBBR1MCS-5和pHC60,从胞外纤维素酶活性、胞外蛋白酶活性、胞外多糖含量、游动性、致病性和过敏性反应、生长速率以及抗铜性等,对转化菌株进行生物学特性影响的分析。【结果】载体pBBR1MCS-5对菌株的生物学特性各方面未表现出显著影响,载体pHC60会显著抑制菌株的生长速率和游动性。【结论】表达载体本身会影响西瓜食酸菌的某些生物学特性,在基因功能研究中,应依据所研究基因的功能选择适宜的表达载体。 展开更多
关键词 西瓜食酸菌 表达载体 生物学特性
在线阅读 下载PDF
大鼠MK-shRNA腺病毒表达载体的构建 预览
20
作者 吴晓冬 薄立华 +1 位作者 王小昆 朱辉 《中国实验诊断学》 2017年第5期904-906,共3页
Midkine(MK)基因是在1988年日本学者Kadomatsu等发现的一种cDNA克隆。其表达产物在胚胎发育早期至中期时在多种组织中表达,但随着胚胎的发育而逐渐减少,在成体鼠只有肾脏和子宫两个脏器有表达。因为能与肝素结合并相互作用,又被称为... Midkine(MK)基因是在1988年日本学者Kadomatsu等发现的一种cDNA克隆。其表达产物在胚胎发育早期至中期时在多种组织中表达,但随着胚胎的发育而逐渐减少,在成体鼠只有肾脏和子宫两个脏器有表达。因为能与肝素结合并相互作用,又被称为肝素结合生长因子。MK在神经系统的发育生长中有诸多功能,本课题组也已经证明在脑缺血的急性期其表达增高,近年也相继报道MK在多种肿瘤组织中有高表达[4]。 展开更多
关键词 表达载体 MK-shRNA 腺病毒载体 表达产物 基因沉默 大鼠 BamHI ECORI 脑缺血 测序证明
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 250 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈