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黑逍遥散对阿尔茨海默病模型小鼠Ca^2+-CaM/CaMKⅡα信号通路关键因子表达的影响 预览
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作者 马春林 吴红彦 +2 位作者 兰美华 程坚 段永强 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2019年第10期50-54,共5页
目的观察黑逍遥散对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经元Ca^2+浓度和钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响。方法30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称重后,按随机原则分为模型组、阳性对照组和黑逍遥散组,每组10只。另取1... 目的观察黑逍遥散对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经元Ca^2+浓度和钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响。方法30只APP/PS1双转基因雄性小鼠称重后,按随机原则分为模型组、阳性对照组和黑逍遥散组,每组10只。另取10只同月龄、同种系野生型C57BL/6雄性小鼠为空白组。各给药组给予相应药物干预,连续3个月,采用钙荧光探针结合激光共聚焦显微镜技术检测海马神经元Ca^2+浓度,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术分别检测小鼠海马区CaM、CaMKⅡα基因和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠海马神经元Ca^2+浓度显著升高,CaM基因和蛋白表达显著升高,CaMKⅡα基因和蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,各给药组小鼠海马神经元Ca^2+浓度显著降低,CaM基因和蛋白表达显著降低,CaMKⅡα基因和蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论黑逍遥散通过调节模型小鼠海马Ca^2+-CaM/CaMKⅡα信号通路关键因子表达而发挥防治AD的作用。 展开更多
关键词 黑逍遥散 阿尔茨海默病 海马组织 CA^2+浓度 钙调蛋白 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱα 小鼠
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钙调蛋白激酶Ⅱ的结构及其在神经系统中的作用
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作者 王彤彤 陈治池 +4 位作者 叶鑫 傅维达 陈梦娇 李俊楠 孙臣友 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期395-399,共5页
钙离子(Ca2+)是通过局部信号获得特异性刺激的关键细胞内信使分子。Ca2+结合蛋白,如钙调蛋白(CaM)及其靶蛋白是Ca 2+依赖性反应信号传导的关键靶点。钙/钙调蛋白依赖性蛋白酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种多聚体酶,它是哺乳动物前脑总蛋白的重要组... 钙离子(Ca2+)是通过局部信号获得特异性刺激的关键细胞内信使分子。Ca2+结合蛋白,如钙调蛋白(CaM)及其靶蛋白是Ca 2+依赖性反应信号传导的关键靶点。钙/钙调蛋白依赖性蛋白酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种多聚体酶,它是哺乳动物前脑总蛋白的重要组成部分,并且是形成突触后致密部的主要成分。近年来国内外研究显示,CaMKⅡ包含α、β、γ和δ4种亚型,其中α和β主要在神经组织中表达,而γ和δ则在全身多种组织均有表达,它们参与特定的突触可塑性和记忆巩固过程,对神经系统的兴奋性及一些神经系统疾病的发生起重要作用。前期也有研究表明CaMKⅡδ在促进神经元存活中起重要作用。本文就CaMKⅡ的结构及其在神经系统中的作用和与相关神经系统疾病的关系作一综述。 展开更多
关键词 离子 钙调蛋白 钙调蛋白激酶Ⅱ
CaMKⅡ和PLB在房颤心房重构中的作用及意义
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作者 曹哲哲 马瑞彦 +2 位作者 蹇朝 唐富琴 肖颖彬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期243-246,共4页
目的分析风湿性心脏病(风心病)患者右心房组织受磷蛋白(phospholamban,PLB)及其调节蛋白钙调蛋白(CaMKⅡ)的mRNA水平、蛋白及磷酸化水平,探讨CaMKⅡ和PLB在心房纤颤(房颤)与心房重构中的作用机制。方法收集本院2017年7-10月30例风心病... 目的分析风湿性心脏病(风心病)患者右心房组织受磷蛋白(phospholamban,PLB)及其调节蛋白钙调蛋白(CaMKⅡ)的mRNA水平、蛋白及磷酸化水平,探讨CaMKⅡ和PLB在心房纤颤(房颤)与心房重构中的作用机制。方法收集本院2017年7-10月30例风心病患者右心房组织标本[男性12例,女性18例,年龄24~68(50. 8±11. 4)岁],其中窦性心律组11例,房颤心律组19例。RTPCR检测两组CaMKⅡ和PLB的mRNA,Western blot检测两组CaMKⅡp286、PLBp17和PLB的表达情况。结果与窦性心律组比较,房颤心律组CaMKⅡ(0. 006±0. 003)和PLB(1. 704±1. 008)的基因表达量均显著增加(P <0. 05),CaMKⅡp286(0. 812±0. 227)和PLBp17(0. 649±0. 354)蛋白水平显著增加(P <0. 05),而PLB蛋白水平则显著降低(0. 886±0. 364,P <0. 05)。结论心房组织内CaMKⅡ和PLB的mRNA水平以及CaMKⅡp286和PLBp17的水平与房颤呈正相关,从而PLB单体水平降低,调节PLB来调控心房肌细胞钙离子循环有望成为房颤心房重构治疗的靶点。 展开更多
关键词 钙调蛋白 受磷蛋白 心房重构 心房纤颤
两种肌萎缩侧索硬化基因表达谱差异性比较 预览 被引量:1
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作者 林启鹏 朱茜 马立伟 《武警医学》 CAS 2019年第2期124-127,共4页
目的比较肌萎缩侧索硬化的两种不同基因突变型(C9orf72与CHMP2B)表达谱差异来探讨该类疾病可能的发病机制及治疗靶点。方法从GEO数据库中下载C9orf72基因突变肌萎缩侧索硬化数据集(GSE68605)及CHMP2B基因突变肌萎缩侧索硬化数据集(GSE19... 目的比较肌萎缩侧索硬化的两种不同基因突变型(C9orf72与CHMP2B)表达谱差异来探讨该类疾病可能的发病机制及治疗靶点。方法从GEO数据库中下载C9orf72基因突变肌萎缩侧索硬化数据集(GSE68605)及CHMP2B基因突变肌萎缩侧索硬化数据集(GSE19332)。使用R软件(3. 5. 0版本)、Cytoscape 3. 6. 1软件及在线工具(DAVID及STRING)进行数据分析。结果从两个数据集中,获得了11个样本,其中8个为C9orf72基因突变,3个为CHMP2B基因。发现了13个差异表达基因,在GO及KEGG功能富集分析中发现仅有CALM1-3及RYR2富集在钙离子检测、通过钙离子释放的调节影响心肌的收缩功能等。其中钙调蛋白是引起C9orf72基因突变肌萎缩侧索硬化及CHMP2B基因突变肌萎缩侧索硬化差异的关键蛋白。结论 CALM基因在C9orf72基因突变肌萎缩侧索硬化患者中高表达,钙调蛋白可能是诊断及治疗C9orf72基因突变肌萎缩侧索硬化患者的重要靶点。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化 C9orf72 CHMP2B CALM 钙调蛋白
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外源Ca^2+提高百合耐热性的生理机制初探 预览
5
作者 张铭顺 吕福堂 +3 位作者 褚鹏飞 吴泽 义鸣放 曹兴 《河南农业科学》 北大核心 2019年第2期120-125,共6页
为探讨Ca^2+对百合耐热性的影响及其生理机制,以东方百合杂种系西伯利亚为试验材料,研究CaCl2、钙离子螯合剂EGTA、钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(TFP)处理对40℃高温胁迫下百合热害指数、抗性相关生理指标和相关热响应基因表达的影响。结果表... 为探讨Ca^2+对百合耐热性的影响及其生理机制,以东方百合杂种系西伯利亚为试验材料,研究CaCl2、钙离子螯合剂EGTA、钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(TFP)处理对40℃高温胁迫下百合热害指数、抗性相关生理指标和相关热响应基因表达的影响。结果表明,高温胁迫下,15mmol/LCaCl2处理能够减缓膜透性的加大、叶绿素的降解和丙二醛的积累,提高脯氨酸、可溶性蛋白含量和超氧化物歧化酶活性,促进热响应基因LoCaM3和LoHsfA3a的表达,从而提高植株的耐热性,降低热害指数。10mmol/LEGTA和200μmol/LTFP的作用则相反。表明作为植物生长所必需的大量元素,Ca^2+也可能通过Ca^2+-CaM信使系统提高渗透调节能力、抗氧化能力、光合能力和蛋白质活性,以维持细胞稳态来调节百合对高温逆境的适应性。 展开更多
关键词 百合 CA^2+ 耐热性 生理机制 钙调蛋白
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CaMKⅡ调控NaV1.1与CaM的结合
6
作者 杨春宇 李佳宁 +3 位作者 徐晓雪 于清喜 张聪聪 马海英 《解剖科学进展》 2019年第4期357-360,共4页
目的探讨钙调蛋白激酶CaMKⅡ对电压门控性钠通道NaV1.1结合钙调蛋白CaM的调节功能,分析CaMKⅡ在不同Ca2+浓度下对二者结合的影响,进一步探讨CaMKⅡ、Ca2+对CaM结合NaV1.1的共同调节作用。方法应用pull-down技术检测不同Ca2+浓度下经过C... 目的探讨钙调蛋白激酶CaMKⅡ对电压门控性钠通道NaV1.1结合钙调蛋白CaM的调节功能,分析CaMKⅡ在不同Ca2+浓度下对二者结合的影响,进一步探讨CaMKⅡ、Ca2+对CaM结合NaV1.1的共同调节作用。方法应用pull-down技术检测不同Ca2+浓度下经过CaMKⅡ磷酸化处理后NaV1.1IQ与CaM的结合情况。结果无钙条件下,CaMKⅡ不影响CaM与NaV1.1IQ的结合;有钙条件下,CaMKⅡ使CaM与NaV1.1结合增加。结论钙离子存在时,CaMKⅡ磷酸化作用使NaV1.1与CaM结合增加。 展开更多
关键词 钙调蛋白 pull-down NaV1.1 IQ 离子 CaMKⅡ 磷酸化
亚低温干预对大鼠颅脑创伤后钙调蛋白表达和脑水肿的影响 预览
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作者 廖帅 郑晓梅 +7 位作者 丁华强 汪棋笙 张烨 何济民 李祥龙 陈礼刚 江涌 刘亮 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第8期815-820,共6页
目的亚低温治疗颅脑创伤是针对颅脑创伤有效的脑保护措施。文中旨在探讨亚低温干预对大鼠颅脑创伤模型钙调蛋白表达和脑水肿的影响。方法选取90只成年SD大鼠,随机分为假手术组(37℃,仅开骨窗,不打击)、常温组(37℃,开骨窗后打击制作颅... 目的亚低温治疗颅脑创伤是针对颅脑创伤有效的脑保护措施。文中旨在探讨亚低温干预对大鼠颅脑创伤模型钙调蛋白表达和脑水肿的影响。方法选取90只成年SD大鼠,随机分为假手术组(37℃,仅开骨窗,不打击)、常温组(37℃,开骨窗后打击制作颅脑创伤模型)及亚低温组[(32±0.5)℃,开骨窗后打击制作颅脑创伤模型],每组30只。每组各取6只大鼠于1、3、5、7d行改良神经功能评分(mNSS),其余分别于6、12、24、48h行头颅MRI后取脑组织,分别采用荧光定量PCR、免疫组化和Western-blot检测各组大鼠脑组织中钙调蛋白基因转录和蛋白表达情况。结果亚低温组、常温组各时间点mNSS评分较假手术组明显升高(P<0.05);亚低温组较常温组明显降低(P<0.05)。亚低温组6、12、24h钙调蛋白mRNA(1.83±0.19、1.72±0.12、1.59±0.06)较常温组(2.76±0.25、2.49±0.18、2.04±0.14)表达减少(P<0.05),亚低温组48h钙调蛋白mRNA(1.60±0.07)较常温组(1.65±0.09)差异无统计学意义。亚低温组、常温组各时间点钙调蛋白、钙调蛋白mRNA表达较假手术组明显上调(P<0.05),亚低温组蛋白表达较常温组下降(P<0.05)。亚低温组6、12、24、48h脑组织损伤水肿区体积[(32.14±4.52)、(36.52±4.10)、(42.10±4.38)、(46.25±5.02)mm^3]较常温组[(48.56±5.35)、(53.13±6.31)、(59.23±6.82)、(62.35±7.25)mm^3]明显降低(P<0.05)。结论亚低温干预治疗能改善颅脑创伤后大鼠神经功能,明显降低大鼠颅脑创伤后的钙调蛋白表达和脑水肿,可能与亚低温的神经保护机制有关。 展开更多
关键词 颅脑创伤 亚低温 钙调蛋白 脑水肿 脑保护
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇与黄曲霉毒素B1单一及联合染毒对小鼠神经递质分泌和钙稳态的影响 预览
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作者 刘秦 储小燕 +7 位作者 刘锦芳 张娅菲 朱雷 张咪 冯士彬 李玉 吴金节 王希春 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期912-921,共10页
本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与黄曲霉毒素B1(AFB1)单一及联合染毒对小鼠神经递质分泌和钙稳态的影响。选取96只18日龄昆明系雄性小鼠,随机分成4组,每组24只,每天分别进行灌胃染毒,对照组灌服生理盐水,DON组灌服500μg/kg DON... 本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与黄曲霉毒素B1(AFB1)单一及联合染毒对小鼠神经递质分泌和钙稳态的影响。选取96只18日龄昆明系雄性小鼠,随机分成4组,每组24只,每天分别进行灌胃染毒,对照组灌服生理盐水,DON组灌服500μg/kg DON,AFB1组灌服200μg/kg AFB1,DON+AFB1组灌服200μg/kg AFB1+500μg/kg DON。试验期45 d。分别于试验第0天(试验开始前)、第15天、第30天、第45天每组选取6只小鼠进行剖杀,取脑组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测神经递质、钙离子(Ca2+)和钙调蛋白(CaM)含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CaM mRNA的表达量,Western blotting法检测钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMKⅡ)蛋白表达量。结果显示:在各时间点与对照组相比,DON+AFB1组小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)、谷氨酸(Glu)、乙酰胆碱(ACH)含量显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01),多巴胺(DA)、Ca2+、CaM含量极显著下降(P<0.01),CaM mRNA表达量(第45天除外)极显著下降(P<0.01),磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶(p-CaMKⅡ)蛋白表达量/CaMKⅡ蛋白表达量极显著升高(P<0.01);DON组和AFB1组小鼠脑组织中5-HT、ACH含量显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01),Ca2+含量极显著下降(P<0.01),CaM mRNA表达量(第45天除外)显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01),p-CaMKⅡ蛋白表达量/CaMKⅡ蛋白表达量极显著升高(P<0.01)。试验结果表明,DON与AFB1单一及联合染毒均可造成小鼠脑组织中神经递质分泌紊乱和钙稳态失衡,DON和AFB1的联合毒性大于单一毒性,两者具有协同效应。 展开更多
关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 黄曲霉毒素B1 神经递质 钙调蛋白 小鼠
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电针“委中”对多裂肌损伤模型大鼠钙调蛋白信号通路的影响 预览
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作者 白玉琢 徐菁 +6 位作者 陈洁 张佳怡 许玥 鲁曼 李欣怡 霍泽军 张莉 《湖南中医药大学学报》 CAS 2019年第4期503-506,共4页
目的探讨多裂肌损伤后,电针"委中"干预对多裂肌损伤过程中钙调蛋白信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为空白组、模型1d组、模型3d组、电针1d组、电针3d组,每组8只。电针组双侧"委中"电针,于治疗的第1、3天各组同步... 目的探讨多裂肌损伤后,电针"委中"干预对多裂肌损伤过程中钙调蛋白信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为空白组、模型1d组、模型3d组、电针1d组、电针3d组,每组8只。电针组双侧"委中"电针,于治疗的第1、3天各组同步取材,采用酶联免疫吸附法检测多裂肌、脊髓、海马组织中CaM、CaMKⅡ、iNOS的含量。结果模型1d和3d组,多裂肌、脊髓、海马CaM、CaMKⅡ含量显著高于空白组(P<0.01);多裂肌、脊髓、海马iNOS含量高于空白组(P<0.05或P<0.01)。电针1d后,多裂肌、脊髓、海马CaM、CaMKⅡ、iNOS含量显著低于模型1d组(P<0.05或P<0.01)。电针3d后,多裂肌、脊髓、海马CaM、CaMKⅡ、iNOS含量低于模型3d组(P<0.05或P<0.01)。电针3d后,脊髓、海马CaM、CaMKⅡ及多裂肌CaMKⅡ含量显著低于电针1d组(P<0.01),多裂肌CaM、iNOS和脊髓、海马iNOS含量与电针1d组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论多裂肌损伤早期,电针"委中"干预可通过抑制CaM、CaMKⅡ的过度激活,减少组织中iNOS的过多产生,减轻组织炎症损伤。 展开更多
关键词 多裂肌 脊髓 电针 委中 海马 钙调蛋白
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钙调蛋白对电压门控性钠通道NaV 1.1的调节作用
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作者 年青洋 李佳宁 +7 位作者 佟欣 邓海东 贾婉莹 赵东仪 刘君妍 张诗琪 张晓红 郭凤 《解剖科学进展》 2019年第2期213-215,219共4页
目的探讨钙调蛋白对通道的调节功能,分析钙调蛋白与NaV1.1 IQ在不同Ca^2+离子浓度下的结合情况,进一步探讨钙调蛋白和NaV1.1结合的Ca2+依赖性。方法应用pull-down技术检测不同Ca^2+离子浓度下NaV1.1 IQ与钙调蛋白及其突变体的结合情况... 目的探讨钙调蛋白对通道的调节功能,分析钙调蛋白与NaV1.1 IQ在不同Ca^2+离子浓度下的结合情况,进一步探讨钙调蛋白和NaV1.1结合的Ca2+依赖性。方法应用pull-down技术检测不同Ca^2+离子浓度下NaV1.1 IQ与钙调蛋白及其突变体的结合情况。结果 CaM野生型与Nav1.1 IQ基序的结合随着钙浓度和CaM浓度的增加而增高,而CaM 1234与Nav1.1 IQ的结合也随着CaM1234浓度的增加而增高,但在不同钙浓度下的结合无变化。结论 CaM野生型和CaM1234对电压门控性钠通道Nav1.1具有调节作用。 展开更多
关键词 钙调蛋白 pull-down NaV1.1 IQ 离子
半夏钙调蛋白基因的克隆与表达分析
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作者 刘兴 代欢欢 +3 位作者 山雨思 杨怡 廖志华 吴能表 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期2777-2784,共8页
该研究根据半夏转录组数据,克隆获得2条半夏钙调蛋白基因,分别命名为Pt Ca M1和Pt Ca M2。生物信息学分析表明,Pt Ca M1,Pt Ca M2基因的完整开放阅读框均为450 bp,编码149个氨基酸,两者编码区序列一致性为80%,氨基酸序列一致性为91%,且... 该研究根据半夏转录组数据,克隆获得2条半夏钙调蛋白基因,分别命名为Pt Ca M1和Pt Ca M2。生物信息学分析表明,Pt Ca M1,Pt Ca M2基因的完整开放阅读框均为450 bp,编码149个氨基酸,两者编码区序列一致性为80%,氨基酸序列一致性为91%,且均含有EF-hand结构域,属于Ca M家族。采用实时荧光定量PCR分析Pt Ca Ms在不同组织和不同处理中的表达模式,结果表明Pt Ca M1,Pt Ca M2基因均在块茎中表达量最高;外源Ca Cl2处理后Pt Ca Ms的表达量与对照相比显著升高,钙离子鳌合剂EGTA、钙离子通道抑制剂La Cl3以及钙调蛋白拮抗剂TFP处理后其表达量逐渐降低。该研究从半夏中成功克隆得到Pt Ca Ms基因,为深入探索Pt Ca Ms基因功能特点和半夏生物碱合成的研究奠定基础。 展开更多
关键词 半夏 钙调蛋白 基因克隆 表达分析
烟曲霉钙调蛋白的红色荧光蛋白标记及其在菌株极性生长的动态分布
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作者 曾荣 童建波 +6 位作者 刘宇甄 陈青 段志敏 刘彩霞 吕桂霞 林彤 李岷 《中华皮肤科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期43-47,共5页
目的 构建自身启动子调控、含有红色荧光蛋白(RFP)标记的钙调蛋白烟曲霉菌株,观察菌株生长过程中钙调蛋白的动态分布。方法 设计烟曲霉钙调蛋白基因的两端侧翼序列,对两序列及含有RFP-烟曲霉pyrG 营养标记(mRFP-AfpyrG)的质粒分... 目的 构建自身启动子调控、含有红色荧光蛋白(RFP)标记的钙调蛋白烟曲霉菌株,观察菌株生长过程中钙调蛋白的动态分布。方法 设计烟曲霉钙调蛋白基因的两端侧翼序列,对两序列及含有RFP-烟曲霉pyrG 营养标记(mRFP-AfpyrG)的质粒分别进行PCR扩增,再通过融合PCR对上述3个片段进行整合,形成转化用的线性片段。随后采用原生质体转化法将上述片段转入烟曲霉受体菌株中,构建钙调蛋白-RFP烟曲霉菌株。在营养筛选培养基平板上挑取单克隆菌落培养,选取荧光表型最稳定的单菌菌落对其转化子进行PCR验证。将重组菌株和野生菌株分别接种于固体营养培养基中,培养不同时间后荧光显微镜下观察菌株形态学差异。将上述两株菌分别接种于液体培养基中,甲基四氮盐(XTT)方法观察其生长活力差异,并对红色荧光标记菌株进行动态活体观察,分析钙调蛋白在烟曲霉生长发育过程中的时空分布。结果 重组菌株的荧光表型及转化子的PCR鉴定结果表明,钙调蛋白-RFP烟曲霉菌株构建成功。重组菌株与野生菌株在24 h时生长活力(A490值)分别为0.689 ± 0.081和0.678 ± 0.054(t = 1.32,P〉0.05),差异无统计学意义,且形态学方面也无显著差异。钙调蛋白在烟曲霉生长过程中始终处于极性生长过程中的菌丝顶端、分枝出芽点及新形成的分枝顶端。结论 钙调蛋白可能参与调控烟曲霉孢子萌发及菌丝极性生长等重要生物学过程。 展开更多
关键词 烟曲霉菌 钙调蛋白 菌丝 荧光蛋白质示踪 红色荧光蛋白
钙调蛋白抑制剂N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺通过逆转上皮-间充质转化抑制胶质母细胞瘤细胞的侵袭、迁移
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作者 苑锋 李涛 +8 位作者 刘沛东 童鹿青 易立 海龙 陶震楠 马海文 解杨 刘宇恒 杨学军 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期2096-2098,共3页
目的探讨钙调蛋白(CaM)抑制剂N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺(w-7)通过逆转上皮-间充质转化(EMT)抑制胶质母细胞瘤(GBM)细胞侵袭、迁移能力。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)检测w-7对U87、U251胶质瘤细胞存活率的影响。Transw... 目的探讨钙调蛋白(CaM)抑制剂N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺(w-7)通过逆转上皮-间充质转化(EMT)抑制胶质母细胞瘤(GBM)细胞侵袭、迁移能力。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)检测w-7对U87、U251胶质瘤细胞存活率的影响。Transwell侵袭实验检测对照组和w-7处理组穿过小室底膜的U87、U251细胞数目。划痕愈合实验检测各组U87、U251细胞相对迁移距离。Western blot法检测各组U87、U251细胞中上皮标志物(E-钙黏蛋白)和间质标志物(N-钙黏蛋白、波形蛋白)以及转录因子(ZEB1蛋白)的相对表达水平。倒置显微镜下观察各组U87、U251细胞形态变化。免疫荧光检测各组胶质瘤细胞N-cadherin的表达差异。结果w-7处理组穿过小室底膜的U87、U251细胞数少于对照组(P=0.001);w-7处理组U87、U251细胞愈合速率低于对照组,24h后差异均有统计学意义(P=0.001、0.006)。w-7处理组中U87、U251细胞E-钙黏蛋白的相对表达水平高于对照组(P=0.001),而N-钙黏蛋白、ZEB1、波形蛋白相对表达水平低于对照组(P=0.001)。与对照组比较,w-7处理组U87、U251细胞形态呈椭圆形、圆形改变,细胞迁移能力减弱。结论CaM抑制剂w-7能够通过逆转EMT抑制GBM细胞的侵袭、迁移能力。 展开更多
关键词 钙调蛋白 胶质母细胞瘤 上皮-间充质转化 侵袭 迁移
束缚应激致福利损伤小鼠肝脏中钙调蛋白的表达
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作者 马畅 赵迎峰 +3 位作者 梁磊 尤金炜 董敏 恽时锋 《实验动物科学》 2018年第5期56-59,共4页
目的研究束缚应激对小鼠肝脏内钙调蛋白表达的影响。方法选取3周龄ICR小鼠20只,随机分为对照组和束缚应激组,记录实验期间的个体增重和饲料消耗,束缚结束采血测定与福利相关的免疫和神经内分泌指标,及主要肝功能指标,采用Western Bolt... 目的研究束缚应激对小鼠肝脏内钙调蛋白表达的影响。方法选取3周龄ICR小鼠20只,随机分为对照组和束缚应激组,记录实验期间的个体增重和饲料消耗,束缚结束采血测定与福利相关的免疫和神经内分泌指标,及主要肝功能指标,采用Western Bolt法检测小鼠肝脏内钙调蛋白(CaM)和钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的蛋白表达水平。结果与对照组相比,束缚组小鼠的体增重和饲料能耗比(FER)显著降低(P〈0.01),脾脏和胸腺的脏器指数显著降低(P〈0.01,P〈0.05),血清中皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)以及主要肝功能指标谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)均显著升高(P〈0.01,P〈0.05),肝脏中CaM和CaMKⅡ的相对表达显著上升(P〈0.05)。结论束缚应激致实验小鼠福利受损时,CaM和CaMKⅡ参与了小鼠福利损伤过程。 展开更多
关键词 束缚应激 福利受损 肝脏 钙调蛋白
CaM突变体质粒的构建、表达纯化及活性鉴定 预览
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作者 苏敬阳 王蓉蓉 +7 位作者 袁媛 李松霖 朱正南 黄露婷 封瑞 邵冬雪 孙雪菲 郝丽英 《中国医科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期97-101,共5页
目的 制备钙调蛋白(CaM)突变体CaME141G的融合蛋白质粒,并进行蛋白表达、提取纯化和活性鉴定。方法 利用定点突变技术将野生型CaM的第141个氨基酸E (GAG)突变为G (GGG),再将突变体质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后... 目的 制备钙调蛋白(CaM)突变体CaME141G的融合蛋白质粒,并进行蛋白表达、提取纯化和活性鉴定。方法 利用定点突变技术将野生型CaM的第141个氨基酸E (GAG)突变为G (GGG),再将突变体质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后诱导其GST融合蛋白表达,GS-4B beads纯化,PreScission protease酶切GST标签,采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度,SDS-PAGE凝胶电泳检测CaME141G蛋白的相对分子量和纯度,pull-down实验鉴定纯化后蛋白的生物活性。结果 提取纯化后的CaME141G蛋白具有较高的浓度和纯度,且能与心肌CaV1.2钙通道C末端的PreIQ蛋白片段结合,并具有CaME141G蛋白浓度依赖性,提示该蛋白具有与心肌CaV1.2钙通道结合的能力。结论 成功构建了CaME141G融合蛋白质粒,并获得了纯化后的CaME141G蛋白,为深入研究CaM突变体在心肌CaV1.2钙通道中的调节作用及其与心血管系统疾病的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 钙调蛋白 突变体 质粒 表达纯化 pull-down实验
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基质相互作用分子2对软骨细胞钙离子释放激活钙通道的调控作用
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作者 符振澜 龚啸元 +1 位作者 陈诚 杨柳 《中华骨科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第23期1458-1465,共8页
目的利用软骨细胞构建基质相互作用分子2(stromal interaction molecule-2,STIM2)过表达模型探讨STIM2蛋白在软骨细胞钙离子释放激活钙(Ca2+ release activated Ca2+,CRAC)通道中的调控作用。方法骨关节炎软骨细胞及正常软骨细胞分别取... 目的利用软骨细胞构建基质相互作用分子2(stromal interaction molecule-2,STIM2)过表达模型探讨STIM2蛋白在软骨细胞钙离子释放激活钙(Ca2+ release activated Ca2+,CRAC)通道中的调控作用。方法骨关节炎软骨细胞及正常软骨细胞分别取自全膝关节置换术中软骨退变及正常区域,采用胞内钙离子信号实时荧光检测技术对骨关节炎和正常软骨细胞CRAC通道功能进行检测;采用蛋白质印迹技术检测骨关节炎与正常软骨细胞中STIM2蛋白的表达情况。构建质粒并进行转染上调正常软骨细胞STIM2蛋白水平,使用细胞荧光、Real-time PCR与蛋白质印迹验证转染效率;采用胞内钙离子信号实时荧光检测技术对STIM2转染组与空载质粒组软骨细胞中CRAC通道功能的改变进行检测。结果在毒胡萝卜素处理后,骨关节炎软骨细胞的内质网释放钙离子信号的峰值强度[(2.13±0.12)倍]较正常软骨细胞[(2.87±0.32)倍]下降;在外源性钙离子处理后,骨关节炎软骨细胞钙离子信号荧光强度到达峰值所需的时间[(336.85±15.88)s]较正常软骨细胞[(231.96±17.82)s]增加。蛋白质印迹显示骨关节炎软骨细胞中STIM2蛋白表达增加。质粒转染后,STIM2转染组的软骨细胞荧光强度增加,STIM2基因相对表达量增加,STIM2蛋白表达增加。在毒胡萝卜素处理后STIM2转染组软骨细胞内质网释放钙离子信号的峰值强度[(2.60±0.19)倍]较空载质粒组[(4.58±0.28)倍]下降;外源性钙离子处理后STIM2转染组软骨细胞内质网释放钙离子信号的峰值强度[(2.24±0.19)倍]较空载质粒组[(4.34±0.33)倍]下降。结论软骨细胞中STIM2蛋白负向调控CRAC通道功能,减少内质网内储存性钙离子的浓度。 展开更多
关键词 骨关节炎 软骨细胞 钙调蛋白 通道
1,25-(OH)2D3通过Ca^2+/CaM信号调控内皮细胞自噬抑制动脉粥样硬化钙化 被引量:1
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作者 杨萍 崔星钢 +5 位作者 李波 许尧 王中群 仲威 邵晨 严金川 《中国动脉硬化杂志》 2018年第11期1091-1098,共8页
目的探讨1,25二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)是否通过信号调控人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块内钙化。方法 (1)将体外培养的HUVEC高脂刺激自噬后予1,25-(OH)2D3干预后,通过荧光显微镜、透射电镜、蛋白... 目的探讨1,25二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)是否通过信号调控人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块内钙化。方法 (1)将体外培养的HUVEC高脂刺激自噬后予1,25-(OH)2D3干预后,通过荧光显微镜、透射电镜、蛋白免疫印记(Western blot)检测细胞自噬水平;利用慢病毒过表达或者沉默钙调蛋白(CaM),运用Western blot、茜素红染色法、钙检测试剂盒检测细胞钙化指标骨形态发生蛋白2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)。(2)取6~8周龄Apo E-/-雄性小鼠高脂饲养形成动脉粥样硬化模型,1,25-(OH)2D3灌胃后尾静脉注射CaM过表达或者沉默慢病毒,Western blot检测组织自噬及钙化水平指标;扫描电镜观察主动脉斑块自噬小体及钙沉积; HE及Von Kossa染色法分别检测小鼠主动脉粥样硬化及钙化程度。结果体外实验显示,1,25-(OH)2D3处理后细胞自噬增强,Ca(2+与CaM上调;与对照组相比,CaM过表达组自噬增强,细胞钙化减轻,ApoE-/-小鼠斑块内钙化明显被抑制; CaM沉默组细胞自噬流不通畅,细胞钙沉积增加; Apo E-/-小鼠斑块内钙化明显增加(P<0.01)。结论 1,25-(OH)2D3通过Ca2+/CaM信号调控HUVEC自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块钙化。 展开更多
关键词 1 25二羟基维生素D3 人脐静脉内皮细胞 自噬 钙调蛋白 动脉粥样硬化
血清CAM、GDF-15、ox-LDL在急性缺血性脑卒中患者中的变化及其与神经功能的关系 预览 被引量:2
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作者 赵连江 亓法英 任萍 《中国老年学杂志》 北大核心 2018年第9期2049-2052,共4页
目的 探讨血清钙调蛋白(CAM)、血清生长分化因子(GDF)-15、血清氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)在急性缺血性脑卒中患者中的变化及其与神经功能的关系。方法 80例急性缺血性脑卒中患者按照入院时美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS... 目的 探讨血清钙调蛋白(CAM)、血清生长分化因子(GDF)-15、血清氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)在急性缺血性脑卒中患者中的变化及其与神经功能的关系。方法 80例急性缺血性脑卒中患者按照入院时美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分分为A组(≤15分)和B组(〉15分),各40例,另选择同期体检的健康志愿者40例作为对照组。比较血清CAM、GDF-15、ox-LDL的水平,并分析其与NIHSS评分的相关性,应用Logistic回归分析急性缺血性脑卒中的危险因素并应用受试者工作特征(ROC)曲线分析CAM、GDF-15、ox-LDL及联合检测诊断急性缺血性脑卒中的效能。结果 A组、B组及对照组血清CAM分别为(235.26±61.85)ng/ml、(152.62±31.36)ng/ml、(87.85±22.32)ng/ml,差异有统计学意义(P〈0.05);A组、B组及对照组血清GDF-15分别为(967.22±75.28)pg/ml、(648.14±50.26)pg/ml、(417.14±47.03)pg/ml,差异有统计学意义(P〈0.05);A组、B组及对照组血清ox-LDL分别为(516.35±122.38)mg/L、(420.47±75.04)mg/L、(332.58±68.23)mg/L,差异具有统计学意义(P〈0.05);A组、B组及对照组NIHSS评分分别为(23.25±3.36)分、(12.73±2.28)分、(1.05±0.69)分,差异具有统计学意义(P〈0.05);急性缺血性脑卒中血清CAM、GDF-15、ox-LDL与NIHSS评分均呈正相关(r=0.517、0.851、0.338,均P〈0.05);联合检测诊断效能(AUC=0.956,95%CI:0.913-0.998)明显高于CAM(AUC=0.824,95%CI:0.731-0.918)、GDF-15(AUC=0.876,95%CI:0.800-0.952)和ox-LDL(AUC=0.709,95%CI:0.594-0.824)。结论 血清CAM、GDF-15、ox-LDL水平在急性缺血性脑卒中患者中明显增高,且与NIHSS评分均呈正相关,可作为判定病情严重程度的重要指标,且3种指标联合检测对于急性缺血性脑卒中更具有重要意义。 展开更多
关键词 急性缺血性脑卒中 神经功能 钙调蛋白 生长分化因子-15 氧化型低密度脂蛋白
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雷贝拉唑致老年患者骨质疏松临床观察及可能机制 预览
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作者 陆翠钦 陆晶 《宁夏医科大学学报》 2018年第12期1428-1430,共3页
目的探讨雷贝拉唑致老年患者骨质疏松的临床观察及可能机制,为临床治疗提供参考。方法分析2013年6月至2017年6月雷贝拉唑治疗消化系统疾病患者(观察组)和同期健康体检者(对照组)的临床资料,比较患者治疗前后骨密度变化、SERCA2a和炎症... 目的探讨雷贝拉唑致老年患者骨质疏松的临床观察及可能机制,为临床治疗提供参考。方法分析2013年6月至2017年6月雷贝拉唑治疗消化系统疾病患者(观察组)和同期健康体检者(对照组)的临床资料,比较患者治疗前后骨密度变化、SERCA2a和炎症因子水平的变化。结果对照组与观察组研究对象治疗前腰L1~4、桡骨及尺骨骨密度、血清SERCA2a、炎症因子比较差异均无统计学意义(P均 >0.05);观察组患者经雷贝拉唑治疗后骨密度、血清SERCA2a、骨保护素(OPG)水平均降低(P均<0.05),C反应蛋白(CRP)水平明显升高(P<0.05),且随着治疗时间的延长,上述指标的变化越显著(P<0.05)。结论应用雷贝拉唑可能引起老年患者骨质疏松,且此过程可能与患者血清中SERCA2a及OPG水平降低和CRP水平升高有关。 展开更多
关键词 雷贝拉唑 骨质疏松 钙调蛋白 炎症因子 骨保护素 C反应蛋白
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人参皂苷Rg3通过PI3K/AKT信号系统调控CaM基因表达促进胃癌BGC-823细胞的凋亡 被引量:3
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作者 石燕燕 李树才 孙军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期590-594,共5页
目的:探讨人参皂甙Rg3通过PI3K/AKT信号通路干扰Ca M基因的表达及对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。方法:胃癌BGC-823细胞的培养与传代完成后,Western blotting检测胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和/或Rg3分... 目的:探讨人参皂甙Rg3通过PI3K/AKT信号通路干扰Ca M基因的表达及对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。方法:胃癌BGC-823细胞的培养与传代完成后,Western blotting检测胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和/或Rg3分别作用胃癌BGC-823细胞后p-AKT和Ca M蛋白表达水平,MTT法检测IGF-1和/或Rg3对胃癌BGC-823细胞增殖的影响,Transwell法检测IGF-1和/或Rg3对胃癌BGC-823细胞侵袭的影响,流式细胞术检测IGF-1和/或Rg3对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。结果:随着IGF-1作用时间延长,胃癌BGC-823细胞中p-AKT蛋白和Ca M蛋白的表达水平均明显提高(均P〈0.05);与空白对照组比较,Rg3组明显抑制胃癌BGC-823细胞增殖,而IGF-1组和IGF-1+Rg3组明显促进胃癌BGC-823细胞增殖(均P〈0.05);与空白对照组比较,Rg3组明显降低胃癌BGC-823细胞侵袭,而IGF-1组和IGF-1+Rg3组明显促进胃癌BGC-823细胞侵袭能力(均P〈0.05);流式细胞术检测显示,与空白对照组比较,Rg3组明显促进胃癌BGC-823细胞凋亡,而IGF-1组和IGF-1+Rg3组明显抑制胃癌BGC-823细胞凋亡(均P〈0.05)。结论:人参皂甙Rg3通过阻断PI3K/AKT信号通路来抑制Ca M的表达,进而促进胃癌BGC-823细胞的凋亡。 展开更多
关键词 人参皂苷RG3 钙调蛋白 CaM基因 胃癌 BGC-823细胞 凋亡
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