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过量表达AtAPX2基因提高水稻抗逆性 预览
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作者 张政 冯国栋 +3 位作者 王洋 王莹莹 唐维 牛向丽 《合肥工业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第4期546-550,共5页
拟南芥抗坏血酸过氧化物酶2(Arabidopsis thaliana ascorbate peroxidase 2,AtAPX2)是APX基因家族成员,在拟南芥逆境胁迫应答中起着重要作用。文章通过AtAPX2基因过表达载体构建、农杆菌介导遗传转化,获得AtAPX2基因水稻过表达植株。对... 拟南芥抗坏血酸过氧化物酶2(Arabidopsis thaliana ascorbate peroxidase 2,AtAPX2)是APX基因家族成员,在拟南芥逆境胁迫应答中起着重要作用。文章通过AtAPX2基因过表达载体构建、农杆菌介导遗传转化,获得AtAPX2基因水稻过表达植株。对过量表达AtAPX2的转基因水稻阳性植株的分析结果显示,其抗过氧化氢能力提高,对高温、盐胁迫耐受能力显著增强,田间植株秕谷率也明显低于野生型。研究结果表明,拟南芥抗坏血酸过氧化物酶基因AtAPX2在水稻中的过量表达,可通过提高清除活性氧能力而用于增强水稻对多种非生物胁迫逆境的耐受能力。 展开更多
关键词 AtAPX2基因 水稻 过量表达 非生物胁迫 过氧化氢
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过量表达盐芥TsIPK2基因增强转基因水稻耐盐性 预览
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作者 潘晓雪 胡明瑜 +4 位作者 蒋晓英 白文钦 官玲 吴红 雷开荣 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期741-747,共7页
【目的】本试验以野生型(WT)和转盐芥TsIPK2基因的水稻为材料,研究NaCl胁迫条件下过量表达TsIPK2基因对水稻植株抗盐胁迫能力的影响。【方法】取水稻材料种子和其3叶龄幼苗,分别在不同NaCl浓度(0、50、100、150、200mmol/L)下进行处理... 【目的】本试验以野生型(WT)和转盐芥TsIPK2基因的水稻为材料,研究NaCl胁迫条件下过量表达TsIPK2基因对水稻植株抗盐胁迫能力的影响。【方法】取水稻材料种子和其3叶龄幼苗,分别在不同NaCl浓度(0、50、100、150、200mmol/L)下进行处理。检测WT与过量表达TsIPK2基因水稻种子的发芽率、主根长和芽长、幼苗的丙二醛(MDA)和脯氨酸的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性,以及与胁迫相关的5个基因的表达。【结果】在盐胁迫下,与野生型相比,转基因水稻具有更好的发芽率、主根长和芽长。野生型和转基因水稻两者的脯氨酸含量增加,转基因水稻的积累量显著高于野生型,但是转基因水稻MDA含量增加幅度小于野生型。野生型和转基因水稻幼苗SOD酶活性均增加,但转基因植株的酶活性显著高于野生型;二者POD酶活性呈现先升高后下降的趋势,但是二者活性没有显著的差别;转基因水稻的CAT活性也呈现先升高后下降的趋势,然而野生型水稻的CAT活性在盐胁迫下没有显著的变化。高盐处理后,野生型和转基因水稻的5个与胁迫相关的基因表达倍数都增加,与野生型相比,转基因水稻的OsP5CS1、OsSOD、OsCATB和OsLEA3的表达量显著升高,而OsPOX1基因的表达量变化不显著。【结论】过量表达TsIPK2基因能够通过增强水稻的渗透调节能力、抗氧化胁迫能力并调节胁迫相关基因的表达,以提高水稻的耐盐性。 展开更多
关键词 盐芥 TsIPK2基因 过量表达 盐胁迫 转基因水稻
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葡萄转录因子VpSBP12的克隆及功能分析
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作者 侯鸿敏 王亚萍 林延翔 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第3期35-43,共9页
以华东葡萄‘白河-35-1’为试材,依据葡萄全基因组数据库(http://www.genoscope.cns.fr),利用同源序列比对结果设计引物,克隆获得VpSBP12基因的DNA和cDNA序列,并分析其序列特征和表达特性,以期阐明其在葡萄抗盐胁迫中的作用,为葡萄抗逆... 以华东葡萄‘白河-35-1’为试材,依据葡萄全基因组数据库(http://www.genoscope.cns.fr),利用同源序列比对结果设计引物,克隆获得VpSBP12基因的DNA和cDNA序列,并分析其序列特征和表达特性,以期阐明其在葡萄抗盐胁迫中的作用,为葡萄抗逆育种提供参考依据。结果表明:VpSBP12基因DNA全长2 907bp,其中含有3个外显子和2个内含子;该基因的完整开放阅读框序列全长1 137bp,编码379个氨基酸,其中包括一个含有双向核定位信号的高度保守SBP结构域。经过亚细胞定位和转录活性分析表明,该基因可以定位到核里,且具有转录激活活性。构建过量表达载体将VpSBP12转化拟南芥后发现,转基因株系在盐胁迫培养基上的萌发率及根长显著高于野生对照。表明VpSBP12基因在拟南芥中的过量表达提高了植株的抗盐胁迫的能力。 展开更多
关键词 SBP基因 盐胁迫 基因克隆 过量表达
苹果MdSBP4基因非生物胁迫功能分析 预览
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作者 王亚萍 郭江山 +3 位作者 沙婷 张玉刚 祝军 侯鸿敏 《青岛农业大学学报:自然科学版》 2019年第1期7-13,共7页
以苹果砧木‘青砧一号’总RNA反转录合成cDNA第一链为模板,克隆得到MdSBP4基因的cDNA序列。序列分析结果表明MdSBP4基因的完整开放阅读框序列全长1473bp,编码491个氨基酸,具有明显的SBP结构域,包含2个锌指结构Zn-1、Zn-2和双向核定位信... 以苹果砧木‘青砧一号’总RNA反转录合成cDNA第一链为模板,克隆得到MdSBP4基因的cDNA序列。序列分析结果表明MdSBP4基因的完整开放阅读框序列全长1473bp,编码491个氨基酸,具有明显的SBP结构域,包含2个锌指结构Zn-1、Zn-2和双向核定位信号区NLS。实时荧光定量分析结果表明,MdSBP4基因在苹果响应非生物逆境胁迫中具有一定功能。构建过量表达载体pCAMBIA2300-35S-MdSBP4,将MdSBP4转化拟南芥后发现,转基因株系在干旱和盐胁迫培养基上的萌发率高于野生对照,推测MdSBP4基因在拟南芥中的过量表达提高了转基因种子的耐胁迫能力。 展开更多
关键词 苹果 SBP 胁迫 基因克隆 过量表达
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水稻OsTZF3基因敲除和过量表达载体的构建与遗传转化 预览
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作者 周淑芬 刘华清 《福建农业科技》 2019年第3期1-5,共5页
为进一步研究水稻OsTZF3基因的生物学功能,利用日本晴基因组的OsTZF3基因序列,构建了OsTZF3的CRISP/Cas9敲除表达载体pKTZF3和过量表达载体pCXUNTZF3;并通过农杆菌介导法导入粳稻日本晴胚性愈伤组织中,分别获得了pKTZF3和pCXUNTZF3转化... 为进一步研究水稻OsTZF3基因的生物学功能,利用日本晴基因组的OsTZF3基因序列,构建了OsTZF3的CRISP/Cas9敲除表达载体pKTZF3和过量表达载体pCXUNTZF3;并通过农杆菌介导法导入粳稻日本晴胚性愈伤组织中,分别获得了pKTZF3和pCXUNTZF3转化再生植株55个和42个克隆;进一步通过PCR法鉴定了35个克隆转pKTZF3植株和10个克隆转pCXUNTZF3植株。 展开更多
关键词 水稻 基因敲除 过量表达 遗传转化 OsTZF3
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GlnA基因对刺糖多孢菌生长发育及多杀菌素合成的影响 预览
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作者 肖洁 刘朱东 +5 位作者 彭胜男 何昊城 穰杰 刘熊 丁学知 夏立秋 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期625-638,共14页
谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Sac... 谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Saccharopolyspora spinosa的生长发育及次级代谢产物合成的影响,从刺糖多孢菌基因组中克隆了gln A基因的部分片段,将其与穿梭载体p OJ260连接,构建敲除载体p OJ260-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌野生菌中,获得刺糖多孢菌敲除菌株S.spinosa-△gln A;同时,利用重叠延伸PCR将gln A基因置于红霉素强启动子Perm E下,并将融合片段Perm E-gln A与穿梭载体p OJ260进行酶切酶连,构建过量表达载体p OJ260-Perm E-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得了刺糖多孢菌过量表达菌株S.spinosa-gln A。表型分析发现,gln A基因的敲除对刺糖多孢菌的菌丝形态、孢子萌发等方面都有显著的抑制作用。HPLC检测分析发现,过量表达菌株中多杀菌素产量相比原始菌株提高到170%;该研究表明gln A基因对刺糖多孢菌的生长发育与多杀菌素的合成有一定的影响,为研究其在链霉菌次级代谢过程中的作用奠定了重要基础。 展开更多
关键词 刺糖多孢菌 多杀菌素 谷氨酰胺合成酶 阻断 过量表达
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过表达毛葡萄PIP2;1基因对转基因拟南芥幼苗生长的影响
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作者 胡景铭 颜培玲 +2 位作者 张文娥 任菲宏 潘学军 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第20期6695-6703,共9页
为明确毛葡萄PIP2;1基因在水分运输中的作用,以期利用该基因提高葡萄的抗旱性,以PIP2;1转基因拟南芥为研究对象,研究PEG-6000模拟干旱胁迫下转基因拟南芥的生长形态与生理指标变化。结果显示,通过双酶切检验表明成功得植物超量表达... 为明确毛葡萄PIP2;1基因在水分运输中的作用,以期利用该基因提高葡萄的抗旱性,以PIP2;1转基因拟南芥为研究对象,研究PEG-6000模拟干旱胁迫下转基因拟南芥的生长形态与生理指标变化。结果显示,通过双酶切检验表明成功得植物超量表达载体pBll21-35S.VhPIP2;1;PCR、RT-PCR和qPCR检测鉴定表明目的基因成功整合到拟南芥基因组中,获得纯合转基因植株。干旱胁迫耐性分析表明,转基因幼苗成活率显著高于野生型幼苗(p〈0.05);幼苗根长大于野生型,约为野生型的1.3倍;地上部水势显著高于野生型幼苗(p〈0.05),是野生型的1.4倍。毛葡萄PIP2;1基因的过量表达增强了拟南芥的抗旱性。毛葡萄VhPIP2;1基因在水分运输中,能够维持细胞水势,防止细胞水分外流,加强细胞的保水力,从而提高植物的抗旱性。 展开更多
关键词 毛葡萄 PIP2 1 拟南芥 PEG-6000 干旱胁迫 过量表达
芒果多胺氧化酶2(MiPAO2)基因克隆表达分析与沉默和过量表达载体的构建
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作者 刘宽亮 赵志常 +4 位作者 高爱平 黄建峰 党志国 罗睿雄 陈业渊 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第14期4638-4647,共10页
本研究以芒果果皮为材料探究多胺(PAs)和多胺氧化酶2(PAO2)对芒果果实抗逆性的作用机理。多胺(PAs)如腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)是无处不在的聚阳离子,在不同的细胞代谢过程具有广泛的功能。多胺氧化酶2(polyamine... 本研究以芒果果皮为材料探究多胺(PAs)和多胺氧化酶2(PAO2)对芒果果实抗逆性的作用机理。多胺(PAs)如腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)是无处不在的聚阳离子,在不同的细胞代谢过程具有广泛的功能。多胺氧化酶2(polyamine oxidase 2,PAO2)是真核生物多胺分解代谢途径中的关键酶。本研究根据转录组测序得到芒果PAO2部分片段信息设计兼并引物,采取3'和5'cDNA末端快速克隆(RACE)的技术方法,分别在三个不同着色芒果品种(红色‘贵妃’品种,黄色‘金煌’品种,绿色‘桂七’品种)中进行PAO2基因全长cDNA序列的扩增,克隆得到了芒果果皮PAO2基因的全长cDNA序列命名为MiPAO2。结果发现三个着色品种cDNA序列只有几个碱基的差异,以红色‘贵妃’品种为例分析可得全长cDNA序列为1 542 bp,开放阅读框为1 209 bp,编码402个氨基酸,分子重量为43.93 kD,等电点为5.60,定位于过氧化物酶体。通过生物软件预测得到了三种三级蛋白结构图。对NCBI上刊载的30种不同植物构建系统发育树发现该基因编码的蛋白与枳的亲缘关系比其他植物物种的亲缘关系近。为深入探究MiPAO2基因在多胺分解代谢过程中的作用,本研究成功构建出MiPAO2-pTRV2基因沉默载体和MiPAO2-pGreen II 62-SK基因过量表达载体,为后续研究MiPAO2基因在芒果果实的抗盐、抗寒以及抗虫过程中的作用机理提供理论依据。 展开更多
关键词 芒果 基因克隆 多胺氧化酶2 基因沉默 过量表达
水稻OsENO2-2基因过表达对水稻抽穗期的影响 预览
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作者 刘小云 李晓 +1 位作者 李腾飞 苏鲁方 《中国水稻科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期12-22,共11页
【目的】OsENO2-2是OsENO2通过可变剪切产生的短转录本,其cDNA序列从粳稻中花11中分离获得。本研究的主要目的是初步分析OsENO2-2在水稻抽穗期调控中的作用。【方法】构建了OsENO2-2的超量表达载体,获得转基因植株,通过对表型的观察和统... 【目的】OsENO2-2是OsENO2通过可变剪切产生的短转录本,其cDNA序列从粳稻中花11中分离获得。本研究的主要目的是初步分析OsENO2-2在水稻抽穗期调控中的作用。【方法】构建了OsENO2-2的超量表达载体,获得转基因植株,通过对表型的观察和统计,分析目的基因在过量表达条件下的功能,并利用反向遗传学方法验证该基因的功能。【结果】OsENO2-2过量表达导致水稻在长日照条件下的抽穗期推迟,而短日照条件下抽穗期无明显变化。通过qRT-PCR方法对水稻开花关键基因的检测发现,在长日照条件下,RFT1的表达量在超表达材料中显著下调,其他开花重要基因表达量在野生型和超表达材料中没有显著变化;而在短日照条件下,所有检测基因的表达量在野生型和超表达材料中均没有显著变化。【结论】在长日照条件下,OsENO2-2主要通过调控RFT1基因的表达来调控水稻抽穗期。 展开更多
关键词 水稻 过量表达 OsENO2-2 烯醇化酶基因 抽穗期
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过量表达RdreB1BI对草莓果实品质及相关基因的影响 预览
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作者 阎依超 万春雁 +3 位作者 古咸彬 郭成宝 陈月红 高志红 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第7期1353-1367,共15页
【目的】研究外源基因Rdre B1BI转入对‘红颊’草莓果实品质及相关基因表达的影响,揭示Rdre B1BI在草莓果实品质调控中的作用及分子机理。【方法】以5个转Rdre B1BI株系及非转基因‘红颊’草莓全红期果实为材料,测定果实纵横径、单果重... 【目的】研究外源基因Rdre B1BI转入对‘红颊’草莓果实品质及相关基因表达的影响,揭示Rdre B1BI在草莓果实品质调控中的作用及分子机理。【方法】以5个转Rdre B1BI株系及非转基因‘红颊’草莓全红期果实为材料,测定果实纵横径、单果重、可溶性糖、可溶性蛋白、抗坏血酸等风味物质及花青苷、总黄酮、总酚等着色物质的含量。应用BLASTn、GENEFINDER和Plant CARE等生物信息学方法分析外源基因和7个次生代谢产物合成途径相关基因(Rdre B1BI、Fractin、Fv C4H、Fv CCR2、Fv GST、Fv F3H、Fv DFR和Fv MYB306)的结构,并预测基因启动子作用元件。采用q RT-PCR定量法检测相关基因表达量,应用7300 system软件和2-△△Ct法分析数据。对生理生化及分子数据进行方差及相关性分析,综合讨论Rdre B1BI的转入对‘红颊’草莓果实品质及相关基因表达的影响。【结果】转基因‘红颊’草莓株系与野生型果实单果重的范围为11.75—15.42 g,纵径和横径的范围分别为35.12—40.42 mm及28.73—32.6 mm,仅株系8果实纵径显著大于株系7,其余指标间差异不显著。其中转基因株系1和7的花青苷含量显著高于野生型;转基因株系1、7及8总黄酮含量显著高于野生型;各转基因株系的总酚含量均显著高于野生型。转基因株系1、7和8果实的可溶性糖含量显著高于野生型(21.70 mg·g-1FW),分别为野生型的2.87、3.39和3.35倍。可溶性固形物含量与可溶性糖含量呈正相关(r=0.811*),但样品果实的可溶性固形物含量间不存在显著性差异。转基因株系草莓成熟果实果肉中氨基酸含量为0.2580—0.3950 g/100 g FW,野生型果实的氨基酸含量为0.5151 g/100 g FW,显著高于各转基因株系草莓果实;转基因株系1和7的可滴定酸含量显著高于野生型;转基因株系1果实的抗坏血酸含量为168.35 mg/100 g FW,显著高于野生型(92.50 mg/100 g FW)。转基因株系9及 展开更多
关键词 草莓 RdreB1BI 过量表达 果实品质 启动子
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过量表达黄烷酮3-羟化酶基因(AaF3H)提高青蒿中青蒿素的含量 预览
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作者 张婷婷 马嘉伟 +3 位作者 王路尧 唐克轩 李杉 赵静雅 《生物技术进展》 2018年第1期55-62,共8页
黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是参与黄酮类化合物合成过程的一个关键酶。为了研究青蒿中F3H对青蒿素的影响,从青蒿中克隆到黄烷酮3-羟化酶基因(AaF3H),全长为1 095 bp,编码364个氨基酸。Southern Blot证实AaF3H基... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是参与黄酮类化合物合成过程的一个关键酶。为了研究青蒿中F3H对青蒿素的影响,从青蒿中克隆到黄烷酮3-羟化酶基因(AaF3H),全长为1 095 bp,编码364个氨基酸。Southern Blot证实AaF3H基因在青蒿基因组中只有1个拷贝。通过构建AaF3H过表达载体并稳定转化青蒿来获得转基因株系,再采用HPLC测定过量表达AaF3H的转基因青蒿植株中的青蒿素含量。结果表明,过表达AaF3H转基因青蒿植株中青蒿素的含量显著升高。通过实时荧光定量PCR分析,在转基因青蒿中,作为青蒿素合成的关键酶,紫穗槐-4,11-二烯合成酶基因(AaADS)、紫穗槐-4,11-二烯氧化酶基因(AaCYP71AV1)和青蒿醛Δ11(13)双键还原酶基因(AaDBR2)的表达量显著提高。研究结果表明过量表达AaF3H基因是提高青蒿中青蒿素含量的有效方法。 展开更多
关键词 青蒿 黄烷酮3-羟化酶 过量表达 青蒿素
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水稻黑条矮缩病毒P7-1基因对水稻的遗传转化及转基因植株的抗病性分析 预览
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作者 袁平平 孙枫 +4 位作者 倪海平 朱佳慧 周益军 蒋选利 徐秋芳 《中国水稻科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期342-348,共7页
【目的】通过在水稻中过量表达水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)P7-1基因,分析RBSDV P7-1是否是导致水稻不育的重要致病因子,并明确过量表达P7-1转基因植株对病毒的抗性。【方法】采用RT-PCR方法从感病植物... 【目的】通过在水稻中过量表达水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)P7-1基因,分析RBSDV P7-1是否是导致水稻不育的重要致病因子,并明确过量表达P7-1转基因植株对病毒的抗性。【方法】采用RT-PCR方法从感病植物中扩增获得RBSDV P7-1基因,构建p CAMBIA-1300-P7-1载体,通过农杆菌转化法获得转基因水稻,观察水稻是否能够正常结实,并采用人工接种病毒方法分析转基因植株的抗性。【结果】过量表达RBSDV P7-1的转基因水稻生长、结实正常。在接种7 d和14 d时转基因植株中病毒积累量显著低于野生型对照,但在28 d时部分转基因株系中病毒积累量高于对照,接种30 d时转基因植株的发病率与对照无明显差异。【结论】在水稻中过量表达RBSDV P7-1不影响水稻的结实;转基因水稻在RBSDV侵染早期可抑制病毒的积累,但在后期对病毒的抗性与对照没有明显差异。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 过量表达 育性 抗性评价
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过量表达甘菊CBF1基因提高拟南芥抗旱耐盐能力 预览 被引量:1
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作者 刘晨旭 刘彧 +2 位作者 刘杰 高越瑶 周蕴薇 《草业科学》 CSCD 2018年第6期1400-1408,共9页
CBF是一类植物特异性、具有多种功能的转录因子。本研究将从甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)中分离的ClCBF1基因构建到植物表达载体pBI121上,并采用农杆菌介导的花序浸染法对拟南芥(Arabidopsis thaliana)进行遗传转化,共获得... CBF是一类植物特异性、具有多种功能的转录因子。本研究将从甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)中分离的ClCBF1基因构建到植物表达载体pBI121上,并采用农杆菌介导的花序浸染法对拟南芥(Arabidopsis thaliana)进行遗传转化,共获得4个转基因株系经过抗性筛选和RT-PCR验证,对其中表达量较高的3个转基因株系进行研究,结果表明:在150mmol·L^-1)甘露醇培养基中转基因拟南芥的种子萌发率和根长平均为野生型的2.0倍和1.2倍,在150mmol·L^-1 NaCl培养基中转基因拟南芥种子萌发率和根长平均为野生型的1.1倍和1.4倍;在干旱和盐胁迫条件下,转基因拟南芥幼苗的成活率高于野生型,并且超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性显著高于野生型(P〈0.05),丙二醛(MDA)含量及相对电导率显著低于野生型植株(P〈0.05)。说明ClCBF1基因在拟南芥受到干旱和盐胁迫过程中发挥一定作用。 展开更多
关键词 转基因 ClCBF1基因 干旱胁迫 盐胁迫 生理指标 过量表达
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沙柳psLAS基因超表达对拟南芥营养生长的影响 预览
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作者 张磊 路东晔 +1 位作者 张国盛 杨海峰 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期197-203,共7页
用沙柳SpsLAS基因构建35S∷SpsLAS超表达载体并转化野生型拟南芥,对转基因拟南芥进行表型观察,利用荧光定量PCR,对分枝、生长素及细胞分裂素相关基因进行表达分析。结果显示:(1)成功构建35S∷SpsLAS超表达载体,并获得9株纯合转基因株系... 用沙柳SpsLAS基因构建35S∷SpsLAS超表达载体并转化野生型拟南芥,对转基因拟南芥进行表型观察,利用荧光定量PCR,对分枝、生长素及细胞分裂素相关基因进行表达分析。结果显示:(1)成功构建35S∷SpsLAS超表达载体,并获得9株纯合转基因株系,且转基因株系的萌芽速率快于野生型(对照),生活周期也较长;其中7个株系表现为生长迅速、株高增加、莲座叶叶片增大、分枝增加,2个株系表现为矮化、分枝增加、育性降低等一系列变化。(2)荧光定量PCR显示,与对照相比24h时转基因株系幼苗生长素及细胞分裂素途径关键基因无明显变化,4d时各基因在各转基因株系呈上调趋势;30d时分枝相关基因RAX1、RAX3表达量均上调,而MAX1、MAX3、REV、AXR1无明显变化。研究表明,SpsLAS基因过表达对拟南芥株型、莲座叶有明显影响,该研究结果为进一步研究该基因对分枝调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 沙柳 SpsLAS基因 过量表达
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番茄胞嘧啶甲基转移酶同源基因SlMET1功能研究 预览
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作者 曹徐绿 唐晓凤 +1 位作者 苗敏 刘永胜 《合肥工业大学学报:自然科学版》 北大核心 2017年第6期829-834,共6页
真核生物中,DNA甲基化作为表观遗传学修饰的重要手段之一,影响了植物的大量生长发育过程。文章通过生物信息学分析确定番茄中的胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMET1)并对其进行进化关系的分析;利用聚合酶链式反应(polymerase chain r... 真核生物中,DNA甲基化作为表观遗传学修饰的重要手段之一,影响了植物的大量生长发育过程。文章通过生物信息学分析确定番茄中的胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMET1)并对其进行进化关系的分析;利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从番茄cDNA中扩增出胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMETl)全长,构建SlMET1与绿色荧光蛋白融合表达载体,通过在烟草瞬时表达系统,对其进行亚细胞定位;实时定量PCR分析SlMET1基因在番茄不同组织中的表达模式;同时,构建SlMET1与HA标签蛋白融合表达载体,通过免疫共沉淀分析其与DDBl的相互关系。研究结果表明:SIMETl基因在番茄各个时期和组织中都有表达,其中,叶片和花中表达量较高,在果实的变色期和红果时期表达量较低;通过绿色荧光融合蛋白载体的表达,确定SIMETl基因只在番茄细胞核中表达;通过免疫共沉淀分析确定S1METl和DDBl之间存在相互作用。该研究为研究DDBl以表观遗传学的方式调控植物生长发育过程奠定了理论基础。 展开更多
关键词 SlMET1基因 过量表达 转基因番茄 聚合酶链式反应(PCR) 亚细胞定位 免疫共沉淀
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杨树GRFI/2d负调控不定根的发生和发育 预览 被引量:2
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作者 凰厚君 魏凯莉 +3 位作者 江成 赵岩秋 宋学勤 卢盂柱 《林业科学》 EI CSCD 北大核心 2017年第3期33-39,共7页
【目的】生长调节因子(GRFs)是一类植物特有的转录因子,调控植物生长发育的多个生物学过程。研究杨树组织和器官发育中GRFs的作用,尤其是对不定根形成的调控,不仅可以丰富根发育的理论,而且对于杨树的扦插繁殖具有实际应用价值。... 【目的】生长调节因子(GRFs)是一类植物特有的转录因子,调控植物生长发育的多个生物学过程。研究杨树组织和器官发育中GRFs的作用,尤其是对不定根形成的调控,不仅可以丰富根发育的理论,而且对于杨树的扦插繁殖具有实际应用价值。【方法】从银腺杨84K中分离了PtGRFl/2d基因和其启动子,通过对其miR396靶位点核苷酸进行同义突变,获得不受miR396调控的突变形式的mPtGRFl/2d,并将启动子和该突变形式分别构建至含有GUS报告基因的植物表达载体和过量表达载体,通过遗传转化分别获得PptGRF1/2d::GUS启动子驱动GUS转基因杨树和mPtGRFl/2d过表达转基因杨树。通过GUS染色分析PtGRFl/2d杨树启动子的表达特性,并对过表达mPtGRFl/2d杨树不定根的发生时间、数目和长度进行统计,利用qRT-PCR分析不定根发育早期相关转录因子的表达。【结果】PtGRFl/2d主要在根的中柱鞘和根尖位置表达,说明其参与了根的形成;过量表达mPtGRFl/2d基因影响了杨树不定根的发生、发育,导致了不定根发生延迟、数目和长度均减少,且差异均达到显著水平或极显著水平,表明PtGRFl/2d对不定根的发生和发育具有负调控作用。qRT-PCR分析显示,过表达mPtGRFl/2d杨树的不定根发育相关基因PtSCR,PtAIL9,PtBBM2,PtPLTl.2和PtWOXllb的表达量均被下调,表明PtGRFl/2d的过量表达抑制了根原基发生和不定根发育相关的关键调控因子的表达,影响了根原基的发生和不定根的形成,导致不定根数目和长度的变化,最终影响了杨树的生长。【结论】PtGRFl/2d作为不定根形成的负调控因子,位于不定根调控途径的上游,通过下调促进不定根形成的相关转录因子的表达来抑制根原基形成和不定根发育,导致不定根发生延迟、数目和长度减少。 展开更多
关键词 PtGRFl/2d 银腺杨84K 过量表达 不定根 负调控
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小桐子中一个新的ERF家族转录因子JcERF3基因的克隆及功能分析
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作者 王莎莎 赵洪春 +1 位作者 邓凤飞 龚明 《植物生理学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1399-1408,共10页
从小桐子(Jatropha curcas)幼苗的叶片组织中分离出一个新的AP2/ERF类转录因子的编码基因,命名为JcERF3。序列分析显示其完整编码区为729 bp,编码蛋白由242个氨基酸组成。推测的蛋白质与其他物种的ERF3蛋白具有很高的序列相似性,并含... 从小桐子(Jatropha curcas)幼苗的叶片组织中分离出一个新的AP2/ERF类转录因子的编码基因,命名为JcERF3。序列分析显示其完整编码区为729 bp,编码蛋白由242个氨基酸组成。推测的蛋白质与其他物种的ERF3蛋白具有很高的序列相似性,并含有一个保守的AP2结构域。对启动子元件的预测显示存在一个乙烯响应元件(ERE),暗示JcERF3的表达可能受到乙烯的调节。核定位信号预测JcERF3可能定位于细胞核。过表达JcERF3的转基因烟草(Nicotiana tabacum)离体叶盘在200 mmol·L^-1 NaCl溶液中的失绿程度显著低于野生型。经0°C低温胁迫24 h后,转基因株系中游离脯氨酸和可溶性糖含量为野生型的3.79和1.67倍以上,而电解质渗漏率仅为野生型的74%左右。12°C低温下转基因株系T1代种子的萌发速度和萌发率也远高于野生型。综上可知,JcERF3作为一个新的AP2/ERF转录因子,其过表达赋予转基因烟草对低温和盐胁迫较强的耐受性,为小桐子的抗逆遗传改良提供了重要的基因资源。 展开更多
关键词 小桐子 转录因子ERF 过量表达 低温胁迫 盐胁迫
过量表达菠菜SoCYP85A1基因增强烟草的耐盐性 被引量:1
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作者 鲁雪莉 段方猛 +2 位作者 万芳源 李宝笃 宋雯雯 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期454-460,共7页
本研究以转菠菜SoCYP85A1基因稳定表达的烟草植株为试验材料,检测了其耐盐性。利用NaCl模拟盐胁迫处理野生型和转基因烟草,结果表明:在高盐胁迫下,转基因烟草种子的发芽率显著高于野生型;二者的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(PO... 本研究以转菠菜SoCYP85A1基因稳定表达的烟草植株为试验材料,检测了其耐盐性。利用NaCl模拟盐胁迫处理野生型和转基因烟草,结果表明:在高盐胁迫下,转基因烟草种子的发芽率显著高于野生型;二者的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均增强,转基因植株的酶活性显著高于野生型;二者的脯氨酸(Pro)含量升高,并且转基因烟草积累量显著高于野生型,而转基因植株的丙二醛(MDA)含量增幅小于野生型;高盐处理后,野生型和转基因烟草的9个胁迫相关的基因表达倍数都增加,同野生型相比,转基因烟草的NtADC1、NtAPX、NtCAT、NtLEA5、NtGST、NtSOD和NtERD10C的表达量显著升高,而NtNCED1和Nt SAMDC基因的表达量变化不显著。本研究结果证实了过量表达SoCYP85A1基因能够通过增强烟草的抗氧化胁迫能力和调节胁迫相关基因的表达来提高烟草的耐盐性,为进一步阐明菠菜SoCYP85A1基因的耐盐机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 菠菜SoCYP85A1基因 高盐胁迫 过量表达 荧光定量PCR
LRR-RLKs亚家族基因RLK6在拟南芥开花过程中的作用 预览 被引量:1
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作者 杨敏 韩玉珍 +1 位作者 阿依江·哈拜克 王翠玲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期654-662,共9页
为研究LRR-RLKs亚家族基因RLK6(AT2G26730)在拟南芥生长发育过程中的作用,本研究构建了植物过表达载体p Super1300-RLK6,获得5个过表达突变体,其中2个独立株系(OE8,OE9)用于表型分析。通过对野生型(WT)、RLK6基因缺失突变体(rlk... 为研究LRR-RLKs亚家族基因RLK6(AT2G26730)在拟南芥生长发育过程中的作用,本研究构建了植物过表达载体p Super1300-RLK6,获得5个过表达突变体,其中2个独立株系(OE8,OE9)用于表型分析。通过对野生型(WT)、RLK6基因缺失突变体(rlk6-2、rlk6-3和rlk6-6)、过表达株系OE8和OE9生长发育过程的详细观察和分析发现,RLK6基因缺失突变体在整个生长发育过程中的表型与WT差异不明显,而过表达株系OE8和OE9比WT开花早。此外,利用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各基因型植株中开花相关基因的表达情况,结果表明,相对于WT,OE8和OE9中的开花促进基因CO、SOC1和LFY的表达量显著升高,而开花抑制基因FLC的表达量显著下降。研究结果说明RLK6过表达促进了拟南芥的开花,这为后续深入研究RLK6的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 拟南芥 LRR-RLKs 过量表达 开花
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水稻顺式还原酮加双氧酶基因的表达及功能分析 预览
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作者 熊炜 杨波 +6 位作者 刘薇茵 王荃 孔晓聪 靳亚军 梁闪闪 栾维江 张泗举 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第12期2199-2208,共10页
【目的】农作物对逆境胁迫的耐受能力与产量息息相关,是作物育种要考虑的重要因素。文中对水稻顺式还原酮加双氧酶基因Os ARD1进行研究,分析其表达模式,明确其在水稻应对非生物胁迫中的功能,为水稻耐旱品种的分子设计及育种提供参考依... 【目的】农作物对逆境胁迫的耐受能力与产量息息相关,是作物育种要考虑的重要因素。文中对水稻顺式还原酮加双氧酶基因Os ARD1进行研究,分析其表达模式,明确其在水稻应对非生物胁迫中的功能,为水稻耐旱品种的分子设计及育种提供参考依据。【方法】提取不同组织器官的总RNA,利用RT-PCR方法分析Os ARD1表达的组织特异性。利用不同的非生物胁迫处理14 d大小的野生型(中花11)植株,在不同时间点提取总RNA,利用RT-PCR方法分析Os ARD1表达的受诱导情况。通过农杆菌遗传转化法转化水稻愈伤组织,经过一系列分子检测后获得稳定遗传的T1代Os ARD1的过量表达转基因植株,以转入空载体的野生型植株作为对照。将在营养液中正常培养的12 d大小的野生型和过表达幼苗移出营养液进行缺水处理并进行恢复试验。将催芽后的野生型和过表达转基因植株种子种在含有5%PEG6000的agar培养基中进行渗透胁迫处理,以不含PEG6000的agar培养基作为对照,观察二者的表型。【结果】组织特异性表达分析表明Os ARD1主要在根及成熟的组织中表达,尤其在衰老的组织中有较高表达。非生物胁迫处理表明Os ARD1的表达明显受机械损伤、高盐和渗透胁迫的诱导。获得6个独立株系的可稳定遗传的Os ARD1过量表达转基因植株。对过量表达转基因植株及空载体野生型对照进行干旱胁迫处理,缺水处理5 h后,野生型植株叶片卷曲皱缩成针状表现出严重的缺水症状,但此时过表达转基因植株叶片仍处于舒展状态;缺水处理8 h后开始复水培养3 d,野生型植株的存活率仅为10%,而过表达植株存活率为80%,远远高于野生型,说明过量表达Os ARD1提高了水稻对缺水的耐受能力。用PEG渗透胁迫模拟干旱胁迫处理6 d后发现,不含PEG6000对照组中野生型和过表达植株的幼苗生长情况没有明显的差别;在PEG处理组中,野生型� 展开更多
关键词 水稻 OS ARD1 过量表达 干旱胁迫 乙烯
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