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Sox9基因转染的人脐带血干细胞复合骨基质明胶/生物蛋白胶构建组织工程软骨的实验研究
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作者 张军 徐辉 +4 位作者 温绣蔺 王波涛 张阿玲 史艳霞 王正辉 《生物医学工程与临床》 CAS 2018年第1期13-19,共7页
目的探讨Sox9基因转染的人脐带血干细胞(hUCMSC)复合骨基质明胶/生物蛋白胶体内外构建组织工程软骨的效果。方法体外分离培养hUCMSC;采用脂质体转染Sox9载体质粒,将转染的细胞在骨基质明胶/生物蛋白胶材料上体外培养8周,行扫描电子显... 目的探讨Sox9基因转染的人脐带血干细胞(hUCMSC)复合骨基质明胶/生物蛋白胶体内外构建组织工程软骨的效果。方法体外分离培养hUCMSC;采用脂质体转染Sox9载体质粒,将转染的细胞在骨基质明胶/生物蛋白胶材料上体外培养8周,行扫描电子显微镜和组织学观察。选择雄性SD大鼠55只,体质量(150±20)g。将体外形成的软骨样组织移植入SD大鼠背部皮下,8周时行组织学检查,观察软骨形成能力,并进行宿主免疫反应监测。结果体外培养8周后hUCMSC在支架材料上生长良好,分泌大量蛋白多糖和Ⅱ型胶原。移植入大鼠体内8周后,形成软骨样组织,形态学和免疫组织化学染色显示蛋白多糖和Ⅱ型胶原阳性。移植后IgG、IgA、IgM、C3和C4水平与对照组差异无统计学意义[IgG(1.105 6±0.019 2)μg/mL vs(1.145 0±0.023 1)μg/mL(术后28 d),IgM(0.219 1±0.034 3)μg/mL vs(0.348 7±0.030 3)μg/mL(术后28 d),IgA(0.350 7±0.058 5)μg/mL vs(0.367 7±0.042 4)μg/mL(术后28 d),C3(122.65±4.40)μg/mL vs(130.63±2.98)μg/mL(术后28 d),C4(49.89±2.11)μg/mL vs(51.45±3.74)μg/mL(术后28 d)]。Sox9基因转染的hUCMSC复合骨基质明胶/生物蛋白胶构建的组织工程软骨移植入体内后未引起明显的宿主免疫反应。结论Sox9基因转染的hUCMSC可作为组织工程软骨的一种良好的种子细胞来源。 展开更多
关键词 脐带血干细胞 SOX9 组织工程 载体质粒 骨基质明胶 生物蛋白胶
构建大鼠白细胞介素1β基因shRNA腺病毒载体 预览 被引量:1
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作者 赵晓龙 陈建平 +5 位作者 张宇 李航 刘艳芳 高文燕 韩磊 邓亚南 《中国组织工程研究》 北大核心 2015年第18期2923-2927,共5页
背景:特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与siRNA相比,shRNA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达,但是单纯的shRNA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用,而腺病毒载体具有宿... 背景:特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与siRNA相比,shRNA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达,但是单纯的shRNA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用,而腺病毒载体具有宿主范围广、感染效率高以及能够在宿主细胞中稳定表达等特点。目的:构建大鼠白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体并检测其对目的基因表达的影响。方法:根据NCBI查询获得的大鼠白细胞介素1β基因序列设计3条 siRNA 并合成相应的 shRNA,分别为shRNA1、shRNA2、shRNA3。采用3’和5’单链退火得到的shRNA片段与经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pHBAd/U6/GFP干扰载体连接,构建白细胞介素1βshRNA腺病毒载体穿梭质粒。测序后将穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞,进行白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体(rAd/shRNAs)的包装与扩增,分别为rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3。将rAd/shRNAs感染大鼠H9C2细胞,使用荧光显微镜观察其感染效率,采用Western Blot 检测rAd/shRNAs对目的基因表达的影响。结果与结论:测序结果显示白细胞介素1β基因的3条shRNA腺病毒载体穿梭质粒中的序列分别与所设计的3条 shRNA 序列相同;并成功构建了大鼠白细胞介素1β基因的 shRNA 腺病毒载体(rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3)。rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3均可以下调白细胞介素1β的表达,其中rAd/shRNA2的下调效果最明显。 展开更多
关键词 疼痛 实验动物 基因病毒载体及相关因子模型 神经病理性疼痛 白细胞介素1Β 基因表达 RNA干扰 小干扰RNA 短发卡RNA 腺病毒载体 载体质粒 HEK293细胞 大鼠H9C2细胞 山西省自然科学基金
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人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建 预览
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作者 王博涵 余虓 +4 位作者 余淦 李恒 肖巍 徐华 叶章群 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1238-1242,共5页
背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH—KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染... 背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH—KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度。将重组的慢病毒感染5637细胞,RT—PCR检测KLF4mRNA的表达。结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实重组慢病毒载体pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内KLF4mRNA高表达。结果证实,实验成功构建KLF4基因慢病毒过表达载体。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建细胞学实验 慢病毒载体 KLF4基因 基因重组 5637细胞 载体质粒 DNA测序 组织工程 泌尿系肿瘤 大肠杆菌 DH5a感受态细胞 国家自然科学基金 组织构建图片文章
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Two Retroviruses Packaged in One Cell Line can Combined Inhibit the Replication of HIV-1 in TZM-bl Cells 预览 被引量:1
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作者 Zhipin Liang Zhiyuan Guo +2 位作者 Xin Wang Xiaohong Kong Chang Liul 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2012年第6期339-344,共6页
细胞的蛋白质 tetherin 拴住 HIV-1 细胞的膜到上的病毒的粒子禁止 HIV-1 的复制。然而, HIV-1 附件蛋白质 Vpu 抵抗 tetherin 的抗病毒的功能。在这研究,二 retroviral 向量 plasmids 被构造。一个人禁止了 vpu 基因表示;另一个过... 细胞的蛋白质 tetherin 拴住 HIV-1 细胞的膜到上的病毒的粒子禁止 HIV-1 的复制。然而, HIV-1 附件蛋白质 Vpu 抵抗 tetherin 的抗病毒的功能。在这研究,二 retroviral 向量 plasmids 被构造。一个人禁止了 vpu 基因表示;另一个过去表示 tetherin。两 retroviral 向量 plasmids 能在包装房间线 PT67 被包装获得相应 retroviruses。tetherin 在表示上或 vpu-RNAi 的 retroviral 向量 plasmids 功能在房间水平被检测。Retroviral 向量 plasmids 是到在从 0T3V 的不同比率的 PT67 房间的 transfected 到 3T0V,然后混合了 retroviruses 被收获。混合 retroviruses 的抗病毒的功能在 HIV-1 被检测感染的 TZM-bl 房间。结果证明那包装混合 retroviruses 能镇压在 TZM-bl 房间的 HIV-1 的复制。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 HIV-1 细胞系 复制 抗病毒功能 封装 载体质粒 RNAI技术
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抑癌基因PTEN真核表达质粒的构建及对乳腺癌MDA468细胞的影响 预览 被引量:7
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作者 陈庆永 陈道达 +1 位作者 王春友 周友生 《中华肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2005年第4期 216-219,共4页
目的研究外源性PTEN基因稳定转染对人乳腺癌MDA468细胞体外生长的影响.方法先构建PTEN基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PTEN,应用重组质粒pcDNA3.1-PTEN和pcDNA3.1(-)空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人乳腺癌细胞株MDA468,以未转... 目的研究外源性PTEN基因稳定转染对人乳腺癌MDA468细胞体外生长的影响.方法先构建PTEN基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PTEN,应用重组质粒pcDNA3.1-PTEN和pcDNA3.1(-)空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人乳腺癌细胞株MDA468,以未转染组为对照.应用RT-PCR、免疫组化和免疫印迹方法分析目的基因及其蛋白表达,MTT法分析细胞生长抑制作用,Annexin V-FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.结果稳定转染PTEN基因的细胞株有外源目的基因的整合和相应mRNA及其蛋白的高表达.MTT检测表明,pcDNA3.1-PTEN转染组活细胞数低于未转染组和pcDNA3.1-MDA468细胞转染组.流式细胞术显示,pcDNA3.1-PTEN转染组凋亡率高于未转染组和pcDNA3.1-MDA468细胞转染组.结论外源性PTEN基因稳定转染可抑制人乳腺癌细胞的恶性表型. 展开更多
关键词 真核表达质粒 抑癌基因PTEN 外源性PTEN基因 pcDNA3 人乳腺癌细胞株 Annexin 流式细胞术检测 细胞体外生长 稳定转染 脂质体转染法 RT-PCR 生长抑制作用 目的基因 细胞转染 MTT检测 载体质粒 重组质粒 体外培养 蛋白表达
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重组白细胞介素-4增强日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗诱导小鼠的保护力 预览 被引量:4
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作者 陈欲晓 王林纤 +4 位作者 唐连飞 张顺科 章洁 曾宪芳 易新元 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期 65-68,共4页
目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果.方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj... 目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果.方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj31)肌注免疫小鼠,设重组IL-4表达质粒、组织蛋白酶B表达质粒和2种空载体质粒对照组.免疫组化检测IL-4和组织蛋白酶B在小鼠肌细胞内的表达,末次免疫3周后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力.结果重组IL-4和组织蛋白酶B DNA均在小鼠肌细胞表达,重组IL-4和组织蛋白酶B DNA联合免疫小鼠,产生43.2%的减虫率和76.6%的减卵率,与组织蛋白酶B DNA单独免疫相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05).结论重组IL-4能提高日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗的抗血吸虫保护力作用,具有佐剂的免疫效应. 展开更多
关键词 组织蛋白酶B 日本血吸虫 保护力 重组 真核表达载体PCDNA3.1 白细胞介素-4(IL-4) 疫苗诱导 免疫保护效果 BDNA疫苗 真核表达质粒 免疫组化检测 免疫小鼠 基因克隆 载体质粒 肌细胞内 攻击感染 细胞表达 单独免疫 免疫效应
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人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定 预览 被引量:1
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作者 王晓军 王爱民 +6 位作者 张忠荣 吴思宇 郭庆山 吴军 贺伟峰 汤守营 张全顺 《中国骨质疏松杂志》 CAS 2005年第2期 167-170,共4页
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力.方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带... 目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力.方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)进行感染.采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度.结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功,病毒滴度可达2.5×109pfu/ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含hOPG重组腺病毒载体. 展开更多
关键词 人骨保护素 基因重组腺病毒载体 adEasy系统 大鼠骨髓基质细胞 细菌内同源重组法 基因工程技术 293细胞 PCR方法 载体质粒 基因片段 大肠杆菌 骨架质粒 基因转染 酶切鉴定 病毒滴度 感染能力 G基因 hOP 计数法 检测 荧光
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构建不同筛选特性的HBV X基因真核表达载体 预览 被引量:1
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作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 罗红雨 梁骏 《中西医结合肝病杂志》 2005年第5期 274-276,共3页
目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体.方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEM(R)-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和p... 目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体.方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEM(R)-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X.结果:从质粒pEcob6成功PCR扩增出HBV X全基因并克隆至质粒pEasy-X,酶切、PCR及测序均证实真核表达载体质粒pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X构建成功.结论:具有不同筛选特性的两个HBVX基因真核表达载体业已成功构建. 展开更多
关键词 HBV X基因 真核表达载体 构建 基因真核表达载体 HBVX 筛选 PCDNA3.1(+) PCR扩增 载体质粒 特异性片段 多克隆
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构建Neuregulin1克隆载体的实验 预览
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作者 张际绯 金连弘 +2 位作者 傅松滨 史忠诚 于旸 《中国临床康复》 CAS 北大核心 2005年第15期 117-119,共3页
目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用... 目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用提供重要实验方法.方法:实验于2003-09/2004-01在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成.提取幼龄大鼠脑RNA,反转录聚合酶链反应,用XbaI和EcoRI对目的基因和载体质粒进行双酶切,T4连接酶连接Schwann后转化Top10感受态大肠杆菌,挑取LB(Amp+)平板生长克隆菌摇菌扩增,用菌液扩增聚合酶链反应检测目的基因,同时提取质粒与空载体并列电泳验证克隆质粒,进行克隆载体测序.结果:获得一株NRG1克隆质粒,测序结果显示为NRG1新的异构体,用基因组DNA和cDNA为模板扩增聚合酶链反应验证是NRG1新的剪切体.结论:构建的NRG1克隆异构体是大鼠NRG1基因克隆载体,可用于进一步的细胞转染、蛋白表达功能检测和细胞移植研究. 展开更多
关键词 克隆载体 SCHWANN细胞 反转录聚合酶链反应 聚合酶链反应检测 哈尔滨医科大学 神经元再生 基因组DNA 细胞移植 目的基因 医学遗传学 细胞增殖 实验方法 修复作用 神经损伤 损伤模型 脑RNA 幼龄大鼠 载体质粒 大肠杆菌 cDNA
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反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的实验研究 预览 被引量:6
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作者 金鸿雁 丰有吉 《中华妇产科杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期 400-403,共4页
目的探讨反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的机理.方法采用RT-PCR技术分别检测卵巢透明细胞癌细胞株ES-2、卵巢腺癌细胞株OVCAR3、卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910和高转移卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM 细胞中Snail 、E钙黏蛋白 mRNA... 目的探讨反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的机理.方法采用RT-PCR技术分别检测卵巢透明细胞癌细胞株ES-2、卵巢腺癌细胞株OVCAR3、卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910和高转移卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM 细胞中Snail 、E钙黏蛋白 mRNA的表达水平.将HO8910细胞分为两组,分别转染反义Snail质粒(反义组)和空载体质粒(对照组),观察Snail对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞体外侵袭、运动的抑制作用.结果 PCR产物凝胶电泳结果显示,Snail mRNA在ES-2、HO8910、HO8910PM细胞中有表达,而E钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR3细胞中有表达.HO8910细胞瞬时转染0、 24 、48 h时,Snail mRNA的表达水平分别为0.897±0.005、0.865±0.010、0.338±0.014,0 与24 h时相比,差异有统计学意义(P<0.05);24 h与48 h时相比,差异有统计学意义(P<0.01);同时,E钙黏蛋白mRNA开始有表达, 并随转染时间的增加而增加, 0、24、48 h时,E钙黏蛋白mRNA表达水平分别为0、0.130±0.001、0.217±0.005,各时间点间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).HO8910细胞稳定转染后,反义组、对照组Snail mRNA表达水平分别为0.126±0.010、0.355±0.020,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);反义组E钙黏蛋白mRNA开始有表达,表达水平为0.467±0.040,而对照组为0,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01 );同时,检测间质细胞标志物纤维连接蛋白mRNA的表达水平,反义组为0.191±0.010,显著低于对照组的0.582±0.010(P<0.01).体外细胞运动实验表明,反义组、对照组跨膜细胞数[分别为(48±2)、(396±29)个/高倍镜(×200)]比较,差异有统计学意义(P<0.01).重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,两组穿透基底膜细胞数[分别为(35±10)、(219±72)个/高倍镜(×200)]比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论卵巢癌细胞中存在Snail mRNA与E钙黏蛋白mRNA表达的逆转关系,抑制Snail mRNA的表达对卵巢癌细胞的侵袭和运动有抑制作用,可� 展开更多
关键词 Snail 转录因子 癌转移 实验研究 HO8910细胞 蛋白MRNA mRNA表达 RT-PCR技术 OVCAR3细胞 腺癌细胞株 卵巢癌细胞 卵巢浆液性 钙黏蛋白 抑制作用 统计学 对照组 PCR产物 细胞标志物 透明细胞 载体质粒 转染反义 逆转作用
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核酸疫苗研究现状 预览 被引量:5
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作者 舒黛廉 王慧杰 任敏 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第10期 43-45,共3页
核酸疫苗是当前研究的前沿领域,它能诱发机体产生体液免疫和细胞免疫,作者就核酸疫苗的概念、载体、作用机理、影响因素、安全性和在畜禽传染病领域中的应用作一综述,希望为动物疫病防治提供参考.
关键词 核酸疫苗 核酸免疫 载体质粒 作用机理
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髓样分化蛋白2在内毒素/脂多糖激活人脐静脉内皮细胞中作用的实验研究 预览 被引量:4
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作者 熊建琼 朱佩芳 +1 位作者 王正国 蒋建新 《中华烧伤杂志》 CAS 北大核心 2005年第2期 97-99,共3页
目的探讨髓样分化蛋白2(MD-2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及其在内毒素/脂多糖(LPS)激活HUVEC中的作用. 方法分离、培养HUVEC,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法,检测LPS刺激前后HUVEC 的MD-2 mRN... 目的探讨髓样分化蛋白2(MD-2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及其在内毒素/脂多糖(LPS)激活HUVEC中的作用. 方法分离、培养HUVEC,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法,检测LPS刺激前后HUVEC 的MD-2 mRNA及其蛋白表达水平,用目的条带吸光度(A)值表示;HUVEC转染0.5、1.0、2.0 μg MD-2突变质粒(MD-2C95Y)及2.0 μg pEF-BOS空载体质粒、2.0 μg MD-2质粒后, 观察LPS刺激对HUVEC核因子(NF)κB活性和其分泌白细胞介素(IL)8能力的影响, NF-κB的测定值用A450 nm表示. 结果 LPS刺激前, HUVEC MD-2 mRNA及蛋白有表达, LPS能明显上调其表达水平, 并呈一定的时间和剂量依赖性 .LPS刺激前MD-2蛋白A值为25 196±1 723,明显低于0.01 mg/L LPS刺激6 h的A值(58 817±3 241,P<0.01);转染MD-2C95Y能明显抑制LPS对HUVEC NF-κB的激活和IL-8的分泌. 结论 MD-2在LPS激活/损伤HUVEC效应中具有重要的地位. 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 内毒素 激活 实验研究 髓样 蛋白2 逆转录聚合酶链反应 脂多糖(LPS) 培养HUVEC 蛋白免疫印迹 蛋白表达水平 MD-2蛋白 白细胞介素 剂量依赖性 NF-κB 分化蛋白 载体质粒 IL-8 表达及 吸光度 BOS 核因子
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转抗细胞凋亡基因p35黏虫细胞克隆株研究
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作者 郑桂玲 李长友 +2 位作者 李国勋 Wang Ping Robert R. Granados 《科学通报》 CAS 北大核心 2005年第20期2226-2230,共5页
通过脂质体介导的方法将抗细胞凋亡p35基因导入黏虫细胞系Ms7311, 经Zeocin抗性筛选和细胞克隆, 获得了转基因细胞株TMs7311. PCR检测证明, 转基因细胞株基因组DNA中含有p35基因特异扩增谱带. 该转基因细胞株形态与原始细胞系不同, 生... 通过脂质体介导的方法将抗细胞凋亡p35基因导入黏虫细胞系Ms7311, 经Zeocin抗性筛选和细胞克隆, 获得了转基因细胞株TMs7311. PCR检测证明, 转基因细胞株基因组DNA中含有p35基因特异扩增谱带. 该转基因细胞株形态与原始细胞系不同, 生长速度快, 群体倍增时间为25.4 h, 对磷酸缓冲液(PBS)有较强的营养抗性, 能抑制放线菌素D诱导的细胞凋亡; 病毒产量和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)以及碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase, SEAP)的表达水平明显高于原始细胞系Ms7311, 是一株高表达重组蛋白和高产杆状病毒的优良细胞株. 展开更多
关键词 P35基因 黏虫细胞系 重组蛋白 细胞凋亡 重组病毒 载体质粒
大肠杆菌新型菌毛(F1987)基因文库的构建 预览 被引量:3
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作者 于凤鸣 房海 +3 位作者 陈翠珍 张晓君 巩元芳 马建军 《中国兽医学报》 CAS 北大核心 2004年第2期 147-149,共3页
用碱裂解法从表达新型菌毛(F1987)的E.coli DH5α阳性转化子中提取相应质粒DNA,用BamH I对相应质粒和载体质粒(pUC19)分别进行酶切,酶切产物经过纯化并按一定比例混合后,加入T4 DNA连接酶进行连接,连接产物用热激法转化受体菌E.coli DH... 用碱裂解法从表达新型菌毛(F1987)的E.coli DH5α阳性转化子中提取相应质粒DNA,用BamH I对相应质粒和载体质粒(pUC19)分别进行酶切,酶切产物经过纯化并按一定比例混合后,加入T4 DNA连接酶进行连接,连接产物用热激法转化受体菌E.coli DH5a,构建了相应的基因文库. 展开更多
关键词 大肠杆菌 菌毛基因 基因文库 载体质粒
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载体质粒介导的TGF—β1短发夹RNA及TGF—β1反义RNA对人腹膜纤维化的影响 预览 被引量:4
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作者 刘伏友 刘虹 +3 位作者 袁芳 彭佑铭 刘映红 段绍斌 《中华肾脏病杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期 102-108,共7页
目的研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达的影响,并与TGF-β1反义RNA对HPMC的作用比较.方法针对TGF-β1的以ggcc开始的21碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸... 目的研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达的影响,并与TGF-β1反义RNA对HPMC的作用比较.方法针对TGF-β1的以ggcc开始的21碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6).2.对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由6碱基序列间隔的反向互补序列,构建成TGF-β1短发夹RNA的产生质粒.并构建反义TGF-β1基因真核表达载体.采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用脂质体转染表达TGF-β1 shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF-β1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒导入高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1 mRNA的表达以及纤连蛋白(FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)和胶原Ⅰ(Col Ⅰ)的mRNA表达.采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平以及FN和PAI-1的蛋白质水平.结果HPMC在高糖和LPS的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P<0.01).TGF-β1反义RNA转染HPMC 24 h后,与对照组相比,FN、Col Ⅰ、PAI-1 mRNA分别下调17%、26%、9.6%;转染48 h后FN、PAI-1蛋白含量亦明显下降(P<0.05).pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组较GS+LPS组及pcDU6空载体组明显下调TGF-β1的表达(P<0.01);pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组间比较并无明显差别(P>0.05);pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组与pcDU6空载体组比较并无明显差别(P>0.05);pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组较pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组明显下调TGF-β1的表达(P<0.01).结论pcDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA能够明显抑制高糖和LPS刺激下的HPMC TGF-β1的基因表达,可能是防治CAPD患者腹膜纤维化的一种有效方 展开更多
关键词 载体质粒 TGF-Β1 短发夹RNA TGF-Β1 反义RNA 腹膜纤维化 基因疗法
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抗生素和干扰素
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《生物技术通报》 CAS 1994年第2期69-73,共5页
关键词 抗生素生产 大环内醋 产黄青霉菌 链霉菌 载体质粒 程云 重组大肠杆菌 融合蛋白 白色假丝酵母 逆流层析法
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疫苗
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《生物技术通报》 CAS 1994年第3期69-72,共4页
关键词 牛痘病毒 细胞培养物 鼠伤寒沙门氏菌 重组杆状病毒 外膜蛋白 Shiga 抗体反应 载体质粒 基因克隆 昆虫细胞
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疫苗
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《生物技术通报》 CAS 1993年第12期38-41,共4页
934022在微载体上大规模连续继代培养 WI-38和 MRC-5的比较研究[会,英]/Mazur-Melnyk,M.…∥In Vitro.-1993,29A,3,pt.2.-120A[译自DBA,1993,12(13),93-07430]除 MRC-5之外,可以成动地在微载体珠粒上大规模(由501达10001)连续繁殖人... 934022在微载体上大规模连续继代培养 WI-38和 MRC-5的比较研究[会,英]/Mazur-Melnyk,M.…∥In Vitro.-1993,29A,3,pt.2.-120A[译自DBA,1993,12(13),93-07430]除 MRC-5之外,可以成动地在微载体珠粒上大规模(由501达10001)连续繁殖人二倍体成纤维 展开更多
关键词 载体 融合蛋白 编码区 载体质粒 疫苗株 启动子调控 继代培养 转染 麦芽糖结合蛋白 蛋白免疫
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生物防治
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《生物技术通报》 CAS 1993年第11期68-70,共3页
933194昆虫几丁质酶在杆状病毒基因表达系统中生产的特性[会,英]/Gopalakrishnan,B.…//Absir.Pap.Am.Chem.Soc.-1993,205Meet.Pt.1.-AGR079[译自 DBA,1993,12(11),93-06338]把烟草天蛾编码几丁质酶的 cDNA 中的1.8kbEcoRI 片段克隆... 933194昆虫几丁质酶在杆状病毒基因表达系统中生产的特性[会,英]/Gopalakrishnan,B.…//Absir.Pap.Am.Chem.Soc.-1993,205Meet.Pt.1.-AGR079[译自 DBA,1993,12(11),93-06338]把烟草天蛾编码几丁质酶的 cDNA 中的1.8kbEcoRI 片段克隆到杆状病毒转移载体质粒 pVL 展开更多
关键词 杆状病毒 基因表达系统 烟草天蛾 片段克隆 载体质粒 编码区 几丁质酶 ECORI 细胞培养物 随机组合
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激素和活性多肽
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《生物技术通报》 CAS 1993年第8期40-43,共4页
932626细胞固定化作用和有机溶剂对磺化氧化作用和甾类化合物羟化作用的影响[英]/Holland,H.L.…∥J.Ind.Microbiol.-1992,10(3~4).-195~197[译自 DBA,1993,12(4),93-01986]利用深黄被孢霉 ATCC42613进行2种反应,黄体酮的14-α-羟... 932626细胞固定化作用和有机溶剂对磺化氧化作用和甾类化合物羟化作用的影响[英]/Holland,H.L.…∥J.Ind.Microbiol.-1992,10(3~4).-195~197[译自 DBA,1993,12(4),93-01986]利用深黄被孢霉 ATCC42613进行2种反应,黄体酮的14-α-羟化作用和 thioanisole 的磺化氧化 展开更多
关键词 羟化作用 活性多肽 磺化氧化作用 细胞固定化 甾类化合物 载体质粒 酿酒酵母 金属硫因基因 基因融合 转基因动物
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