期刊文献+
共找到15篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
番鸭细小病毒YL08分离株NS1基因的克隆及序列分析 被引量:1
1
作者 于天飞 黎明 +1 位作者 樊兴冬 闫冰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期177-179,共3页
为了了解番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白(NS1)基因的分子生物学特性,试验根据Gen—Bank中发布的其他MDPV基因序列,设计并合成可扩增NS1基因的特异性引物,利用PCR方法从MDPV阳性病料中获得MDPVYL08株NSI基因,将其克隆至载体pET-32... 为了了解番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白(NS1)基因的分子生物学特性,试验根据Gen—Bank中发布的其他MDPV基因序列,设计并合成可扩增NS1基因的特异性引物,利用PCR方法从MDPV阳性病料中获得MDPVYL08株NSI基因,将其克隆至载体pET-32a(-4-)中,构建重组质粒pET-32a—NS1,并进行同源性分析和构建系统发育进化树。结果表明:MDPVYL08分离株NS1基因全长为1884bp,编码627个氨基酸;MDPVYL08分离株NS1基因与国内外已发表的MDPV分离株核苷酸序列同源性为98.5%-99.4%,该分离株与福建株亲缘关系最近。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 YL08分离株 NS1基因 结构蛋白基因 克隆 序列分析
猪流感病毒H1N1亚型天津分离株核蛋白、基质蛋白、非结构蛋白基因克隆与序列分析 预览
2
作者 孙英峰 鄢明华 +5 位作者 路超 李秀丽 张莉 韩伟 任卫科 田向学 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期61-66,共6页
从天津地区不同猪场分离到6株H1N1亚型猪源流感病毒(SIV)。根据GenBank发表的H1N1亚型SIV的核蛋白(NP)、基质蛋白(M)及非结构蛋白(NS)基因序列,分别设计3对引物,将RT—PCR产物克隆至pMD18-T载体,进行测序分析。遗传进化分析... 从天津地区不同猪场分离到6株H1N1亚型猪源流感病毒(SIV)。根据GenBank发表的H1N1亚型SIV的核蛋白(NP)、基质蛋白(M)及非结构蛋白(NS)基因序列,分别设计3对引物,将RT—PCR产物克隆至pMD18-T载体,进行测序分析。遗传进化分析结果表明:A/swine/Tianjin/TJ2/2005(H1N1)与A/swine/TianJin/TJ4/2006(H1N1)的NP、M及NS基因核苷酸序列在遗传进化树中均与A/swine/Guangdong/33/2006(H1N1)位于同一分支上,属于古典型H1N1猪谱系;A/swine/Tianjin/TJ3/2006(H1N1)与A/swine/Tianjin/TJS/2006(H1N1)的NP、M及NS基因核苷酸在遗传进化树中均与A/Dunedin/2/2000(H1N1)组成一个大分支,可能起源于人谱系;A/swine/Tianjin/TJ6/2009(H2N2)与A/swine/Tianjin/TJ7/2009(H1N1)NP、M及NS基因核苷酸序列在遗传进化树中均与A/swine/Jiangsu/s15/2011(H1N1)位于同一分支上,属于类禽H1N1猪谱系。本试验对6株H1N1亚型SIV的NP、M及NS全基因序列进行分析,在一定程度上揭示了天津地区H1N1亚型SIV的基因进化与流行情况。 展开更多
关键词 猪流感 H1N1亚型 蛋白基因 基质蛋白基因 结构蛋白基因 序列分析
在线阅读 下载PDF
GPV YZ株非结构蛋白1基因的克隆及序列分析 预览
3
作者 吕春伟 朱峰伟 +1 位作者 杨丽金 朱新产 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期27-37,共11页
对鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因进行克隆、测序、比对及蛋白质结构和功能等生物信息学分析,探究了非结构蛋白1的基因分子特征和理化特性及病理学相关致病机理。通过PCR、质粒克隆及核苷酸序列测定方法获得病毒YZ株非结构蛋白1基因序... 对鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因进行克隆、测序、比对及蛋白质结构和功能等生物信息学分析,探究了非结构蛋白1的基因分子特征和理化特性及病理学相关致病机理。通过PCR、质粒克隆及核苷酸序列测定方法获得病毒YZ株非结构蛋白1基因序列,采用DNAsis、Mega 5.10、Blast等多种生物学软件完成核苷酸序列及氨基酸序列和系统进化分析。结果显示,鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因全长1 881个核苷酸,编码627个氨基酸。与GPV-GB标准株、MDPV、ChPV、AAV的NS1基因序列存在很高的同源相似性,与MDPV的亲缘关系最近,提示番鸭和鹅细小病毒来自共同的祖先,其宿主的不同而演化为不同的分支。对应GPVNS1-YZ的同源区段序列(293-524)含231个氨基酸,分子量为26.446 kDa、PI=6.04,带负电的氨基酸30个,带正电的氨基酸28个,体外表达半衰期为5.5 h时,不稳定系数为40.23,脂肪系数为78.01,平均疏水值为-0.43,表明这一蛋白质为亲水性蛋白;该蛋白还存在9个抗原肽的位置:55-69,185-195,94-129,156-167,19-30,76-83,6-12,205-210,40-45,出现16个可能的B细胞抗原表位,表明它具有较高的免疫原性;但不存在跨膜片段,也不含信号肽和二硫键,可能不会分泌到宿主细胞的细胞膜外发生作用;其二级结构包含α-螺旋占30.74%,β-折叠占17.32%,无规则卷曲占51.95%,三级结构近似球状,包含一个SF3解旋酶超家族的DNA病毒解旋酶功能域(AA17-AA173),提示鹅细小病毒的非结构蛋白1可能在感染发生后参与病毒DNA自我复制中的DNA解旋过程。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 结构蛋白基因 结构蛋白1 序列分析
在线阅读 免费下载
猫细小病毒非结构蛋白基因克隆及抗原表位预测
4
作者 黎明 闫冰 +1 位作者 李胜 于天飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期122-123,共2页
为了对猫细小病毒非结构蛋白基因进行克隆,试验根据猫细小病毒(CU-4)基因序列设计了1对引物,采用PCR方法对NS基因进行了扩增,将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T载体,并应用DNAStar软件预测NS蛋白抗原表位。结果表明:NS基因的序列长... 为了对猫细小病毒非结构蛋白基因进行克隆,试验根据猫细小病毒(CU-4)基因序列设计了1对引物,采用PCR方法对NS基因进行了扩增,将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T载体,并应用DNAStar软件预测NS蛋白抗原表位。结果表明:NS基因的序列长度为2007bp,编码.668个氨基酸,厥段121~126aa?243~247aa、256—260aa、388—393aa、467~477aa、498~505aa、559—563aa、589—593aa和624—628aa等区域可能是线性表位优势区域。 展开更多
关键词 猫细小病毒 结构蛋白基因 克隆 表位预测
基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成中多位点缺失突变的校正方法 预览
5
作者 范华昊 王娟 +6 位作者 安小平 王晓娜 李建彬 陈斌 李存 米志强 童贻刚 《生物技术通讯》 CAS 2011年第3期 366-369,共4页
目的:建立一种PCR方法,以快速校正基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的多位点缺失突变。方法:用PCR方法合成基孔肯雅病毒非结构蛋白基因;对测序的克隆进行序列比对,分析不同克隆上缺失突变发生的位置,以保守区域互相重叠的寡... 目的:建立一种PCR方法,以快速校正基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的多位点缺失突变。方法:用PCR方法合成基孔肯雅病毒非结构蛋白基因;对测序的克隆进行序列比对,分析不同克隆上缺失突变发生的位置,以保守区域互相重叠的寡核苷酸为上下游引物、以该区域测序正确的克隆为模板进行PCR扩增,得到所需片段,再将这些片段用PCR方法进一步组装成完整的基因序列并进行测序。结果:测序结果表明,经过2次PCR扩增,校正了基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的5个位点缺失突变。结论:得到序列正确的基孔肯雅病毒非结构蛋白基因。在进行基因合成过程中如发生多位点缺失突变,可利用该方法同时对以上突变进行校正,无须再合成引物,降低了实验操作难度,并提高了实验效率。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 结构蛋白基因 基因合成 多位点缺失突变的校正
在线阅读 免费下载
7株鹅细小病毒的克隆序列分析与分子特性 预览 被引量:3
6
作者 刘中勇 李福伟 +3 位作者 曹宗喜 李惠敏 吴玄光 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第7期 11-13,共3页
参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPV分离株的3对引物,利用PCR技术扩增7株小鹅瘟病毒的非结构蛋白基因和结构蛋白基因。然后将其克隆到pMD18-T载体上,筛选重组质粒并进行了序列测定及分析,测序结果表明... 参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPV分离株的3对引物,利用PCR技术扩增7株小鹅瘟病毒的非结构蛋白基因和结构蛋白基因。然后将其克隆到pMD18-T载体上,筛选重组质粒并进行了序列测定及分析,测序结果表明,GPV分离株非结构蛋白基因由1884个核苷酸组成,编码627个氨基酸;结构蛋白由2199个核苷酸组成,编码732个氨基酸。拼接非结构蛋白和结构蛋白的全序列,不同毒株的同源性分别为94.3%~99.2%和92.6%~98.5%。表明目前国内的鹅细小病毒的同源性比较高,但是强弱毒株也存在一定的差别。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 结构蛋白基因 结构蛋白基因
在线阅读 下载PDF
口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC在大肠杆菌中的高效表达 预览 被引量:7
7
作者 曹轶梅 刘在新 +3 位作者 卢曾军 郭建宏 常惠芸 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期 115-118,共4页
将牛源O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)China/99株非结构蛋白基因3ABC从pGEM-T-3ABC重组质粒中亚克隆到原核表达载体pTriEx-4Neo上,成功构建重组表达质粒pTriEx-3ABC.将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,... 将牛源O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)China/99株非结构蛋白基因3ABC从pGEM-T-3ABC重组质粒中亚克隆到原核表达载体pTriEx-4Neo上,成功构建重组表达质粒pTriEx-3ABC.将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,表达产物经SDS-PAGE可检测到分子量约为59.1 ku的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的31.4%.Western blotting分析证明表达产物能被FMDV阳性血清所识别.表达产物纯化后作抗原进行ELISA检测,结果表明,表达的蛋白显示特异的免疫学活性,并能区分自然感染动物和注苗动物.研究为以FMDV非结构蛋白为抗原,建立自然感染动物和注苗动物的鉴别诊断方法提供了材料. 展开更多
关键词 口蹄疫 病毒 结构蛋白基因 3ABC 大肠杆菌 基因表达
在线阅读 免费下载
禽流感病毒新疆分离株1/96(H14N5)非结构蛋白基因克隆及序列分析 预览 被引量:2
8
作者 邓国华 于康震 +4 位作者 王秀荣 姜永萍 田国斌 乔传玲 陈化兰 《动物医学进展》 CSCD 2004年第1期 103-106,共4页
研究应用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒分离株A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5),提取病毒基因组及病毒感染鸡胚绒毛尿囊膜细胞信使RNA,运用RT-PCR技术扩增病毒分离株的NS1和NS2基因cDNA,克隆后进行序列测定.序列测定后分析结果表... 研究应用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒分离株A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5),提取病毒基因组及病毒感染鸡胚绒毛尿囊膜细胞信使RNA,运用RT-PCR技术扩增病毒分离株的NS1和NS2基因cDNA,克隆后进行序列测定.序列测定后分析结果表明,扩增的两个基因包含完整的阅读框架. 展开更多
关键词 禽流感病毒 新疆分离株 1/96 H14N5 结构蛋白基因 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
我国部分鸡源H9N2亚型流感病毒NS1基因序列分析 预览 被引量:7
9
作者 刘金华 史为民 +1 位作者 吴清民 郭玉璞 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期 547-553,共7页
对1996年至2001年间自我国部分养鸡场发病鸡或死亡鸡分离鉴定的8株H9N2亚型禽流感病毒的非结构蛋白基因(NSl)进行了扩增和序列测定,并分析和比较了其核苷酸和氨基酸的同源性。结果表明:NSI基因核苷酸和氨基酸同源性分别为96.5%-99.... 对1996年至2001年间自我国部分养鸡场发病鸡或死亡鸡分离鉴定的8株H9N2亚型禽流感病毒的非结构蛋白基因(NSl)进行了扩增和序列测定,并分析和比较了其核苷酸和氨基酸的同源性。结果表明:NSI基因核苷酸和氨基酸同源性分别为96.5%-99.5%和94.5-98.6%,说明NSl基因在遗传进化上高度保守,稳定遗传。与中国香港、韩国、巴基斯坦及人源H9N2分离株相比较,发现中国大陆的鸡源H9N2分离株的NSl基因在其羧基端缺少13个氨基酸。系统进化树分析表明,该8株病毒的NSl基因属于相同的进化分支,而且中国的早年分离株A/chicken/Beijing/1/94位于该进化分支的根部,暗示这些分离株的NSl基因是由A/chicken/Beijing/1/94演化而来;尚未发现NSl基因属于A/quail/HongKong/G1/97-1ike分支的分离株。同时,系统进化树也说明了我国的H9N2分离株与韩国、巴基斯坦等地的H9N2分离株隶属于不同的进化分支,H9N2亚型禽流感的发生和流行与地域有一定的相关性。 展开更多
关键词 鸡源H9N2亚型流感病毒 NSl基因 序列分析 结构蛋白基因
在线阅读 下载PDF
用PCR技术克隆细小病毒H—1部分非结构蛋白基因 预览
10
作者 黄青山 黄建 +2 位作者 罗祖玉 王顺德 刘为平 《中国病毒学》 CSCD 1995年第4期 323-331,共9页
应用PCR技术定向克隆了细小病毒H-1的非结构蛋白(NS)部分基因片段。自行设计并合成了PCR引物△P3和△P4,在两个引物中分别引入两个突变碱基,使扩增后的DNA片段的两端含有限制性核酸内切酶HindⅢ或BamHI... 应用PCR技术定向克隆了细小病毒H-1的非结构蛋白(NS)部分基因片段。自行设计并合成了PCR引物△P3和△P4,在两个引物中分别引入两个突变碱基,使扩增后的DNA片段的两端含有限制性核酸内切酶HindⅢ或BamHI的酶切位点,经双酿切法把该DNA片段重组到pUC118质粒中。对插入片段的DNA序列测定和分析结果证实该片段为H-1NS-1基因序列。以此重组质粒为探针,采用分子杂交的方法,分别测定了H-1及MVMDNA在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备H-1的质量监测、H-1及MVMNS-1蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 细小病毒H-1 聚合酶链反应 结构蛋白基因
在线阅读 下载PDF
禽呼肠孤病毒μNS非结构蛋白基因的克隆及序列分析 预览 被引量:1
11
作者 秦春香 谢芝勋 谢丽基 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第4期 4-7,共4页
根据GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)M3基因序列,设计并合成了一对跨越μNS非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV的10个毒株进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定。结果表明,10个毒株μNS蛋白基因ORF的核苷酸序列全长均为... 根据GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)M3基因序列,设计并合成了一对跨越μNS非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV的10个毒株进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定。结果表明,10个毒株μNS蛋白基因ORF的核苷酸序列全长均为1908 bp,编码635个氨基酸。这10个毒株之间的核苷酸及推导的氨基酸同源性分别都在98%以上。将它们与哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)、番鸭呼肠孤病毒(DRV)等进行核苷酸及推导的氨基酸序列比较,并进行遗传系统树分析,结果表明ARV与MRV有较大的差异,与DRV差异较小。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 μNS结构蛋白基因 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
水稻矮缩病毒非结构蛋白基因S6的表达和抗血清的制备 预览 被引量:3
12
作者 马中良 杨怀义 田波 《中国病毒学》 CSCD 2003年第5期 496-499,共4页
经RT-PCR扩增出水稻矮缩病毒(RDV)中国分离物非结构蛋白基因S6,并克隆至 pGEM-Teasy 载体上.序列分析表明该基因与日本株具有高度同源性,并且含有较高比例的稀有密码子.将S6基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,并转化大肠杆菌,该基因在大肠杆... 经RT-PCR扩增出水稻矮缩病毒(RDV)中国分离物非结构蛋白基因S6,并克隆至 pGEM-Teasy 载体上.序列分析表明该基因与日本株具有高度同源性,并且含有较高比例的稀有密码子.将S6基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,并转化大肠杆菌,该基因在大肠杆菌以包涵体形式大量表达.以表达的融合蛋白作抗原免疫家兔,制备抗S6蛋白的抗血清,ELISA 测定表明,该血清与抗原共价特异性反应,抗血清的效价为1:3000. Western blot印迹实验表明该抗血清能特异性检测RDV感染的水稻组织中的S6蛋白,因而可作为感染RDV的水稻植株的分子手段. 展开更多
关键词 水稻 矮缩病毒 结构蛋白基因S6 表达 抗血清
在线阅读 下载PDF
H3N2流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达及其对293T细胞增殖的影响
13
作者 迟莹 卞倩 +3 位作者 李燕 张文帅 温恬 焦永军 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 40-44,共5页
目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1(nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白;探讨NS1对细胞增殖的影响。方法 :从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Ve... 目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1(nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白;探讨NS1对细胞增殖的影响。方法 :从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/NS1质粒,双酶切pMD18-T/NS1与pXJ40-HA后,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过免疫印迹法鉴定NS1蛋白的表达。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测NS1转染细胞后对细胞增殖的影响。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实NS1蛋白的表达。MTT法证实转染NS1质粒后对细胞增殖有抑制作用。结论:成功克隆了NS1全长基因,构建了其真核表达载体,并初步验证了NS1蛋白过表达后能抑制细胞的增殖,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1的细胞模型和NS1蛋白对细胞增殖和凋亡作用机制的进一步研究提供了基础。 展开更多
关键词 H3N2流感病毒 结构蛋白-1基因 克隆 真核表达 细胞增殖
丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达 预览 被引量:3
14
作者 安润 楚雍烈 +4 位作者 杨娥 寻萌 孙菊 卢阳 郑建武 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 449-451,473,共4页
目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表... 目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET32a重组,后转入BL21菌株并诱导表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS3基因的蛋白表达水平。结果含有NS3的重组体构建成功并在大肠杆菌中表达。结论运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV非结构基因NS3蛋白,为尽一步研究HCVNS3基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 结构蛋白3基因 基因表达 克隆
在线阅读 下载PDF
猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB基因在重组杆状病毒中的表达与鉴定 预览 被引量:1
15
作者 沈芳 李玉峰 +3 位作者 王先炜 李军星 王海燕 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第2期 9-13,共5页
利用PCR方法扩增获得EMCV非结构蛋白3AB基因,并将其克隆至杆状病毒转座载体pFastBac^TM中,提取阳性克隆质粒转化至DH10Bac感受态细菌,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-3AB,经脂质体介导转染sf9细胞获得重... 利用PCR方法扩增获得EMCV非结构蛋白3AB基因,并将其克隆至杆状病毒转座载体pFastBac^TM中,提取阳性克隆质粒转化至DH10Bac感受态细菌,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-3AB,经脂质体介导转染sf9细胞获得重组杆状病毒,并IFA和Westernblotting鉴定其抗原性。结果表明,EMCV3AB基因在昆虫细胞中获得成功表达,分子量约16ku,具有良好的EMCV抗原性。因此利用杆状病毒表达系统成功表达了EMCV3AB基因,为该病毒抗原表位和诊断方法研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 结构蛋白3AB基因 杆状病毒 表达
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈