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疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5中猪圆环病毒的检测
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作者 刘欣玉 黄艳秋 李玉华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期732-734,共3页
目的检测疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5是否存在外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)污染。方法对已建立的PCR方法进行灵敏度验证后,检测人二倍体细胞2BS和MRC-5中PCV1和PCV2污染情况。结... 目的检测疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5是否存在外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)污染。方法对已建立的PCR方法进行灵敏度验证后,检测人二倍体细胞2BS和MRC-5中PCV1和PCV2污染情况。结果两种细胞上清中最低均可检出1 pg的PCV1和PCV2 DNA,灵敏度较高;两种细胞中PCV检测结果均为阴性。结论在生产用人二倍体细胞2BS和MRC5中,均未检出PCV1和PCV2污染。 展开更多
关键词 人二倍体细胞 2BS细胞 MRC-5细胞 疫苗 猪圆环病毒 聚合酶链反应
细胞工厂在麻腮风系列疫苗生产中的应用
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作者 付永其 宋艳梅 +6 位作者 高静 张颖欣 刘辉 孙雅 申亚楠 律苗 杨云凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第10期1049-1054,共6页
目的利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,... 目的利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,按照《中国药典》三部(2015版)方法进行病毒滴度检测。结果细胞工厂制备的麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液滴度分别为大于5.2、6.1和5.7lgCCID50/mL,高于转瓶工艺,且符合《中国药典》三部(2015版)相关规定;1个40层细胞工厂制备的病毒原液量相当于1个转瓶的4至8倍,产量较高。细胞工厂制备的多批次麻腮风各单价及联合疫苗的病毒滴度均符合《中国药典》三部(2015版)相关标准,且病毒滴度热稳定性下降均不超过1个lg。结论利用细胞工厂制备麻腮风各单价及联合疫苗的工艺稳定,重复性好,质量可控,可用于规模化生产。 展开更多
关键词 细胞工厂 麻腮风系列疫苗 2BS细胞 鸡胚细胞 病毒滴度
带状疱疹疫苗生产中2BS细胞细胞工厂培养工艺的建立 被引量:3
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作者 梁雪 刘延威 +4 位作者 张宇 石磊 杨晓叶 李生军 沈红杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1485-1487,1492共4页
目的建立带状疱疹疫苗生产中2BS细胞在细胞工厂中的培养工艺。方法将2BS细胞复苏(28代)后,连续传代至35、36代,再分别按1∶4、1∶2比例传至10层细胞工厂中,采用不同的加液量(200、300、400 ml/层)进行培养,显微镜下观察细胞形态,并... 目的建立带状疱疹疫苗生产中2BS细胞在细胞工厂中的培养工艺。方法将2BS细胞复苏(28代)后,连续传代至35、36代,再分别按1∶4、1∶2比例传至10层细胞工厂中,采用不同的加液量(200、300、400 ml/层)进行培养,显微镜下观察细胞形态,并进行细胞计数。取细胞工厂,按MOI 0.008接种水痘-带状疱疹病毒,制备成带状疱疹减毒活疫苗,检测疫苗原液及成品的滴度;疫苗成品进行37℃稳定性试验;采用酶联免疫法检测抗生素残留量和牛血清白蛋白残留量;凝胶法检测内毒素含量;水分容量滴定法检测水分含量。结果 2BS细胞按1∶2比例传代,细胞工厂单层加液量为300 ml,可制备单层致密、优质的细胞,细胞工厂收获时细胞病变达80%以上,且病变细胞圆润、典型、广泛,细胞形态保持较好;传代比例为1∶4的细胞制备的疫苗原液及成品的滴度明显低于传代比例为1∶2的细胞制备的疫苗,且1∶4传代的细胞制备的疫苗成品37℃稳定性滴度不符合带状疱疹疫苗放置1周病毒滴度不小于4.6 lg PFU/ml的质量标准;其他各项质量指标均符合要求。结论建立了带状疱疹疫苗生产中2BS细胞在细胞工厂中的培养工艺,利用细胞工厂可制备出质量均一、致密优质的2BS细胞。 展开更多
关键词 带状疱疹疫苗 2BS细胞 细胞工厂
两种方法制备的水痘-带状疱疹病毒(Oka株)毒种感染2BS细胞的敏感性 被引量:4
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作者 梁慧颖 隋波 +5 位作者 赫宝双 梁雪 李生军 张宇 杨晓叶 沈红杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1459-1462,共4页
目的用现有方法及新方法分别制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)(Oka株)毒种,比较两种方法制备的毒种对2BS细胞的感染复数及増殖动态差异。方法用现有方法(用含2%小牛血清的病毒维持液于-70℃条件下冻存Oka株毒种... 目的用现有方法及新方法分别制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)(Oka株)毒种,比较两种方法制备的毒种对2BS细胞的感染复数及増殖动态差异。方法用现有方法(用含2%小牛血清的病毒维持液于-70℃条件下冻存Oka株毒种)和新方法(用含90%小牛血清的病毒冻存液于-196℃条件下冻存Oka株毒种)制备第47代Oka株VZV毒种,采用不同的MOI(0.000 5、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1)感染第37代2BS细胞,观察细胞病变(CPE)情况,收获不同MOI接种和培养不同时间点病毒制备疫苗,采用噬斑法检测疫苗原液、成品滴度以及37℃稳定性,确定两种方法制备的毒种对2BS细胞感染的最适MOI。结果现有方法制备毒种以0.01~0.1 MOI感染2BS细胞72 h后,病变达到高峰期;新方法制备毒种以0.001~0.01 MOI感染2BS细胞72 h后,病变达到高峰期。两种方法收获的病毒液制备的成品疫苗的病毒滴度为4.4~4.6 lg PFU/ml,37℃放置1周,病毒滴度3.8~4.0 lg PFU/ml;疫苗原液、成品滴度以及37℃稳定性无差异,均达到本公司水痘减毒活疫苗制造与检定规程制定的相关标准。结论现有方法和新方法制备的毒种最适MOI分别为0.01~0.1和0.001~0.01,新方法制备的毒种更适合水痘疫苗的生产。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 2BS细胞 感染复数 病毒滴度
比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析 预览 被引量:3
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作者 郝鹏博 谢秋红 +1 位作者 杜岩 杨蕾蕾 《中国实用医药》 2011年第21期 60-61,共2页
目的比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度(VT)。方法分别配制两种浓度的胰酶和EDTA:0.125%、0.25%的胰酶,0.01%、0.02%的EDTA各1000ml,按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2B... 目的比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度(VT)。方法分别配制两种浓度的胰酶和EDTA:0.125%、0.25%的胰酶,0.01%、0.02%的EDTA各1000ml,按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细胞中,消化后,用显微镜观察细胞形态,消化液离心、浓缩、冻融、检测并比较病毒滴度。结果与0.125%、0.25%的胰酶、0.01%EDTA,0.25%的胰酶与0.02%的EDTA混合消化液相比,用0.02%的EDTA消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞,冻融后的病毒滴度提高了1.3~0.8个log值。结论用0.2%EDTA消化液消化的含有水痘病毒的细胞获得的病毒滴度最好。 展开更多
关键词 胰酶 EDTA 2BS细胞 病毒滴度
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衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达
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作者 任文君 王群义 +2 位作者 吕小凤 毛泽斌 蒋晓刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期 215-218,共4页
目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异 PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶... 目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异 PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段 将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域 通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件。结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高 在IG-FBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点 5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件。结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30bp序列存在一个新的增强子元件IEE(IGFBP-3enhancerelement),对IGFBP-3的表达起到调控作用。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白-3 IEE(IGFBP-3 enhancerelement) 2BS细胞
H2O2诱导的2BS早老细胞中自噬体增多 被引量:1
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作者 谢步善 韩秀丽 +3 位作者 陈丽婷 何维清 白俊海 毛泽斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期753-758,共6页
自噬在细胞复制性衰老中起着重要的作用.然而,早老细胞中的自噬现象基本无相关的报道.本文通过外源性过氧化氢(H2O2)的诱导,构建人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞)早老模型.首先,通过SA-β-gal染色,验证细胞早老;从形态学和特异标志... 自噬在细胞复制性衰老中起着重要的作用.然而,早老细胞中的自噬现象基本无相关的报道.本文通过外源性过氧化氢(H2O2)的诱导,构建人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS细胞)早老模型.首先,通过SA-β-gal染色,验证细胞早老;从形态学和特异标志分子及雷帕霉素作用的靶位点(mTOR)信号通路不同角度检测自噬的变化,其中形态学检测包括丹(磺)酰戊二胺(MDC)自噬分子定量法及电镜自噬超微结构的观察;特异标志分子LC3的检测包括GFP-LC3自噬定位法和免疫印迹法检测LC3;及检测mTOR信号通路下游激酶p70S6蛋白的表达变化.结果表明,过氧化氢诱导的早老细胞中自噬体相对年轻细胞明显增多,且具有保护早老细胞的作用. 展开更多
关键词 自噬 人胚肺二倍体成纤维细胞 早老 过氧化氢
刺五加对人胚肺二倍体纤维母细胞生长的影响 预览 被引量:3
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作者 黄志卫 马忠森 +3 位作者 王秀丽 吴艳峰 董春玲 赫国志 《广西医科大学学报》 CAS 2004年第1期 28-30,共3页
目的:探讨刺五加(APS)对人胚肺二倍体纤维母细胞(2BS)增殖、凋亡的影响.方法:采用生物活性法观察不同浓度APS在不同时间对2BS细胞增殖的抑制作用,利用流式细胞仪检测其诱导2BS细胞凋亡小体形成百分率及对细胞周期的影响,并与甲基强的松... 目的:探讨刺五加(APS)对人胚肺二倍体纤维母细胞(2BS)增殖、凋亡的影响.方法:采用生物活性法观察不同浓度APS在不同时间对2BS细胞增殖的抑制作用,利用流式细胞仪检测其诱导2BS细胞凋亡小体形成百分率及对细胞周期的影响,并与甲基强的松龙(M-pred)比较.结果:①APS和M-pred对2BS细胞均有增殖抑制作用,与无药空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),但两药作用相比差异无统计学意义(P>0.05);②APS和M-pred均有诱导2BS细胞凋亡作用,主要作用于S期,2BS细胞凋亡小体形成百分率与无药空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),但两药作用相比差异无统计学意义(P>0.05).结论:APS有显著抑制2BS细胞增殖并诱导其凋亡的作用、活性与M-pred相近,但由于APS尚有多种药理作用而无不良副反应,所以是治疗肺纤维化较好的药物. 展开更多
关键词 人胚肺二倍体纤维母细胞 刺五加 增殖抑制 细胞凋亡
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弓形体对三种培养细胞感染的实验研究 预览 被引量:6
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作者 解中坚 李宏军 +1 位作者 李春华 吴玉秀 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1990年第6期 39-42,共4页
尽管弓形体可以侵犯人和动物的多种组织器官,但却常见侵犯中枢神经系统(CNS)。为判断CNS细胞对弓形体的感染是否较其它组织细胞敏感,我们采用人脑多形性胶质母细胞瘤(BT_(325))、人胚胎肺(2BS)、非洲绿猴肾(VERO)三种传代的培养细胞,定... 尽管弓形体可以侵犯人和动物的多种组织器官,但却常见侵犯中枢神经系统(CNS)。为判断CNS细胞对弓形体的感染是否较其它组织细胞敏感,我们采用人脑多形性胶质母细胞瘤(BT_(325))、人胚胎肺(2BS)、非洲绿猴肾(VERO)三种传代的培养细胞,定量接种弓形体速殖子,在4.5小时内观察3种细胞的感染情况。结果表明:(1)BT_(325)细胞感染率最高,其多重感染细胞占总感染细胞的百分率亦高,而且感染细胞与其它两种细胞相比,差异非常显著,说明BT_(325) 细胞对弓形体较为敏感。(2)两种胚胎性细胞(BT_(325)与2BS)较成体细胞(VERO)易感。 展开更多
关键词 弓形体 细胞培养
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Identification of C-geranylated flavonoids from Paulownia catalpifolia Gong Tong fruits by HPLC-DAD-ESI-MS/MS and their anti-aging effects on 2BS cells induced by H2O2
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作者 TANG Wen-Zhao WANG Ying-Ai +2 位作者 GAO Tian-Yang WANG Xiao-Jing ZHAO Yun-Xue 《中国天然药物:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第5期384-391,共8页
The fruits of Paulownia catalpifolia Gong Tong are used as a Chinese folk herbal medicine for the treatment of enteritis, tonsillitis, bronchitis, and dysentery, etc. Our previous study has identified new C-geranylate... The fruits of Paulownia catalpifolia Gong Tong are used as a Chinese folk herbal medicine for the treatment of enteritis, tonsillitis, bronchitis, and dysentery, etc. Our previous study has identified new C-geranylated flavanones with obvious anti-proliferative effects in lung cancer A549 cells. In the present study, a new C-geranylated flavone, paucatalinone C(1) and five known C-geranylated flavanones(2-6) were isolated. In addition, a total of 34 C-geranylated flavonoids were detected by HPLC-DAD-ESI-MS/MS coupling techniques from the CH_2Cl_2 extract of P. catalpifolia. Futhermore, anti-aging effects of isolated compounds were evaluated in vitro with premature senescent 2BS cells induced by H_2O_2. Phytochemical results indicated that P. catalpifolia was a natural resource of abundant C-geranylated flavonoids. Diplacone(3) and paucatalinone A(5) were the potent anti-aging agents in the premature senescent 2BS cells induced by H_2O_2 and the C-geranyl substituent may be an important factor because of its lipophilic character. 展开更多
Effect of PKCα on the gene expression related with proliferation and activity of transcription factor AP-1 被引量:1
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《中国科学通报:英文版》 SCIE 1997年第23期1986-1989,共4页
PROTEIN kinase C (PKC) is a serine/thronine kinase, which plays a major role in cell sig-nalling, growth control and tumorigenesis. PKC is encoded by a multigene family, which havebeen identified as consisting of at... PROTEIN kinase C (PKC) is a serine/thronine kinase, which plays a major role in cell sig-nalling, growth control and tumorigenesis. PKC is encoded by a multigene family, which havebeen identified as consisting of at least 12 members in mammalian tissues. PKC isoforms differin their biochemical properties, tissue-specific expression and intracellular localization. Thedifferences imply that the individual PKC isoforms have a distinct physiological function. Inorder to study the role of specific PKC subtype in cell proliferation and transformation, weconstructed the human embryonic lung cell (2BS) model stably overexpressing PKC_α andfound that the overexpression of PKC_α promoted the growth rate and caused the transform- 展开更多
关键词 protein KINASE 2BS cell TRANSCRIPTION factor AP-1.
Construction of human embryonic lung cell model for overproduction of protein kinase Ca and its preliminary analysis
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作者 王向阳 吴承军 柳惠图 《中国科学通报:英文版》 SCIE 1996年第6期506-511,共6页
Protein kinase Cα(PKC), a multifunctional Ca<sup>2+</sup>- and phospholipid-dependent kinase isthough to play an important role in cellular signal transduction, growth regulation andtumorigenesis. Mol... Protein kinase Cα(PKC), a multifunctional Ca<sup>2+</sup>- and phospholipid-dependent kinase isthough to play an important role in cellular signal transduction, growth regulation andtumorigenesis. Molecular cloning technique demonstrated tha PKC was encoded by amultigene family. To date, at least 12 members of the PKC family have been identified.It is suggested that PKC isoforms differ in their cellular functions. In order to study thefurther role of specific PKC subtype in cell growth regulation, we constructed PKCα ex- 展开更多
关键词 PROTEIN KINASE 2BS cell proliferation.
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