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马铃薯热激转录因子HsfA3基因的克隆及其耐热性功能分析 认领
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作者 唐锐敏 贾小云 +2 位作者 朱文娇 印敬明 杨清 《作物学报》 CAS 北大核心 2021年第4期672-683,共12页
马铃薯在田间生长时常会受到各种不利环境的影响。夏季高温常导致马铃薯块茎产量和质量的下降。因此,阐明马铃薯对热胁迫的响应机制,发掘耐热相关基因,对马铃薯耐热性的提高意义重大。热激转录因子(heat shock transcription factor A3,... 马铃薯在田间生长时常会受到各种不利环境的影响。夏季高温常导致马铃薯块茎产量和质量的下降。因此,阐明马铃薯对热胁迫的响应机制,发掘耐热相关基因,对马铃薯耐热性的提高意义重大。热激转录因子(heat shock transcription factor A3,HsfA3)在植物机体内的活动影响到大量功能基因的表达,在植物响应热胁迫的过程中发挥重要的作用。为了研究马铃薯中HsfA3的结构和功能,本研究通过RT-PCR从马铃薯品种Désirée中克隆到长度为1506 bp的StHsfA3基因,编码501个氨基酸。StHsfA3的相对分子量为55.23 kD,理论等电点为4.9,属于亲水性蛋白。构建StHsfA3-pBA002过表达载体,并转化马铃薯植株,共鉴定得到5个独立的StHsfA3过表达转基因马铃薯株系。通过对转基因植株和非转基因植株叶片中的相对含水量(relative water content,RWC)以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的测定发现,在高温胁迫下,转基因植株叶片中的RWC显著高于非转基因植株,MDA含量显著低于非转基因植株,说明StHsfA3在耐热过程中起到正调控作用。对StHsfA3、StHsp26-CP和StHsp70在不同马铃薯植株中的表达分析显示,StHsfA3过量表达诱导了StHsp26-CP和StHsp70的表达,预示着StHsfA3可能协同StHsp26-CP和StHsp70来增强过表达转基因株系的耐热性。 展开更多
关键词 马铃薯 热胁迫 HsfA3 基因克隆 遗传转化 功能分析
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山核桃赤霉素氧化酶基因CcGA3ox的克隆和功能分析 认领
2
作者 魏广利 梁璧 +4 位作者 张佳琦 胡恒康 黄有军 娄和强 张启香 《果树学报》 CAS 北大核心 2021年第1期13-28,共16页
【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技... 【目的】赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)是赤霉素(GAs)生物合成途径中关键酶之一,对山核桃(Carya cathayensis)中CcGA3ox基因进行克隆,并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料,提取RNA,采用PCR扩增技术,克隆山核桃CcGA3ox基因编码区全长;对序列进行生物信息学分析。为验证基因功能,通过同源重组技术构建具有强启动子的35S::CcGA3ox::GFP过表达载体,以核桃体细胞胚为转化材料,利用农杆菌介导法进行遗传转化;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析山核桃CcGA3ox基因在转基因阳性核桃植株中的相对表达量。采用紫外分光光度计检测植株中叶绿素含量,并分析其差异。【结果】山核桃CcGA3ox基因开放阅读框(ORF)全长为1 116 bp,编码371个氨基酸。对CcGA3ox氨基酸序列分析发现,其含有2OG-FeⅡ-Oxy结构域。系统进化树显示,CcGA3ox与薄壳山核桃CiGA3ox亲缘关系最近,与核桃JrGA3ox亲缘关系较近。对核桃体细胞胚进行遗传转化、荧光检测及PCR验证表明,35S::CcGA3ox::GFP过表达载体被成功转入核桃体胚中。核桃阳性再生植株与对照植株相比,株高明显增高;qRT-PCR结果表明,CcGA3ox基因相对表达量显著增加。同时,过表达CcGA3ox基因可以降低核桃阳性再生植株中叶绿素含量。【结论】山核桃CcGA3ox基因在核桃生长过程中对株高调控起关键作用。 展开更多
关键词 山核桃 赤霉素3-氧化酶基因(GA3ox) 遗传转化 功能分析
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根癌农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化体系研究 认领
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作者 黄运福 贡莎莎 +4 位作者 孟庆玲 乔军 张国武 王熙凤 才学鹏 《动物医学进展》 北大核心 2021年第2期60-65,共6页
根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)是一种丝状真菌常用的遗传转化手段,但目前还不能有效地应用于少孢节丛孢菌的转化。构建由PgpdA启动子调控mgfp-gus基因的真菌表达载体pCAMBIA1304'-PgpdA并转入农杆菌中,利用ATMT技术对少孢节丛... 根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)是一种丝状真菌常用的遗传转化手段,但目前还不能有效地应用于少孢节丛孢菌的转化。构建由PgpdA启动子调控mgfp-gus基因的真菌表达载体pCAMBIA1304'-PgpdA并转入农杆菌中,利用ATMT技术对少孢节丛孢菌进行转化。结果显示,农杆菌AGL-1介导的转化在共培养时间为60 h,温度为23℃的条件下获得了1株转化子,以其基因组为模板可以扩增出hph和gus基因片段,进行GUS组织染色能观察到蓝色,表明目的基因成功转入少孢节丛孢菌基因组中并能正常表达。初步建立了农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化方法,为少孢节丛孢菌功能新基因的研究、菌株改良等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 少孢节丛孢菌 根癌农杆菌 遗传转化 mgfp-gus基因
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根癌农杆菌介导苹果愈伤组织遗传转化体系的优化 认领
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作者 牛淑庆 陈丽 +3 位作者 李雨欣 田佶 姚允聪 张杰 《北京农学院学报》 2021年第1期37-41,共5页
【目的】以‘王林’苹果愈伤组织为转化研究的材料,在已经建立的遗传转化基础上,优化根癌农杆菌介导的‘王林’愈伤组织的遗传转化系统。【方法】在遗传转化的过程中,通过对根癌农杆菌的侵染时间、共培养以及抗性的选择,优化遗传转化体... 【目的】以‘王林’苹果愈伤组织为转化研究的材料,在已经建立的遗传转化基础上,优化根癌农杆菌介导的‘王林’愈伤组织的遗传转化系统。【方法】在遗传转化的过程中,通过对根癌农杆菌的侵染时间、共培养以及抗性的选择,优化遗传转化体系并且增加转化效率。【结果】选择生长20 d的愈伤组织,在根癌农杆菌OD 600=0.8时侵染20 min,共培养3 d、转入卡那霉素30 mg/L和头孢噻肟250 mg/L的培养基上进行筛选,可显著提高遗传转化效率。【结论】将McmiR399d作为标记基因进行转化,优化苹果‘王林’愈伤组织的遗传转化系统,从而得到过表达和沉默的McmiR399d‘王林’愈伤组织。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 苹果愈伤组织 遗传转化
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农杆菌介导的棕色棉胚珠离体培养遗传转化体系的建立 认领
5
作者 丁一 耿晓丽 +5 位作者 何守朴 潘兆娥 贾银华 王立如 吴立强 杜雄明 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第1期218-223,共6页
本研究以棕色棉品种‘棕1-61’为受体材料,以茁-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,探索农杆菌介导离体培养胚珠的遗传转化条件。结果表明最适合的遗传转化条件是:1 DPA胚珠预培养4 d后,用针头进行扎孔处理形成伤口,在OD600为0.6~0.8的... 本研究以棕色棉品种‘棕1-61’为受体材料,以茁-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,探索农杆菌介导离体培养胚珠的遗传转化条件。结果表明最适合的遗传转化条件是:1 DPA胚珠预培养4 d后,用针头进行扎孔处理形成伤口,在OD600为0.6~0.8的农杆菌菌液中侵染3 min,22℃黑暗条件下共培养20 h后转移至含500 mg/L卡那霉素的BT培养基上进行暗培养。GUS染色结果发现,暗培养20 d的胚珠和30 d的纤维上均有染色,证明GUS报告基因转化成功。进一步将目的基因Gh UFGT构建RNAi载体并进行转基因,荧光定量PCR检测发现转基因阳性胚珠中Gh UFGT基因的表达量与对照相比显著下降。该实验为研究纤维发育和色泽相关基因的功能提供了一种快速高效的遗传转化方法。 展开更多
关键词 棕色棉 胚珠 农杆菌介导法 遗传转化 离体培养
中国野生毛葡萄芪合酶基因表达及对葡萄抗白粉病的影响 认领
6
作者 丁茜 赵凯茜 王跃进 《中国农业科学》 CAS 北大核心 2021年第2期310-323,共14页
【目的】克隆中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis)‘丹凤-2’芪合酶(stilbene synthase)基因(STS)并研究其功能,为提高欧洲葡萄(V.vinifera)的白粉病抗性及品质提供依据。【方法】利用同源克隆法获得中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合酶... 【目的】克隆中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis)‘丹凤-2’芪合酶(stilbene synthase)基因(STS)并研究其功能,为提高欧洲葡萄(V.vinifera)的白粉病抗性及品质提供依据。【方法】利用同源克隆法获得中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合酶基因VqSTS9和VqSTS21,构建植物过表达载体;用无核白单芽茎段诱导出分生愈伤组织,作为农杆菌介导法遗传转化的受体材料,获得抗性植株,经过不同水平检测,确定转基因植株;对野生型和转基因植株叶片人工接种葡萄白粉病菌(Uncinula necator),通过显微技术观察叶片受白粉病菌侵染后的情况,比较两者对白粉病的抗性;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析野生型和转基因植株在自然条件和接种白粉病菌后STS及其相关基因的表达,用高效液相色谱法(HPLC)检测转基因植株中芪类物质的种类与含量。【结果】同源序列克隆得到VqSTS9(JQ868689)与VqSTS21(JQ868677)的cDNA序列,长度为1179 bp。经PCR和Western blot检测,鉴定出过表达VqSTS9无核白植株4株和过表达VqSTS21无核白植株3株。显微观察发现,与野生型植株相比,转VqSTS9和VqSTS21植株叶片上的菌丝生长较慢,表现出对白粉病的抗性。qRT-PCR结果表明,自然生长条件下,与野生型植株相比,转VqSTS9和VqSTS21植株STS的表达量提高,STS上游苯丙氨酸裂解酶基因(PAL)、下游白藜芦醇糖基转移酶基因(RSGT)、转录因子基因(MYB14、MYB15)的表达量均不同程度上升,而查尔酮合成酶基因(CHS)表达量降低;人工接种白粉病菌后,与野生型植株相比,转基因植株STS表达量显著上调。高效液相色谱分析表明,自然条件下,芪类物质主要以反式云杉新苷形式存在,转基因植株芪类物质的含量高于野生型植株;在接种白粉病菌诱导表达后,除了反式云杉新苷,还产生了反式白藜芦醇和葡萄素,即转基因植株体内芪类物质的种类和含量均有所增加。【结论】将VqSTS9、Vq 展开更多
关键词 中国野生毛葡萄 芪合酶基因 白藜芦醇 白粉病 遗传转化 抗病性
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发根农杆菌介导的杜梨毛状根遗传转化方法 认领
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作者 郝紫微 戴雨沁 +1 位作者 张绍铃 王鹏 《湖北农业科学》 2021年第1期151-154,159,共5页
以杜梨(Pyrus betulaefolia)为研究材料,利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)开发了一种简单、快速、高效的杜梨毛状根遗传转化方法。将含有mCherry基因的表达载体pROK2导入发根农杆菌K599,侵染杜梨幼苗,通过注射烟草叶片、常规PC... 以杜梨(Pyrus betulaefolia)为研究材料,利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)开发了一种简单、快速、高效的杜梨毛状根遗传转化方法。将含有mCherry基因的表达载体pROK2导入发根农杆菌K599,侵染杜梨幼苗,通过注射烟草叶片、常规PCR及体视显微镜观察,检测转化效率。结果表明,利用侵染烟草叶片瞬时表达的方法,证明mCherry可以正常表达;发根农杆菌侵染40株杜梨后,再生毛状根植株为34株,再生率达85%,通过PCR鉴定,转基因毛状根长势良好且鉴定为阳性的植株有6株,阳性率达到17.6%;经体视显微镜观察,可以在转基因根中直接观察到mCherry的红色荧光。通过发根农杆菌直接侵染杜梨苗的方法,成功实现了外源基因在杜梨新生不定根中的表达,操作简便,转化率高,周期较短,为梨树基因功能研究和遗传改良提供了新型工具,为提高梨树遗传转化成功率奠定了基础。 展开更多
关键词 杜梨(Pyrus betulaefolia) 发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes) 毛状根 遗传转化
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文章速递AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究 认领
8
作者 谢晓阳 魏磊 +6 位作者 王伟 景炳年 陈谭星 颜慧萍 曹力凡 常霞 高正龙 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2021年第1期27-34,共8页
为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株... 为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株。结果表明:最佳灭菌体系为75%乙醇消毒20 s,0.3%HgCl 2消毒15 min,污染率低,成活率高;最佳愈伤期激素配比为6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L,最佳壮苗期激素配比为6-BA 1.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L。最佳筛选抗生素配比为噻孢霉素(Cef)300 mg/L、潮霉素(Hyg)7.5 mg/L;通过RT-PCR验证试验结果,并通过定量PCR测定AAT基因表达含量,重组植株与野生型相比提高2.5倍。试验首次建立了重组载体遗传转化杂交构树,对叶片组培及筛选方法具有重要意义。 展开更多
关键词 杂交构树 载体构建 组织培养 AAT基因 遗传转化
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文章速递西瓜‘SM1’高效遗传转化体系的构建 认领
9
作者 张曼 徐锦华 +5 位作者 刘广 任润生 姚协丰 徐建 娄丽娜 羊杏平 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期498-503,共6页
为构建高效的西瓜再生和遗传转化体系,本研究以西瓜‘SM1’材料子叶节为外植体,研究不同激素配比对子叶节再生的影响。在此基础上,通过农杆菌介导法导入外源基因,研究潮霉素浓度、农杆菌侵染时间、共培养时间等因素对遗传转化效率的影响... 为构建高效的西瓜再生和遗传转化体系,本研究以西瓜‘SM1’材料子叶节为外植体,研究不同激素配比对子叶节再生的影响。在此基础上,通过农杆菌介导法导入外源基因,研究潮霉素浓度、农杆菌侵染时间、共培养时间等因素对遗传转化效率的影响,建立遗传转化体系。结果表明,‘SM1’不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L,不定芽分化率为91.7%。最优遗传转化组合为农杆菌侵染时间15 min,共培养3 d,之后进行选择培养。外植体不定芽分化潮霉素最适浓度为10 mg/L,最适生根培养基为1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.01 mg/L。通过潮霉素筛选和PCR鉴定,获得12株阳性转化株系,转化率为6.5%。本研究建立了高效西瓜‘SM1’再生及遗传转化体系,为进一步开展基因功能研究及西瓜遗传改良提供了技术支撑。 展开更多
关键词 西瓜(Citrullus lanatus) 子叶节 再生体系 遗传转化
文章速递紫花苜蓿遗传转化体系的优化 认领
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作者 仪登霞 仝宗永 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期504-511,共8页
为建立农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系,以‘中苜1号’和‘保定苜蓿’为试验材料,选用离体叶片为外植体,采用农杆菌介导法将双元质粒载体pCA-GR导入紫花苜蓿,研究了不同浓度的两种抑菌剂(羧苄青霉素和特美汀)、Ag^+、激素(KT和NAA... 为建立农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系,以‘中苜1号’和‘保定苜蓿’为试验材料,选用离体叶片为外植体,采用农杆菌介导法将双元质粒载体pCA-GR导入紫花苜蓿,研究了不同浓度的两种抑菌剂(羧苄青霉素和特美汀)、Ag^+、激素(KT和NAA)组合以及基因型对紫花苜蓿转化频率的影响。结果表明:当选择培养基中无其它添加时,两个基因型在转化频率上存在显著差异,‘保定苜蓿’的转化率达到4.48%,显著高于‘中苜1号’苜蓿(2.97%)。当选择培养基中激素浓度组合为2 mg/L KT+0.1 mg/L NAA,并含有2.5 mg/L Ag NO3和150 mg/L特美汀时‘,保定苜蓿’的转化率最高,达到10.42%;对卡那霉素抗性植株进行了PCR、Southern blot鉴定及除草剂抗性评价,表明除草剂抗性基因GR79Ms已成功导入受体紫花苜蓿基因组中并得到表达。本研究优化了紫花苜蓿的遗传转化体系,为转基因技术在紫花苜蓿育种中的应用提供了技术支持。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 遗传转化 体系优化 分子检测 抗除草剂
大豆遗传转化方法及再生体系研究进展 认领
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作者 王立平 何展泳 +2 位作者 年海 王宏杰 马启彬 《广东农业科学》 CAS 2020年第3期16-27,共12页
转基因技术作为现代生物技术之一,在基因功能研究和转基因育种方面取得重要进展。大豆基因组测序之后,大豆功能基因组学发展迅速,挖掘控制重要性状的基因用于转基因育种受到广泛关注。随着转基因大豆新品种培育重大专项的实施,我国建立... 转基因技术作为现代生物技术之一,在基因功能研究和转基因育种方面取得重要进展。大豆基因组测序之后,大豆功能基因组学发展迅速,挖掘控制重要性状的基因用于转基因育种受到广泛关注。随着转基因大豆新品种培育重大专项的实施,我国建立了基因克隆、遗传转化、功能研究、转基因品系安全评价等转基因育种研究技术体系和监管体系。其中,转基因大豆遗传转化技术体系的研究取得了较快的进展,主要集中在高效、稳定遗传转化再生体系的建立和优化,大豆遗传转化方法的探索和优化等方面。对大豆遗传转化体系、转化方法和转化效率等因素进行阐述,可为大豆基因功能研究和转基因新品种培育相关研究提供参考。 展开更多
关键词 转基因大豆 遗传转化 再生体系 转化方法
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甘蔗SoInvInh2基因克隆及其在转基因拟南芥中的表达分析 认领
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作者 牛俊奇 苗小荣 +2 位作者 王道波 黄维 杨丽涛 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3587-3592,共6页
转化酶抑制子(InvInh)是转化酶翻译后水平的一个重要调控因子,通过与转化酶结合成复合物来抑制转化酶酶活性。为了探究甘蔗SoInvInh2基因的功能特性,本研究以甘蔗品种GT28叶片总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增甘蔗SoInvInh2基因的编码区... 转化酶抑制子(InvInh)是转化酶翻译后水平的一个重要调控因子,通过与转化酶结合成复合物来抑制转化酶酶活性。为了探究甘蔗SoInvInh2基因的功能特性,本研究以甘蔗品种GT28叶片总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增甘蔗SoInvInh2基因的编码区序列,以中间载体pMD18-T和表达载体pRI101-AN为基础,采用酶切和连接的方法,构建植物正义表达载体。通过花序轴浸染法转化拟南芥,获得转SoInvInh2基因拟南芥株系。经kan抗性筛选和PCR扩增检测,共获得12株阳性植株,转化效率为9.7%。半定量RT-PCR分析结果表明SoInvInh2基因在转基因拟南芥叶中相对表达量最高,根中次之,叶柄中最低。这将为后续解析甘蔗SoInvInh2基因的功能提供理论参考。 展开更多
关键词 甘蔗(Saccharum officinarum) 转化酶抑制子 遗传转化 过表达
单倍体诱导创建二倍体技术在油菜遗传育种中的研究进展 认领
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作者 万丽丽 王转茸 +5 位作者 范志雄 辛强 洪登峰 杨光圣 孙玉宏 谭庆 《江苏农业科学》 2020年第10期38-45,共8页
单倍体诱导创建二倍体的技术体系主要包括2种类型。(1)对植物中雄性或者雌性生殖器官进行培养获得具有单套染色体组的组织,经过天然或者加倍剂处理获得二倍体;(2)对CENH3基因进行修饰获得单倍体诱导系,利用单倍体诱导系与不同材料杂交... 单倍体诱导创建二倍体的技术体系主要包括2种类型。(1)对植物中雄性或者雌性生殖器官进行培养获得具有单套染色体组的组织,经过天然或者加倍剂处理获得二倍体;(2)对CENH3基因进行修饰获得单倍体诱导系,利用单倍体诱导系与不同材料杂交获得后者的单倍体,进而加倍成二倍体。在油菜中应用最广泛的单倍体诱导创建二倍体植株的技术是小孢子培养方法,其过程受到3个因素的影响,分别为小孢子胚发生能力、小孢子天然加倍和加倍剂处理后的加倍效率、从胚再生成完整植株的能力。经过多年研究,在油菜中建立的小孢子诱导创建二倍体的技术为油菜遗传育种研究提供了重要的技术支持。小孢子和小孢子培养得到的胚均能用于创造突变体及遗传转化试验。通过遗传学方法定位了决定油菜小孢子胚发生、天然加倍以及胚状体直接成苗的数量性状基因座(QTLs),可在不同群体中验证候选基因。深入挖掘调控小孢子胚发生和再生成苗的分子机制,分析胚性细胞发育的转变、起始细胞的分化以及胚形态发生的基因调控网络,进而为理解油菜单倍体诱导以及二倍体发生的作用机制提供依据。随着植物单倍体诱导发生的分子机制被逐步揭示,在油菜中对与拟南芥染色体减数分裂相关的同源基因进行修饰能够获得单倍体诱导系,将其与待改良的父母本进行杂交可快速获得具有不同亲本背景的单倍体,经过加倍剂处理可快速获得纯系,单倍体诱导技术能够用于反向育种研究以及品种的遗传改良。 展开更多
关键词 双单倍体 油菜 遗传育种 小孢子培养 遗传转化 单倍体诱导 数量性状基因座(QTLs) 分子机制
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薰衣草及其次生代谢产物的分子生物学研究概述 认领
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作者 董世晨 侯一航 +2 位作者 孙悦 任杏 苑泽宁 《现代农业研究》 2020年第5期56-60,共5页
深入了解薰衣草分子生物学特性及其次生代谢产物分子生物学作用机理,有助于为培育薰衣草新品种和发挥薰衣草的功效提供理论参考。本文综述了薰衣草功能基因、遗传多样性及遗传转化等研究进展,介绍了薰衣草次生代谢产物分子组成及其影响... 深入了解薰衣草分子生物学特性及其次生代谢产物分子生物学作用机理,有助于为培育薰衣草新品种和发挥薰衣草的功效提供理论参考。本文综述了薰衣草功能基因、遗传多样性及遗传转化等研究进展,介绍了薰衣草次生代谢产物分子组成及其影响因素,次生代谢产物发挥主要功效的分子机制,为深入开展薰衣草理论和实践研究提供参考和基础。 展开更多
关键词 薰衣草 遗传多样性 遗传转化 次生代谢产物 分子生物学
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冬小麦膨胀素基因EXPB7工程菌构建及纤维素水解作用分析 认领
15
作者 周磊 李雅权 +12 位作者 徐永清 苗宇 贺付蒙 朱元芳 石奇海 武佳文 赵潇璨 李秀钰 冯哲 刘娣 冯艳忠 胡宝忠 李凤兰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第5期88-93,100共7页
为了寻找促进纤维素降解的有效方法来提高纤维素酶的降解效率。本研究以东农冬麦1号膨胀素基因EXPB7为供体,构建黑曲霉表达载体,以黑曲霉CICC2462为受体,采用农杆菌介导法遗传转化黑曲霉,构建膨胀素基因黑曲霉工程菌pSZHGS-EXPB7,并对... 为了寻找促进纤维素降解的有效方法来提高纤维素酶的降解效率。本研究以东农冬麦1号膨胀素基因EXPB7为供体,构建黑曲霉表达载体,以黑曲霉CICC2462为受体,采用农杆菌介导法遗传转化黑曲霉,构建膨胀素基因黑曲霉工程菌pSZHGS-EXPB7,并对该工程菌发酵液的纤维素水解促进作用进行分析。结果表明,黑曲霉重组膨胀素蛋白在对滤纸处理2 d后崩解效果明显,与出发菌株的分泌蛋白相比,具有一定的促进作用;重组菌株发酵液上清处理滤纸产生的还原糖含量显著高于出发菌株(P<0.05),与仅用酶液处理滤纸相比,能够将纤维素酶的水解效率提高32.9%。 展开更多
关键词 膨胀素基因EXPB7 黑曲霉 遗传转化 纤维素水解
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芦笋茎尖遗传转化体系的建立与优化 认领
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作者 张园 刘正杰 +5 位作者 林春 闫亚泽 袁加红 王入 毛自朝 杨焕文 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期109-116,共8页
通过优化根癌农杆菌EHA105(含有pBI121表达载体)介导的茎尖遗传转化条件,包括抑菌抗生素类型及浓度、农杆菌浓度、侵染时间、共培养时间、卡那霉素浓度等影响因素,建立芦笋品种‘达宝利’遗传转化体系。以0.1~0.3 cm长的芦笋茎尖为转化... 通过优化根癌农杆菌EHA105(含有pBI121表达载体)介导的茎尖遗传转化条件,包括抑菌抗生素类型及浓度、农杆菌浓度、侵染时间、共培养时间、卡那霉素浓度等影响因素,建立芦笋品种‘达宝利’遗传转化体系。以0.1~0.3 cm长的芦笋茎尖为转化受体,用MS液体培养基(MS+蔗糖3%+乙酰丁香酮150μmol·L-1)悬浮菌体至OD 600为0.6,侵染茎尖15 min,20℃避光共培养4 d;抗性茎尖在筛选培养基(1/2 MS+IBA 0.5 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1+嘧啶醇0.5 mg·L^-1+羧苄青霉素200 mg·L^-1+卡那霉素50 mg·L^-1)上诱导长芽与生根,可获得抗性植株,经PCR、GUS组织化学染色和qRT-PCR检测,获得阳性植株。 展开更多
关键词 芦笋 茎尖 遗传转化 参数优化 GUS QRT-PCR
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紫花苜蓿MsERF003的基因克隆及其在干旱胁迫中的功能分析 认领
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作者 坚伟宁 左朋 +4 位作者 张国珍 范杰英 邢少辰 郑梅竹 韦正乙 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期5674-5681,共8页
ERFs转录因子属于AP2/ERF转录因子超家族,在植物生长、发育和逆境胁迫响应调节中具有重要的作用。紫花苜蓿是重要的牧草,具有较强的抗旱能力。本研究通过RT-PCR的方法从紫花苜蓿中克隆了一个ERF基因,即MsERF003。该基因的开放阅读框长度... ERFs转录因子属于AP2/ERF转录因子超家族,在植物生长、发育和逆境胁迫响应调节中具有重要的作用。紫花苜蓿是重要的牧草,具有较强的抗旱能力。本研究通过RT-PCR的方法从紫花苜蓿中克隆了一个ERF基因,即MsERF003。该基因的开放阅读框长度为570 bp,编码190个氨基酸残基。序列比对发现,该基因与来自蒺藜苜蓿的同源基因PPLZ02 (LOC11427311)的mRNA的编码区同源性为99%,在氨基酸水平的同源性为98.94%。通过qPCR方法对MsERF003基因的表达模式进行了分析,我们发现在干旱胁迫的条件下,在各个组织中的表达量均有上调,在茎和荚果中尤为显著,暗示该基因在响应干旱胁迫时,主要在茎和胚胎发育中发挥作用。我们预测了可能与Ms ERF003高度同源的PPLZ02的互作蛋白,发现其与多种转录因子和酶类互作。我们构建了植物表达载体pCBC-MsERF003,并利用农杆菌转化法获得过量表达该基因的转基因烟草。抗旱性评估结果显示,在干旱处理后,过量表达Ms ERF003的转基因烟草植株比野生型有更好的保水性,其脯氨酸含量极显著高于野生型,显示出更强的抗旱能力。本研究为进一步探究紫花苜蓿的抗旱性调控提供了有益参考。 展开更多
关键词 紫花苜蓿(Medicago sativa L.) AP2/ERF转录因子 抗旱性 遗传转化
利用农杆菌介导法将抗草甘膦基因转入玉米自交系H99的研究 认领
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作者 韩平安 吴新荣 +7 位作者 孙瑞芬 石海波 薛春雷 常悦 唐宽刚 梁亚晖 任芹勇 李晓东 《北方农业学报》 2020年第2期21-26,共6页
【目的】利用转基因手段培育抗除草剂玉米品种以解决草害问题。【方法】采用农杆菌介导法对玉米自交系H99的幼胚进行遗传转化研究,进行单因素试验,分别设置不同胚的大小、农杆菌的菌液浓度和共培养时间处理,比较分析转基因幼胚GUS的瞬... 【目的】利用转基因手段培育抗除草剂玉米品种以解决草害问题。【方法】采用农杆菌介导法对玉米自交系H99的幼胚进行遗传转化研究,进行单因素试验,分别设置不同胚的大小、农杆菌的菌液浓度和共培养时间处理,比较分析转基因幼胚GUS的瞬时表达率。【结果】幼胚大小1.5~2.0 mm、农杆菌的侵染浓度OD_(600)为0.4、侵染5 min、共培养3 d,GUS的瞬时表达率最高。PCR检测证明成功获得7株阳性转基因苗,且抗性鉴定实验证明转基因苗具有草铵膦抗性。【结论】为玉米转基因技术体系优化和培育抗除草剂新品种提供了理论参考。 展开更多
关键词 玉米 抗草甘膦基因(EPSPS) 农杆菌介导法 遗传转化 GUS染色
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转Cry2A基因抗虫甘蔗植株的培育 认领
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作者 王文治 胡天娇 +8 位作者 杨本鹏 王俊刚 冯小艳 熊国如 冯翠莲 赵婷婷 沈林波 林拥军 张树珍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2893-2898,共6页
Bt基因具有广谱杀虫性,培育转基因抗虫品种为甘蔗病虫害防治提供了新思路。为了检验Cry2A基因对甘蔗螟虫的防治效果,本研究构建了由玉米Ubi启动子驱动的Cry2A基因高效植物表达载体Cry2A-3300,利用农杆菌介导技术,对甘蔗胚性愈伤组织材... Bt基因具有广谱杀虫性,培育转基因抗虫品种为甘蔗病虫害防治提供了新思路。为了检验Cry2A基因对甘蔗螟虫的防治效果,本研究构建了由玉米Ubi启动子驱动的Cry2A基因高效植物表达载体Cry2A-3300,利用农杆菌介导技术,对甘蔗胚性愈伤组织材料进行遗传转化,经过筛选培养及再生培养共得到46株抗性植株。对抗性植株进行PCR扩增检测,15株呈阳性;进一步利用RT-PCR,表明外源基因Cry2A在转录水平上得到有效表达。室内抗虫鉴定的结果表明Cry2A基因可有效抑制害虫的生长,这将有利于后期进行田间防治。 展开更多
关键词 甘蔗(Saccharum officinarum) Cry2A基因 遗传转化 甘蔗螟虫
过表达二穗短柄草BdDREB1-like基因提高烟草的抗氧化能力 认领
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作者 李论 柯杰 +4 位作者 黄钢 刘红诗 宋燕妮 张英洁 陈利红 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期1-8,共8页
为了研究二穗短柄草BdDREB1-like基因在转基因烟草中的功能,克隆了该基因,并进行了生物信息学分析。该基因开放阅读框684 bp,编码228个氨基酸,编码蛋白的分子量为24.178 ku,只含有一个典型的AP2结构域,属于AP2/EREBP(APETALA2/ethylene-... 为了研究二穗短柄草BdDREB1-like基因在转基因烟草中的功能,克隆了该基因,并进行了生物信息学分析。该基因开放阅读框684 bp,编码228个氨基酸,编码蛋白的分子量为24.178 ku,只含有一个典型的AP2结构域,属于AP2/EREBP(APETALA2/ethylene-responsive element binding protein)超家族的DREB家族。多序列比对与进化分析显示它与黑麦ScCBFI的亲缘关系较近。亚细胞定位分析表明,BdDREB1-like基因定位于细胞核。将其构建到植物表达载体上,并通过农杆菌介导法转入烟草中。PCR和RT-PCR筛选鉴定显示BdDREB1-like基因不仅整合到烟草基因组中而且还能稳定表达。过氧化氢胁迫条件下,转BdDREB1-like基因烟草幼苗具有较高的发芽率。为了进一步确定BdDREB1-like基因与氧化胁迫的关系,又对一个月大的转基因烟草进行氧化胁迫(MV,甲基紫精)处理。结果表明,在正常生长条件下,T3转基因株系除了SOD含量外,测定的其他各种生理指标均与野生型无显著差异,T1转基因株系中只有POD和叶绿素含量与野生型中的有显著差异;而在氧化胁迫处理条件下,转BdDREB1-like基因的烟草植株相对于野生型具有较高的过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶和叶绿素的含量和较低的丙二醛和过氧化氢含量。这些结果表明,过表达BdDREB1-like基因增强了植物对氧化胁迫的耐受性。 展开更多
关键词 二穗短柄草 BdDREB1-like 表达载体构建 遗传转化
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