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过量表达黄烷酮3-羟化酶基因(AaF3H)提高青蒿中青蒿素的含量 预览
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作者 张婷婷 马嘉伟 +3 位作者 王路尧 唐克轩 李杉 赵静雅 《生物技术进展》 2018年第1期55-62,共8页
黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是参与黄酮类化合物合成过程的一个关键酶。为了研究青蒿中F3H对青蒿素的影响,从青蒿中克隆到黄烷酮3-羟化酶基因(AaF3H),全长为1 095 bp,编码364个氨基酸。Southern Blot证实AaF3H基... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是参与黄酮类化合物合成过程的一个关键酶。为了研究青蒿中F3H对青蒿素的影响,从青蒿中克隆到黄烷酮3-羟化酶基因(AaF3H),全长为1 095 bp,编码364个氨基酸。Southern Blot证实AaF3H基因在青蒿基因组中只有1个拷贝。通过构建AaF3H过表达载体并稳定转化青蒿来获得转基因株系,再采用HPLC测定过量表达AaF3H的转基因青蒿植株中的青蒿素含量。结果表明,过表达AaF3H转基因青蒿植株中青蒿素的含量显著升高。通过实时荧光定量PCR分析,在转基因青蒿中,作为青蒿素合成的关键酶,紫穗槐-4,11-二烯合成酶基因(AaADS)、紫穗槐-4,11-二烯氧化酶基因(AaCYP71AV1)和青蒿醛Δ11(13)双键还原酶基因(AaDBR2)的表达量显著提高。研究结果表明过量表达AaF3H基因是提高青蒿中青蒿素含量的有效方法。 展开更多
关键词 青蒿 黄烷3-羟化酶 过量表达 青蒿素
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华北紫丁香黄烷酮3-羟化酶基因克隆及表达分析
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作者 王蕊 郑健 +1 位作者 李彦慧 谢玉常 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第12期3863-3869,共7页
黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)作为黄酮类化合物合成早期的一个关键酶,在花色素合成途径中起重要作用。本研究依托华北紫丁香花序转录组高通量测序数据,结合RACE技术克隆出SoF3H基因,并对SoF3H基因进行生物信息学分析... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)作为黄酮类化合物合成早期的一个关键酶,在花色素合成途径中起重要作用。本研究依托华北紫丁香花序转录组高通量测序数据,结合RACE技术克隆出SoF3H基因,并对SoF3H基因进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR技术分析了该基因的组织表达模式。结果表明,SoF3H基因的c DNA序列全长为1 101 bp,编码366个氨基酸残基;该基因的g DNA序列无内含子;SoF3H基因的组织特异性表达分析表明该基因在花中表达量最大,且在花蕾期表达量最高。本研究将为深入研究华北紫丁香黄烷酮3-羟化酶(SoF3H)在花色素代谢途径中的表达特性提供参考依据。 展开更多
关键词 华北紫丁香 黄烷3-羟化酶 基因克隆 表达
紫色甘薯渝紫薯7号黄烷酮3-羟化酶基因的克隆和序列分析 预览 被引量:1
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作者 黄元射 舒田 +1 位作者 毛景欣 陈敏 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期486-490,共5页
为渝紫薯7号品种后续的遗传转化及其分子育种提供理论基础,采用同源克隆和RACE方法对其生物合成途径中关键酶基因进行同源性克隆及生物信息学分析。结果表明:从渝紫薯7号中克隆到F3H基因的全长cDNA序列(Genbank登录号为KU144881),... 为渝紫薯7号品种后续的遗传转化及其分子育种提供理论基础,采用同源克隆和RACE方法对其生物合成途径中关键酶基因进行同源性克隆及生物信息学分析。结果表明:从渝紫薯7号中克隆到F3H基因的全长cDNA序列(Genbank登录号为KU144881),序列全长为1280bp,包括5’端UTR+一个编码368个氨基酸残基的编码区+3’端UTR+polyA尾巴;F3H基因蛋白具有结合酮戊二酸的RXS基序Arg287-Ser285和结合亚铁离子的保守氨基酸His219、Aps221和His277,结构域位于蛋白的核心(Fe^2+被包埋在酶的中心);在GenBank中,渝紫薯7号F3H的序列与圆叶牵牛的F3H序列之间具有很高的相似性,为96%;渝紫薯7号F3H蛋白与近缘物种茑萝氨基酸相似性较高,为94%;渝紫薯7号F3H符合植物中普遍存在的F3H基因,同时具有生物学活性。 展开更多
关键词 渝紫薯7号 黄烷3-羟化酶 基因克隆 序列分析
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黄烷酮3-羟化酶基因表达分析及转基因大豆新种质创制 预览
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作者 崔艳伟 李文龙 +2 位作者 常文锁 李喜焕 张彩英 《河北农业科学》 2016年第3期62-66,81共6页
黄烷酮3-羟化酶(F3H)是大豆异黄酮代谢途径重要酶类。研究F3H在不同大豆品种中的表达差异,并应用转基因途径创制新种质是提高大豆异黄酮含量的重要途径。以高异黄酮含量大豆品种中豆27和低异黄酮含量大豆品种楚秀为试材,采用q PCR技术... 黄烷酮3-羟化酶(F3H)是大豆异黄酮代谢途径重要酶类。研究F3H在不同大豆品种中的表达差异,并应用转基因途径创制新种质是提高大豆异黄酮含量的重要途径。以高异黄酮含量大豆品种中豆27和低异黄酮含量大豆品种楚秀为试材,采用q PCR技术,分析F3H在大豆不同发育时期、组织部位中的表达差异;并利用花粉管通道转化技术,获得转F3H阳性植株。结果表明:F3H在2个大豆品种R1~R7期叶片中的表达模式不同,中豆27的F3H表达量在R1期最高,而后开始下降,R2~R5期维持较低水平,R6期略有上升,R7期又出现下降;楚秀F3H表达量在R1~R4期较低,R5期出现表达高峰,R6期开始下降。F3H在2个大豆品种R5~R8期籽粒中的表达模式基本相同,表达量均从R5期开始下降,且R6~R8期维持较低水平。基于此,构建F3H RNAi反义载体,并利用花粉管通道技术转入不同大豆品种,获得了5个转基因新材料。 展开更多
关键词 大豆 异黄含量 黄烷3-羟化酶 基因表达 RNAI
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汉中黑稻黄烷酮3-羟化酶基因(F3H)的遗传变异分析 预览
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作者 张涛 尹亚军 +1 位作者 路宏朝 王令 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第10期2257-2262,共6页
本实验通过PCR和测序拼接获得汉中地区8个黑稻品种黄烷酮3-羟化酶基因(F3H)编码区序列,在NCBI中用BLAST分析首次发现该基因位于水稻4号染色体。发现8种黑稻和普通籼稻F3H序列完全相同,与粳稻相比较,则存在4个突变位点,导致2个氨... 本实验通过PCR和测序拼接获得汉中地区8个黑稻品种黄烷酮3-羟化酶基因(F3H)编码区序列,在NCBI中用BLAST分析首次发现该基因位于水稻4号染色体。发现8种黑稻和普通籼稻F3H序列完全相同,与粳稻相比较,则存在4个突变位点,导致2个氨基酸突变。基于乃日序列信息的进化树表明黑稻与籼稻、粳稻、小麦、玉米的亲缘关系较近;遗传距离和同源性分析表明F3H基因较为保守,是一个古老的基因,可用于种属的鉴定分析。F3H蛋白理化性质分析发现,黑稻与其它禾本科植物存在一定差异,蛋白三维结构及相关位点预测发现粳稻和黑稻无明显差异,初步认为黑稻F3H序列变异可能与花青素的合成无关,需要在其表当量与花青苷和成合成与沉积的关系方面开展进一步研究。 展开更多
关键词 黑稻 黄烷3-羟化酶 序列分析 遗传变异
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金花茶黄烷酮3-羟化酶基因CnF3H的克隆及表达分析 被引量:4
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作者 周兴文 殷恒福 +1 位作者 朱宇林 李纪元 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2051-2057,共7页
本研究利用反转录PCR和RACE方法,从中国珍稀濒危植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的c DNA全长,命名为Cn F3H,Gen Bank登录号为HQ290517。碱基序列分析表明,该Cn F3H基因c ... 本研究利用反转录PCR和RACE方法,从中国珍稀濒危植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的c DNA全长,命名为Cn F3H,Gen Bank登录号为HQ290517。碱基序列分析表明,该Cn F3H基因c DNA序列全长为1 360 bp,5’非翻译区(untranslated regions,UTR)长54 bp,3’UTR长202 bp,开放阅读框长为1 104 bp编码367个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明,Cn F3H与茶(C.sinensis)F3H同源性高达99%。二级结构预测表明,无规则卷曲在Cn F3H蛋白结构中所占比例最大,其次为α-螺旋和延伸链。相对荧光定量PCR分析表明,Cn F3H基因的表达量在幼蕾期、初蕾期和膨大期的表达量较高,之后逐渐降低;Cn F3H基因在花器官不同部位中均有表达,其表达量高低顺序为雄蕊、花瓣、萼片、雌蕊和苞片。本研究为全面深入地研究金花茶花色形成的分子调控机理提供了充实的理论依据。 展开更多
关键词 金花茶 黄烷3-羟化酶 基因克隆 表达
山葡萄黄烷酮3-羟化酶VamF3H基因及其克隆 预览
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作者 李娟 曹芳芳 +1 位作者 权哲 刘海峰 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第10期36-40,共5页
采用RT-PCR与RACE技术相结合的方法,从山葡萄果皮中克隆到黄烷酮3-羟化酶(F3H)基因的c DNA全长序列。该基因全长1 398 bp,包含1 092 bp的完整开放阅读框,编码363个氨基酸,相对分子质量为40.81 ku,等电点(PI)值为5.37。二级结构预测表明... 采用RT-PCR与RACE技术相结合的方法,从山葡萄果皮中克隆到黄烷酮3-羟化酶(F3H)基因的c DNA全长序列。该基因全长1 398 bp,包含1 092 bp的完整开放阅读框,编码363个氨基酸,相对分子质量为40.81 ku,等电点(PI)值为5.37。二级结构预测表明,随机卷曲是Vam F3H蛋白最大量的结构元件,不具有信号肽,属于不稳定亲水蛋白。氨基酸序列与欧亚种葡萄(FQ389950)、圆叶葡萄(KF040970)、美国蔓藤(JX087441)等的F3H类基因同源性较高,相似性分别为99%、99%、96%。 展开更多
关键词 山葡萄 CDNA克隆 黄烷3-羟化酶
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鹤望兰黄烷酮3-羟化酶基因SrF3H的克隆及表达分析 被引量:3
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作者 樊荣辉 黄敏玲 +1 位作者 钟淮钦 吴建设 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期168-172,共5页
类黄酮3-羟化酶是类黄酮生物合成途径中的关键酶,对花色的形成起重要作用。本研究克隆了鹤望兰类黄酮3-羟化酶基因SrF3H,该cDNA全长1333bp(GenBank收录号:KC412257),具有完整的开放阅读框(ORF),共1122个碱基,编码374个氨基酸... 类黄酮3-羟化酶是类黄酮生物合成途径中的关键酶,对花色的形成起重要作用。本研究克隆了鹤望兰类黄酮3-羟化酶基因SrF3H,该cDNA全长1333bp(GenBank收录号:KC412257),具有完整的开放阅读框(ORF),共1122个碱基,编码374个氨基酸。与其他物种的氨基酸序列都有一定的同源性,其中与高杯花的F3H同源性最高,达到83%。系统进化树分析显示,鹤望兰SrF3H与百合蛋白亲缘关系较近。应用半定量PCR分析表明,SrF3H在蓝色花瓣中表达最高,而在鹤望兰不同花发育阶段差异不明显。研究结果不仅为植物育种提供了重要基因资源,也为剖析鹤望兰花色形成机理奠定基础。 展开更多
关键词 鹤望兰 黄烷3-羟化酶 类黄生物合成 基因克隆
花生黄烷酮3-羟化酶基因AhF3H的克隆和表达分析 预览 被引量:3
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作者 李明 王玉红 +5 位作者 李长生 侯蕾 赵传志 赵术珍 夏晗 王兴军 《山东农业科学》 2013年第11期1-6,共6页
利用花生转录组测序结果和GenBank EST数据库,首次从花生中克隆了黄烷酮3-羟化酶基因,命名为AhF3H,GenBank登录号为KF312218。氨基酸序列分析表明,AhF3H与其他植物F3H有较高的同源性。进化树分析表明,AhF3H与大豆、野生大豆F3H的亲缘关... 利用花生转录组测序结果和GenBank EST数据库,首次从花生中克隆了黄烷酮3-羟化酶基因,命名为AhF3H,GenBank登录号为KF312218。氨基酸序列分析表明,AhF3H与其他植物F3H有较高的同源性。进化树分析表明,AhF3H与大豆、野生大豆F3H的亲缘关系较近。在花生紫色种质材料及丰花1号中,AhF3H的相对表达水平同花青素含量呈正相关,表明AhF3H在花生花青素合成代谢过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 花生 花青素 黄烷3-羟化酶 基因表达
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液质联用法测定干旱胁迫下红砂(Reaumuria soongorica)叶片F3H、DFR酶活性 被引量:2
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作者 刘美玲 刘玉冰 曹波 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期2158-2162,共5页
黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)和二氢黄酮醇4-还原酶(di-hydroflavonol 4-reductase,DFR)是类黄酮合成途径中的2个关键酶,研究其活性的变化对探讨类黄酮合成途径的调控有重要的意义。以荒漠植物红砂(Reaumuria soon... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)和二氢黄酮醇4-还原酶(di-hydroflavonol 4-reductase,DFR)是类黄酮合成途径中的2个关键酶,研究其活性的变化对探讨类黄酮合成途径的调控有重要的意义。以荒漠植物红砂(Reaumuria soongorica)为材料,建立了类黄酮合成途径关键酶F3H、DFR活性的液质联用检测法,研究干旱胁迫对红砂叶片F3H、DFR酶活性的影响。结果表明,F3H酶作用的底物柚皮素和DFR酶作用的底物二氢槲皮素的检测含量线性范围分别为0.04~1.20μg(r=0.998)和0.08~2.40μg(r=0.998)。因此,本方法可用于测定F3H、DFR酶活性。根据以上建立的方法,对干旱胁迫处理下,不同处理时间的红砂植株叶片进行F3H、DFR酶活性的测定,结果表明,干旱胁迫下,F3H酶活性随着干旱胁迫处理时间的延长,先升高后降低至处理前水平。DFR酶活性随干旱胁迫时间的延长逐渐升高。表明干旱胁迫对红砂叶片F3H、DFR酶活性有诱导作用。 展开更多
关键词 干旱胁迫 红砂 黄烷3-羟化酶 二氢黄醇4-还原 反相高效液相色谱-质谱法
核桃黄烷酮3-羟化酶基因cDNA 3′端的克隆与序列分析(英文) 预览 被引量:2
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作者 许锋 李琳玲 +3 位作者 程华 唐寅 程水源 张威威 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期 151-157,共7页
从核桃(Juglans regia)中首次克隆得到黄烷酮3-羟化酶基因的cDNA片段,并命名为JrF3H,Gen-Bank登录号为FJ966204。JrF3H长1 029 bp ,编码342个氨基酸。蛋白质序列多重比对结果表明,推导的JrF3H蛋白质与其他植物F3 H蛋白质具有很高的相... 从核桃(Juglans regia)中首次克隆得到黄烷酮3-羟化酶基因的cDNA片段,并命名为JrF3H,Gen-Bank登录号为FJ966204。JrF3H长1 029 bp ,编码342个氨基酸。蛋白质序列多重比对结果表明,推导的JrF3H蛋白质与其他植物F3 H蛋白质具有很高的相似性,JrF3H蛋白质与茶学、拟南芥、大豆、烟草、小麦和银杏F3 H蛋白质序列的同源性分别为86 %、85 %、85 %、82 %、80 %和79 %。此外,JrF3H在相似的位置存在结合亚铁离子和酮戊二酸的保守位点。F3 H系统进化树表明,JrF3H与乔木类植物的F3 H基因聚类关系最近。JrF3H基因的克隆将有助于弄清该基因在核桃黄酮代谢途径中所起的作用。 展开更多
关键词 黄烷3-羟化酶 JrF3H 分子克隆 序列分析
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海岛棉黄烷酮3-羟化酶(F3 H)基因序列分析和表达 预览
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作者 刘超 张俊 +2 位作者 姚正培 倪志勇 陈全家 《棉花科学》 2015年第3期7-12,共6页
根据棉纤维发育相关基因转录组学、表达谱分析结果,从海岛棉(新海21)中筛选到一个与棉纤维发育相关的黄烷酮3-羟化酶基因(GbF3H)。生物信息学分析表明,该基因编码区长1107bp,编码368个氨基酸,多序列比对发现 GbF3H序列保守性... 根据棉纤维发育相关基因转录组学、表达谱分析结果,从海岛棉(新海21)中筛选到一个与棉纤维发育相关的黄烷酮3-羟化酶基因(GbF3H)。生物信息学分析表明,该基因编码区长1107bp,编码368个氨基酸,多序列比对发现 GbF3H序列保守性较高,具有典型的2-酮戊二酸双加氧酶结构域。实时定量PCR分析表明,GbF3H基因在纤维发育的不同时期中均有表达,在开花后5 d的胚珠中表达量最高,推测GbF3H基因可能对棉纤维发育具有重要作用。 展开更多
关键词 海岛棉 黄烷3-羟化酶基因 序列分析 基因表达
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茶树黄烷酮3-羟化酶基因(乃奶的克隆及功能分析 预览 被引量:8
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作者 胡晓婧 许玉娇 +2 位作者 高丽萍 夏涛 王云生 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期309-316,共8页
黄烷酮3-羟化酶(flavanone3-hydroxylase,F3H)是类黄酮代谢途径中的关键酶。本研究采用逆转录PCR技术,获取了茶树(Camelliasinensis)F3H的开放阅读框(openreadingframe,omq包含1107个碱基,编码含有368个氨基酸的蛋白质,推测... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone3-hydroxylase,F3H)是类黄酮代谢途径中的关键酶。本研究采用逆转录PCR技术,获取了茶树(Camelliasinensis)F3H的开放阅读框(openreadingframe,omq包含1107个碱基,编码含有368个氨基酸的蛋白质,推测分子量为41.46kD,等电点为5.61;实时荧光定量PCR表明,CsF3H在叶片中表达量较高,且受光照影响;将此基因重组到表达载体PRSF上,导入大肠杆菌(Escherich—iacoli)BL21中进行原核表达,优化原核表达的条件,结果表明,最佳诱导温度28℃、异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0mmoFL、诱导时间5h;利用高效液相色谱法(HPLC)对重组蛋白进行了体外酶活的检测,结果表明,重组目的蛋白具有F3H酶活性,可将反应底物柚皮素m)和圣草酚(E)分别转化为二氢山奈素(DHKl和二氢槲皮素(DHQ);当E作为底物时,酶活性明显高于柚皮素。本研究结果为茶树F3H酶动力学研究和其器官组织特异性研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 茶树 黄烷3-羟化酶(F3H) 原核表达 活性
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石蒜黄烷酮3–羟化酶基因LrF3H的克隆及表达分析 被引量:7
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作者 黄春红 高燕会 +2 位作者 朱玉球 童再康 姜小凤 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期960-970,共11页
采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,从石蒜花瓣中克隆到1个黄烷酮3–羟化酶(F3H)基因的cDNA全长序列,全长1293bp,包含1098bp的完整开放阅读框,编码365个氨基酸;氨基酸序列比对显示该序列编码的氨基酸与水仙的F3H具有高达91%的同源性,... 采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,从石蒜花瓣中克隆到1个黄烷酮3–羟化酶(F3H)基因的cDNA全长序列,全长1293bp,包含1098bp的完整开放阅读框,编码365个氨基酸;氨基酸序列比对显示该序列编码的氨基酸与水仙的F3H具有高达91%的同源性,将其命名为LrF3H。二级结构预测表明,随机卷曲是LrF3H蛋白最大量的结构元件,而α–螺旋和延伸链散布于整个蛋白中。保守结构域预测表明该基因编码的蛋白具有典型的F3H蛋白功能结构域,其保守结构域中含有铁离子及2–O–酮戊二酸结合位点,属于2OG-FeⅡ_Oxy双加氧酶超家族。实时荧光定量PCR分析表明,LrF3H在整个花发育过程中均表达,而且从初蕾期到盛开期随着花瓣着色加深表达量逐渐增加,盛开期表达量最高,之后随着花朵萎蔫表达量下降;在不同器官中,LrF3H的表达量在花瓣和花葶中最高,而在根、鳞茎和叶片中都很低,推测该基因在石蒜花色形成过程中起着关键作用。 展开更多
关键词 石蒜 黄烷3羟化酶 基因克隆 表达
洋桔梗黄烷酮3-羟化酶基因的克隆及其反义表达载体的构建 预览 被引量:1
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作者 阮春燕 韦银凤 +1 位作者 姚超 陈崇顺 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第11期35-38,共4页
黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是花青素生物合成途径中的关键酶,对花色的形成具有重要作用。以洋桔梗试管苗叶片基因组DNA为模板,通过设计分别带有酶切位点BamH Ⅰ和Xba Ⅰ的1对特异引物,进行PCR扩增,克隆了洋桔... 黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)是花青素生物合成途径中的关键酶,对花色的形成具有重要作用。以洋桔梗试管苗叶片基因组DNA为模板,通过设计分别带有酶切位点BamH Ⅰ和Xba Ⅰ的1对特异引物,进行PCR扩增,克隆了洋桔梗F3H基因;对克隆得到的F3H基因进行测序鉴定,再将该基因反向插入pBI121质粒,成功构建了植物反义表达载体pBI121-F3H,为利用植物基因工程技术调控洋桔梗F3H基因的表达提供了重要基础。 展开更多
关键词 洋桔梗 黄烷3-羟化酶基因 克隆 反义表达载体构建
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芜菁黄烷酮3-羟化酶基因的克隆、序列分析及表达 预览 被引量:10
16
作者 许志茹 崔国新 +2 位作者 李春雷 孙燕 李玉花 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第4期 787-792,共6页
花青素是一类重要的植物次生代谢产物,黄烷酮3-羟化酶(F3H)是花青素生物合成早期阶段的重要催化酶。利用UV-A处理津田芜菁(Tsuda turnip)和赤丸芜菁(Yurugi Akamaru turnip)块根24h后提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆了BrF3H基因。... 花青素是一类重要的植物次生代谢产物,黄烷酮3-羟化酶(F3H)是花青素生物合成早期阶段的重要催化酶。利用UV-A处理津田芜菁(Tsuda turnip)和赤丸芜菁(Yurugi Akamaru turnip)块根24h后提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆了BrF3H基因。津田芜菁和赤丸芜菁的F3H基因完全相同。BrF3H的开放读码框为1077bp,编码358个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3H与甘蓝型油菜(Brassica napus)F3H-1的同源性为99%。Northern杂交结果显示,UV-A可以诱导BrF3H表达,基因的表达量与处理时间呈相关。 展开更多
关键词 芜菁 黄烷3-羟化酶基因 克隆与表达 序列分析
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独行菜La F3H基因克隆、序列分析及原核表达
17
作者 赵乐 马利刚 +3 位作者 张金燕 冯卫生 匡海学 郑晓珂 《中草药》 CSCD 北大核心 2018年第23期5626-5632,共7页
目的为了研究独行菜黄酮类化合物生物合成途径的关键基因,从独行菜中克隆了黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)基因,命名为LaF3H,并进行序列分析、原核表达和纯化。方法根据独行菜转录组数据中LaF3H基因序列设计特异性引物,... 目的为了研究独行菜黄酮类化合物生物合成途径的关键基因,从独行菜中克隆了黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)基因,命名为LaF3H,并进行序列分析、原核表达和纯化。方法根据独行菜转录组数据中LaF3H基因序列设计特异性引物,克隆LaF3H基因的cDNA序列,构建pET-32a-LaF3H原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达LaF3H重组蛋白。结果 LaF3H基因开放阅读框(ORF)长1080bp,编码359个氨基酸,其蛋白质相对分子质量为40 320。序列分析结果表明LaF3H具有F3H蛋白的5个保守基序,系统进化分析结果显示LaF3H蛋白与拟南芥等十字花科植物F3H蛋白同源性较高。通过构建原核表达载体pET-32a-LaF3H,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达LaF3H重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的LaF3H重组蛋白。结论克隆了LaF3H基因,获得LaF3H纯化蛋白,为下一步制备LaF3H蛋白抗体、酶学活性检测,研究LaF3H基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 独行菜 黄烷-3-羟化酶 基因克隆 序列分析 原核表达
百合黄烷酮3-羟化酶基因LhSorF3H的克隆与表达 预览
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作者 张星 杨捷 +2 位作者 彭梦笛 贾桂霞 何恒斌 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2325-2331,共7页
为了探究百合花色的调控机制,以东方百合品种‘索邦’(Sorbonne)的花蕾为试验材料,根据前期转录组测序结果,成功克隆出黄烷酮3羟化酶(flavanone 3 hydroxylase,F3H)基因的编码序列和基因组序列,其中,编码序列全长1110bp,可编码369个氨基... 为了探究百合花色的调控机制,以东方百合品种‘索邦’(Sorbonne)的花蕾为试验材料,根据前期转录组测序结果,成功克隆出黄烷酮3羟化酶(flavanone 3 hydroxylase,F3H)基因的编码序列和基因组序列,其中,编码序列全长1110bp,可编码369个氨基酸;基因组序列全长1438bp,包含3个外显子和2个内含子,命名该基因为LhSorF3H(GenBank登录号为MF614135)。生物信息学分析结果显示,黄烷酮3羟化酶在进化上具有较高的保守性。LhSorF3H编码的蛋白与郁金香(Tulipafosteriana)最为相似。半定量RTPCR结果显示,LhSorF3H在花被、柱头以及花柱中表达明显,在花丝、子房、嫩茎、茎生根及上部叶片中表达较弱,而在花药和中下部叶片中基本不表达。LhSorF3H在不同发育阶段的花被片中均有表达(S2和S6阶段除外);黑暗处理使LhSorF3H表达降低,黑暗处理2h的LhSorF3H表达量降到最低,之后表达量开始上升;转入光照条件后,LhSorF3H的表达水平持续增加。研究表明,LhSorF3H基因对昼夜节律和光照具有双重响应的特性。 展开更多
关键词 百合'索邦’ 黄烷3羟化酶基因 克隆 表达
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擎天凤梨花色素合成关键基因CHS、F3'H和DFR的克隆及表达分析 被引量:2
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作者 刘建新 丁华侨 +1 位作者 葛亚英 王炜勇 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期805-813,共9页
擎天凤梨‘Ostsra’是一种观赏红色苞片为主的高档盆栽花卉。一般认为植物苞片的呈色物质除叶绿素外多来源于花色素,而CHS、F3'H和DFR是在花色素的合成过程中的关键酶。本研究采用采用简并引物及同源克隆法获得了881 bp的CHS基因,编码... 擎天凤梨‘Ostsra’是一种观赏红色苞片为主的高档盆栽花卉。一般认为植物苞片的呈色物质除叶绿素外多来源于花色素,而CHS、F3'H和DFR是在花色素的合成过程中的关键酶。本研究采用采用简并引物及同源克隆法获得了881 bp的CHS基因,编码276个氨基酸的序列,GenBank登录号为KX364270;采用cDNA全长文库构建、EST批量测序及目标单克隆序列测通法,获得了F3'H和DFR基因。F3'H基因长1 176 bp,可编码325个氨基酸序列,GenBank登录号为KX364271;DFR基因长1 209 bp,可编码167个氨基酸的序列,GenBank登录号为KX364272。采用实时定量PCR法检测CHS、F3'H和DFR在‘Ostsra’苞片呈色过程中的表达变化,结果表明,3个基因在苞片变色过程中(绿苞-半红苞-全红苞)都呈现出递增的趋势,即随着苞片颜色的变深,3基因的表达量逐渐增加,全红状态时,表达量最高,而作为对照的绿叶,表达水平都是最低的。 展开更多
关键词 擎天凤梨 查儿合成基因 黄烷3-beta-羟化酶基因 二氢黄醇4-还原基因 表达分析
黄花蒿黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的克隆及其在烟草中的表达
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作者 龙金花 龚志华 +2 位作者 田娜 刘硕谦 肖文军 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2601-2609,共9页
通过SMART-RACE技术从黄花蒿中克隆得到了2 136 bp的黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的cDNA全长序列,该序列包含一个1 092 bp的完整编码区,编码364个氨基酸组成的蛋白。该蛋白的分子量为41.18 k D,理论等电点(p I)为5.67,是一种稳定的非分泌和... 通过SMART-RACE技术从黄花蒿中克隆得到了2 136 bp的黄烷酮3-羟化酶基因AaF3H的cDNA全长序列,该序列包含一个1 092 bp的完整编码区,编码364个氨基酸组成的蛋白。该蛋白的分子量为41.18 k D,理论等电点(p I)为5.67,是一种稳定的非分泌和非跨膜的亲水性蛋白,共有13个磷酸化位点,属于典型的2OG-FeⅡ_Oxy加氧酶超家族,二级结构以无规则卷曲为主。利用NCBI分析表明,AaF3H与菊花F3H蛋白的一致性达97%。经基因克隆、农杆菌介导将该基因转入烟草中,结果显示,相较于野生烟草,过表达AaF3H基因能显著转化柚皮素,说明AaF3H基因在黄花蒿黄酮类物质的生物合成中起重要作用,也为进一步研究黄花蒿中黄酮类物质的生物合成调控提供了基础。 展开更多
关键词 黄花蒿 黄烷-3-羟化酶基因 克隆 序列分析 转化烟草
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