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Cre-loxP重组酶技术敲除酿酒酵母丙酮酸脱羧酶编码基因pdc1和pdc5 预览
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作者 刘磊 王长丽 葛菁萍 《生物技术通讯》 CAS 2019年第4期479-485,共7页
目的:分别构建含有酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因pdc1和pdc5同源序列loxP-kanMX-loxP的质粒,敲除丙酮酸脱羧酶基因。方法:以两端含40 bp pdc1或pdc5的同源序列为引物,以pUG6质粒DNA为模板,通过PCR扩增loxP-kanMX-loxP基因敲除片段,将其分别... 目的:分别构建含有酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因pdc1和pdc5同源序列loxP-kanMX-loxP的质粒,敲除丙酮酸脱羧酶基因。方法:以两端含40 bp pdc1或pdc5的同源序列为引物,以pUG6质粒DNA为模板,通过PCR扩增loxP-kanMX-loxP基因敲除片段,将其分别插入pMD18-T、pEASY-T3,构建表达载体pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5并测序,构建后的质粒利用醋酸锂转化法转化酿酒酵母H5,经筛选鉴定后进行摇瓶发酵试验。结果:分别含有1693、1672 bp目的片段pdc1-loxP-kanMX、pdc5-loxP-kanMX的质粒pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5构建成功,发酵试验显示重组酿酒酵母H5-01与H5-02较原始菌株的乙醇产量分别下降了14.53%与17.54%,证明pdc1或pdc5基因被敲除。结论:利用Cre-loxP重组酶技术分别敲除了酿酒酵母pdc1和pdc5基因,为后续在酿酒酵母中连续敲除pdc1和pdc5奠定了良好的技术基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 丙酮酸脱羧酶 醋酸锂转化法 2 3-丁二醇
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2,3-丁二醇脱氢酶基因(BudC)过表达菌株的构建和初步鉴定 预览
2
作者 王长丽 孙雯 +1 位作者 宋刚 葛菁萍 《中国农学通报》 2018年第27期89-96,共8页
旨在过表达Bud C进而上调2,3-丁二醇(2,3-Butanediol,2,3-BD)的合成,通过基因工程手段构建整合载体p R1SW-Bud C,经PCR和酶切双重验证后将其电转化至产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79。结果经卡那霉素筛选,获得一株菌株K.oxy... 旨在过表达Bud C进而上调2,3-丁二醇(2,3-Butanediol,2,3-BD)的合成,通过基因工程手段构建整合载体p R1SW-Bud C,经PCR和酶切双重验证后将其电转化至产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79。结果经卡那霉素筛选,获得一株菌株K.oxytoca HD79-01。以原始菌株为对照,摇瓶发酵检测2,3-BD含量和相关酶活,q RT-PCR检测Bud C表达差异,最终Bud C在HD79-01中转录水平的表达量为HD79的45.25倍(P〈0.01)。摇瓶发酵显示2,3-BD的最高产量、转化率和生产强度分别提高了24.54%、10.97%、45.08%[分别为30.818±0.003 g/L、0.253±0.013 g/g、0.43±0.01 g/(L·h)],酶活提高了3.61倍(0.563±0.003 U/mg)。因此,2,3-丁二醇脱氢酶基因(Bud C)过表达菌株构建不仅成功的提高了2,3-BD的产量也为实现2,3-BD的工业化生产奠定基础。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 产酸克雷伯氏菌 2 3-丁二醇脱氢酶 荧光定量PCR 电转化法
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克雷伯肺炎杆菌2,3-丁二醇合成途径功能基因研究 预览
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作者 周吉东 郝晓蔚 +2 位作者 王敏 史吉平 郝健 《山东农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页
克雷伯肺炎杆菌2,3-丁二醇合成相关基因形成bud操纵子,其中budB编码乙酰乳酸合成酶,budC编码丁二醇脱氢酶。除了bud操纵子中的基因外,在缬氨酸合成途径中ilvB和ilvI也编码乙酰乳酸合成酶,dhaD、gldA和acyI三个脱氢酶都报道具有丁二... 克雷伯肺炎杆菌2,3-丁二醇合成相关基因形成bud操纵子,其中budB编码乙酰乳酸合成酶,budC编码丁二醇脱氢酶。除了bud操纵子中的基因外,在缬氨酸合成途径中ilvB和ilvI也编码乙酰乳酸合成酶,dhaD、gldA和acyI三个脱氢酶都报道具有丁二醇脱氢酶活性。但是这些基因编码的酶蛋白对菌株合成2,3-丁二醇的贡献并不清楚。本文分别构建了budB、ilvB、ilvI单突变株,和kp-ΔbudC-ΔdhaD-ΔgldA-Δacyl四基因突变株,通过批次发酵实验对这些菌株的生理特性进行了研究。结果显示ilvB和ilvI基因突变对于2,3-丁二醇合成无明显影响,而budB突变株丧失2,3-丁二醇合成能力,表明budB编码的酶蛋白是2,3-丁二醇合成途径中唯一的功能性乙酰乳酸合成酶。kp-ΔbudC-ΔdhaD-ΔgldA-Δacyl四基因缺失突变株合成2,3-丁二醇能力相较于kp-ΔbudC有所下降,但仍然能合成2,3-丁二醇,表明dhaD,gldA和acyI编码的酶蛋白对于2,3-丁二醇合成贡献微弱,同时表明细胞中具有丁二醇脱氢酶功能的醇脱氢酶种类较多。 展开更多
关键词 克雷伯肺炎杆菌 2 3-丁二醇 乙酰乳酸合成酶 丁二醇脱氢酶
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1,3-丙二醇四塔精馏提纯工艺优化 预览
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作者 罗吉安 石国柱 +2 位作者 方建军 杨德华 张赟 《化工设计通讯》 CAS 2018年第7期77-78,共2页
利用Aspen Plus软件对PDO的四塔精馏提纯工艺进行了模拟计算,在常规四塔精馏模拟计算基础上进行了优化,提出了一种新的四塔精馏提纯工艺,并用Aspen Plus软件进行了比较研究,研究结果表明,优化后的四塔精馏提纯工艺相对于常规精馏工艺综... 利用Aspen Plus软件对PDO的四塔精馏提纯工艺进行了模拟计算,在常规四塔精馏模拟计算基础上进行了优化,提出了一种新的四塔精馏提纯工艺,并用Aspen Plus软件进行了比较研究,研究结果表明,优化后的四塔精馏提纯工艺相对于常规精馏工艺综合能耗降低约30%。 展开更多
关键词 1 3-丙二醇 2 3-丁二醇 甘油 精馏 ASPEN PLUS
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高产3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二醇菌株的筛选及其应用研究 预览 被引量:1
5
作者 李兰 陈斌 吴文睿 《酿酒》 CAS 2018年第3期87-90,共4页
研究从古井贡酒窖泥中筛选出了一株高产3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二醇的功能菌,编码为GJJN BL0101,结合功能菌的形态学特征、Biolog微生物鉴定及分子生物学鉴定结果,该菌种为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens),其代谢产物3-羟基... 研究从古井贡酒窖泥中筛选出了一株高产3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二醇的功能菌,编码为GJJN BL0101,结合功能菌的形态学特征、Biolog微生物鉴定及分子生物学鉴定结果,该菌种为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens),其代谢产物3-羟基-2-丁酮为6000mg/L、2,3-丁二醇为30000mg/L。同时我们对该功能菌在白酒酿造中的应用进行了初步研究,将功能菌发酵液按一定比例加入出池酒醅进行蒸馏,可大幅提高基酒中3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二醇的含量,研究结果表明,该菌株在发酵工业中具有应用潜力。 展开更多
关键词 古井贡酒窖泥 3-羟基-2-丁酮 2 3-丁二醇 解淀粉芽孢杆菌
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高产光学纯(R,R)-2,3-丁二醇工程菌株构建与发酵优化
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作者 黄艳燕 陈先锐 +5 位作者 彭龙云 叶柳健 李检秀 蒙健宗 张云开 谢能中 《生物技术》 2018年第2期178-184,共7页
[目的]构建能够专一性合成光学纯(R,R)-2,3-丁二醇的大肠杆菌工程菌,并进行发酵条件优化。[方法]将来源于多粘芽孢杆菌的(R,R)-2,3-丁二醇脱氢酶基因bdh,来源于阴沟肠杆菌的α-乙酰乳酸合成酶基因bud B和α-乙酰乳酸脱羧酶基因bud ... [目的]构建能够专一性合成光学纯(R,R)-2,3-丁二醇的大肠杆菌工程菌,并进行发酵条件优化。[方法]将来源于多粘芽孢杆菌的(R,R)-2,3-丁二醇脱氢酶基因bdh,来源于阴沟肠杆菌的α-乙酰乳酸合成酶基因bud B和α-乙酰乳酸脱羧酶基因bud A与表达载体p Tr C99A连接,导入大肠杆菌中构建人工合成途径。筛选最适的培养基和发酵条件,提高(R,R)-2,3-丁二醇的产量、产率和得率。[结果]获得高效合成(R,R)-2,3-丁二醇的工程菌株GXASB,筛选到最适碳源及其浓度为120 g/L木薯淀粉,最适pH为6.5,最适接种量为10%,在发酵罐中进行同步糖化法发酵,(R,R)-2,3-丁二醇产量达到105.28 g/L,光学纯为99.1%,得率为0.47 g/g,生产强度为1.95 g/(L·h)。[结论]在大肠杆菌中表达基因簇bud B-bud A-bdh能够专一性合成光学纯(R,R)-2,3-丁二醇,经优化发酵条件后,能够显著提高(R,R)-2,3-丁二醇的合成效率。同时工程菌能够利用非粮原料木薯淀粉高效生产(R,R)-2,3-丁二醇,补料发酵产量达到105.28 g/L,为使用廉价原料工业化生产(R,R)-2,3-丁二醇提供参考。 展开更多
关键词 (R R)-2 3-丁二醇 人工合成途径 合成生物学 大肠杆菌基因工程菌 非粮原料 发酵条件优化
产2,3-丁二醇高木糖耐性肺炎克雷伯氏菌转录组学分析与发酵优化 预览
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作者 郭学武 张玉 +4 位作者 关翔宇 倪晓丰 汪庆 陈叶福 肖冬光 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第8期159-169,共11页
选育高木糖耐性肺炎克雷伯氏菌并对其进行转录组学分析与产2,3-丁二醇发酵条件的优化。首先通过适应性进化定向筛选出了具有高木糖耐受能力和2,3-丁二醇产量提高的肺炎克雷伯氏菌(KP2),然后对其进行转录组学分析与发酵条件优化。... 选育高木糖耐性肺炎克雷伯氏菌并对其进行转录组学分析与产2,3-丁二醇发酵条件的优化。首先通过适应性进化定向筛选出了具有高木糖耐受能力和2,3-丁二醇产量提高的肺炎克雷伯氏菌(KP2),然后对其进行转录组学分析与发酵条件优化。结果显示,筛选出的高木糖耐性的肺炎克雷伯氏茵木糖的转化率提高了174.5%,2,3-丁二醇的产量提高了227%。转录纽分析结果表明亲本菌株KPG和KP2菌株差异表达基因中有242个基因上调和263个基因下调。Pathway分析表明,转录水平的变化主要表现在信号转导、碳水化合物代谢、能量代谢和其它物质代谢等。在1L反应器中,初始木糖浓度120g/L时最优发酵条件为:温度35℃,转速230r/min,通气量0.7L/min,最适pH值5.9。在最优条件下,2,3-丁二醇产量达43.75g/L,相比优化前提高了32.7%。本研究获得了高效利用木糖生产2,3-丁二醇的菌株,对表型变化产生的机理在分子水平上进行阐述,并得到了最优的发酵条件,结果可以为2,3-丁二醇的生物转化提供参考,对2,3-丁二醇的生物法生产具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 适应性进化 肺炎克雷伯氏菌 转录组学分析 响应面优化 2 3-丁二醇
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Klebsiella pneumoniae CICC10011发酵产2,3-丁二醇的工艺研究
8
作者 樊亚超 张霖 +3 位作者 李晓姝 王鹏翔 姚新武 乔凯 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期68-74,共7页
2,3-丁二醇应用广泛,是一种潜在的平台化合物,可以用于替代传统平台化合物-四碳烃。基于能源安全及绿色环保的需求,生物炼制制备2,3-丁二醇受到人们的青睐。与化学法相比,生物炼制制备2,3-丁二醇具有明显的优势。因此,开发合适的2,3-丁... 2,3-丁二醇应用广泛,是一种潜在的平台化合物,可以用于替代传统平台化合物-四碳烃。基于能源安全及绿色环保的需求,生物炼制制备2,3-丁二醇受到人们的青睐。与化学法相比,生物炼制制备2,3-丁二醇具有明显的优势。因此,开发合适的2,3-丁二醇发酵工艺是实验室研究的重点。针对菌种Klebsiella pneumoniae CICC10011,研究人员对菌种发酵产2,3-丁二醇的性质进行了初步考察,并通过控制不同的发酵条件,研究了pH、通空气量和转速在发酵过程中对菌种代谢的影响,从而确定了菌种发酵产2,3-丁二醇的工艺条件。发酵过程中,pH、通空气量以及转速均采用两段调控。在前12h菌种生长阶段,控制pH 6.8,通空气量1.0vvm,转速400r/min,转发酵之后控制发酵条件为pH 6.0,通空气量0.5vvm,转速300r/min。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 发酵工艺 两段调控
代谢工程改造酿酒酵母生产2,3-丁二醇的研究进展 预览
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作者 刘德安 王长丽 +1 位作者 丁昊 葛菁萍 《中国酿造》 北大核心 2018年第9期6-11,共6页
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为“细胞动力车间”能够生产生物燃料和工业产品,2,3-丁二醇(2,3-BD)是其重要的一种次级代谢产物,广泛应用于工业化生产。但野生型S.cerevisiae合成2,3-BD的效率低,制约着工业化生产进程,因此,应... 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为“细胞动力车间”能够生产生物燃料和工业产品,2,3-丁二醇(2,3-BD)是其重要的一种次级代谢产物,广泛应用于工业化生产。但野生型S.cerevisiae合成2,3-BD的效率低,制约着工业化生产进程,因此,应用代谢工程法优化代谢途径来解决这一问题极其重要。该研究对近年来利用代谢工程手段来提高S.cerevisiae.2,3-BD产量的策略进行了总结,主要包括:过表达2,3-BD合成途径中的关键酶编码基因;敲除编码乙醇、甘油、乙酸等分支途径的关键酶基因;利用可再生能源合成2,3-BD;应用辅因子工程手段对S.cerevisiae合成2,3-BD的代谢网络进行重新设计及合理改造等。对S.cerevisiae未来的研究方向进行了展望,为实现生物燃料2,3-BD的工业化生产提供了保障。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 酿酒酵母 代谢工程 策略
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酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WBG3菌株发酵特性研究 预览
10
作者 佟天奇 裴芳艺 +2 位作者 王长丽 孙健 葛菁萍 《中国农学通报》 2018年第32期49-56,共8页
通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WBG3进行菌株发酵特性的研究,旨在获得一株性能良好的2,3-丁二醇(2,3-BD)生产菌株。本研究采用摇瓶发酵法,改变发酵过程中的底物浓度、溶氧量和酸碱浓度,紫外分光光度法和高效液相色谱(High Pe... 通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)WBG3进行菌株发酵特性的研究,旨在获得一株性能良好的2,3-丁二醇(2,3-BD)生产菌株。本研究采用摇瓶发酵法,改变发酵过程中的底物浓度、溶氧量和酸碱浓度,紫外分光光度法和高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测2,3-BD合成途径中关键中间产物(丙酮酸、α-乙酰乳酸、乙偶姻)含量和发酵产物浓度。结果表明:S. cerevisiae WBG3菌株生长良好,在80 g/L葡萄糖、30℃和200 r/min条件下,丙酮酸、α-乙酰乳酸和乙偶姻含量分别达到0.10±0.03 g/L、3.38±0.06 g/L和0.17±0.02 g/L,乙醇转化率最低为0.44±0.02 g/g。添加乙酸后,甘油产量和乙醇转化率分别较对照组降低了9.5%和10%,2,3-BD的最终产量为0.36±0.02 g/L。因此,S. cerevisiae WBG3具备生产2,3-BD的潜力。 展开更多
关键词 酿酒酵母 HPLC 2 3-丁二醇 乙酸 发酵特性
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2R,3R-丁二醇和2,3-丁二醇诱导匍匐翦股颖抗病性的比较 预览 被引量:1
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作者 马源 马晖玲 刘兴菊 《草原与草坪》 CAS CSCD 2017年第1期79-83,91共6页
以2R,3R-丁二醇和2,3-丁二醇作为诱抗剂,在诱导匍匐翦股颖产生对褐斑病抗性的过程中,重点比较了不同施用方式的诱抗效果,筛选出了诱抗剂的最佳作用方式和浓度。结果表明:匍匐翦股颖接菌后第15d,2R,3R-丁二醇根部注射处理下,100μmol/L... 以2R,3R-丁二醇和2,3-丁二醇作为诱抗剂,在诱导匍匐翦股颖产生对褐斑病抗性的过程中,重点比较了不同施用方式的诱抗效果,筛选出了诱抗剂的最佳作用方式和浓度。结果表明:匍匐翦股颖接菌后第15d,2R,3R-丁二醇根部注射处理下,100μmol/L的病情指数最低,诱导效果最佳;而与叶面喷施相比,叶面喷施的诱导效果不明显;2,3-丁二醇根部注射处理下,250μmol/L的病情指数最低,诱导效果最佳,而与叶面喷施相比,叶面喷施的诱导效果不明显。结果表明,100μmol/L的2R,3R-丁二醇与250μmol/L的2,3-丁二醇根部注射可有效诱导匍匐翦股颖产生对褐斑病的抗性。 展开更多
关键词 匍匐翦股颖 2R 3R-丁二醇 2 3-丁二醇 褐斑病
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CuO/凹凸棒土负载型催化剂的合成及其催化2,3-丁二醇的脱氢反应 预览
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作者 冯涛 姜霆 +1 位作者 黄娣 余定华 《石油化工》 CSCD 北大核心 2017年第8期979-984,共6页
采用湿法浸渍制备了一系列CuO/凹凸棒土负载型催化剂,并用于2,3-丁二醇的脱氢反应,采用XRD、N2吸附-脱附、TEM、H2-TPR和XPS等表征了催化剂的结构。实验结果表明,与凹凸棒土相比,CuO/凹凸棒土催化剂可提高3-羟基丁酮的选择性,抑... 采用湿法浸渍制备了一系列CuO/凹凸棒土负载型催化剂,并用于2,3-丁二醇的脱氢反应,采用XRD、N2吸附-脱附、TEM、H2-TPR和XPS等表征了催化剂的结构。实验结果表明,与凹凸棒土相比,CuO/凹凸棒土催化剂可提高3-羟基丁酮的选择性,抑制2,3-丁二醇脱水产生丁酮;CuO负载量为10%(W)的凹凸棒土催化剂的活性最高,反应温度为240℃时,2,3-丁二醇的转化率和3-羟基丁酮的选择性分别为95.2%,66.8%;较高的反应温度有助于2,3-丁二醇的转化,但是低温更利于3-羟基丁酮的生成;CuO负载量为10%(w)的凹凸棒土催化剂的优越性能归属于其独特的氧化还原性能,源于催化剂表面分散均匀的纳米CuO颗粒及其与凹凸棒土之间的强相互作用。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 3-羟基丁酮 凹凸棒土 氧化还原性能 相互作用
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二氧化钛光解水过程中乙醇选择性光催化氧化反应研究 被引量:1
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作者 孟超 王华 +2 位作者 吴煜斌 付贤智 员汝胜 《化学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期508-513,共6页
光催化分解水的产氢体系往往采用小分子醇作为电子供体,本工作以纯金红石相与混晶结构P25(80%锐钛矿与20%金红石相)二氧化钛为光催化剂,研宄光解水过程中牺牲剂乙醇的氧化路径与反应机理.研究结果表明,_尢论是金红石相还是锐钛... 光催化分解水的产氢体系往往采用小分子醇作为电子供体,本工作以纯金红石相与混晶结构P25(80%锐钛矿与20%金红石相)二氧化钛为光催化剂,研宄光解水过程中牺牲剂乙醇的氧化路径与反应机理.研究结果表明,_尢论是金红石相还是锐钛矿相为主的P25二氧化钛,其无氧条件下光催化氧化乙醇的主要终端产物均为乙醛,而不是2,3-丁二醇,2,3-丁二醇产物主要由醇醛特定波长范围内的有机光化学反应偶联产生.另外,不同晶相二氧化钛氧化乙醇至2,3.丁二醇的选择性差异可能主要由非均相固-液界面所产生羟基自由基迁移至溶液体系的距离不同所致,进而与有机光化学反应产生的·CH(OH)CH,自由基发生不同路径与频率的猝灭反应.本研究对乙醇无氧光催化反应步骤的探索与解析可为小分子醇参与的醇类重整反应提供机理借鉴与设计思路. 展开更多
关键词 光催化 -氧化钛 乙醇 羟基自由基 2 3-丁二醇
克雷伯氏肺炎杆菌群体感应系统缺失对合成2,3-丁二醇的影响 预览
14
作者 柳鹏福 王晨红 +2 位作者 储消和 史吉平 郝健 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期61-67,共7页
通过同源重组技术敲除克雷伯氏肺炎杆菌的luxS基因,使其群体感应系统失活,研究突变株在2,3-丁二醇发酵培养基中的生长状况及对2,3-丁二醇合成的影响;同时检测对其他副产物合成的影响,通过对野生株和luxS突变株发酵合成2,3-丁二... 通过同源重组技术敲除克雷伯氏肺炎杆菌的luxS基因,使其群体感应系统失活,研究突变株在2,3-丁二醇发酵培养基中的生长状况及对2,3-丁二醇合成的影响;同时检测对其他副产物合成的影响,通过对野生株和luxS突变株发酵合成2,3-丁二醇的结果进行研究发现,与野生株相比,失去了群体感应功能的luxS突变株利用同样质量浓度的葡萄糖合成2,3-丁二醇的能力提高了47.75%,同时琥珀酸、乳酸和乙醇等主要副产物的质量浓度大幅降低。 展开更多
关键词 克雷伯氏肺炎杆菌 2 3-丁二醇 群体感应系统 LUXS基因
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乙酰乳酸合成酶基因(budB)整合表达载体的构建 预览
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作者 葛菁萍 邓利廷 +2 位作者 孙雯 宋刚 平文祥 《中国农学通报》 2017年第8期25-30,共6页
为了进一步了解2,3-丁二醇合成路径中关键酶的表达量与产量之间的关系,本研究根据Gen Bank中乙酰乳酸合成酶基因(bud B)的基因序列设计引物,以产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到目标酶基... 为了进一步了解2,3-丁二醇合成路径中关键酶的表达量与产量之间的关系,本研究根据Gen Bank中乙酰乳酸合成酶基因(bud B)的基因序列设计引物,以产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到目标酶基因,目的片段全长1680 bp。以表达载体p RSFDuet-1为骨架,利用基因工程手段构建整合表达载体p R1SW-bud B。电转化法将其转化至菌株HD79感受态细胞中,通过高浓度Kan筛选和PCR双重鉴定验证后测定ALS酶活力。结果表明,乙酰乳酸合成酶基因整合表达载体构建成功,酶活可达1.0627 U/mg,比原始菌株提高了4.35倍。在一定程度上为实现2,3-丁二醇的工业化生产奠定基础。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 乙酰乳酸合成酶 产酸克雷伯氏菌 电转化法 酶活力
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budR表达水平对克雷伯氏菌甘油代谢的影响 预览 被引量:2
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作者 陆信曜 季广建 +1 位作者 宗红 诸葛斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期24-27,共4页
通过过量表达和反义RNA抑制改变budR表达水平,考察budR表达水平对克雷伯氏菌甘油代谢的影响。过表达budR使得Bud B和Bud C的酶活提高了48.7%和69.7%,1,3-丙二醇产量降低了12.6%,2,3-丁二醇含量增加了73.3%,同时乙酸含量显著降低。反义RN... 通过过量表达和反义RNA抑制改变budR表达水平,考察budR表达水平对克雷伯氏菌甘油代谢的影响。过表达budR使得Bud B和Bud C的酶活提高了48.7%和69.7%,1,3-丙二醇产量降低了12.6%,2,3-丁二醇含量增加了73.3%,同时乙酸含量显著降低。反义RNA抑制budR表达后,Bud B和Bud C酶活分别降低了56%和78%,重组菌的生物量、2,3-丁二醇(BDO)、乙酸、乳酸等均表现为略有降低,1,3-丙二醇含量达到23.4g/L,提高约10%。上述结果进一步丰富了budR基因在调控bud操纵子的表达水平、2,3-丁二醇合成及克雷伯氏菌甘油代谢中的作用,为后续代谢改造克雷伯氏菌合成1,3-丙二醇提供了新的思路。 展开更多
关键词 budR 克雷伯氏菌 甘油代谢 1 3-丙二醇 2 3-丁二醇
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枯草芽孢杆菌产3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二醇发酵条件优化 预览
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作者 吴文睿 李兰 +1 位作者 汤有宏 陈斌 《酿酒》 CAS 2016年第2期93-96,共4页
研究以一株从古井窖泥中分离筛选的枯草芽孢杆菌为出发菌株,进行发酵培养成分和发酵条件优化。与静置发酵相比,振荡培养可有效提高菌株发酵液中3-羟基-2-丁酮和2,3-丁二醇的产量;在振荡培养的基础上采用正交试验方法对发酵培养基和培养... 研究以一株从古井窖泥中分离筛选的枯草芽孢杆菌为出发菌株,进行发酵培养成分和发酵条件优化。与静置发酵相比,振荡培养可有效提高菌株发酵液中3-羟基-2-丁酮和2,3-丁二醇的产量;在振荡培养的基础上采用正交试验方法对发酵培养基和培养条件进行了优化。实验结果表明,枯草芽孢杆菌发酵培养的最佳条件为:3mmol/L Mg^2+,15g/L蛋白胨,150r/min,32℃。与初始静置发酵条件相比,最优条件下3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二醇(左旋)、2,3-丁二醇(内消旋)的产量分别提高了57.75%、1234.96%、163.33%。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 3-羟基-2-丁酮 2 3-丁二醇 正交试验
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2,3-丁二醇气相脱水制备甲乙酮用催化剂及其工艺研究 被引量:2
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作者 王文革 吴彦彬 +3 位作者 杨理 宋国全 闫广学 吴正岭 《精细与专用化学品》 CAS 2016年第2期41-44,共4页
采用固定床反应器,以2,3-丁二醇为原料,在超强固体酸催化剂作用下,气相催化脱水制备甲乙酮。研究了反应温度、液时空速和氮醇物质量的比(N2流量)等因素对合成反应的影响。在反应温度290-305℃,液时空速0.5-3.0h^-1,氮醇物质量的比26-3... 采用固定床反应器,以2,3-丁二醇为原料,在超强固体酸催化剂作用下,气相催化脱水制备甲乙酮。研究了反应温度、液时空速和氮醇物质量的比(N2流量)等因素对合成反应的影响。在反应温度290-305℃,液时空速0.5-3.0h^-1,氮醇物质量的比26-30的条件下,2,3-丁二醇转化率达95%以上,甲乙酮选择性达92%以上。 展开更多
关键词 甲乙酮 2 3-丁二醇 制备
地衣芽胞杆菌WX-02联产聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇培养基的优化 预览
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作者 占杨杨 高立 +2 位作者 徐迪红 魏雪团 陈守文 《生物技术进展》 2016年第1期52-58,共7页
聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇是两种重要的化合物,广泛运用于能源、医药、农业等领域。地衣芽胞杆菌WX-02具有同时合成聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇的能力。优化了地衣芽胞杆菌WX-02联产聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇的发酵培养基,并进行了50 L发酵罐小... 聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇是两种重要的化合物,广泛运用于能源、医药、农业等领域。地衣芽胞杆菌WX-02具有同时合成聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇的能力。优化了地衣芽胞杆菌WX-02联产聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇的发酵培养基,并进行了50 L发酵罐小试放大。分批发酵结果显示,采用优化后的培养基,聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇的产量分别为42.5 g/L和76.13 g/L,比优化前分别提高了26.5%和188%。在联产发酵中聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇的产量能够分别达到单独合成这两种物质的水平,为工业化联产聚γ谷氨酸和2,3-丁二醇奠定了基础。 展开更多
关键词 聚γ谷氨酸 2 3-丁二醇 地衣芽胞杆菌 联产 优化
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过量表达枯草芽孢杆菌乙偶姻还原酶提高2,3-丁二醇产量 预览
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作者 李秀鹏 杨套伟 +2 位作者 徐美娟 张显 饶志明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期252-257,共6页
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168是一株安全生产的菌株,但是在2,3-丁二醇(2,3-BD)的发酵过程中,会积累较多的副产物乙偶姻(AC)。乙偶姻还原酶是催化AC合成2,3-BD的关键酶。为了提高2,3-BD合成效率,首先将乙偶姻还原酶基因acr克隆... 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168是一株安全生产的菌株,但是在2,3-丁二醇(2,3-BD)的发酵过程中,会积累较多的副产物乙偶姻(AC)。乙偶姻还原酶是催化AC合成2,3-BD的关键酶。为了提高2,3-BD合成效率,首先将乙偶姻还原酶基因acr克隆到B.subtilis 168,构建了重组菌B.subtilis 168/p MA5-acr。对重组菌进行摇瓶发酵实验,结果表明,相比出发菌,重组菌的2,3-BD产量和转化率分别提高28.62%和22.87%,主要副产物AC积累量下降了20.01%。同时,分支路径的副产物甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸,也有不同程度的降低。 展开更多
关键词 乙偶姻还原酶 2 3-丁二醇 乙偶姻 枯草芽孢杆菌
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