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花青素转录因子调控机制及代谢工程研究进展
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作者 宋雪薇 魏解冰 +1 位作者 狄少康 庞永珍 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期133-156,共24页
花青素是广泛存在于植物中的一类重要的类黄酮化合物,在植物生长发育和人类营养保健方面具有重要价值。花青素的生物合成途径已经解析得比较清楚,但花青素的代谢调控网络还在不断完善。调控花青素生物合成的转录因子主要包括MYB、bHLH和... 花青素是广泛存在于植物中的一类重要的类黄酮化合物,在植物生长发育和人类营养保健方面具有重要价值。花青素的生物合成途径已经解析得比较清楚,但花青素的代谢调控网络还在不断完善。调控花青素生物合成的转录因子主要包括MYB、bHLH和WD40三大类,这些转录因子通过激活或抑制CHS、ANS和DFR等花青素途径关键结构基因的表达水平,进而决定花青素积累的部位与水平。该文结合国内外花青素生物合成与转录调控方面的研究进展,简要介绍了花青素的生物合成途径,归纳总结了模式植物中花青素代谢调控的分子机理,尤其是MYB、bHLH和WD40三类主要转录因子的调控机理,以及这些转录因子在观赏植物和水果等经济作物花青素代谢工程中的应用。该文将为系统阐明花青素的转录调控机制和利用代谢工程改良花青素的相关研究提供有益参考。 展开更多
关键词 花青素 转录因子 转录调控 代谢工程
bZIP转录因子在植物生长发育及非生物逆境响应的作用 预览
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作者 刘慧洁 徐恒 +5 位作者 邱文怡 李晓芳 张华 朱英 李春寿 王良超 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第7期1205-1214,共10页
在植物的一生中,不同的基因被设定在不同的时期及部位精确地表达,或是在不同的环境条件下如高温、干旱等诱导表达,基因表达受转录因子的精确调控。植物碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)蛋白是一类重要的转录因子,其参与了植... 在植物的一生中,不同的基因被设定在不同的时期及部位精确地表达,或是在不同的环境条件下如高温、干旱等诱导表达,基因表达受转录因子的精确调控。植物碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,bZIP)蛋白是一类重要的转录因子,其参与了植物从生长发育到胁迫响应的各种过程。植物生长转变及对胁迫做出响应会迅速地诱发自身大量基因的转录变化,这一过程称为转录重编程。bZIP转录因子就是引导这些转录重编程的转录因子中重要的一类。本文介绍了bZIP转录因子的结构、分类以及重要功能,综述了其在植物生长发育及非生物胁迫响应等过程中所起的关键作用,并就如何拓展完善bZIP转录因子功能研究作了展望。 展开更多
关键词 bZIP转录因子 生长发育 非生物逆境 转录调控 蛋白互作
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小鼠干扰素γ受体β基因启动子荧光报告载体构建及转录活性分析
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作者 王棋 王心正 +5 位作者 韩秋影 樊浩 李亭亭 巩伟丽 周涛 李卫华 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期16-21,共6页
目的克隆小鼠干扰素γ受体β(Ifngr2)基因启动子,并应用双荧光素酶报告系统对其进行功能分析。方法首先应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得小鼠Ifngr2基因的启动子区域,包含转录起始位点在内的-1344~+48的DNA序列。然后以小鼠MEF细胞基... 目的克隆小鼠干扰素γ受体β(Ifngr2)基因启动子,并应用双荧光素酶报告系统对其进行功能分析。方法首先应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得小鼠Ifngr2基因的启动子区域,包含转录起始位点在内的-1344~+48的DNA序列。然后以小鼠MEF细胞基因组DNA为模板,利用PCR扩增调取该序列,并进一步插入pGL4.19-luc2CP荧光素酶报告载体。通过PCR扩增获得启动子系列截短体并分别插入pGL4.19-luc2CP载体,共获得包含6个不同长度启动子序列的荧光素酶报告载体。进一步通过双荧光报告实验检测不同截短体对Ifngr2基因转录活性影响,确定其影响转录活性的关键区域。通过点突变探究潜在转录因子对Ifngr2基因转录的影响。结果成功构建小鼠Ifngr2基因启动子荧光素酶报告载体,获得有转录活性的启动子报告基因载体。启动子系列截短分析显示,-132~-97和-1059~-727包含启动子重要元件。生物信息学分析发现,在-132~-97区域内存在潜在的NF-κB结合位点,进而通过点突变实验得到验证。结论通过构建小鼠Ifngr2基因启动子报告载体并对Ifngr2启动子进行功能分析,发现小鼠Ifngr2基因启动子中的转录因子NF-κB结合区域,提示NF-κB在Ifngr2基因表达调控中起重要作用。 展开更多
关键词 干扰素Γ 受体 启动子 转录因子 转录调控
用于细胞水平家蚕转录调控元件研究的简单基础启动子的构建 预览
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作者 顾健健 刘红玲 +7 位作者 李凯荣 孟紫旺 王慧娟 沈关望 张宇靖 阮杨 林英 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期391-397,共7页
【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的... 【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的能在家蚕细胞中稳定表达且基本不含上游转录调控元件的BmVgP78M启动子的基础上,通过PCR技术在其上游添加一定长度的间隔序列和能够应答20-羟基蜕皮激素(20E)且增强启动子活性的BrC-Z2转录因子结合基序(BrC-Z2Element,BrC-Z2E);通过基因克隆技术构建细胞转染载体;通过细胞转染技术和双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性的变化。【结果】通过在BmVgP78M启动子上游添加28bp间隔序列,成功构建了一个简单基础启动子,命名为VgP78ML,并证明其为可用于研究目标转录调控元件的简单基础启动子。经实验验证表明,该简单基础启动子不仅可以在家蚕细胞中稳定表达,且其本身活性不受20E及转录因子BrC-Z2的影响;当该启动子上游连接BrC-Z2E时,可以显著地应答20E及BrC-Z2转录因子,从而调控报告基因的表达。【结论】VgP78ML能够作为简单基础启动子应用于细胞水平对家蚕基因转录调控进行研究。同时,其构建方法也为其他物种构建研究转录调控的简单基础启动子提供了参考。 展开更多
关键词 家蚕 细胞 简单基础启动子 双荧光素酶报告基因系统 转录调控 转录元件
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转录因子c-Jun对人血管平滑肌细胞中线粒体融合基因2表达调控作用的实验研究 预览
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作者 李笑 罗兴才 +5 位作者 王佐广 吴琼 辛毅 刘洁琳 刘雅 魏永祥 《心肺血管病杂志》 2019年第5期538-543,共6页
目的:探讨转录因子c-Jun对培养的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)中线粒体融合基因2(Mfn2)表达的调控作用。方法:①siRNA干扰实验:设正常对照组、阴性siRNA对照组和siRNA干扰组,用c-Jun siRNA转染hVSMCs,培养26 h后提取细胞mRNA和总蛋白。通过... 目的:探讨转录因子c-Jun对培养的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)中线粒体融合基因2(Mfn2)表达的调控作用。方法:①siRNA干扰实验:设正常对照组、阴性siRNA对照组和siRNA干扰组,用c-Jun siRNA转染hVSMCs,培养26 h后提取细胞mRNA和总蛋白。通过RT-PCR和Western blot检测Mfn2基因和蛋白质的表达。②过表达实验:设正常对照组、阴性病毒对照组和慢病毒过表达组。用慢病毒载体感染细胞,培养96 h后提取细胞mRNA和总蛋白。通过RT-PCR和Western blot检测Mfn2基因和蛋白质的表达。结果:siRNA敲减c-Jun后,与阴性siRNA对照和正常对照组相比,siRNA干扰组Mfn2 mRNA明显降低[(0.671±0.061)vs.(1.110±0.080),P<0.01;(0.671±0.061)vs.(1.000±0),P<0.01],蛋白质的表达也显著降低[(0.571±0.049)vs.(1.042±0.039),P<0.01;(0.571±0.049)vs.(1.000±0),P<0.01],hVSMCs的数量明显增加。相反,用慢病毒表达载体过表达c-Jun后,与阴性病毒对照和正常对照组相比,慢病毒过表达组Mfn2 mRNA明显增加[(1.414±0.063)vs.(1.056±0.020),P<0.01;(1.414±0.063)vs.(1.000±0),P<0.01],蛋白质的表达也显著增加[(1.449±0.044)vs.(1.089±0.026),P<0.01;(1.449±0.044)vs.(1.000±0),P<0.01],hVSMCs的数量则明显下降。结论:c-Jun能显著正调控Mfn2的表达,并影响hVSMCs的增殖。因此,它可能是Mfn2表达的转录调控因子。 展开更多
关键词 线粒体融合基因2 C-JUN 转录因子 转录调控 血管平滑肌细胞
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红掌AaMYB1的表达特征及其在烟草中的过表达
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作者 李崇晖 杨光穗 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1898-1905,共8页
R2R3-MYB转录因子在观赏植物花青素着色中具有关键性的调控作用。为了进一步明确红掌AaMYB1调控花青素合成的功能,本研究采用序列分析、表达特征分析以及在烟草中异源过表达等方法,对AaMYB1进行了功能分析。结果表明,AaMYB1与单子叶植... R2R3-MYB转录因子在观赏植物花青素着色中具有关键性的调控作用。为了进一步明确红掌AaMYB1调控花青素合成的功能,本研究采用序列分析、表达特征分析以及在烟草中异源过表达等方法,对AaMYB1进行了功能分析。结果表明,AaMYB1与单子叶植物中调控花青素合成的R2R3-MYB同源性较高。在品种‘Tropical’中,AaMYB1主要在红掌佛焰苞中表达,各组织中的表达量与花青素苷积累密切相关,但在不同品种不同颜色佛焰苞中的表达与花青素苷积累无相关性。单独过表达AaMYB1的T1代烟草花冠檐部因大量积累花青素苷而使颜色变深,且烟草中花青素苷合成途径上的关键酶基因NtDFR和NtANS以及烟草内源调控花青素苷合成的R2R3-MYB基因NtAn2的表达量得到大幅度上调。以上结果进一步明确了AaMYB1具有调控花青素苷合成的功能。 展开更多
关键词 R2R3-MYB 转录因子 异源过表达 转录调控 花色
LncRNA HOTAIR在肿瘤中转录调控及作用机制的研究进展 预览
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作者 马旭兰 代荫梅 《医学综述》 2019年第9期1739-1744,共6页
长链非编码RNA(lncRNAs)在表观遗传学、转录水平及转录后水平等多方面广泛参与基因组的调控过程。其中,同源异型盒基因转录反义基因间RNA(HOTAIR)是目前探究的热点lncRNAs之一。HOTAIR在多种肿瘤中高表达,并可促进肿瘤恶性生物学行为的... 长链非编码RNA(lncRNAs)在表观遗传学、转录水平及转录后水平等多方面广泛参与基因组的调控过程。其中,同源异型盒基因转录反义基因间RNA(HOTAIR)是目前探究的热点lncRNAs之一。HOTAIR在多种肿瘤中高表达,并可促进肿瘤恶性生物学行为的进展。但HOTAIR的转录调控机制异常复杂,受雌激素、雌激素内分泌干扰物、原癌基因c-Myc等许多因素的调控,还可通过与多梳蛋白抑制复合体2和赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1复合物结合、作为竞争性内源RNA、激活信号通路等方式发挥作用。HOTAIR在肿瘤中的具体转录调控及作用机制的深入研究可为靶向阻断HOTAIR表达及作用途径提供理论基础,从而实现肿瘤的精准治疗。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 同源异型盒基因转录反义基因间RNA 转录调控 肿瘤
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乳腺癌中差异表达的长链非编码RNA作用的研究进展
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作者 陈琦 刘月琴 +2 位作者 杨卉 池华茂 许文林 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1150-1153,共4页
长链非编码RNA(lncRNA)的表达改变影响不同类型肿瘤的进展。lncRNA的异常表达不仅是肿瘤恶性转化的信号,还可以通过表观遗传调控、转录调控和转录后调控影响基因的表达水平。多项研究表明,乳腺癌中lncRNA作为促癌基因或抑癌基因,参与细... 长链非编码RNA(lncRNA)的表达改变影响不同类型肿瘤的进展。lncRNA的异常表达不仅是肿瘤恶性转化的信号,还可以通过表观遗传调控、转录调控和转录后调控影响基因的表达水平。多项研究表明,乳腺癌中lncRNA作为促癌基因或抑癌基因,参与细胞增殖凋亡、侵袭转移、肿瘤干性、化疗耐药及影响肿瘤预后。因此,lncRNA能够作为乳腺癌诊断和预后评估的潜在标志物,并有望成为新型的肿瘤治疗的潜在靶点。本文将通过对乳腺癌中差异表达的lncRNA的功能及对肿瘤进展的调控机制进行阐述,为乳腺癌的诊治提供研究目标和理论依据。 展开更多
关键词 非编码RNA 差异表达 乳腺癌 长链 表观遗传调控 肿瘤预后 抑癌基因 转录调控
转录因子JunD在HIV-1前病毒DNA转录调控中的作用研究 预览
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作者 孙君帅 林朝辉 +2 位作者 徐菱 马建 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期333-337,共5页
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救H... 人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救HIV-1假病毒并分别感染对照细胞、JunD敲除以及JunD稳定表达的细胞系,通过荧光素酶技术检测HIV-1前病毒DNA转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,JunD敲除显著抑制了HIV-1的复制,而过表达JunD则促进了HIV-1的复制。该结果表明,JunD参与了HIV-1前病毒DNA的转录调控,并可能由此影响HIV-1在宿主细胞内的复制。本实验为研究激活HIV-1细胞潜伏感染的靶点提供了实验数据。 展开更多
关键词 HIV-1 前病毒DNA 转录调控 JunD蛋白 Jurkat细胞系
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DNA去甲基化酶对拟南芥Laccase家族基因甲基化及转录模式的影响 预览
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作者 孔维文 王彬 +5 位作者 陈伟 丁立 贾祥子 郑晓慧 花文涓 徐小勇 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期27-33,共7页
植物Laccase家族蛋白,是铜蓝氧化酶超家族的重要成员,具有包括抗病性在内的多种生物学功能。利用拟南芥野生型及ros1、rdd和dme突变体的全基因组甲基化测序(BS-SEQ)数据,分析了拟南芥Laccase蛋白家族基因(AtLACs)的DNA甲基化模式。结果... 植物Laccase家族蛋白,是铜蓝氧化酶超家族的重要成员,具有包括抗病性在内的多种生物学功能。利用拟南芥野生型及ros1、rdd和dme突变体的全基因组甲基化测序(BS-SEQ)数据,分析了拟南芥Laccase蛋白家族基因(AtLACs)的DNA甲基化模式。结果表明:在野生型和不同DNA去甲基化酶突变体中,该家族少数成员在基因上游区和转录区存在较高水平的甲基化修饰现象。转录组测序(RNA-SEQ)数据分析结果显示,在野生型和不同突变体中,ALAC家族基因的转录水平普遍较低。而AT5G48100基因在拟南芥胚乳细胞中剧烈表达,DME突变后,其表达水平进一步剧烈增强。综合而言,在野生型和不同DNA去甲基化酶突变体中,ALAC基因家族大部分成员的DNA甲基化修饰与转录调控关联不强,但有些基因的DNA甲基化程度与转录水平之间有密切联系。 展开更多
关键词 拟南芥 LACCASE DNA去甲基化酶 转录调控
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MvaT调控铜绿假单胞菌吩嗪的合成机制
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作者 纪南南 杨广 梁如冰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1662-1671,共10页
【背景】属于H-NS家族的MvaT转录因子参与了铜绿假单胞菌的许多重要代谢过程,如吩嗪合成代谢,但其调控方式仍不十分明确。【目的】确定转录调控因子MvaT是否直接调控铜绿假单胞菌的吩嗪合成过程,即该蛋白是否可以直接结合2个吩嗪-1-羧... 【背景】属于H-NS家族的MvaT转录因子参与了铜绿假单胞菌的许多重要代谢过程,如吩嗪合成代谢,但其调控方式仍不十分明确。【目的】确定转录调控因子MvaT是否直接调控铜绿假单胞菌的吩嗪合成过程,即该蛋白是否可以直接结合2个吩嗪-1-羧酸合成基因簇(phzA1G1和phzA2G2)与3个分支转化基因(phzH、phzS和phzM)的上游启动子区域。【方法】以铜绿假单胞菌SJTD-1和其mvaT基因敲除突变株SJTD-1(ΔmvaT)为研究对象,检测其在不同培养基条件下吩嗪化合物的合成量差异。通过体外异源表达与亲和纯化,获得重组蛋白MvaT。利用凝胶阻滞实验,确定MvaT重组蛋白对5个吩嗪代谢基因簇/基因上游启动子的结合情况。【结果】mvaT基因敲除突变株SJTD-1(ΔmvaT)的吩嗪产量较野生型显著提升。MvaT重组蛋白被有效表达与纯化,体外凝胶阻滞实验结果显示,该重组蛋白可与phzA1G1、phzA2G2、phzM、phzS和phzH的上游启动子区域均发生特异性结合。其中,重组蛋白MvaT与phzA1G1和phzA2G2的结合区域位于其上游启动子的200 bp以内,而该蛋白与phzM、phzS和phzH的结合区域则位于其上游启动子的100 bp以内。【结论】MvaT蛋白通过直接结合吩嗪合成代谢基因的上游启动子区域来直接调控假单胞菌的吩嗪类化合物合成。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 MvaT 吩嗪 转录调控 吩嗪代谢基因
副溶血性弧菌CalR调控vopB2的分子机制
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作者 张凌宇 唐浩 +2 位作者 仇越 张义全 王丽 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1672-1677,共6页
【背景】副溶血性弧菌是一种非常重要的食源性致病菌,CalR蛋白是一种全局转录调节因子。III型分泌系统2 (Type 3 secretion systems 2 T3SS2)是副溶血性弧菌主要的毒力因子,vopB2是T3SS2中的一个关键效应蛋白。【目的】研究副溶血弧菌C... 【背景】副溶血性弧菌是一种非常重要的食源性致病菌,CalR蛋白是一种全局转录调节因子。III型分泌系统2 (Type 3 secretion systems 2 T3SS2)是副溶血性弧菌主要的毒力因子,vopB2是T3SS2中的一个关键效应蛋白。【目的】研究副溶血弧菌CalR对vopB2的转录调控机制。【方法】利用引物延伸实验鉴定vopB2及vtrA的转录起始位点,并根据产物的丰度判断CalR对靶基因的调控关系;采用实时定量RT-PCR研究靶基因mRNA在WT和ΔcalR中转录丰度,验证CalR对靶基因的转录调控关系,进一步利用LacZ实验通过比较β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对靶基因的调控关系;利用凝胶阻滞实验分析His-CalR对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】vopB2有两个转录起始位点A(-130和-28)且其活性受CalR的直接抑制;引物延伸和LacZ结果表明CalR对vtrA的转录并无调控作用。【结论】CalR直接抑制vopB2的转录,该抑制作用与vtrA无关联。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 转录调控 CalR vopB2 vtrA
染色质架构蛋白CTCF调控UGT1基因簇的表达 预览
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作者 郑晓飞 黄海燕 吴强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期509-523,共15页
尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)是一类重要的Ⅱ相药物代谢酶,通过葡萄糖醛酸接合反应代谢大量内外源小分子化合物,对机体维持内部动态平衡具有重要意义。UGT基因突变或表达异常会造成高胆红素血症等多种... 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)是一类重要的Ⅱ相药物代谢酶,通过葡萄糖醛酸接合反应代谢大量内外源小分子化合物,对机体维持内部动态平衡具有重要意义。UGT基因突变或表达异常会造成高胆红素血症等多种疾病、影响药物疗效或减弱代谢药物能力,因此探索UGT表达调控机制将会为人类疾病的预防和个体化医疗以及精准医学提供科学依据。脊椎动物UGT分为UGT1和UGT2两个亚家族,UGT1基因簇结构与原钙粘蛋白(protocadherin,Pcdh)、免疫球蛋白或B细胞受体(immunoglobulin or B-cell receptor)、T细胞受体(T-cell receptor)基因簇类似,但与UGT2结构不同,分为可变区和恒定区,可变区包含成串排列的外显子,任意一个外显子都可以被可变剪接到下游同一套恒定区外显子上,形成9种UGT1信使RNA并翻译成不同UGT1葡醛酸转移酶亚型。本实验室前期工作发现,染色质架构蛋白CTCF结合DNA的方向性在染色质三维结构构建中发挥重要作用。基于此,为了进一步解析UGT1复杂基因簇的三维转录调控机制,本研究分析和比较了人和小鼠UGT1基因簇的CTCF结合位点(CTCF binding site,CBS)的方向性分布,发现人和小鼠的UGT1基因簇中CBS分布差异很大。以人肺癌细胞系A549为模型,通过RNAi敲低细胞中CTCF和SMC3(cohesin亚基),证明了CTCF和cohesin蛋白参与调控人UGT1基因簇的转录表达。进一步采用CRISPR介导的DNA片段编辑技术对hCBS1进行了原位反转(in situ inversion)和删除,并通过RNA-seq分析技术发现hCBS1删除能够显著降低UGT1A6、UGT1A7和UGT1A9的表达水平,然而hCBS1反转仅仅显著降低UGT1A7的表达水平。上述研究表明hCBS1参与UGT1A6、UGT1A7和UGT1A9的转录调节,是人UGT1基因簇的潜在转录调控元件。本研究为未来进一步探索UGT1基因簇的三维基因转录调控机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 UGT1 CTCF CRISPR/Cas9 DNA片段编辑 转录调控
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绵羊miR-150启动子的鉴定及生殖激素对其转录调控研究 预览
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作者 宋鹏琰 李佳丽 +3 位作者 苗艳平 李相运 周荣艳 锡建中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1358-1366,共9页
旨在对绵羊miR-150基因的启动子进行鉴定以及探索生殖激素对miR-150启动子转录调控的影响。本研究利用生物学软件预测雌性绵羊(小尾寒羊)卵巢miR-150启动子区域及繁殖相关转录因子结合位点,构建重组质粒,并利用双荧光素酶报告基因检测mi... 旨在对绵羊miR-150基因的启动子进行鉴定以及探索生殖激素对miR-150启动子转录调控的影响。本研究利用生物学软件预测雌性绵羊(小尾寒羊)卵巢miR-150启动子区域及繁殖相关转录因子结合位点,构建重组质粒,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-150的启动子活性。通过在无血清培养基内添加FSH、LH和E2,进行miR-150启动子重组质粒转染并检测miR-150启动子活性。结果,分别利用Promoter 2.0和PROMO软件预测出miR-150启动子区域和转录起始位点,并获得了与繁殖相关转录因子结合位点。所预测的绵羊miR-150启动子片段序列长度为582 bp,且成功构建miR-150启动子质粒,并确定绵羊颗粒细胞的最佳转染效率(脂质体∶质粒DNA=1∶1)和质粒最佳转染比例(50∶1),从而验证了所预测的区域具有启动子活性。此外,FSH、LH和E2处理组与对照组(无激素组)相比,miR-150启动子的活性均显著下调(P<0.05)。结果表明,生殖激素可以通过影响绵羊miR-150启动子活性来调控miR-150基因的表达,为miR-150调控卵泡发育的机制研究提供了新思路。 展开更多
关键词 miR-150启动子 生殖激素 绵羊 转录调控 颗粒细胞
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环形RNA研究现状及展望
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作者 曹培华 武丹彤 +3 位作者 栾静 王新蕾 刘伯男 马宁 《医学分子生物学杂志》 CAS 2019年第4期395-400,共6页
环形RNA(circular RNA,circRNA)属于迄今发现的非编码RNA的当中的一种,是通过反向剪接(back spacing)形成的并以共价键形成环形结构的一类单链闭环分子。不同于经传统剪接(canonical splicing)形成的mRNA,经反向剪接形成的环形RNA不具... 环形RNA(circular RNA,circRNA)属于迄今发现的非编码RNA的当中的一种,是通过反向剪接(back spacing)形成的并以共价键形成环形结构的一类单链闭环分子。不同于经传统剪接(canonical splicing)形成的mRNA,经反向剪接形成的环形RNA不具有亍加帽结构和3'poly(A)尾结构,可抵抗RNaseR酶的降解。环形RNA可在多物种间广泛、稳定存在。随着高通量测序技术的发展,环形RNA相继被发现,在调控基因表达中发挥着重要功能,可参与多种疾病的发生发展过程。环形RNA以多种形式在转录水平发挥着重要的调控作用,具有巨大的研究前景。 展开更多
关键词 环形RNA 转录调控 非编码RNA
地衣芽孢杆菌中木糖操纵子受葡萄糖胁迫的转录调控特性
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作者 刘翔 李由然 +4 位作者 张梁 丁重阳 徐沙 顾正华 石贵阳 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期695-701,共7页
木糖操纵子是芽孢杆菌中常用的表达元件,但目前对其认识只停留在静态机理层面,关于其在发酵过程中转录调控特性的研究还鲜见报道.利用qPCR技术探究在葡萄糖胁迫下地衣芽孢杆菌木糖诱导的木糖异构酶基因在发酵过程中的转录水平,考察菌体... 木糖操纵子是芽孢杆菌中常用的表达元件,但目前对其认识只停留在静态机理层面,关于其在发酵过程中转录调控特性的研究还鲜见报道.利用qPCR技术探究在葡萄糖胁迫下地衣芽孢杆菌木糖诱导的木糖异构酶基因在发酵过程中的转录水平,考察菌体的生长状态,并通过二硝基水杨酸(DNS)法及高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)法测定发酵过程中糖浓度变化.结果显示:在实验所设置的地衣芽孢杆菌代谢相对稳定的条件下,地衣芽孢杆菌木糖启动子转录强度在稳定期以前均呈增加的趋势,在对数生长末期或稳定前期转录强度最高,约是7 h时的14倍,随后呈下降趋势;进一步研究发现20-180 g/L葡萄糖浓度均对其表现为抑制,且抑制程度一致,当葡萄糖含量极少或者没有而木糖存在的情况下,启动子转录强度极高.本研究表明以地衣芽孢杆菌为宿主的木糖诱导系统在菌体对数生长末期诱导效果最佳;当环境中葡萄糖含量极少或者没有而木糖存在的情况下,更有利于启动子表达;结果对利用木糖诱导型重组地衣芽孢杆菌诱导发酵有一定的启示与指导意义. 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 木糖操纵子 实时荧光定量PCR 葡萄糖胁迫 发酵过程 转录调控
HDACi诱导B细胞淋巴瘤表达CD47分子机制研究
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作者 邓思宇 彭程 黄传新 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期12-17,共6页
研究探讨B细胞淋巴瘤中组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor, HDACi)调控CD47表达及相关分子机制。课题组对小鼠B淋巴瘤细胞系A20进行不同剂量和不同时间长度的广谱HDACi (Vorinostat,SAHA)处理后,流式细胞术检测细... 研究探讨B细胞淋巴瘤中组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor, HDACi)调控CD47表达及相关分子机制。课题组对小鼠B淋巴瘤细胞系A20进行不同剂量和不同时间长度的广谱HDACi (Vorinostat,SAHA)处理后,流式细胞术检测细胞表面CD47分子表达水平。随后用TRIzol法提取经SAHA处理的小鼠和人源B淋巴瘤细胞系样本中总mRNA,检测CD47转录水平。为进一步研究HDACi调控CD47表达的分子机制,课题组采用染色质免疫共沉淀法检测H3K4ac、H3K9ac和H3K27ac与CD47 DNA启动子区域的结合情况。最后在SAHA和BRD4特异性抑制剂JQ1的联合处理下,通过流式细胞术检测淋巴瘤细胞中CD47表达水平变化。研究发现CD47的蛋白质水平及mRNA水平均与SAHA处理时间和作用剂量呈正相关性。而在CD47启动子区域,H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平在SAHA处理后都有显著提高。此外,SAHA和JQ1的联合使用能够显著抑制SAHA单独作用时对CD47的上调。以上结果说明SAHA通过增强CD47启动子区域所结合组蛋白的乙酰化水平,促进基因的转录表达,上调了CD47的mRNA和蛋白质水平,而抑制BRD4可以逆转SAHA对CD47的上调作用。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 转录调控 CD47 BET抑制剂
肺癌中SOX30基因对PKP2基因表达的调控 预览
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作者 马帮靖 郝翔麟 +3 位作者 韩飞 刘晋祎 曹佳 张爱华 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第6期641-646,共6页
目的:探讨 SOX 30基因与 PKP 2基因在肺癌中的表达调控关系。方法:利用TCGA数据库数据分析 SOX 30与 PKP 2在肺癌中的相关性,利用JASPAR数据库分析 PKP 2启动子区SOX30蛋白转录结合位点;利用qRT-PCR检测HBE、A549、H460、H520、H358、H1... 目的:探讨 SOX 30基因与 PKP 2基因在肺癌中的表达调控关系。方法:利用TCGA数据库数据分析 SOX 30与 PKP 2在肺癌中的相关性,利用JASPAR数据库分析 PKP 2启动子区SOX30蛋白转录结合位点;利用qRT-PCR检测HBE、A549、H460、H520、H358、H1975、SPC-A1、95D、LTEP等细胞中 PKP 2的mRNA表达情况,采用qRT-PCR及Western Blot检测H460及H520细胞转染SOX30表达载体后对PKP2的mRNA与蛋白表达的影响,用qRT-PCR检测 SOX 30基因敲除小鼠肺组织中 PKP 2 mRNA表达情况。结果: TCGA数据库数据分析表明在肺腺癌中 SOX 30与 PKP 2表达呈正相关( n =576, r =0.156, P =0.000), PKP 2启动子区存在多个SOX30转录结合位点;肺癌细胞系中 PKP 2 mRNA表达下调,与 SOX 30基因表达趋势一致;过表达 SOX30 后,H460细胞中PKP2 mRNA及蛋白水平显著上调( P <0.05),而H520细胞中PKP2 mRNA及蛋白水平未见显著变化;敲除 SOX 30后,小鼠肺组织中 PKP 2 mRNA表达水平显著下调。结论: SOX 30是调控 PKP 2表达的关键分子, SOX 30 -PKP 2可能在肺腺癌中发挥重要作用。 展开更多
关键词 SOX30 PKP2 肺肿瘤 基因表达 转录调控
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垂体催乳素细胞分化发育的研究进展 预览
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作者 苏凯 章卫平 曹冬梅 《医学研究杂志》 2019年第6期7-10,共4页
垂体前叶主要由5种内分泌细胞组成,其中催乳素细胞在胚胎期的分化过程与生长激素细胞有共同起源,出生后的细胞数量受激素等调节亦有很大可塑性.近年的研究发现,转录因子ZBTB20缺失可导致垂体催乳素细胞群特异性缺失,为其分化命运决定的... 垂体前叶主要由5种内分泌细胞组成,其中催乳素细胞在胚胎期的分化过程与生长激素细胞有共同起源,出生后的细胞数量受激素等调节亦有很大可塑性.近年的研究发现,转录因子ZBTB20缺失可导致垂体催乳素细胞群特异性缺失,为其分化命运决定的机制研究提供了很好的动物模型.文章就垂体催乳素细胞的分化发育过程和调控机制的研究进展进行综述,以期完善人们对垂体内分泌细胞分化发育的认识,为深入研究垂体发育调控的分子机制提供新的思路,并可能为垂体相关疾病的防治提供新的靶点. 展开更多
关键词 垂体 催乳素细胞 发育 细胞分化 转录调控
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转录因子调控植物萜类化合物生物合成研究进展
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作者 苏文炳 蒋园园 +3 位作者 白昀鹭 甘小清 刘月学 林顺权 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期919-926,共8页
植物三萜酸等萜类化合物具有抗炎、抗氧化、抑制肿瘤细胞增殖等生物活性,在医药、化妆品、食品等等领域应用广泛,但萜类化合物的生物合成调控机制尚未明确。本文重点综述近年来植物萜类化合物生物合成相关转录因子和调控机制的研究进展... 植物三萜酸等萜类化合物具有抗炎、抗氧化、抑制肿瘤细胞增殖等生物活性,在医药、化妆品、食品等等领域应用广泛,但萜类化合物的生物合成调控机制尚未明确。本文重点综述近年来植物萜类化合物生物合成相关转录因子和调控机制的研究进展,为进一步阐明萜类代谢的转录调控网络提供参考。 展开更多
关键词 天然活性物质 萜类化合物 生物合成 转录调控 基因簇
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