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易感线虫番茄品种Rutgers遗传转化体系的建立 预览
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作者 吴文涛 董莹 +3 位作者 邓人可 薛美静 张靖 王扬 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期92-97,共6页
【目的】旨在建立Rutgers番茹品种的遗传转化体系。【方法】以易感线虫番茹品种Rutgers为实验材料,采用农杆菌介导法,对无菌苗的苗龄、筛选培养基中Hyg的浓度大小、不定芽诱导培养基的激素配比和生根培养基4个方面进行优化,从而建立Rut... 【目的】旨在建立Rutgers番茹品种的遗传转化体系。【方法】以易感线虫番茹品种Rutgers为实验材料,采用农杆菌介导法,对无菌苗的苗龄、筛选培养基中Hyg的浓度大小、不定芽诱导培养基的激素配比和生根培养基4个方面进行优化,从而建立Rutgem品种的遗传转化体系。【结果】选择9~11 d的无菌苗的叶片分化愈伤组织的效果最好,筛选培养基中Hyg的浓度为10 mg/L时可以有效的筛选转基因的抗性芽,愈伤组织诱导不定芽培养基中最佳激素配比为6-BA2mg/L+IAA0.1 mg/Lo以1/2MS添加不同浹度IBA(0.05、0.1、0.15、0.20 mg/L)进行生根比较,再生芽在1/2 MS+IBA 0.1 mg/L生根培养基上生根最好。【结论】首次建立了Rutgers番茹品种的遗传转化体系,为番茄的抗根结线虫转基因育种打下基础。 展开更多
关键词 Rutgers番茹 农杆菌介导法 遗传转化 再生体系
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农杆菌介导的黑果枸杞遗传转化体系的建立
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作者 王静 唐静 +3 位作者 崔悦婷 陈韵 赵会君 闫兴富 《北方园艺》 CAS 北大核心 2020年第1期104-110,共7页
以黑果枸杞下胚轴为试材,采用农杆菌浸泡侵染法,建立简单有效的黑果枸杞遗传转化体系,以期为深入研究黑果枸杞基因功能提供参考依据。结果表明:成功构建pORE R1-35S:GUS:NOS质粒载体,并通过冻融法导入农杆菌GV3101。调整菌液浓度至OD600... 以黑果枸杞下胚轴为试材,采用农杆菌浸泡侵染法,建立简单有效的黑果枸杞遗传转化体系,以期为深入研究黑果枸杞基因功能提供参考依据。结果表明:成功构建pORE R1-35S:GUS:NOS质粒载体,并通过冻融法导入农杆菌GV3101。调整菌液浓度至OD600=0.5,侵染黑果枸杞下胚轴,经选择培养基筛选、PCR及GUS检测后,获得转基因阳性植株,转化阳性率为16%,通过驯化移栽后转基因植株均可成活。表明可通过农杆菌GV3101侵染黑果枸杞下胚轴实现外源基因的转化,且转化较高。 展开更多
关键词 农杆菌 黑果枸杞 下胚轴 遗传转化
过表达钾转运蛋白基因trkH提高玉米的钾营养 预览
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作者 丁宝娟 安利佳 苏乔 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期141-147,共7页
钾是植物生长发育必须的营养元素,参与多种生理生化过程。土壤缺钾严重影响了玉米的产量和品质,通过遗传改良的方式提高玉米的钾营养是解决这个问题的有效途径。本实验室前期从海洋微生物宏基因组DNA中克隆得到细菌钾转运蛋白基因trk H... 钾是植物生长发育必须的营养元素,参与多种生理生化过程。土壤缺钾严重影响了玉米的产量和品质,通过遗传改良的方式提高玉米的钾营养是解决这个问题的有效途径。本实验室前期从海洋微生物宏基因组DNA中克隆得到细菌钾转运蛋白基因trk H,在酵母和烟草中验证了功能。为进一步分析trk H基因在玉米中的功能,以Hi-Ⅱ基因型玉米为转化受体,采用农杆菌介导法将trk H基因转入玉米,获得具有Baster抗性的独立转化苗21株。PCR检测结果表明trk H基因已成功转入到玉米基因组中。Bar试纸条检测结果表明Bar基因在蛋白水平上成功表达。将部分T0代转基因植株与玉米骨干自交系PH6WC杂交,获得8个T1代株系,半定量RT-PCR检测结果表明转基因植株在转录水平上均能表达。三叶一心期喷洒除草剂进行筛选,选择比例接近1∶1的L3、L5和L7转基因株系进行PCR检测,统计检测结果并进行χ2测验,结果表明符合孟德尔分离定律。L3、L5和L7转基因株系玉米苗期的钾耗竭实验结果表明过表达trk H基因能够提高转基因玉米的K+吸收,为培育钾营养高效玉米新品种奠定基础。 展开更多
关键词 trkH 玉米 遗传转化 钾吸收
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冬小麦膨胀素基因EXPB7工程菌构建及纤维素水解作用分析 预览
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作者 周磊 李雅权 +12 位作者 徐永清 苗宇 贺付蒙 朱元芳 石奇海 武佳文 赵潇璨 李秀钰 冯哲 刘娣 冯艳忠 胡宝忠 李凤兰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第5期88-93,100,共7页
为了寻找促进纤维素降解的有效方法来提高纤维素酶的降解效率。本研究以东农冬麦1号膨胀素基因EXPB7为供体,构建黑曲霉表达载体,以黑曲霉CICC2462为受体,采用农杆菌介导法遗传转化黑曲霉,构建膨胀素基因黑曲霉工程菌pSZHGS-EXPB7,并对... 为了寻找促进纤维素降解的有效方法来提高纤维素酶的降解效率。本研究以东农冬麦1号膨胀素基因EXPB7为供体,构建黑曲霉表达载体,以黑曲霉CICC2462为受体,采用农杆菌介导法遗传转化黑曲霉,构建膨胀素基因黑曲霉工程菌pSZHGS-EXPB7,并对该工程菌发酵液的纤维素水解促进作用进行分析。结果表明,黑曲霉重组膨胀素蛋白在对滤纸处理2 d后崩解效果明显,与出发菌株的分泌蛋白相比,具有一定的促进作用;重组菌株发酵液上清处理滤纸产生的还原糖含量显著高于出发菌株(P<0.05),与仅用酶液处理滤纸相比,能够将纤维素酶的水解效率提高32.9%。 展开更多
关键词 膨胀素基因EXPB7 黑曲霉 遗传转化 纤维素水解
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黄梁木遗传转化受体系统对筛选物敏感性研究 预览
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作者 黄浩 韦莹 +2 位作者 翟勇进 白隆华 陈晓阳 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期58-64,共7页
【目的】明确农杆菌介导的黄梁木遗传转化体系对筛选物的敏感浓度,为黄梁木遗传转化研究奠定基础.【方法】以黄梁木子叶、胚轴和无菌苗为材料,探讨筛选物卡那霉素、潮霉素、头孢霉素对试验材料生长的影响,以及对农杆菌LBA4404的抑菌效... 【目的】明确农杆菌介导的黄梁木遗传转化体系对筛选物的敏感浓度,为黄梁木遗传转化研究奠定基础.【方法】以黄梁木子叶、胚轴和无菌苗为材料,探讨筛选物卡那霉素、潮霉素、头孢霉素对试验材料生长的影响,以及对农杆菌LBA4404的抑菌效果.[结果]在不定芽分化、生根阶段,卡那霉素的临界浓度分别为20、10 mg/L,潮霉素的临界浓度均为10 mg/L;当头孢霉素的浓度为100 mg/L时,完全抑制农杆菌生长,而且该浓度对黄梁木不定芽分化、生根影响较小.【结论】在黄梁木子叶和胚轴为试验材料的遗传转化体系中,20和10 mg/L的卡那霉素可作为不定芽分化、生根阶段的筛选选择压,10 mg/L的潮霉素可作为两个阶段的筛选选择压;而100~200 mg/L的头孢霉素可作为农杆菌LBA4404的抑菌浓度. 展开更多
关键词 黄梁木 遗传转化 筛选物 农杆菌 抗生素
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甘蓝型油菜如BnaA BI4基因CRISPR/Cas9编辑载体的构建及甘蓝型油菜转化
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作者 杨慧 胡信畅 +2 位作者 次央 阮颖 刘春林 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1144-1151,共8页
ABI4(Abscisic acid-insensitive 4)是ABA响应途径中重要的转录因子。本研究以甘蓝型油菜全基因组数据库为基础,借助拟南芥ABI4蛋白的氨基酸序列,通过序列比对,获得了甘蓝型油菜的2个BnaA BI4,分别命名为BnaA BI4-A(GenBank登录号为BnaA... ABI4(Abscisic acid-insensitive 4)是ABA响应途径中重要的转录因子。本研究以甘蓝型油菜全基因组数据库为基础,借助拟南芥ABI4蛋白的氨基酸序列,通过序列比对,获得了甘蓝型油菜的2个BnaA BI4,分别命名为BnaA BI4-A(GenBank登录号为BnaA03gl8970D)和BnaA BI4-C(GenBank登录号为BnaC03g725-10D)。在这两个基因的CDS序列上寻找一段长度为20bp、序列相同的片段作为基因编辑的目标位点,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体pCAMBIA1300-sgRNA/Cas9-BnaABI4;借助根癌农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化法,成功将BnaA BI4的基因编辑表达框转入甘蓝型油菜‘湘油15’中,共获得转基因植株13株,这将为深入研究甘蓝型油菜的生物学功能提供科学依据。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 BnaA BI4 CRISPR/Cas9 遗传转化
农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系研究进展
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作者 张婧 包爱科 +2 位作者 柴薇薇 刘林波 王锁民 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期931-943,共13页
紫花苜蓿(Medicago sativa)是一种优质的豆科牧草,其粗蛋白含量较高,适口性较好,被称为"牧草之王",在畜牧业生产中发挥着重要的作用。随着基因工程研究的深入,建立快速、高效的紫花苜蓿遗传转化体系是开展相关研究的首要前提... 紫花苜蓿(Medicago sativa)是一种优质的豆科牧草,其粗蛋白含量较高,适口性较好,被称为"牧草之王",在畜牧业生产中发挥着重要的作用。随着基因工程研究的深入,建立快速、高效的紫花苜蓿遗传转化体系是开展相关研究的首要前提。本综述围绕与遗传转化体系密切相关的基因型、外植体、农杆菌、表达载体和转化方案5个方面,归纳总结了近年来国内外报道的紫花苜蓿遗传转化体系研究进展、存在的问题和未来的研究方向,以期为紫花苜蓿遗传转化体系的优化提供有益信息。 展开更多
关键词 农杆菌 紫花苜蓿 遗传转化 影响因素
细叶百合LpWRKY20基因对非生物胁迫的响应及抗旱性分析 预览
8
作者 杨柳慧 尹航 +3 位作者 黄沁梅 张彦妮 何淼 周蕴薇 《草业学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期193-202,共10页
以细叶百合LpWRKY20基因为研究对象,通过荧光定量(qRT-PCR)分析该基因在不同非生物胁迫中的表达,结果表明,在不同非生物胁迫中该基因表达量存在差异。利用叶盘法将pBI121-LpWRKY20-GFP植物表达载体转入烟草并获得转基因株系。在干旱胁... 以细叶百合LpWRKY20基因为研究对象,通过荧光定量(qRT-PCR)分析该基因在不同非生物胁迫中的表达,结果表明,在不同非生物胁迫中该基因表达量存在差异。利用叶盘法将pBI121-LpWRKY20-GFP植物表达载体转入烟草并获得转基因株系。在干旱胁迫条件下,转基因植株的表型优于野生型;转基因植株超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性均高于野生型,且随着时间的延长这种清除体内自由基的能力在显著升高,而丙二醛(MDA)含量均低于野生型,说明转基因植株细胞膜受损程度较低,具有较强的自我修复能力。干旱条件下表型及生理指标的变化均表明转基因植株具有较强的抗旱性,初步推断LpWRKY20具有抗旱的功能。 展开更多
关键词 细叶百合 LpWRKY20 非生物胁迫 遗传转化 抗旱性
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小麦钙调素基因TaCaM1分子特征及转化烟草植株对低磷胁迫的反应 预览
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作者 王卓 史美华 +3 位作者 宋文腾 马自飞 路文静 肖凯 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期17-23,共7页
钙信号转导途径在介导植物应答和适应环境逆境中发挥重要作用。本试验以前期鉴定的对低磷逆境产生应答的小麦钙调素基因TaCaM1为基础,对该基因分子特征、应答低磷胁迫表达模式及介导植株抵御低磷逆境的生物学功能进行了研究。结果表明,T... 钙信号转导途径在介导植物应答和适应环境逆境中发挥重要作用。本试验以前期鉴定的对低磷逆境产生应答的小麦钙调素基因TaCaM1为基础,对该基因分子特征、应答低磷胁迫表达模式及介导植株抵御低磷逆境的生物学功能进行了研究。结果表明,TaCaM1基因与部分植物种属CaM家族基因高度同源,基因编码蛋白含有植物种属CaM家族蛋白含有的保守结构域,该基因翻译蛋白经内质网分选后定位在细胞质中。低磷胁迫下,根系中该基因的转录本数量随胁迫进程不断减少,复磷后低磷下调的基因表达不断上调。基因转化结果表明,丰磷条件下,上、下调表达株系的植株生长、干鲜重、含磷量和磷累积量以及细胞保护参数与野生型对照相比表现相似;低磷处理下,与对照相比,转化株系的植株生长和上述生理生化参数发生明显改变,表现为正义系Sen-1植株长势变差,磷累积量减少,部分保护酶活性下降,丙二醛含量增加;而反义系Anti-1植株长势增强,磷累积量增多,细胞保护酶活性提高,丙二醛含量减少。研究表明,TaCaM1通过下调响应低磷逆境,在植株抵御低磷逆境中发挥重要的负调控效应。 展开更多
关键词 钙调素基因 分子特征 表达特征 遗传转化
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根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展 预览
10
作者 李俊香 古勤生 《江苏农业科学》 2020年第3期43-49,共7页
根癌农杆菌介导的遗传转化是近20年来真菌研究的主要技术之一。农杆菌介导转化(ATMT)技术已广泛应用于随机突变试验中,以确定哪些基因是真菌与昆虫、植物、哺乳动物甚至其他真菌的致病相关基因。该技术广泛地应用于正向和反向遗传学,使... 根癌农杆菌介导的遗传转化是近20年来真菌研究的主要技术之一。农杆菌介导转化(ATMT)技术已广泛应用于随机突变试验中,以确定哪些基因是真菌与昆虫、植物、哺乳动物甚至其他真菌的致病相关基因。该技术广泛地应用于正向和反向遗传学,使得许多真菌基因功能得以阐明。尽管ATMT技术影响深远,但该技术作为一种转化工具在真菌中的应用并不均衡。本文综述了ATMT技术在发掘真菌功能基因方面的最新进展,以及它的优点和局限性。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 丝状真菌 遗传转化 ATMT技术
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紫花苜蓿基因工程改良研究进展 预览
11
作者 边佳辉 刘自扬 +6 位作者 李宗英 赵媛媛 唐益雄 孙占敏 吕嘉卫 张金林 吴燕民 《草业科学》 CAS CSCD 2020年第1期139-155,共17页
紫花苜蓿(Medicago sativa)具有适应性强、蛋白含量高、适口性好和营养价值丰富等特点,是全球栽培面积最大的优良牧草。随着生物技术的快速发展,利用基因工程改良紫花苜蓿已成为国内外研究的热点。本文就紫花苜蓿载体介导法、DNA直接导... 紫花苜蓿(Medicago sativa)具有适应性强、蛋白含量高、适口性好和营养价值丰富等特点,是全球栽培面积最大的优良牧草。随着生物技术的快速发展,利用基因工程改良紫花苜蓿已成为国内外研究的热点。本文就紫花苜蓿载体介导法、DNA直接导入法和种质系统介导法三类转化方法和抗生物胁迫、抗非生物胁迫、抗除草剂、品质改良及生物反应器开发五方面的转基因与遗传改良研究进行了全面的综述与分析,并对其应用前景及相关安全性等问题进行了展望,以期为紫花苜蓿基因工程改良的后续研究提供参考与借鉴。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 基因工程 遗传转化 性状改良
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芦笋茎尖遗传转化体系的建立与优化 预览
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作者 张园 刘正杰 +5 位作者 林春 闫亚泽 袁加红 王入 毛自朝 杨焕文 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期109-116,共8页
通过优化根癌农杆菌EHA105(含有pBI121表达载体)介导的茎尖遗传转化条件,包括抑菌抗生素类型及浓度、农杆菌浓度、侵染时间、共培养时间、卡那霉素浓度等影响因素,建立芦笋品种‘达宝利’遗传转化体系。以0.1~0.3 cm长的芦笋茎尖为转化... 通过优化根癌农杆菌EHA105(含有pBI121表达载体)介导的茎尖遗传转化条件,包括抑菌抗生素类型及浓度、农杆菌浓度、侵染时间、共培养时间、卡那霉素浓度等影响因素,建立芦笋品种‘达宝利’遗传转化体系。以0.1~0.3 cm长的芦笋茎尖为转化受体,用MS液体培养基(MS+蔗糖3%+乙酰丁香酮150μmol·L-1)悬浮菌体至OD 600为0.6,侵染茎尖15 min,20℃避光共培养4 d;抗性茎尖在筛选培养基(1/2 MS+IBA 0.5 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1+嘧啶醇0.5 mg·L^-1+羧苄青霉素200 mg·L^-1+卡那霉素50 mg·L^-1)上诱导长芽与生根,可获得抗性植株,经PCR、GUS组织化学染色和qRT-PCR检测,获得阳性植株。 展开更多
关键词 芦笋 茎尖 遗传转化 参数优化 GUS QRT-PCR
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枣树遗传转化研究进展 预览
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作者 周义杰 姜梦嫣 +3 位作者 闫希焕 高亭豪 杨明峰 马兰青 《北京农学院学报》 2019年第1期107-112,共6页
【目的】枣树是中国第一大干果树种,具有重要的经济价值和生态价值。枣树长期面临着病害严重、育种缓慢等问题,急需定向培育优良品种。【方法】枣树遗传转化一般使用农杆菌介导法,通过对遗传转化过程中的各因素进行优化,可以有效提高遗... 【目的】枣树是中国第一大干果树种,具有重要的经济价值和生态价值。枣树长期面临着病害严重、育种缓慢等问题,急需定向培育优良品种。【方法】枣树遗传转化一般使用农杆菌介导法,通过对遗传转化过程中的各因素进行优化,可以有效提高遗传转化效率。得到转基因植株后要验证目的基因是否整合到植物基因组并能够发挥预期的功能,验证通过后再进行后续的炼苗移栽等工作。【结果】通过枣树遗传转化试验,可以定向改良枣树品种,缩短育种年限,培育出符合实际需求的新品种。【结论】综述中国枣树遗传转化的方法和成果,总结比较枣树遗传转化过程中各个影响因素的作用,为利用基因工程手段进行枣树品种改良提供借鉴。 展开更多
关键词 枣树 遗传转化 转化验证
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根癌农杆菌介导观赏羽衣甘蓝遗传转化体系优化 预览
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作者 王欢 付小蕾 +1 位作者 毛洪玉 祝朋芳 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期543-549,共7页
为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体... 为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体的再生体系。将播种后6d的子叶于最适再生培养基上进行黑暗预培养,以根瘤农杆菌为介导侵染子叶后,于黑暗条件下进行农杆菌与植物材料的共培养。随后转入含有头孢霉素的抑菌培养基中进行抑菌培养,再将子叶移入含有卡那霉素浓度的筛选培养基中进行抗性芽选择,并提取植物基因组DNA进行目的基因的PCR验证,从而建立高效的羽衣甘蓝遗传转化体系。结果表明:最佳的外植体是羽衣甘蓝的子叶,在培养基MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1上,不定芽分化率可达100%;子叶经2~3d预培养,将OD600值为0.3~0.5的携带DFR基因表达载体的农杆菌菌液离心,以50mL MS重悬液重悬,侵染外植体5min,共培养2d;采用头孢霉素300mg·L^-1,抑菌培养3d后,采用10mg·L^-1卡那霉素进行抗性芽选择。在播种后30~40d共获得了24个抗性芽,以抗性芽的基因组DNA为模板进行PCR扩增,9株呈DFR阳性,显示外源基因已经成功整合到羽衣甘蓝基因组中,平均转化率为37.5%。本研究结果可以为羽衣甘蓝重要性状基因的遗传转化提供依据。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 羽衣甘蓝 遗传转化 外植体
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川乌头F3′5′H基因在矮牵牛中的遗传转化及功能分析
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作者 马璐琳 崔光芬 +4 位作者 贾文杰 王祥宁 段青 杜文文 王继华 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2892-2898,共7页
类黄酮3’,5’羟基化酶(flavonid-3’, 5’-hydroxylase, F3’5’H)是花色素苷合成途径中催化蓝色花色素飞燕草色素合成的关键酶。为验证川乌头(Aconitum carmichaeli Debx.) Ac-F3′5′H基因的催化功能,构建了该基因的植物过表达载体,... 类黄酮3’,5’羟基化酶(flavonid-3’, 5’-hydroxylase, F3’5’H)是花色素苷合成途径中催化蓝色花色素飞燕草色素合成的关键酶。为验证川乌头(Aconitum carmichaeli Debx.) Ac-F3′5′H基因的催化功能,构建了该基因的植物过表达载体,利用农杆菌介导法将Ac-F3′5′H遗传转化矮牵牛。通过抗性筛选共得到6株在潮霉素抗性培养基上可正常生长的矮牵牛植株,经PCR和RT-PCR验证共得到5株转基因阳性植株,其中2株中目标基因表达量相对较高。相比对照,这2株转基因矮牵牛阳性植株花色变化较明显,由粉色变为紫蓝色,表明该基因可催化合成一定的蓝色花色素。该结果将为观赏植物蓝色花色分子育种工作提供一定的科学依据。 展开更多
关键词 川乌头 Ac-F3′5′H基因 遗传转化 功能验证
红曲霉LovD基因的克隆及转基因高产洛伐他汀菌株筛选 预览
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作者 沈小瑞 王钰 陈达伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期23-25,共3页
通过紫外诱变筛选出的高产洛伐他汀红曲霉菌株M120-1为出发菌株,提取红曲霉菌株总RNA,通过RT-PCR技术克隆LovD基因,构建表达载体,对红曲霉进行遗传转化;通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀转化菌株。结果表明:提取红曲霉总RNA并建立表... 通过紫外诱变筛选出的高产洛伐他汀红曲霉菌株M120-1为出发菌株,提取红曲霉菌株总RNA,通过RT-PCR技术克隆LovD基因,构建表达载体,对红曲霉进行遗传转化;通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀转化菌株。结果表明:提取红曲霉总RNA并建立表达载体,随机挑选出12个转化子,经PCR鉴定,有10株成功得到转化。对其进行培养并通过HPLC法测定洛伐他汀产量,其中一株转化菌株的洛伐他汀产量为0.55mg/mL,比出发菌株产量高63%。对该菌株进行传代培养,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 红曲霉 洛伐他汀 根癌农杆菌 遗传转化
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千里光组织培养体系的构建与遗传转化
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作者 王丽平 谌琴琴 +2 位作者 梁瑾 杨攀攀 王强 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期6000-6005,共6页
传统药材千里光化学成分复杂,富含生物碱、黄酮和萜类等化合物,极具药用价值。为了提高千里光次生代谢产物的含量,增加千里光药用价值,实现千里光资源的科学利用,本研究进行了千里光组织培养体系的构建和遗传转化初探。本实验以千里光... 传统药材千里光化学成分复杂,富含生物碱、黄酮和萜类等化合物,极具药用价值。为了提高千里光次生代谢产物的含量,增加千里光药用价值,实现千里光资源的科学利用,本研究进行了千里光组织培养体系的构建和遗传转化初探。本实验以千里光幼嫩茎叶为外植体,通过不同浓度6-BA和NAA的组合,得到最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,出愈率达92%;得到最佳分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,出芽率为88%;得到最佳不定芽诱导生根的培养基是MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,生根率为67%。采用农杆菌介导法,将外源报告基因GUS (β-glucuronidase)转入愈伤组织,经组织化学染色法鉴定了GUS的表达,表明GUS基因成功转入了千里光愈伤组织。本实验通过诱导千里光幼嫩茎叶形成愈伤组织,进而分化形成再生植株,同时经农杆菌浸染愈伤组织探索了千里光遗传转化方法,为后续的研究提供了依据。 展开更多
关键词 千里光(Senecio scandens) 组织培养 遗传转化 农杆菌介导法 GUS基因
农杆菌介导黄瓜Tril基因转化及体系优化 预览
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作者 肖婷婷 杜慧 +7 位作者 潘健 孙敬贤 陈岳 张乐钰 潘俊松 王刚 何欢乐 蔡润 《上海交通大学学报:农业科学版》 2019年第3期17-22,28共7页
采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株... 采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株阳性率为0.33%;分化培养基中6-BA适宜浓度为0.5mg/L,出芽率最高(76.33%),平均出芽天数最短(19.66d);生根培养基中Kan浓度为60mg/L时筛选效果最好。3种筛选方式的研究表明,仅在生根培养基中添加Kan(60mg/L)筛选,其转化周期最短(45d),阳性率最高(达4.0%)。 展开更多
关键词 黄瓜 6-苄氨基腺嘌呤 卡那霉素 遗传转化
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拟南芥的遗传转化 预览
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作者 刘晓丽 魏楠 《河南农业》 2019年第27期45-46,共2页
通过构建重组表达载体,转化农杆菌制作浸染液,实现农杆菌介导法进行目的基因的拟南芥遗传转化,将目的基因转入到野生型拟南芥中。通过筛选和鉴定后,得到阳性的转基因植株,最终得到纯合T3代转基因株系。后续可以通过对纯合转基因株系和... 通过构建重组表达载体,转化农杆菌制作浸染液,实现农杆菌介导法进行目的基因的拟南芥遗传转化,将目的基因转入到野生型拟南芥中。通过筛选和鉴定后,得到阳性的转基因植株,最终得到纯合T3代转基因株系。后续可以通过对纯合转基因株系和野生型拟南芥进行比较鉴定,即可推断目的基因在拟南芥中的功能。 展开更多
关键词 拟南芥 遗传转化 实验
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杉木 ClLAR 基因的克隆及遗传转化拟南芥 预览
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作者 王培 张家君 +4 位作者 吕蒙蒙 理挪 马志慧 陈宇 林思祖 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期1-9,共9页
为探究杉木种子发育过程中无色花青素还原酶(LAR)基因在类黄酮生物合成途径中对原花青素(PA)合成的分子调控机制,以杉木种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法成功克隆到杉木ClLAR基因全长,该基因的cDNA全长为1625bp,具有1个1242bp... 为探究杉木种子发育过程中无色花青素还原酶(LAR)基因在类黄酮生物合成途径中对原花青素(PA)合成的分子调控机制,以杉木种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法成功克隆到杉木ClLAR基因全长,该基因的cDNA全长为1625bp,具有1个1242bp的开放阅读框(ORF),编码413个氨基酸。构建pCambia3301-ClLAR植物表达载体,运用冻融法将重组质粒转至农杆菌GV3101,通过花序侵染法获得拟南芥转基因植株,利用Basta溶液和PCR验证筛选出阳性苗,确定目的基因ClLAR已整合至拟南芥基因组中。研究结果为深入分析杉木ClLAR基因调控PA合成的分子机制和ClLAR蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 杉木 ClLAR 基因克隆 序列分析 载体构建 遗传转化
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