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转BpCHS基因过量表达白桦叶片和韧皮部色素含量及植株表型分析 预览 被引量:1
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作者 范志勇 姜晶 +4 位作者 王芳 吕东林 顾宸瑞 李腾 姜静 《东北林业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期8-13,共6页
查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)是类黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该酶不仅在植物花色及叶色形成中起决定作用,同时还参与植物的多种生理生化过程。为了揭示白桦查耳酮合酶的功能,试验以白桦成熟合子胚为受体,以35S启动... 查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)是类黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该酶不仅在植物花色及叶色形成中起决定作用,同时还参与植物的多种生理生化过程。为了揭示白桦查耳酮合酶的功能,试验以白桦成熟合子胚为受体,以35S启动子驱动的 BpCHS3为载体,采用农杆菌介导法开展转 BpCHS3 基因研究,利用含50 mg/L Hyg的培养基进行抗性筛选转基因株系,同时结合目标基因的PCR验证,试验获得转 BpCHS3白桦15个阳性株系,分子检测证明,目标基因整合到白桦基因组中,BpCHS3能在转基因白桦中过量表达。2年生转基因白桦生长及表型观察发现,转基因白桦与WT株系的苗高及地径差异不显著,而侧枝数显著高于WT株系(P<0.01);转基因白桦叶片呈现浅绿色、茎杆为浅黄绿色,光合色素及花青素质量分数测定显示,叶片组织中转基因白桦的叶绿素、类胡萝卜素及花青素质量分数均显著低于WT株系(P<0.01),花青素相对质量分数均值低于WT株系的 45.99%;韧皮组织中转基因株系的光合色素质量分数均高于WT,花青素相对质量分数与WT株系差异不显著。转基因白桦中 BpCHS1和 BpCHS2家族基因表达特性分析发现,相对WT株系转基因白桦的 BpCHS1和BpCHS2基因均呈下调表达(OE1株系除外),认为过量表达 BpCH3白桦中发生了BpCH1和BpCH2的共抑制现象。 展开更多
关键词 查耳酮合酶 转基因白桦 花青素
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外源NO对转基因白桦外源基因表达及DNA甲基化的影响 预览
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作者 孙丰坤 李思达 +2 位作者 李吉祥 陈晓慧 曾凡锁 《植物研究》 CSCD 北大核心 2017年第6期870-875,共6页
为探讨外源NO诱导转基因白桦外源基因表达与基因组DNA甲基化之间的关系,本研究分析了NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对转基因白桦愈伤组织中外源基因BGT转录的影响,并对此过程中基因组DNA甲基化水平、甲基转移酶基因DRM、... 为探讨外源NO诱导转基因白桦外源基因表达与基因组DNA甲基化之间的关系,本研究分析了NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对转基因白桦愈伤组织中外源基因BGT转录的影响,并对此过程中基因组DNA甲基化水平、甲基转移酶基因DRM、MET表达量及生理生化指标进行研究。结果表明:2mmol·L^-1 SNP处理后,转基因白桦防御酶活性、丙二醛(MDA)含量显著升高,表明高浓度NO对白桦细胞正常生命活动产生了伤害;甲基转移酶DRM和MET基因上调表达,基因组DNA甲基化水平由10.6%增加到16.5%,外源基因BGT表达量在6h时显著增加,3d时仅为对照的0.46倍,说明转基因白桦外源BGT基因的表达对高浓度NO响应明显且受基因组甲基化水平的影响。本研究揭示了转基因白桦外源BGT基因和甲基转移酶MET、DRM基因对高浓度NO的响应模式,分析了基因组甲基化水平及生理生化特征的变化,为转基因植物生长发育的表观遗传调控和外源基因表达影响机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 NO 转基因白桦 基因表达 甲基化
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转基因白桦不同杂交组合的种子活力测定及外源基因的遗传规律分析 被引量:2
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作者 陈素素 张嫚嫚 +6 位作者 于洪淼 顾宸瑞 魏优 刘宇 王朔 陈肃 刘桂丰 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期36-42,共7页
转基因植物的遗传稳定性分析是基因工程的重要环节。本研究以转基因白桦的控制授粉杂交子代家系、正反交子代家系以及自由授粉的半同胞子代家系为研究对象,测定了各家系间的种子千粒质量、发芽率、发芽势以及活力指数。结果表明:各家... 转基因植物的遗传稳定性分析是基因工程的重要环节。本研究以转基因白桦的控制授粉杂交子代家系、正反交子代家系以及自由授粉的半同胞子代家系为研究对象,测定了各家系间的种子千粒质量、发芽率、发芽势以及活力指数。结果表明:各家系间种子千粒质量及种子活力等指标差异达到极显著水平(P〈0.01),各性状的变异系数在41.09%~73.16%之间,遗传力在98.00%以上;种子千粒质量与发芽率、发芽势、活力指数呈极显著正相关,相关系数分别为0.916、0.803与0.896。转基因株系与非转基因株系正反交群体的外源基因检测表明:外源基因通过雌配子的传递效率高于雄配子,雌、雄配子外源基因传递效率分别在60.00%、30.00%左右。杂交子代家系外源基因检测结果表明,4个转基因株系有1个插入位点,1个株系有2个插入位点。卡方检验表明:外源基因插入位点为一个的转基因株系,其配子类型符合1∶1的分离规律;外源基因插入位点为2个转基因株系,其配子类型符合3∶1的分离规律。 展开更多
关键词 转基因白桦 种子活力 外源基因检测 传递规律
转基因白桦不同月份叶片基因组DNA甲基化水平的变异 预览 被引量:1
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作者 刘堃 曾凡锁 +1 位作者 李博 詹亚光 《生物技术通讯》 CAS 2013年第1期65-70,共6页
目的:以转坛£抗虫基因白桦的不同月份叶片为实验材料,揭示基因组DNA甲基化水平与植物叶片发育及外源基因表达水平之间的相关性。方法:应用DNA-MSAP方法检测叶片基因组DNACCGG位点甲基化状态,利用Northern杂交技术分析其外源基因表... 目的:以转坛£抗虫基因白桦的不同月份叶片为实验材料,揭示基因组DNA甲基化水平与植物叶片发育及外源基因表达水平之间的相关性。方法:应用DNA-MSAP方法检测叶片基因组DNACCGG位点甲基化状态,利用Northern杂交技术分析其外源基因表达水平。结果:转基因白桦叶片基因组DNA同年5~9月总甲基化水平分别为21.95%、29.62%、25.41%、41.39%和47.24%,除7月份稍有波动外,整体呈现随着叶片的成熟和衰老渐升高趋势;全部扩增位点中,半、全甲基化位点比例分别为17.99%和15.19%,在各月份叶片中变化较大,其中半甲基化位点比例分别为10.37%、19.14%、14.92%、17.2%和28.83%,全甲基化位点比例依次为11.58%、10.49%、10.50%、24.11%和18.40%。同一无性系外源基因在当年5~7月表达量最高,8~9月呈下降趋势,与基因组甲基化状态呈负相关趋势。结论:转基因白桦叶片的成熟和衰老及外源基因表达量降低均可能与基因组DNA甲基化水平的升高相关。 展开更多
关键词 转基因白桦 基因 甲基化 甲基化敏感扩增多态性
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抗体夹心BGT—ELISA方法的建立及在转基因白桦中的应用 预览
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作者 曾凡锁 骆薇 +2 位作者 赵宏翠 詹亚光 孙东 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第1期 67-73,共7页
以蜘蛛杀虫肽与Bt—toxinC肽融合蛋白基因(bgt基因)的表达产物的定量分析为研究目标,采用原核表达及纯化出融合蛋白His—BGT作为抗原进行兔免疫,得到相应的抗血清,采用ELISA法检测效价在1:10000以上,并对抗血清进行了免疫亲和层... 以蜘蛛杀虫肽与Bt—toxinC肽融合蛋白基因(bgt基因)的表达产物的定量分析为研究目标,采用原核表达及纯化出融合蛋白His—BGT作为抗原进行兔免疫,得到相应的抗血清,采用ELISA法检测效价在1:10000以上,并对抗血清进行了免疫亲和层析,获得了高纯度的IgG,Westernblot检测具有较好的特异性。采用过碘酸钠法将抗体标记辣根过氧化物酶(HRP),得到第二抗体即酶标抗体,标记率在85%以上。建立起检测BGT杀虫蛋白的快速、灵敏的方法。应用该检测方法,分析了不同转基因白桦(Betulaplatyphylla Suk.)株系中BGT蛋白含量占叶片可溶性总蛋白含量的0.05%~0.3%,并利用Westernblot验证了此方法是可靠的。说明抗体夹心BGT-ELISA方法能够定量分析转基因植株中BGT蛋白的含量,为转bgt基因植物的检测和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 转基因白桦 多克隆抗体 酶标抗体 酶联免疫
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转基因白桦中GUS基因表达的定量分析 预览 被引量:16
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作者 曾凡锁 钱晶晶 +3 位作者 康君 王红艳 王亦洲 詹亚光 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期 484-490,共7页
以转基因白桦(Betula platyphylla)为材料,采用单酶切结合Southern杂交的方法揭示不同转基因植株中GUS基因的整合拷贝数为1—4个。采用组织化学染色法定性分析不同整合方式转基因白桦植株中GUS基因的表达。结果表明,11个转基因植株... 以转基因白桦(Betula platyphylla)为材料,采用单酶切结合Southern杂交的方法揭示不同转基因植株中GUS基因的整合拷贝数为1—4个。采用组织化学染色法定性分析不同整合方式转基因白桦植株中GUS基因的表达。结果表明,11个转基因植株中有2株出现了GUS基因沉默,其余植株均有不同水平的GUS表达。在此基础上应用分光光度法定量分析不同拷贝数的GUS转基因白桦中β-葡萄糖醛酸酶活性。结果表明,在11个转基因尢性系中除2个株系的GUS基因沉默外,其它9个转基因植株中GUS酶活力差异明显,但这种差异与GUS基因的拷贝数没有必然联系。 展开更多
关键词 基因表达 GUS 整合方式 分光光度法 转基因白桦
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转基因白桦的花粉活力及外源基因的遗传表达分析 预览 被引量:8
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作者 曾凡锁 王晓风 +1 位作者 骆薇 詹亚光 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期 1082-1086,共5页
采用荧光素二乙酸酯(FDA)染色比较分析转基因白桦花粉的活力的结果表明,转基因白桦的花粉活力均低于非转基因白桦。应用多重PCR和Northern杂交技术分析表明,转基因白桦花粉中有外源基因整合和转录表达。检测转基因白桦花粉中gus报... 采用荧光素二乙酸酯(FDA)染色比较分析转基因白桦花粉的活力的结果表明,转基因白桦的花粉活力均低于非转基因白桦。应用多重PCR和Northern杂交技术分析表明,转基因白桦花粉中有外源基因整合和转录表达。检测转基因白桦花粉中gus报告基因的活性,显示gus报告基因在花粉表达。 展开更多
关键词 转基因白桦 花粉活力 遗传 表达
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培养基组分、激素及pH值对转基因白桦花粉萌发的影响 预览 被引量:5
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作者 钱晶晶 曾凡锁 +1 位作者 王晓凤 詹亚光 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期 106-109,共4页
采用花粉离体培养法研究了培养基不同组分、激素及pH值对转基因白桦(Betula platyphylla Suk.)花粉萌发的影响。结果表明,培养基组分在一定范围内促进花粉萌发,转基因白桦花粉萌发对硼酸和Ca^2+的反应敏感,培养基中缺乏该物质时花粉... 采用花粉离体培养法研究了培养基不同组分、激素及pH值对转基因白桦(Betula platyphylla Suk.)花粉萌发的影响。结果表明,培养基组分在一定范围内促进花粉萌发,转基因白桦花粉萌发对硼酸和Ca^2+的反应敏感,培养基中缺乏该物质时花粉不萌发。激素类物质低浓度时促进萌发,高浓度时抑制萌发。最适合培养基组分为蔗糖18%,硼酸0.015%,Ca^2+ 0.020%,pH6.0,NAA 10mg/ml,6-BA 1mg/ml。并对不同保存条件(4℃,-20℃)下转基因白桦花粉的萌发率进行了比较,4℃下干燥保存更有利于保持转基因白桦花粉的活力。 展开更多
关键词 转基因白桦 花粉 萌发率
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转基因白桦的遗传变异分析 预览 被引量:8
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作者 詹亚光 曾凡锁 李彩华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 59-64,共6页
应用细胞学方法分析了由农杆菌介导法获得的转基因白桦的细胞学变异情况,结果表明转基因白桦的染色体变异频率为78.5%,远远高于非转基因白桦的变异频率(15.3%),且变异以非整倍体占多数.同时用RAPD标记方法研究了转基因白桦在DNA水平的... 应用细胞学方法分析了由农杆菌介导法获得的转基因白桦的细胞学变异情况,结果表明转基因白桦的染色体变异频率为78.5%,远远高于非转基因白桦的变异频率(15.3%),且变异以非整倍体占多数.同时用RAPD标记方法研究了转基因白桦在DNA水平的变异情况,结果显示DNA多态性指数为31.67,并与其它转基因植物的变异情况作了比较研究.最后分析、讨论了产生变异的原因:(1)组织培养过程中产生突变;(2)外源基因的整合及重排对宿主基因组的插入位点及相邻基因转录表达的干扰;(3)应用抗生素和除草剂等筛选转基因植株时促进了转基因植株的变异程度.并提出减少转基因植物体细胞克隆变异的建议. 展开更多
关键词 转基因白桦 遗传变异 农杆菌 染色体 变异频率 体细胞克隆变异 多态性指数
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