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ME 49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性 预览
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作者 陆瑶瑶 苏瑞景 +2 位作者 董辉 王梦瑶 杨玉荣 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第19期3800-3806,共7页
【目的】通过ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性的研究,了解该虫株速殖子的毒力特点,为深入研究弓形虫弱毒株的致病特征提供研究基础。【方法】以ME 49株弓形虫速殖子为研究对象,用血球计数板将速殖子梯度浓度稀释为<10^0,10^0-10^6个... 【目的】通过ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性的研究,了解该虫株速殖子的毒力特点,为深入研究弓形虫弱毒株的致病特征提供研究基础。【方法】以ME 49株弓形虫速殖子为研究对象,用血球计数板将速殖子梯度浓度稀释为<10^0,10^0-10^6个/mL,腹腔注射昆明小鼠,死亡小鼠的组织直接涂片检测肺脏及肠系膜淋巴结速殖子或大脑组织中弓形虫包囊数量,肺脏常规石蜡切片进行H.E及IHC染色,统计涂片和MAT方法的结果分析弓形虫的感染情况,并统计小鼠的感染率和生存率。【结果】0-60 DPI,死亡小鼠组织涂片显微镜检查和MAT法检测小鼠血清中弓形虫IgG抗体结果显示,<10^0、10^0、10^1及≥10^2速殖子浓度组小鼠的弓形虫感染率分别为0、20%、60%及100%。104速殖子浓度组小鼠有3只分别在12、16、19 DPI死亡;105速殖子浓度组小鼠有2只在11 DPI死亡,1只在8 DPI死亡;10^6速殖子浓度组小鼠有2只在9 DPI死亡,在7、8、10 DPI各死亡1只,感染弓形虫的小鼠生存率为62.07%(18/29)。对死亡小鼠的肺脏和肠系膜淋巴结直接涂片,显微镜镜检可见弓形虫速殖子;H.E及IHC染色,肺脏可以观察到弓形虫包囊及弓形虫抗原。对<10^0、10^0、10^1及10^2处死小鼠的大脑组织研磨镜检,结果显示<100和100感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数均为0;10^1感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数分别为60、10^0和0;10^2感染组阳性小鼠大脑中弓形虫包囊数量分别为20、40、40、60和0。60-600 DPI,10^3速殖子浓度组小鼠在184、435和569 DPI各有1只死亡,大脑中未检测到弓形虫包囊;10^5速殖子浓度组小鼠1只在188 DPI死亡,大脑包囊数量为20,其余小鼠存活时间为590 DPI。【结论】本研究探讨了ME 49株弓形虫速殖子对昆明小鼠的致病性,≥10^2速殖子浓度可引起小鼠100%感染,10^6速殖子浓度可引起小鼠100%死亡,小鼠死亡的时间为7-19 DPI,感染小鼠生存率为62.07%(18/ 展开更多
关键词 弓形虫 ME 49虫株 昆明小鼠 致病性
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绵羊弓形虫TgSheepHn1对小鼠的病理损伤及其抗原分布特点 预览
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作者 陆瑶瑶 翟少华 +3 位作者 祝子伏 董辉 王梦瑶 杨玉荣 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期519-523,共5页
目的为了探究绵羊弓形虫分离株ToxoDB#9(TgSheepHn1)感染Swiss小鼠后,弓形虫在各脏器的分布及病理组织学损伤特点。方法选取104浓度的弓形虫速殖子腹腔接种小鼠,采用H&E及IHC方法分析小鼠各脏器中弓形虫抗原的分布以及病理损伤特点... 目的为了探究绵羊弓形虫分离株ToxoDB#9(TgSheepHn1)感染Swiss小鼠后,弓形虫在各脏器的分布及病理组织学损伤特点。方法选取104浓度的弓形虫速殖子腹腔接种小鼠,采用H&E及IHC方法分析小鼠各脏器中弓形虫抗原的分布以及病理损伤特点。结果昆明小鼠在急性感染期病理损伤主要表现在肺脏、肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结及小肠,其他脏器损伤较轻或无明显损伤;弓形虫抗原在脾脏,肠系膜淋巴结,肾上腺,肝脏胆囊管肌层,生殖器官分布较多,大脑,心肌,肺脏,肾脏,膀胱及小肠也可观察到弓形虫抗原的分布。结论 TgSheepHn1对昆明小鼠的免疫及消化系统损伤较重,抗原分布广泛,免疫及生殖系统是该虫株的主要靶器官。 展开更多
关键词 弓形虫 绵羊 分离株 抗原分布 组织损伤
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河南省部分地区奶牛弓形虫病血清学调查 预览 被引量:4
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作者 陈益 皇甫和平 +8 位作者 石冬梅 宋予震 王岩 朱志超 许文博 史静柯 李聪聪 潘昊纯 王林康 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第8期45-46,共2页
弓形虫病是由龚地弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病,猫、犬、牛、羊、猪等动物均可感染。奶牛感染弓形虫后急性型表现为体温升高,呼吸困难,体表淋巴结肿大,重者可致死亡。弓形虫感染阶段及传播途径多,其速殖子可通过胎盘在胎儿脑部形... 弓形虫病是由龚地弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病,猫、犬、牛、羊、猪等动物均可感染。奶牛感染弓形虫后急性型表现为体温升高,呼吸困难,体表淋巴结肿大,重者可致死亡。弓形虫感染阶段及传播途径多,其速殖子可通过胎盘在胎儿脑部形成包囊,导致死胎或流产。 展开更多
关键词 奶牛 弓形虫病 弓形虫感染 血清学调查 龚地弓形虫 淋巴结肿大 胎盘 死胎 传播途径
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米诺环素体外抑制弓形虫增殖作用的研究 预览
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作者 赵莹 杨晓燕 +1 位作者 陈顺仪 廖利银 《海南医学》 CAS 2017年第7期1036-1038,共3页
目的评价米诺环素(MNC)体外抑制弓形虫速殖子的增殖作用。方法体外在96孔板中用Hela细胞培养弓形虫速殖子,设置SMX给药组、MNC给药组和未给药组。观察各组弓形虫速殖子的增殖情况、形态变化,并对各组进行活虫计数。结果给药后72 h,与... 目的评价米诺环素(MNC)体外抑制弓形虫速殖子的增殖作用。方法体外在96孔板中用Hela细胞培养弓形虫速殖子,设置SMX给药组、MNC给药组和未给药组。观察各组弓形虫速殖子的增殖情况、形态变化,并对各组进行活虫计数。结果给药后72 h,与未给药组比较,SMX给药组活虫计数显著减少[(2.08±0.40)vs(15.17±2.07),P〈0.01],MNC给药组活虫数亦显著减少[(1.42±0.20)vs(15.17±2.07),P〈0.01];给药后96 h,与未给药组相比,SMX给药组活虫计数显著减少[(1.42±0.20)vs(10.92±0.47),P〈0.01],MNC给药组活虫数亦显著减少[(1.92±0.33)vs(10.92±0.47),P〈0.01],差异均有统计学意义;给药后120 h,各组活虫计数比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 MNC在体外能够明显抑制弓形虫速殖子的增殖。 展开更多
关键词 体外 弓形虫 米诺环素
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金丝桃素体外抗刚地弓形虫速殖子效果的观察 被引量:2
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作者 杨小迪 孙希萌 +13 位作者 王旗 崔洁 计永胜 薛洪宝 胡守锋 苏胖胖 李江艳 孟令文 乔继琛 丁忆晗 宋迪 吴琦 方强 陈兴智 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期203-207,共5页
目的 观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。 方法 将生理盐水(A组)和终浓度为5 μg/ml(B组)、50 μg/ml(C组)、500 μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含... 目的 观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。 方法 将生理盐水(A组)和终浓度为5 μg/ml(B组)、50 μg/ml(C组)、500 μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×10^6个/孔的24孔培养板中,于2、4、6 h后收集虫体,台盼蓝染色检测速殖子着色率,吉氏染色观察速殖子形态和结构变化,透射电镜观察速殖子超微结构的变化,流式细胞仪检测相同处理的携带黄色荧光蛋白的弓形虫的存活情况。 结果 弓形虫速殖子经不同浓度金丝桃素作用2 h后,B组、C组和D组虫体的台盼蓝着色率分别为(11.0±3.6)%、(25.0±6.3)%和(40.0±2.7)%,D组着色率高于C组和B组(P〈0.01),3组均高于A组(6.0±3.0)%,但B组和A组间差异无统计学意义(P〉0.05)。作用4 h后,D组着色率为(97.0±2.0)%,高于C组(30.0±7.2)%、B组(20. 0±3.0)%和A组(10.0±1.0)%(P〈0.01);作用6 h后,D组着色率为(98.0±1.7)%,亦高于C组(42.7±5.5)%、B组(34.0±6.6)%和A组(19.3±4.9)%,两两比较,各组间差异均有统计学意义(P〈0.01)。吉氏染色观察发现,随时间的延长和剂量的增高,虫体两端逐渐变圆、肿胀、坏死。透射电镜观察结果显示,随金丝桃素作用时间延长,虫体逐渐肿胀,胞膜与基质间出现明显空隙,虫体内空泡增多、变大,胞膜破裂,内部结构溶解。流式细胞仪检测结果表明,弓形虫速殖子存活率在金丝桃素作用后的各时间段内与对照组间差异有统计学意义(P〈0.01);金丝桃素作用2 h后,D组无弓形虫存活,C组弓形虫存活率为(7.9±1.9)%,低于B组(38.1±5.5)%和A组(81.8±6.0)%(P〈0.01);作用4 h后,C组无弓形虫存活;B组在作用4 h和6 h后,弓形虫存活率分别为(14.3±7.9)%和(1.4±1.8)%,均低于A组 展开更多
关键词 金丝桃素 刚地弓形虫 体外 效果
槐果碱的体外抗弓形虫作用 被引量:2
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作者 张晓川 张昌浩 +2 位作者 金莉莉 李婧美 金春梅 《延边大学医学学报》 CAS 2015年第4期280-282,共3页
[目的]评估槐果碱的体外抗弓形虫作用.[方法]采用CCK-8法测定槐果碱对HeLa细胞的毒性和对弓形虫选择性作用的效果,光学显微镜下观察细胞形态变化,应用台盼蓝拒染法检测活细胞百分比.[结果]槐果碱浓度为500μmol/L时,对HeLa细胞有明显的... [目的]评估槐果碱的体外抗弓形虫作用.[方法]采用CCK-8法测定槐果碱对HeLa细胞的毒性和对弓形虫选择性作用的效果,光学显微镜下观察细胞形态变化,应用台盼蓝拒染法检测活细胞百分比.[结果]槐果碱浓度为500μmol/L时,对HeLa细胞有明显的抑制作用;槐果碱体外抗弓形虫作用的选择性指数为0.96,效果低于乙胺嘧啶(1.77),但优于螺旋霉素(0.73);给予200μmol/L槐果碱治疗24 h后,HeLa细胞破损程度明显降低,细胞内外速殖子数量显著减少,且在10~200μmol/L浓度范围内时活细胞比例随给药浓度的增加而明显上升.[结论]槐果碱在体外表现出良好的抗弓形虫活性,且对弓形虫感染的HeLa细胞具有一定程度的保护作用. 展开更多
关键词 槐果碱 弓形虫 体外
氟康唑抗弓形虫速殖子作用的超微结构观察
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作者 吴升伟 王正蓉 包怀恩 《黑龙江畜牧兽医:下半月》 CAS 北大核心 2015年第8期73-75,共3页
为探讨氟康唑在体外杀灭弓形虫速殖子的效果,抽取感染弓形虫RH株速殖子小鼠腹水,选择活跃的速殖子并稀释至含虫密度为1×105个/m L,加入氟康唑溶液使其终浓度为1.5 mg/m L,以未加药物的相同腹水作阴性对照,加入阿奇霉素的作为阳性... 为探讨氟康唑在体外杀灭弓形虫速殖子的效果,抽取感染弓形虫RH株速殖子小鼠腹水,选择活跃的速殖子并稀释至含虫密度为1×105个/m L,加入氟康唑溶液使其终浓度为1.5 mg/m L,以未加药物的相同腹水作阴性对照,加入阿奇霉素的作为阳性对照。应用透射电镜观察药物作用1小时、4小时时虫体超微结构的变化并拍照。结果表明:随着氟康唑作用时间的延长,弓形虫速殖子超微结构逐渐遭到破坏,细胞内容物外溢,最终崩解死亡。相同时间内阿奇霉素作用的速殖子出现细胞膜结构受损,速殖子从头、尾两端开始断裂。说明氟康唑在体外可以杀死弓形虫速殖子,达到了和阿奇霉素一样的效果,且效果与时间有关。 展开更多
关键词 弓形虫 氟康唑 体外杀灭 超微结构
刚地弓形虫速殖子表面抗原的研究及应用 被引量:1
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作者 冷丽 罗米 +1 位作者 高菊 申丽洁 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2014年第6期687-689,共3页
弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,能感染包括人在内的所有温血动物。近年来弓形虫速殖子表面抗原已成为候选的诊断和疫苗抗原,主要包括P30、P22、P43、P35和P23等,本文就此做一综述。
关键词 刚地弓形虫 表面抗原
应用免疫磁珠分离法纯化弓形虫速殖子的研究 预览 被引量:1
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作者 楼研 沈继龙 +4 位作者 程维晟 刘芳 陈鹤 罗庆礼 王林 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第1期9-13,共5页
目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子... 目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗原,免疫家兔,获得兔抗弓形虫多克隆IgG抗体。用抗体包被的免疫磁珠对小鼠腹腔液内弓形虫速殖子进行纯化,比较其纯度、回收率、虫体活力、毒力与感染性。结果用免疫磁珠分离技术纯化弓形虫速殖子后,其纯度提高到98.2%,细胞清除率为96%,虫体回收率为73.5%;用内盐法(MTS)细胞增殖与毒性检测试剂盒检测分离后的速殖子活性为95.6%。定量分组感染小鼠后死亡时间无显著性差异。结论免疫磁珠分离的速殖子纯度、细胞清除率和虫体回收率较高,能有效去除宿主细胞,且对速殖子的活性和毒力无影响。该法操作简便快速,无需昂贵的仪器设备,具有较大的实用价值。 展开更多
关键词 弓形虫 纯化 免疫磁珠分离
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新孢子虫速殖子在HCT-8、Vero和Hela细胞中培养的比较 被引量:2
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作者 边征征 吕强 +4 位作者 宫鹏涛 常乐 邢沈阳 张西臣 李建华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第8期721-723,726共4页
目的观察和比较新孢子虫速殖子在人结肠癌细胞(HCT-8)、人宫颈癌细胞(Hela)和非洲绿猿肾细胞(Vero)中的生长情况。方法分别用HCT-8、Hela和Vero细胞(RPMI-1640培养基)连续培养新孢子虫速殖子9d,观察并计数速殖子数量,绘制生长曲... 目的观察和比较新孢子虫速殖子在人结肠癌细胞(HCT-8)、人宫颈癌细胞(Hela)和非洲绿猿肾细胞(Vero)中的生长情况。方法分别用HCT-8、Hela和Vero细胞(RPMI-1640培养基)连续培养新孢子虫速殖子9d,观察并计数速殖子数量,绘制生长曲线;4d取培养物作吖啶噔染色,用激光共聚焦显微镜观察速殖子。结果新孢子虫速殖子用HCT-8、Vero和Hela细胞培养均生长,尤以在HCT-8和Vero细胞中生长较快,第6d虫体数达到高峰,且在HCT-8中高峰期可持续2d,在Vero中生长高峰可持续1d。在Hela细胞中速殖子生长较慢,虫体数量一直处于较低水平。吖啶噔染色观察,HCT-8和Vero细胞中纳虫泡较大且速殖子数量较多,Hela细胞内纳虫泡较小且速殖子数量较少。结论新孢子虫速殖子在HCT-8细胞中生长较快,纳虫泡较大且速殖子数量较多。HCT-8细胞可以替代Vero细胞用于速殖子的体外培养。 展开更多
关键词 新孢 HCT-8 体外培养
人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞体外培养弓形虫速殖子
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作者 兰兰 吴翡斐 梁韶晖 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2014年第4期227-229,233共4页
目的 比较弓形虫RH株速殖子在人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞内的增殖情况. 方法 按照弓形虫速殖子∶细胞为1∶1的比例将弓形虫RH株速殖子分别与人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞共培养0、6、12、24、48 h后,于显微镜下观察细胞内虫体增殖情... 目的 比较弓形虫RH株速殖子在人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞内的增殖情况. 方法 按照弓形虫速殖子∶细胞为1∶1的比例将弓形虫RH株速殖子分别与人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞共培养0、6、12、24、48 h后,于显微镜下观察细胞内虫体增殖情况.在两种细胞培养瓶中分别接种弓形虫RH速殖子,连续传代,每隔10代取弓形虫速殖子,将其密度调整为1×10^7个/ml,0.3 ml/只,腹腔接种ICR健康小鼠,记录小鼠存活时间. 结果 在相同条件下弓形虫速殖子侵入人巨噬细胞的时间早于侵入人包皮成纤维细胞的时间;共培养48 h时,绝大部分弓形虫速殖子胀破细胞,游离在细胞外.在两种细胞培养瓶中分别接种3×106弓形虫RH速殖子,约72 h后均可获得大量游离的弓形虫速殖子,2~3d传1代.人巨噬细胞内连续传代约30次,每代可获得(1×10^7~4×10^7)个速殖子,约增殖3~13倍;人包皮成纤维细胞中连续传代30次,每代可获得(1×10^7~3×10^7)个速殖子,约增殖3~10倍.弓形虫速殖子传代次数为10、20和30代时,人巨噬细胞内传代的弓形虫速殖子接种小鼠的存活时间分别为(4.3±0.5)、(4.0±0.8)、(4.3±1.2)d,人包皮成纤维细胞内传代的弓形虫速殖子接种小鼠的存活时间分别为(4.0±0.0)、(3.7±0.9)、(4.3±0.5)d,各代之间差异无统计学意义(P>0.05),弓形虫速殖子毒力未见明显改变. 结论 弓形虫RH株速殖子可在人巨噬细胞和人包皮成纤维细胞内增殖并长期稳定传代. 展开更多
关键词 弓形虫 人巨噬细胞 人包皮成纤维细胞 体外培养
二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外抗弓形虫速殖子的实验研究 预览 被引量:2
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作者 陈兴智 杨雯 +4 位作者 杨小迪 王旗 夏惠 刘刚 沈继龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期692-696,共5页
目的 观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法 将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物])浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05 μg/mL(B组)、0.5 μg/mL... 目的 观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法 将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物])浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05 μg/mL(B组)、0.5 μg/mL(C组)、5.00 μg/mL(D组),分别加入到含弓形虫速殖子(含虫体4×106个/mL)的24孔培养板中,于1 h、2 h、4 h后收集弓形虫速殖子,以Trypan blue染色法检测弓形虫着色率;C组和A组以MTT法检测弓形虫活性,Giemsa染色法观察虫体形态和结构变化,透射电镜观察弓形虫速殖子超微结构。结果 不同浓度(0.05 μg/mL、0.5 μg/mL、5.00 μg/mL)弓形虫经二(喹唑啉-4-基)二硒醚作用1 h后的着色率分别为5.00%、26.70%和99.50%,作用2 h后的着色率分别为22.00%、98.70%,100.00%,作用4 h后的着色率分别为58.30%、100.00%和100.00%;生理盐水组1 h、2 h、4 h后的着色率分别为1.0%、1.20%和1.70%。0.5 μg/mL浓度药物组,MTT检测弓形虫活性, OD值随时间延长增长率明显低于生理盐水对照组(P〈0.05);Giemsa染色观察,弓形虫速殖子随着时间的延长,逐渐出现肿胀,两端变圆,虫体坏死现象;透射电镜观察随着时间延长,逐渐出现虫体肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,越来越多和大的空泡形成,胞膜出现断裂,内部结构溶解模糊。结论 二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外可部分或全部杀死弓形虫,效果与时间、剂量相关。 展开更多
关键词 二(喹唑啉-4-基)二硒醚 刚地弓形虫 体外
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弓形虫感染动物模型的建立及其特异性IgG抗体的研究 预览 被引量:2
13
作者 李林杰 包怀恩 《检验医学与临床》 CAS 2012年第5期 513-514,516,共3页
目的通过弓形虫RH株速殖子不同途径、不同剂量攻击BALB/c小鼠和sD大鼠,以获得有效的特异性IgG抗体,为建立体液免疫应答的动物模型提供一定的实验依据。方法将实验动物分成速殖子1×10。个腹腔注射sD大鼠组、不同剂量速殖子腹腔注... 目的通过弓形虫RH株速殖子不同途径、不同剂量攻击BALB/c小鼠和sD大鼠,以获得有效的特异性IgG抗体,为建立体液免疫应答的动物模型提供一定的实验依据。方法将实验动物分成速殖子1×10。个腹腔注射sD大鼠组、不同剂量速殖子腹腔注射BALB/c小鼠组和速殖子4×10。个灌胃BALB/c小鼠组。每组在不同的时间取血查IgG抗体,各组均设对照鼠。结果腹腔注射SD大鼠组的实验鼠未出现发病征象;其血清IgG抗体含量逐渐上升,其抗体水平明显高于对照鼠(P〈0.01)。腹腔注射BALB/c小鼠组的实验鼠存活不超过8d;灌胃BALB/c小鼠组到第9天时实验鼠有4%死亡,其余均可存活至28d。且这两组实验鼠和对照鼠的IgG抗体水平差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论BALB/c小鼠经口或经腹腔感染弓形虫RH株速殖子均未产生特异性IgG抗体,SD大鼠经腹腔感染可产生特异性IgG抗体。SD大鼠适于建立体液免疫应答的动物模型。 展开更多
关键词 弓形虫 BALB/C小鼠 SD大鼠 IGG抗体
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刚地弓形虫速殖子分离纯化方法的优化 被引量:1
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作者 王洁琳 贾博寅 +2 位作者 王心蕊 姜宁 陈启军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 467-472,共6页
为减少弓形虫假包囊和宿主细胞对试验的干扰,对弓形虫的速殖子进行了分离纯化。将弓形虫RH株虫体复苏后,接种于小鼠腹腔进行培养,72h后收集腹液,腹液经27G注射器针头抽吸后进行不同组合的非连续密度梯度(1.031×106 mg/L、1.056... 为减少弓形虫假包囊和宿主细胞对试验的干扰,对弓形虫的速殖子进行了分离纯化。将弓形虫RH株虫体复苏后,接种于小鼠腹腔进行培养,72h后收集腹液,腹液经27G注射器针头抽吸后进行不同组合的非连续密度梯度(1.031×106 mg/L、1.056×106 mg/L、1.077×106 mg/L、1.123×106 mg/L Percoll)离心纯化。通过显微镜观察以及细胞计数等方法比较各组合的纯化效果。结果显示,经注射器针头帮助假包囊破裂后,使用非连续密度梯度离心,以密度为1.056×106 mg/L、1.077×106 mg/L Percoll不连续梯度3 000r/min离心30min,可以将速殖子和假包囊进行较高纯度的分离纯化。本研究为纯化高纯度的弓形虫速殖子提供了一种方法。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 假包囊 分离纯化
磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子抑制消减文库的构建和初步分析 预览 被引量:1
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作者 曾艳波 黄兵 +8 位作者 董辉 姜连连 赵其平 朱顺海 马卫娇 程军 李婷 孔春林 韩红玉 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第3期44-49,共6页
为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库。将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10 000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子。用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶... 为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库。将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10 000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子。用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶液和PBS分别浸泡速殖子,37℃恒温箱孵育2 h,分别提取虫体的总RNA和mRNA,以PBS处理的正常虫体cDNA为驱动组,以药物处理虫体cDNA为实验组,构建药物处理前后弓形虫速殖子的抑制性消减文库,对部分阳性克隆进行测序和序列分析。结果显示,提取的虫体总RNA纯度高,合成的双链cDNA经Rsa I酶切反应较完全;从消减文库中随机选择100个阳性克隆进行PCR扩增,其插入片段长度在200~750 bp之间,文库的重组率达93%以上;随机挑取30个阳性克隆进行测序,获得11个单一序列,Blast分析显示有7个单一有效EST序列与已知蛋白质相似性较高。结果表明,已成功构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子的抑制性消减cDNA文库,并对部分阳性克隆进行了初步分析,为深入研究磺胺氯吡嗪的抗弓形虫机制和寻找药物作用的关键靶分子奠定了基础。 展开更多
关键词 磺胺氯吡嗪 弓形虫 抑制性消减杂交
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不同保种时间及复苏代次弓形虫对小鼠致病性研究 预览 被引量:2
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作者 曾艳波 朱顺海 +6 位作者 韩红玉 董辉 姜连连 赵其平 马卫娇 程军 黄兵 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第6期 55-59,共5页
为了评价液氮冻存不同时间后及在小鼠体内复苏不同代次的弓形虫速殖子感染小鼠致病性的研究,通过比较感染处理后的弓形虫小鼠健康及存活状况,筛选出更佳的液氮冻存时间和合适复苏代次,对于建立小鼠急性弓形虫感染模型及弓形虫致病机理... 为了评价液氮冻存不同时间后及在小鼠体内复苏不同代次的弓形虫速殖子感染小鼠致病性的研究,通过比较感染处理后的弓形虫小鼠健康及存活状况,筛选出更佳的液氮冻存时间和合适复苏代次,对于建立小鼠急性弓形虫感染模型及弓形虫致病机理等具有重要意义。通过腹腔注射不同保种时间(2、4、6月)和不同复苏代次(1、2、3代)弓形虫速殖子,观察感染后小鼠健康状况及死亡情况,比较各种条件下弓形虫的致病性。结果表明,液氮冻存半年后经小鼠接种4 000个/鼠~16 000个/鼠,传代2代~3代后能得到毒力稳定的虫体,且达到最佳复苏状态。不同冻存时间对弓形虫速殖子的致病性有差异,为弓形虫急性感染模型及后续的药物筛选和致病机理研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 弓形虫 保种时间 复苏代次 致病性
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ERK1/2信号途径与弓形虫侵入细胞及胞内增殖关系的研究 被引量:2
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作者 杨小迪 陈兴智 +5 位作者 王媛媛 常雪莲 徐军 程启媛 胡守锋 孙新 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第3期204-206,212,F0002共5页
目的探讨阻断细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)信号途径对弓形虫速殖子侵入宿主细胞及在胞内增殖的影响。方法姬氏染色法检测ERK1/2途径不同时间及不同剂量的抑制剂U0126或PD98059作用下宿主细胞感染弓形虫速殖子的百分率,根据细胞感染率... 目的探讨阻断细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)信号途径对弓形虫速殖子侵入宿主细胞及在胞内增殖的影响。方法姬氏染色法检测ERK1/2途径不同时间及不同剂量的抑制剂U0126或PD98059作用下宿主细胞感染弓形虫速殖子的百分率,根据细胞感染率和感染细胞内虫荷量分析ERK1/2途径抑制剂对速殖子在细胞中增殖的影响。结果速殖子在细胞培养系统中以1、10和100μmol/L U0126或PD98059作用3 h、6 h和9 h后,前者细胞培养孔中的细胞感染率分别较对照组平均下降34.62%(P〈0.01)、53.55%(P〈0.01)和67.76%(P〈0.01),后者分别较对照组平均下降22.67%(P〈0.01)、52.21%(P〈0.01)和58.99%(P〈0.01);感染细胞感染速殖子率与对照组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论阻断ERK1/2途径的不同信号位点对弓形虫速殖子侵入宿主细胞影响不同,ERK1/2途径在速殖子侵入宿主细胞起主要作用,但对侵入后的增殖无明显影响。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 ERK1/2信号通路 NIH3T3细胞 U0126 PD98059
刚地弓形虫速殖子抗原研究进展 预览 被引量:2
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作者 逄伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期 229-231,共3页
弓形虫为顶复动物门寄生原虫,呈世界性广泛分布,可感染所有温血动物,并在宿主免疫功能低下或受抑制时导致严重的疾患,其极高的流行性和致病的机会性已越来越引起人们的关注。作者综述了目前弓形虫速殖子抗原研究的现状。
关键词 刚地弓形虫 抗原
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弓形虫速殖子与缓殖子体外转化体系的建立 预览 被引量:2
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作者 丁洁琼 吴妮 +1 位作者 谭峰 陈晓光 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期668-671,共4页
目的建立弓形虫速殖子与缓殖子体外转化体系。方法纯化弓形虫RH株速殖子,按一定比例和条件接种于COS-7细胞内进行体外培养。分别在接种后第1、2、3、4、5、6天观察细胞和虫体的形态并提取TotalRNA,用RT-PCR的方法检测速殖子期特异性蛋白... 目的建立弓形虫速殖子与缓殖子体外转化体系。方法纯化弓形虫RH株速殖子,按一定比例和条件接种于COS-7细胞内进行体外培养。分别在接种后第1、2、3、4、5、6天观察细胞和虫体的形态并提取TotalRNA,用RT-PCR的方法检测速殖子期特异性蛋白SAG1基因、缓殖子期特异性蛋白BAG1基因和SAG2C基因的表达。结果随着速殖子在COS-7细胞中培养时间的延续,虫体的数量逐渐增多,但增殖速度逐步减缓;虫体在细胞内的排列方式也在不断变化,由成对的弧形、玫瑰花形或簇形、变成半圆形最后形成圆形的类包囊样结构。RT-PCR检测显示:速殖子期特异性蛋白SAG1基因在培养的第1~6天均有表达,且表达量呈递增趋势;缓殖子期特异性蛋白BAG1基因从第2天开始出现表达,随时间延续表达量逐渐增加;缓殖子期特异性蛋白SAG2C基因从第5天开始表达,第6天表达量增加。以上结果表明有越来越多的速殖子转化为缓殖子。改变培养条件,缓殖子也能向速殖子转化。结论成功构建弓形虫速殖子与缓殖子体外相互转化体系,为其转化机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 体外培养 转化
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刚地弓形虫速殖子与鼠星形胶质细胞体外共培养的实验观察 预览 被引量:5
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作者 李冬娜 梁幼生 +5 位作者 周永华 张焕相 沈海英 骆伟 龚唯 诸葛洪祥 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期318-320,共3页
原代培养星形胶质细胞,待其长至培养皿的80%时,将星形胶质细胞与弓形虫速殖子(细胞与虫体的比例为1∶10)共培养0~72h,吉氏染色观察星形胶质细胞和弓形虫速殖子的变化。共培养1h,此时定为0点,再培养0~48h,单磺酰戊二胺染色在荧光显... 原代培养星形胶质细胞,待其长至培养皿的80%时,将星形胶质细胞与弓形虫速殖子(细胞与虫体的比例为1∶10)共培养0~72h,吉氏染色观察星形胶质细胞和弓形虫速殖子的变化。共培养1h,此时定为0点,再培养0~48h,单磺酰戊二胺染色在荧光显微镜下观察星形胶质细胞内自噬囊泡的变化。结果发现共培养1h时,弓形虫速殖子开始进入星形胶质细胞,并出现荧光颗粒;8h星形胶质细胞内荧光颗粒最多;12h后显著减少,星形胶质细胞开始被破坏;48h星形胶质细胞内荧光颗粒消失;72h大部分星形胶质细胞已被涨破,留下大量增殖的弓形虫速殖子。说明自噬在弓形虫速殖子体外感染星形胶质细胞的过程中是受到抑制的。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 弓形虫 自噬
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